脯氨酸测定方法

磺基水杨酸法

一：原理

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长 520nm 处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。

二：试剂

1：质量分数为3%的磺基水杨酸溶液

2：甲苯

3：2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和 6mol/L 磷酸以 3︰2 混合，作为溶剂进行配制，此液在 4℃下 2～3 日有效

4：脯氨酸标准溶液----用蒸馏水配置成100ug/ml（可以不用，看相对含量的高低就好）

三：方法

（1）脯氨酸提取取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2～0.5g（干样根据水分含量酌减），分别置于大试管中，加入 5ml 3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提 10min。

（2）取出试管待冷却至室温后，吸取上清液 2ml，加 2ml 冰乙酸和 3ml 显色液，于沸水浴中加热 40min，下一步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。

（3）结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下

式计算样品中脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸（μg/g FW 或 DW）= CV/Wa

式中C—提取液中脯氨酸浓度（μg），由标准曲线求得；

V—提取液总体积（ml）；

a—测定时所吸取的体积（ml）；

W—样品重（g）。

*****标准曲线