原料中羟脯氨酸含量的测定
高效液相色谱法检测酱油中羟脯氨酸的含量
摘要 ： 实验建立 了柱前衍 生高效液相 色谱 分析 酱 油 中羟 脯氨 酸 （ ｙ ｒ ｘ ｐ ｏｉｅ Ｈｙ ） 量 的方 法 。样 ｈ ｄ ｏ ｙ ｒｌ ， ｐ 含 ｎ 品经 乙醇提取 ， ２ ４二硝基 氟苯 为衍 生试剂 ， 以 ，一 采用 Ｇ ｍｉｉ １ （． ×２ ０ｍｍ， ｍ） ｅ ｎ Ｃ ８ ４ ６ ５ ５ 色谱 柱 分 离， 检 测波长 为 ３ ０ｎ ６ ｍ。Ｈｙ ｐ质量 浓度 与其峰 面积 在 ｉ ￣３ ０ｍｇ Ｌ范围 内具有 良好 的线 性 关 系， 关 系数 ０ ２ ／ 相 为 ０ ９ ９ 。回收率为 ９ ． ９ ． ９２ ７ １ ％～１ Ｏ １ ， 出限为 ２ ５ｍｇ Ｌ。对 实际样品 中相 对 Ｈｙ １． ８ 检 ． ／ ｐ含 量 （ 示 为 表 每 克氨 态氮 中所含羟 脯氨酸 的毫克数） 进行 检 测发现 ， 纯酿 造酱 油在０ ６ ～１ ９ ／ ． ７ ． ３ｍｇ ｇ之 间， 酸水 解植
能区分酱 油 中是否 添加 酸水 解蛋 白液 。 关键词 ： 脯氨 酸 ； 油 ； 解动 物蛋 白； 羟 酱 水 高效液相 色谱 ； 测 检
中图分类 号 ： ２ ７ ３ ＴＳ ０ ． 文献标识码 ： Ｂ 文章 编号 ：ｏ Ｏ ９ ３ ２ １ ） ４ １ ６ ４ １ ０ 一９ ７ （Ｏ Ｏ ０ 一Ｏ Ｏ —０
ｒｖ ｔｚ ｄ ｗ ｔ ４ ｄ ｎｔｏ ｕ ｒ ｂｅ ｚ ｎ ．Ｃｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｉｃ ｓｐａ ａｉｎ ｗａ ｅ ｏ ｍｅ ｔ ｍｉ ｉＣ１ ｏ ｕ ｉａ ｉｅ ｈ ２， － ｉ ｉｒ ｆ ｏ ｏ ｎ ｅ ｅ ｉ ｌ ｒ ｍ ｏ ｒｐｈ ｅ ｒ ｔｏ ｓ ｐ ｒ ｒ ｄ ｗ ｈ Ｇｅ ｎ ８ ｃ ｌ ｍｎ ａ ｆ ｉ
ＨＵ ｕ Ｈ ａ”，ＬＶ ｎ Ｄｉｇ ，ＤＵ ｎ Ｈ ＡＮＧ ｅ— ｕ ｎ 。 Ｑｉｇ ，Ｚ Ｗ ｉ ａ ｇ ，ＺＨＵ ｎ － ｏ ｇ ｇ Ｙｏ ｇ ｈ ｎ “ （ ． ｏ ｇ ｉｇＡｃ ｄ ｍ ｙｏ ｅｒ ｌｇ ｎ ａｉ ｎ ｐ ｃｉｎ，Ｎａｉｎ ｌ ｎ ｅ ｆＱｕ ｌ ｙＳ ｐ ｒ ｉｉｎ １ Ｃｈ ｎ ｑｎ ａ ｅ ｆＭ ｔｏｏ ｙ ａ ｄ Ｑｕ ｌ ｙ Ｉ ｓ ｅ ｔｏ ｔ ｔｏ ａ Ｃｅ ｔｒｏ ａｉ ｕ ｅｖ ｓ ｔ ｏ ＆ Ｉ ｓ ｅｔｏ ｒｃ ｌｕ ａ ｒ ｃ ｓ ｅ ｒ ｄ ｃｓａ ｄＣｏ ｄｍｅ ｔ ，Ｃｈ ｎ ｑｎ ０ ０ ０， ｉａ ｎ ｐ ｃｉｎ ＯｎＡｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌ ｏ ｅ ｓ ｄ Ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｎ ｉ ｎ ｓ Ｐ ｏ ｇ ｉｇ ４ ０ ２ Ｃｈｎ ；
4种鱼肉羟脯氨酸含量的测定-论文
４种鱼 肌 肉样 品的 羟脯 氨酸含 量测 定 方法参 照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ９ ６ ９ ５ ． ２ ３ ２ ０ Ｏ ８ ／ Ｉ Ｓ ０ ３ ４ ９ ６ ：１ ９ ９ ４ ［ 略作 修 改 。
１ ． ３ ． １ 标 准 曲 线 制 作
４种 鱼 肉羟 脯 氨 酸 含 量 的 测 定
张 延 华 ，马 国红 ，王爱 英 ，王 秉 利 ，许 鹏 （ 山东省淡水水产研究所， 山东 济南２ ５ ０ １ １ ７ ）
［ 摘 要］ 采 用 比色 法 对 草 鱼 （ Ｃ ｔ ｅ ｎ ｃ ｐ ｈ ａ ｒ ｙ ｎ ｇ ｏ ｄ ｏ ｎ ｉ ｄ ｅ ｌ ｌ ｕ ｓ ） 、鲤 鱼 （ Ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｎ ｕ ｓ ｃ ａ ｒ ｐ ｉ ｏ ） 、鳙 鱼 （ Ａｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｈ ｔ ｈ ｙ ｓ
下 式计 算 ：
Ｘ 一 ６ ． ２５ ｃ （ ／ Ｔ ／ × Ｖ）
式 中 ：Ｘ 为试 样 中羟脯 氨酸 的含 量 ， ；ｃ为 由标 准 曲线得 到的试 样溶 液 中羟脯 氨酸 的浓 度 ，￣ ｇ ／ ｍｌ ；ｍ
为试样 质量 ，ｇ ；Ｖ 为从 ２ ５ ０ ｍｌ 容 量瓶 中 吸取滤液 的体 积 ，ｍｌ 。
１ ０ ｍｌ 硫 酸溶 液分 ３次洗 涤 烧瓶 和滤 纸 ，合并 至上 述容量 瓶 中 。用水定 容 ，摇匀 。
用移液 管 移 取 一 定 体 积 （ Ｖ） 的 水 解 产 物 至 ２ ５ ０ ｍｉ 容 量 瓶 中 ，定 容 后 羟 脯 氨 酸 的 浓 度 在 ０ ． ５ ～
２ ￣ ， ｇ ／ ｍｌ 之 间 。移 取 ４ ． ０ ０ ｍｌ 上 述 溶 液 于 比 色 管 中 ，加 入 ２ ． ０ ０ ｍｌ氯 胺 试 剂 ， 混 合 后 于 室 温 下 放 置
过氧化氢氧化法测定羟脯氨酸含量的研究
关 键词 ： 脯氨 酸 ； 原蛋 白； 氧化 氢 ； 化 羟 胶 过 优
中图分 类号 ：Ｓ １ Ｔ ５２
文献 标识 码 ： Ａ
文章 编号 ：６ １ １ ０ （ ０ ８ ０ － ０ ３ ０ １７ — ６ ２ ２ ０ ）８ ０ ４ － ４
Ｓ ｕｄ ｎ Ａｎａ ｙ ｉ ｆＨｙ ０ ｙ ０ ｉ ｅ ｗｉｈ ｈ ｏ ｏ ｅ Ｍ ｅ ｈｏ ｔ ｙｏ ｌ ｓｓｏ ｄｒ ｘ ｐｒ ｌｎ ｔ ｔ ｅ Ｄｉ ｘ ｇ ｎ ｔ ｄ
比色法是 一种 传统 Ｈｙ ｐ含量测 定法 ， 的操 作方 它
法简单 ， 对实验条件要求不高 ， 因此作为一种有效简
便 的方法 广泛 地被 实验 室 和临 床采 用 。 而在 比色法 中
４ ３
维普资讯
西 部 皮 革
第３ ０卷
常用 的是氯 胺一 Ｔ氧化法 ， 法存 在 以下 缺 点 ： 该 氧化 剂
通讯联系人引言羟脯氨酸是胶原蛋白所特有的氨基酸在胶原蛋白中含量约为定量测定胶原水解后的含量不仅可以分析组织和纯化样品中的胶原蛋白含量而且还可以用于监测胶原的临床代谢情况
维普资讯
３ ０卷 第 ｌ．１ ０ １ 期 ２０ ０ ８年 ９ 月
西
部
皮
革
Ｖｏ ＿０ Ｎｏ．０． ｌ３ １ １１
氧 化 剂 的 比 色法测 定 羟脯 氨 酸含 量 ， 广泛 使 用 的氯 胺 一 与 Ｔ氧化 法相 比更 为 简便 。对 显 色反 应 时 间 、 显 色反 应 温度 、 氧 化 氢 浓度 、 二 甲基 氨 基 苯 甲醛 浓度 等条 件 进 行 了优 化 ， 绘 制 了优 化 后 的标 过 对 且
品 中的胶原 蛋 白含 量 ， 而且 还 可 以用 于监测 胶 原 的临
乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定——L(-)-羟脯氨酸含量测定法
乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定法—L(-)-羟脯氨酸含量测定羟脯氨酸含量测定法1主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。
本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。
本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。
2 引用标准) --羟脯氨酸含量测定L(--)GB9695.23-90 肉与肉制品L(3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。
经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。
用高氯酸破坏过量的氯胺T。
羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。
4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。
将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。
4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。
4.3 氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。
4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。
4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。
4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。
4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。
4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。
4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。
5 仪器和设备5.1 实验室常规设备。
5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。
5.3 恒温水浴。
猪皮中羟脯氨酸含量的测定
我 国是世界 肉类 生产 和消费大 国， ０４年全 国 肉 ２０ 类产 量 占世界总量 ２， ０万吨 的 ２． ５５ ７ ８１ ％，其 中当年猪 肉产量 占世界 １， ９万吨 的 ４ ． ００ ３ ６８ ％，居各种 肉类 产量 的第一位Ｌ。然而 ，猪 肉在 生产过程 中会 伴随产 生大 １ Ｊ
ｈｇ ｉｌｎ ｔ Ｔ ｅ ｖｒｇ ｃｖｒ ｔ ｏ Ｈ ｐｉ８ ． ％， ｄ ｅ ｖ ｒ ｅ ｏｔ ｔ ｆ ｙ ｉ ｓｉ ｉ２ ． ｍ￣ｇ Ｈ ｐｐｇ ｋｎ． ｉ ｙｅ ｉｇ ａ ． ｅ ｅｅｏ ｅ ｒ ｅ ｆ ｙ ５ ７ ａ ｅ ｇ ｎｅ Ｈ ｐｉｐｇ ｋｎ ｓ ３１ ｈ ｄ ｒ ｅｈ ａ ａ ｒ ｙ ａ ｓ ９ ｎ ｔ ａ ａ ｃ ｎｏ ｈ ｎ ８ （ ｙ ／ ｉ） ｉｓ
量猪 皮 。一 般猪 皮约 占胴体重 的 １％左右 ，对 于一个 ０
改善皮肤环境 ， 达到美容 的 目的。东汉名医张仲景在 《 伤
寒 论》中 曾详细记载 了猪皮具有“ 和气血 、润肌肤 、可美 容” 的功效 。猪 皮经 济实惠 ，制作简单 ，美容 效果明显，
故深 受人们欢迎 ，也正 因为猪 皮胶原蛋 白或 其分解物对 美容所起 的作 用，因此测定 其胶 原蛋 白的含 量和变化对 研 究猪皮 的功 能性具有重 要意义 。
（ ． ｈ ｎ ｈ ｉ ｏ ｄＲｅｅ ｒｈＩｓｉ ｔ， ｈ ｎ ｈ ｉ ０ ２ ５ Ｃ ｉａ ２ Ｓ ａ ｇ ａ ｏ ｓａｃ ｔｕｅ Ｓ ａ ｇ ａ ２ ０ ３ 。 ｈｎ ） Ｆ ｎ ｔ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｃｏ ｌ ｅ ｉｈｉ ｉ ｉ ， ｉｈｉ ｄ ｌ ｓ ｄｉ ｏ ， ｄ ｃｎ ｎ ｏ ｍｅｉ ｄ ｓｒ ｒｉ ｎ ｑ ｅｓ ｕ ｔ ｒ ｄｂ ｏｏ ｉａ ｓｒ ｃ ： ｌ ｇ ｎｉ ｒ ｐｇ ｓ ｎ ｗｈｃ ｗｉ ｅｙｕ ｅ ｆ ｄ ｍｅ ｉｉ ｅ ｄｃ ｓ ｔ ｉ ｕ ｔ ｆ ｓ ｉ ｕ ｔ ｃｕ ｅ ａ ｓ ｃ ｎ ｋ ｓ ｎｏ ａ ｃｎ ｙ ｏ ｔｕ ｒ ｎ ａ ｉ ｌｇ ｃ ｌ
纯牛奶中动物水解蛋白L-羟脯氨酸含量测定
国
结 晶 乙 酸 钠 溶 于 水 ，稀释 至 １ Ｌ ，此 溶 液 与 ２ ０ ０ ｍＬ 水 和 光度 ； Ｐ为标准 曲线查得试样 吸光度对应浓度 （ｕ ｇ ／ ３ ０ ０ ｍＬ 正 丙醇 混 合 。
ｍＬ）；Ｍ为标准曲线斜率 ；Ｘ 为样品中Ｌ 一 羟脯氨酸的百
氯胺Ｔ 溶 液 ：将 １ ． ４ １ ｇ 氯胺Ｔ ，溶于 １ ０ ｍＬ 水 中 ，依 分含 量 （ ｍｇ ／ ｋ ｇ） ；Ｖ 为 水解 后定 容体 积 （ ｍＬ）；Ｖ ２ 为
含量是衡量动物胶原水解蛋白含量 的一个重要指标 】 。 本试验之所 以设计 为检测纯牛奶 中是否含有Ｌ 一 羟脯氨
１ ． ２ 试 剂 结 晶 乙酸 钠 、苯 酚 、柠 檬酸 、对 二 甲基苯 甲醛 、氯
国药 集 团化 学 试 剂 有 限公 司 ）；正 丙 醇 （ 永 大 化 酸 ，是 因其 为动 物胶 原 蛋 白中特 有成 分 ，而不 存在 于 乳 胺 Ｔ （ 金 鹿 化 工 有限 公 司 ）；盐 酪 蛋 白中 ，所 以一 旦 检 出 ，则可 认 为纯 牛奶 中含 有皮 革 学试 剂 有 限公 司 ）；高氯 酸 （
摘
要 ：为 建立一种 测定 纯牛奶 中Ｌ 一 羟脯氨 酸 的紫外分 光光度 法 ，本研 究首先优化 前 处理条件 ，然后 通过
紫外 分光光度 计选 出Ｌ 一 羟脯氨 酸 的最佳吸 收波 长 ，测 定其含 量 ，并进 行精 密度和加 标 回收率试 验 。结果显 示 ，待测组分线性 关 系良好 ，最低检 出限为０ ． ２ ｍｇ ／ ｋ ｇ 。相对标 准４ ＆￣ＲＳ Ｄ． ｇ Ｊ ０ ． ４ ８ ％￣ ０ ． ７ ７ ％，加标 回收率基本在 ９ ３ ． １ ３ ￣ ／ ｏ ＂ １ ０ ０ ． ５ ７ ％。本 方法灵敏 、准确 ，重复性好 ，样 品处理 简便 易行 ，Ｔｉ ｆ于纯牛奶 ｅ ｅ Ｌ 一 羟脯氨酸含 量测定。
羟脯氨酸含量检测试剂盒说明书
羟脯氨酸（HYP ）含量检测试剂盒说明书微量法货号：BC0255规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体200 mL×1瓶（自备）常温保存试剂一液体8 mL×1瓶4℃保存试剂二液体8 mL×1瓶4℃保存标准品液体0.5 mL×1支4℃保存溶液的配制：1.提取液：自备6 mol/L 盐酸，提供一个125mL 空瓶。
6 mol/L 盐酸的配制：浓盐酸（37%）和H 2O 的体积比是1：1。
2.标准品：0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品。
产品说明：HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样本经水解产生游离的HYP ，进一步被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm 处有特征吸收峰。
通过测定样本水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。
技术指标：最低检出限：0.057 μg/mL 线性范围：0.117-30 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：天平、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、6mol/L 盐酸和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.2g 样本于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。
加入2mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块，冷却后用10mol/L NaOH （约1mL ）调节pH 值至6-8范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至4mL 。
最后16000rpm ，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。
羟脯氨酸含量的测定方法优化
羟脯氨酸含量的测定方法优化
魏东;陈文慧
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2005(014)018
【摘要】羟脯氨酸（hydroxyprolinc，HYP）是胶原蛋白所持有的氨基酸，测定HYP含量可明确胶原总体水平，评定纤维化病变程度。
氯胺T法是传统的经典HYP测定方法，其基本原理是：先把含有HYP多呔的组织或血清、腹水、尿液等水解成游离的HYP，游离的HYP再被氧化，与对-二甲氨基苯甲醛（PDAB）在一定温度下发生反应成红色的吡咯化合物，最后通过分光光度计比色，或其他的方法检测出水解液中HYP的含量。
【总页数】2页(P2479-2480)
【作者】魏东;陈文慧
【作者单位】云南中医学院,云南,昆明,650200;云南中医学院,云南,昆明,650200【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.UPLC-MS/MS法测定乳品中L-羟脯氨酸的含量 [J], 黄蓓蓓
2.柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量[J], 王旭波;徐利丽;郑洁;李楠;沈玉萍;王智;韦波;杨欢
3.市售蔬菜亚硝酸盐含量的测定方法优化和在不同温度储存过程中亚硝酸盐含量的变化 [J], 温睿
4.小鼠肺组织羟脯氨酸含量测定的实验方法优化 [J], 陈以文; 盛春瑞; 刘珊珊; 宗晨钟; 董瑞娟; 葛东宇; 王淑艳; 李丽娜
5.生乳中L-羟脯氨酸含量测定的不确定度评定 [J], 李均;卢琳;魏磊
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原料中羟脯氨酸含量的测定
1.材料和试剂
1.1材料
秦宝雪花牛牛蹄筋：陕西秦宝牧业有限责任公司。
秦宝普通育肥牛、雪花牛肺：陕西秦宝牧业有限责任公司。
秦宝雪花牛棒骨：陕西秦宝牧业有限责任公司。
1.2试剂
所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或去离子水，或相同浓度的水。
1.2.1硫酸溶液[c(H2SO4)≈3mol/L]
量取750mL水于2L的容量瓶中，在搅拌下缓慢加入320mL浓硫酸（ρ20=1.84g/mL）。
冷却至室温后用水定容。
1.2.3缓冲溶液（PH=6.8）
包括下列组分：
a）26.0g一水柠檬酸（C6H8O7·H2O）；
b）14.0g氢氧化钠；
c）78.0g无水乙酸钠[Na(CH3CO2)]。
用500mL水溶解上述试剂并转入1L的容量瓶中，加入250mL 正丙醇，用水定容。
该溶液于4℃暗处可稳定保存几周。
1.2.4氯胺T溶液
称取1.41g三水·N-氯-对甲苯磺酰胺钠盐（氯胺T），用100mL 缓冲溶液溶解。
临用前配制。
1.2.5显色剂
称取10.0g对甲氨基苯甲醛，用30mL高氯酸溶液[70%（质量分数）]溶解，缓慢加入65mL异丙醇。
临用前配制。
1.3羟脯氨酸标准溶液
1.3.1标准储备液
称取50mg4-羟基-α-吡咯甲酸（羟脯氨酸）于100mL容量瓶中，用水溶解，加一滴硫酸溶液（1.2.1），用水定容。
该溶液于4℃下可稳定存放1个月。
1.3.2标准工作液
移取5.00mL上述标准储备液至500mL容量瓶中，用水定容。
分
别吸取该溶液10.00mL、20.00mL、30.00mL、40.00mL于100mL容量瓶中，用水定容，所得标准工作液浓度一次为0.5µg/mL、1.0µg/mL、
1.5µg/mL、
2.0µg/mL。
临用前配制。
2.仪器和设备
3.试样制备
用刀将原料在冷冻时（0℃以下）切成小块（约0.5cm3，边长约为8mm）。
将切好的试样装入密封样品盒中，或用耐热塑料袋真空包装，70℃以上保温30min后，冷却。
用绞肉机将试样均质。
将试样装入密封的容器里，防止变质和成分变化。
试样应在均质化后24h内尽快分析。
4.分析步骤
4.1试样
称取4g试样（精确至0.001g）于烧杯中，避免试样粘在烧杯壁上。
4.2水解
4.2.1量取30mL±1mL硫酸溶液，加入烧杯中，用培养皿盖住，于105℃干燥箱内恒温16h。
4.2.2趁热将水解产物转移至250mL容量瓶中。
用10mL硫酸溶液分三次洗涤烧杯，合并至上述容量瓶中。
用水定容，摇匀。
然后将其过滤至三角瓶中。
4.3测定
4.3.1用移液管移取5mL的上述滤液至250mL容量瓶中。
4.3.2移取4.00mL上述溶液于比色管中，加入2.00mL氯胺T试剂，混合后于室温下放置20min±1min。
4.3.3加入2.00mL显色剂于比色管中，充分混合，用塞子将比色管封
口。
4.3.4将比色管迅速放入60℃水浴中，加热20min。
4.3.5取出比色管，用流动水冷却比色管至少3min，在室温下放置30min。
4.3.6空白测试
用水代替稀释溶液，重复4.3.2至4.3.5的操作。
后于558nm±2nm 处用分光光度计测定吸光度值。
4.3.7从4.4所得标准曲线查得水解产物中羟脯氨酸的含量。
4.4标准曲线
4.4.1用4.00mL羟脯氨酸标准工作液一次代替稀释后的水解产物，进行4.3.2至4.3.6的操作。
4.4.2以标准工作液的吸光度为纵坐标，以相应的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
管号0 1 2 3 4 标品L羟脯氨酸含量（ug/ml）0 0.5 1.0 1.5 2.0
0.457
吸光度值（A）0 0.121 0.232 0.232
试样中羟脯氨酸的含量按下式计算：
X=6.25c/（m×V）
式中：
X —试样中羟脯氨酸的含量，%；
c —由标准曲线得到的试样溶液中羟脯氨酸的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL ）；
m —试样质量，单位为克（g ）；
V —从250mL 容量瓶中吸取滤液的体积，单位为毫升（mL ）； 计算结果保留至小数点后两位。
6.实验结果
试验 羟脯氨酸含量（%）
范围（%） 1肺11625 0.3102
0.2911～0.3860
2肺11626 0.3373 1肺5865 0.3860 2肺5866 0.3334 1肺5840 0.2911 2肺5840 0.3406
0.2920～0.4293 1肺9804 0.2922 2肺9804 0.3700 1肺9828 0.2989 2肺9828 0.3308 1肺9836 0.3162 2肺9836 0.3831 1肺7953 0.4285 2肺7953 0.4293 1肺7975 0.3405 2肺7975 0.2920 1肝脏9836 0.0518
0.0518~0.0642 2肝脏9836 0.0642 1蹄筋 1.3146
1.3146~1.3627
2蹄筋 1.3627 棒骨
1.3577
1.3577 7.讨论
原料胶原蛋白的含量
猪皮[2]荣昌成猪74.12%±0.99 荣昌乳猪66.78%±0.36
鸡肉[3]农家饲养的土鸡0.22%市场购买后再于农家饲养0.15%鱼皮[5]鱿鱼皮0.823% 狗鲑鱼皮2.247%
牛皮[1]26%
林蛙皮[4]26%
猪肺[6] 3.08%±0.12
原料羟脯氨酸的含量
猪皮[7]23.18mg/g
8.参考文献
[1] 孟月志,翁佩芳.胃蛋白酶提取牛皮胶原蛋白的工艺研究.精细化工,2010, 27(12):1187-1200.
[2] 刁雪洋, 2010. 猪皮胶原蛋白提取及理化特性的研究. 西南大学硕士学位论文.
[3] 罗凤莲,夏延斌,欧阳建勋,王燕,夏晓凤.分光光度法测定鸡肉中的羟脯氨酸含量.食品科技,2010, 35(1): 122-124.
[4] 郑淼,周亚丹,赵敏.东北林蛙皮中胶原蛋白含量的测定及提取工艺.东北林业大学学报,2008,36(7): 81-83.
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