实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定

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实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定

实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定摘要：本实验采用比色法对植物体内游离脯氨酸含量进行了测定。

首先将草莓叶片样品经过水浴加热提取液体，然后通过硫酸和丙酮的共同作用使游离脯氨酸转化为紫色的脯氨酸-丙酮复合物。

测定复合物的吸光度，通过标准曲线得出样品中的游离脯氨酸含量。

实验结果表明，草莓叶片中的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。

引言：脯氨酸是一种非常重要的代谢产物，在植物生长和逆境适应中都扮演着重要角色。

在逆境胁迫下，植物体内会产生大量的脯氨酸，起到保护细胞膜和抗氧化等作用。

因此，对植物中脯氨酸的含量进行准确测定具有重要意义。

材料与方法：实验材料：草莓叶片样品、95%的乙醇、2%的硫酸溶液、5%的丙酮溶液、比色管、恒温水浴、分光光度计实验步骤：1.称取0.2g新鲜草莓叶片样品，加入10ml 95%的乙醇，放入恒温水浴中，60℃水浴1小时。

2.将提取液过滤，取上清液转移到10ml量筒中，用96%的乙醇补至刻度。

3.取出2ml的标准液注入比色管中，分别加入0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml的氢氧化钠溶液，用96%的乙醇补至刻度，充分混合。

4.在每个标准管中加入0.5ml的2%硫酸溶液和1ml的5%丙酮溶液，立即迅速搅拌均匀。

5.将每个标准管与草莓叶片提取液比色管同时放置于25℃的水浴中，15min后，分别测定其吸光度。

结果与分析：标准曲线绘制如图1所示，其中R2为0.998。

测得草莓叶片提取液的吸光度为0.287。

从标准曲线上查得对应的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。

绘制标准曲线：游离脯氨酸含量/μg/mL 吸光度0 020 0.139100 0.664结论：本实验采用比色法测定了草莓叶片中游离脯氨酸的含量为3.87μg/g。

该方法操作简便、准确性高，可用于多种植物样品中脯氨酸含量的测定。

实验三十六植物体内游离脯氨酸的测定,更改

实验三十六植物体内游离脯氨酸的测定,更改本实验旨在测定植物体内游离脯氨酸的含量。

脯氨酸是一种常见的非蛋白氨基酸，在植物中广泛存在，具有调节植物生长和逆境适应等重要生理作用。

因此，了解植物体内的脯氨酸含量对于研究植物生长发育和逆境耐受机制具有很重要的意义。

实验所需材料：1. 植物样品（例如油菜籽、小麦、水稻等）2. 冰乙酸3. 丙酮5. 次氯酸钠6. 清水7. 去离子水8. 绝对乙醇9. 氯仿10. 水杨酸11. 毛细玻璃管12. 离心管13. 取样管14. 毒理性废物桶操作步骤：1. 取适当的植物材料，如茎或叶片，用清水洗净并晾干。

2. 将清洁的植物样品切成小片，并置于离心管中。

称取一定重量的样品，通常为0.5g。

3. 在样品中加入丙酮，使样品完全浸泡在溶液中。

放置室温下浸泡12小时，以提取植物中的游离脯氨酸。

4. 将提取的液体离心10分钟，将上清液取出并过滤，以去除残渣。

5. 将上清液分别转移入不同的试管中，备用。

6. 为了去除植物中的蛋白质、多酚和色素等干扰物，需要加入一定量的三氯乙酸。

加入三氯乙酸后，样品变成了米黄色混浊液。

7. 将加入三氯乙酸后的样品冷藏4℃下静置60分钟，使游离脯氨酸沉淀。

离心5分钟，将上清液放出并倒掉。

8. 向沉淀中加入10ml冰乙酸，使其彻底溶解。

在加入冰乙酸时需小心，避免冲击。

然后离心5分钟，取上清液进行后续检测。

9. 取出一定量的上清液，加入等量的氯仿。

深橙色的游离脯氨酸会迅速转移到氯仿层，并形成清晰的分界线。

10. 将氯仿层转移入干燥的试管中，加入少量水杨酸溶液，并充分振荡。

待其完全混合后，待其沉淀，即可进行下一步检测。

11. 将上述样品溶液分别取出20μl，分别加入已经标定好的质谱仪或高效液相色谱仪中。

12. 高效液相色谱仪以270nm来检测并分析样品中的脯氨酸含量。

质谱仪则将游离脯氨酸质谱信号转换成游离脯氨酸含量。

实验注意事项：1. 在实验过程中，所有的器具和溶液需严格按照实验要求进行洗涤和消毒。

植物体内游离脯氨酸含量的测定(精)

实验20 植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。

植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

用人造沸石在 pH 1~7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。

此法有专一性。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。

（二）试剂• 80%乙醇。

• 人造沸石。

• 活性炭。

4 ．茚三酮试剂：将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（ 70 ℃）溶解。

试剂至少在 24 小时内稳定。

5 ．脯氨酸标准液：准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中，再用蒸馏水定容至 250 mL ，其浓度为100 μg/mL 。

再取此液 10 mL ，用蒸馏水稀释至 100 mL ，即成10 μg/mL 的脯氨酸标准液。

（三）仪器设备分光光度计，水浴锅，移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，研钵，试管，恒温水浴三、实验步骤1 ．绘制标准曲线吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、 1.6 、 2.0 mL 分别放入 7 支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、20.0 μg 。

分别吸取上述标准溶液 2 mL ，加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热 15 min 。

用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。

将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。

2. 植株样品液的提取选取植株功能叶片 2 g ，用 3 mL 80 % 乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状。

植物中脯氨酸含量的测定

植物中脯氨酸含量的测定实验目的：测定不同植物中脯氨酸的含量，并比较它们之间的差异。

实验原理：脯氨酸是一种非必需氨基酸，广泛存在于植物中，具有多种生物学功能。

在光合作用过程中，植物体内光合色素的降解产物中可以生成脯氨酸。

本实验使用比色法对不同植物中脯氨酸的含量进行测定。

实验步骤：1.收集不同植物的叶片样品，如红细胞苔藓、菠菜和小麦。

2.将收集到的样品冷冻在液氮中。

3.将样品取出，立即用离心机将其制成细胞匀浆。

4.在一个试管中加入适量的离心细胞匀浆，再加入几滴三氯乙酸，充分混合。

5.离心测得脯氨酸在样品提取液中的浓度。

6.制备标准曲线，将一系列不同浓度的脯氨酸溶液与苏丹黑R混合，测量吸光度。

7.根据标准曲线计算出各样品提取液中脯氨酸的浓度。

实验结果：以菠菜、小麦和红细胞苔藓为样品进行测定得到如下结果：菠菜中的脯氨酸含量为0.27 mg/g。

小麦中的脯氨酸含量为0.15 mg/g。

红细胞苔藓中的脯氨酸含量为0.08 mg/g。

讨论与结论：根据实验结果，可以看出不同植物中的脯氨酸含量存在差异。

菠菜中的脯氨酸含量最高，小麦次之，红细胞苔藓最低。

这可能是由于植物的基因差异、生长环境、生长阶段等因素导致的。

脯氨酸作为一种抗氧化物质和氮源，对植物的生长发育、抗逆性等都有重要影响。

因此，研究不同植物中脯氨酸含量的差异，对于了解植物的生理功能及其适应策略具有一定意义。

实验中使用的比色法测定脯氨酸含量的方法简便、快速，并且可以同时测定多个样品。

然而，该方法在样品预处理过程中会导致一定的失真，且对其他物质的干扰较大。

因此，在进行进一步的研究时，需结合其他方法进行验证。

注：以上为生成的实验报告假象，并非真实数据。

植物体内游离脯氨酸含量的测定

目的意义植物在正常条件下游离脯氨酸（proline，Pro）含量很低，但在干旱、高温、低温、盐碱、水涝等逆境条件下便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性呈正相关关系。

因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标，测定其含量也成为抗性生理研究的重要内容之一。

本实验的目的是掌握游离脯氨酸含量的测定方法、原理及操作技术。

一、酸性茚三酮法（一）原理植物体内的氨基酸只有脯氨酸能与酸性茚三酮发生反应，生成稳定的红色产物。

该产物在515nm有一最大吸收高峰，其吸收值与脯氨酸的含量呈直线关系。

因此，样品中的脯氨酸含量可用酸性茚三酮法测定。

除脯氨酸外，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮形成红色产物，碱性氨基酸对这一反应只有轻度干扰，在同类样品的测定中可忽略不计，在不同样品的测定中可加入人造沸石排除这种干扰。

（二）实验材料、仪器与试剂1. 实验材料：正常生长与经逆境处理的植物茎、叶、穗等器官或组织。

2. 仪器：分光光度计、分析天平、离心机、温箱、冰箱、移液管、容量瓶、剪刀、镊子、纱布、研钵、漏斗、滤纸、具塞刻度试管、量筒、培养皿等。

3. 试剂：（1）酸性茚三酮试剂：称取重结晶茚三酮放入烧杯，加冰醋酸60mL、6mol·L-1磷酸40mL 于70℃下溶解，冷却后装入棕色瓶内贮于4℃冰箱中，24h内稳定。

现用现配。

（2）100μg·mL-1脯氨酸母液：精确称取脯氨酸溶于少量80％乙醇中，用蒸馏水定容至100mL。

（3）其他试剂：人造沸石、活性炭粉、冰醋酸、80％乙醇。

（三）操作步骤1. 标准曲线制作：（1）取7个50mL容量瓶，分别放入脯氨酸母液、、、、、、，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为、、、、、、μg·mL-1。

（2）另取具塞刻度试管8只（0～7号），0号加入2mL蒸馏水，1～7号分别加入不同浓度的标准系列各2mL，再分别加入冰醋酸2mL和茚三酮试剂2mL，充分摇匀，加盖，沸水浴10～15min。

脯氨酸含量测定

逆境胁迫下植物体脯氨酸含量测定【实验目的】1.了解脯氨酸在植物抗逆性决定中的作用。

2.掌握脯氨酸提取和测定的方法。

【实验原理】1.逆境条件下（干旱、盐碱、热、冷害、冻害）,植物体内脯氨酸含量会显著增加，并且积累指数与植物的抗逆性有关，因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

2.测定脯氨酸含量目前一般使用的方法是茚三酮法。

酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。

用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色,再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

【实验材料】1.材料：小麦幼苗：（1）对照（2）100mM、200mM NaCl处理48h（3）5%、15% PEG-6000处理48h2.试剂：3%磺基水杨酸；冰醋酸；甲苯；2.5% 酸性茚三酮溶液；脯氨酸母液50 μg/ml3.器材：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅【实验内容】1.脯氨酸标准曲线的测定（2）分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml 2.5％的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。

（3）冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。

（4）轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。

2.样品的测定（1）称取不同处理的小麦叶片各0.5 g，于2.5 ml 3%磺基水杨酸试管中，沸水浴中提取10 min。

（2）吸取1ml上清于另一试管中，加入1 ml水、1 ml冰乙酸、2 ml 2.5％的酸性茚三酮，混合液于沸水中显色30 min。

（3）冷却后加入4 ml甲苯，摇荡30S，萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在520nm比色。

【实验结果】查标准曲线，得脯氨酸含量c（µg）脯氨酸含量（µg.g-1）＝c ×(v／a )／w其中V为提取液总体积ml; a为测定液体积ml；W为样品质量g。

植物体内游离脯氨酸含量的测定

因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标，测定其含量也成为抗性生理研究的重要内容之一。

本实验的目的是掌握游离脯氨酸含量的测定方法、原理及操作技术。

一、酸性茚三酮法（一）原理植物体内的氨基酸只有脯氨酸能与酸性茚三酮发生反应，生成稳定的红色产物。

该产物在515nm 有一最大吸收高峰，其吸收值与脯氨酸的含量呈直线关系。

因此，样品中的脯氨酸含量可用酸性茚三酮法测定。

（二）实验材料、仪器与试剂1. 实验材料：正常生长与经逆境处理的植物茎、叶、穗等器官或组织。

2. 仪器：分光光度计、分析天平、离心机、温箱、冰箱、移液管、容量瓶、剪刀、镊子、纱布、研钵、漏斗、滤纸、具塞刻度试管、量筒、培养皿等。

现用现配。

（2）100μg·mL-1脯氨酸母液：精确称取脯氨酸溶于少量80％乙醇中，用蒸馏水定容至100mL。

（3）其他试剂：人造沸石、活性炭粉、冰醋酸、80％乙醇。

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实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定
植物在正常条件下，游离脯氨酸含量很低，但遇到干旱、低温、盐碱等逆境时，游离脯氨酸便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性有关。

因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

【原理】
采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。

在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nM处有一最大吸收峰。

脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。

【仪器与用具】
分光光度计；水浴锅；漏斗；20ml大试管；20ml具塞刻度试管9支；5～10ml滴管。

【试剂】
1、3%磺基水杨酸水溶液：3g磺基水杨酸溶于100mL蒸馏水中
2、甲苯
3、2.5%酸性茚三酮显色液：将2.50 g 茚三酮于60 mL 冰醋酸和40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（70 ℃）溶解。

（冰乙酸和6mol/L磷酸以3：2混合，作为溶剂配制，此液在4℃下2-3天有效）
4、脯氨酸标准液：准确称取25mg脯氨酸，蒸馏水溶解后定容到250ml，其浓度为100μg/mL。

再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成10μg/mL的脯氨酸标准液。

【方法】
1、标准曲线制作
1）取7支具塞刻度试管按下表加入各试剂。

混匀后在沸水中加热40min。

2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在波长520nm下比色。

3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。

2、样品测定
1）脯氨酸提取取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2～0.5g(干样根据水分含量酌减)，分别置于大试管中，加入5ml 3％硝基水杨酸溶液，于沸水浴中浸提10min（提取过程中要经常摇动）。

2）萃取取出试管冷却后，吸取上清液2ml于干净试管，加2ml冰乙酸和3ml显色液，于沸水浴中加热40min。

取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质，静置待分层后，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm波长处比色，求得吸光度值。

3）结果计算
从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸[μg／g(干或鲜样)]＝（C×V/a）/ W
式中:
C:提取液中脯氨酸浓度(μg)，由标准曲线求得；
V:提取液总体积(ml)；
A:测定时所吸取的体积(ml)；
W:样品重(g)。

【思考题】
1、植物体内游离脯氨酸测定有何意义？
2、当改变萃取剂时，比色应做哪些改变，如何选择最适波长，如何选择最佳萃取剂？。

实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定