植物组织游离脯氨酸含量的测定实验报告精华版
植物中脯氨酸含量的测定(实验报告及结果)
实验材料：
木瓜叶叶片
实验器材：
1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8.胶头滴管；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。
实验试剂：
1.酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L磷酸中，搅拌加热 （70℃）溶解，贮于冰箱中。
（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）
根据吸光度测定，所得数据如下：
编号
1
2
3
4
5
6
脯氨酸浓度（μg/2ml）
2
4
6
8
10
12
吸光度
2. 样品的测定
（1）脯氨酸的提取 准确称取不同处理的待测植物叶片各，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。
（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。
（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果
植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果本实验的目的是测定植物中脯氨酸的含量。
脯氨酸是一种非常重要的氨基酸，它在植物中起着调节渗透压、抗逆性、保护细胞膜完整性等多种生理功能。
因此，测定植物中脯氨酸含量对于研究植物生理学和生物化学具有重要意义。
实验所需材料和仪器设备有：植物组织样品、乙醇、脯氨酸标准物质、离心机、溶液混合器、超声波清洗器、显微管、比色皿、分光光度计等。
实验步骤如下：1.准备样品：收集植物样品后，在洁净条件下取样品约10克，稍微清洗并切碎成小片，以利于提取脯氨酸。
2.浸提脯氨酸：将植物样品放入超声波清洗器中，加入适量的乙醇，使乙醇能充分接触到样品。
使用超声波清洗仪提取样品中的脯氨酸，提取时间为30分钟。
3.离心处理：将乙醇提取液离心10分钟，将上清液转移至显微管中。
4.标准曲线的制备：取不同浓度的脯氨酸标准物质，分别加入适量的乙醇，制备不同浓度（如0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/mL）的标准品溶液。
5.比色测定：取0.2~1.0 mL标准品溶液，分别加入10%冰醋酸溶液（2.3 mL），然后加入15%草酸溶液（2.5 mL），混合均匀。
再加入0.2%法拉第试剂（0.2 mL），充分混合，并静置15分钟。
测量样品的最大吸收波长为535 nm。
6.吸光度测定：使用分光光度计进行吸光度测定，按照比色皿中的液体，即可得到对应吸光度值。
7.测量样品中脯氨酸的含量：根据标准曲线上的吸光度值，可以通过光谱仪测得样品溶液的吸光度值，然后将其代入标准曲线中计算脯氨酸的含量。
通过以上步骤，我们可以测定植物中脯氨酸的含量。
实验的结果按照以下格式进行记录：表1植物样品中脯氨酸含量的测定结果样品编号吸光度值脯氨酸含量(mg/mL)--------------------------------10.320.120.450.230.520.340.570.450.620.5通过实验测定的结果，我们可以发现不同植物样品中脯氨酸含量的差异，并进一步探究其对于植物生长和生理功能的影响。
实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定
实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定摘要：本实验采用比色法对植物体内游离脯氨酸含量进行了测定。
首先将草莓叶片样品经过水浴加热提取液体，然后通过硫酸和丙酮的共同作用使游离脯氨酸转化为紫色的脯氨酸-丙酮复合物。
测定复合物的吸光度，通过标准曲线得出样品中的游离脯氨酸含量。
实验结果表明，草莓叶片中的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。
引言：脯氨酸是一种非常重要的代谢产物，在植物生长和逆境适应中都扮演着重要角色。
在逆境胁迫下，植物体内会产生大量的脯氨酸，起到保护细胞膜和抗氧化等作用。
因此，对植物中脯氨酸的含量进行准确测定具有重要意义。
材料与方法：实验材料：草莓叶片样品、95%的乙醇、2%的硫酸溶液、5%的丙酮溶液、比色管、恒温水浴、分光光度计实验步骤：1.称取0.2g新鲜草莓叶片样品，加入10ml 95%的乙醇，放入恒温水浴中，60℃水浴1小时。
2.将提取液过滤，取上清液转移到10ml量筒中，用96%的乙醇补至刻度。
3.取出2ml的标准液注入比色管中，分别加入0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml的氢氧化钠溶液，用96%的乙醇补至刻度，充分混合。
4.在每个标准管中加入0.5ml的2%硫酸溶液和1ml的5%丙酮溶液，立即迅速搅拌均匀。
5.将每个标准管与草莓叶片提取液比色管同时放置于25℃的水浴中，15min后，分别测定其吸光度。
结果与分析：标准曲线绘制如图1所示，其中R2为0.998。
测得草莓叶片提取液的吸光度为0.287。
从标准曲线上查得对应的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。
绘制标准曲线：游离脯氨酸含量/μg/mL 吸光度0 020 0.139100 0.664结论：本实验采用比色法测定了草莓叶片中游离脯氨酸的含量为3.87μg/g。
该方法操作简便、准确性高，可用于多种植物样品中脯氨酸含量的测定。
植物体内游离脯氨酸含量的测定(精)
实验20 植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。
植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。
用人造沸石在 pH 1~7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。
此法有专一性。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。
（二）试剂• 80%乙醇。
• 人造沸石。
• 活性炭。
4 ．茚三酮试剂：将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（ 70 ℃）溶解。
试剂至少在 24 小时内稳定。
5 ．脯氨酸标准液：准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中，再用蒸馏水定容至 250 mL ，其浓度为100 μg/mL 。
再取此液 10 mL ，用蒸馏水稀释至 100 mL ，即成10 μg/mL 的脯氨酸标准液。
（三）仪器设备分光光度计，水浴锅，移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，研钵，试管，恒温水浴三、实验步骤1 ．绘制标准曲线吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、 1.6 、 2.0 mL 分别放入 7 支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、20.0 μg 。
分别吸取上述标准溶液 2 mL ，加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热 15 min 。
用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。
将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。
2. 植株样品液的提取选取植株功能叶片 2 g ，用 3 mL 80 % 乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状。
植物中脯氨酸含量的测定
植物中脯氨酸含量的测定实验目的：测定不同植物中脯氨酸的含量，并比较它们之间的差异。
实验原理：脯氨酸是一种非必需氨基酸，广泛存在于植物中，具有多种生物学功能。
在光合作用过程中，植物体内光合色素的降解产物中可以生成脯氨酸。
本实验使用比色法对不同植物中脯氨酸的含量进行测定。
实验步骤：1.收集不同植物的叶片样品，如红细胞苔藓、菠菜和小麦。
2.将收集到的样品冷冻在液氮中。
3.将样品取出，立即用离心机将其制成细胞匀浆。
4.在一个试管中加入适量的离心细胞匀浆，再加入几滴三氯乙酸，充分混合。
5.离心测得脯氨酸在样品提取液中的浓度。
6.制备标准曲线，将一系列不同浓度的脯氨酸溶液与苏丹黑R混合，测量吸光度。
7.根据标准曲线计算出各样品提取液中脯氨酸的浓度。
实验结果：以菠菜、小麦和红细胞苔藓为样品进行测定得到如下结果：菠菜中的脯氨酸含量为0.27 mg/g。
小麦中的脯氨酸含量为0.15 mg/g。
红细胞苔藓中的脯氨酸含量为0.08 mg/g。
讨论与结论：根据实验结果，可以看出不同植物中的脯氨酸含量存在差异。
菠菜中的脯氨酸含量最高，小麦次之，红细胞苔藓最低。
这可能是由于植物的基因差异、生长环境、生长阶段等因素导致的。
脯氨酸作为一种抗氧化物质和氮源，对植物的生长发育、抗逆性等都有重要影响。
因此，研究不同植物中脯氨酸含量的差异，对于了解植物的生理功能及其适应策略具有一定意义。
实验中使用的比色法测定脯氨酸含量的方法简便、快速，并且可以同时测定多个样品。
然而，该方法在样品预处理过程中会导致一定的失真，且对其他物质的干扰较大。
因此，在进行进一步的研究时，需结合其他方法进行验证。
注：以上为生成的实验报告假象，并非真实数据。
植物组织中脯氨酸含量的测定
植物组织中脯氨酸含量的测定植物组织中脯氨酸含量的测定XXX,YYY,ZZZ一实验目的1、了解植物组织在逆境中积累脯氨酸的意义。
2、掌握脯氨酸的测定方法。
二实验原理脯氨酸普遍存在于植物体中,正常的花粉中含量最多,可达干重的1~3%，而在不育的花粉中含量却很低。
因而有人把它作为花粉育性指标。
植物在遭受水分、盐分和温度等逆境胁迫时,体内脯氨酸含量可以增加几倍到几百倍，故可把它作为植物抗性的指标。
本法根据在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应产生稳定的红色产物，此产物在515nm 波长有一最大吸收峰。
可用分光光度计测定。
而酸性和中性氨基酸不能与茚三酮反应形成红色产物,一些碱性氨基酸如Lys对测定有干扰，可以用人造沸石吸附除去这些氨基酸后再进行测定，该法有专一性。
三、实验材料：黄豆Giy c in e max豆目豆科大豆属四实验步骤1、标准曲线的绘制用浓度为100μg/ml的脯氨酸标准溶液，依次稀释成浓度为0、5、10、15、20、25、30μg/ml的的脯氨酸溶液各10ml。
分别取标准溶液2ml,加冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml,摇匀。
放入100℃水浴中显色15分钟,冷却后在515nm比色测定,以浓度0为空白对照,将测定结果以脯氯酸浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标作标准曲线标准曲线：C（μg/ml）=47.8A515nm+0.022、植物样品液的提取及测定取对照或处理植物材料各1g，加入研钵中，加入10ml5%乙酸研磨成匀浆，再加20ml 蒸馏水混合均匀后，过滤并定容到50ml，取滤液8ml，加0.8g人造沸石振荡5分钟，将上层液离心(3000rpm)10分钟，上清液即样品提取液。
3、显色与比色取2ml样品提取液，加冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml，摇匀，放入100℃水浴中显色15分钟，冷却后在515nm比色测定，从标准曲线上查出对照和处理材料的提取液中的脯氨酸浓度。
（测定3次）另外取2ml蒸馏水做试剂空白，重复上述操作。
植物体内游离脯氨酸含量的测定
实验20 植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。
植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。
用人造沸石在 pH 1~7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可用分光光度计测定。
此法有专一性。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。
（二）试剂• 80% 乙醇。
•人造沸石。
•活性炭。
4 ．茚三酮试剂：将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中，加热（ 70 ℃）溶解。
试剂至少在 24 小时内稳定。
5 ．脯氨酸标准液：准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中，再用蒸馏水定容至 250 mL ，其浓度为 100 μg/mL 。
再取此液 10 mL ，用蒸馏水稀释至 100 mL ，即成 10 μg/mL 的脯氨酸标准液。
（三）仪器设备分光光度计，水浴锅，移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯，研钵，试管，恒温水浴三、实验步骤1 ．绘制标准曲线吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、 1.6 、 2.0 mL 分别放入 7 支具塞刻度试管，分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为 0 、 2.0 、4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、 20.0 μg 。
分别吸取上述标准溶液 2 mL ，加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热 15 min 。
用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。
将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。
2. 植株样品液的提取选取植株功能叶片 2 g ，用 3 mL 80 % 乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状。
植物体内游离脯氨酸含量的测定
3
仪器与试剂：
1、实验试剂：
３%磺基水杨酸，甲苯，冰醋酸，人造沸石， 酸性茚三酮试剂（25g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml 6mol/L磷酸中,加热（70℃）溶解。常温保存期24h，冰箱中保存 48h）， 标准脯氨酸溶液（10mg脯氨酸溶于100ml80％乙醇中，浓度 为100ug/ml）
材料在第一片新叶完全展开后分为两组，第一组作为对 照,继续浇灌1/2Hoagland溶液；第二组为NaCl处理组，浇灌 含0.8%NaCl的1/2Hoagland溶液;继续培养三天后，取地上部 分以备实0、0.5、1.0、5、10、20μg/ml 一系列浓度的标准溶液。取标准溶液各2ml，加入2ml３%磺 基水杨酸、１ml冰醋酸和３ml茚三酮试剂于加塞试管中，充 分混匀后在沸水浴中加热显色40min，冷却后加入４ml甲苯 盖好盖子充分震荡，待其静置分层后，吸取红色甲苯相，于 波长520nm测定OD值，以OD值为纵坐标，脯氨酸浓度 （ μg/ml ）为横坐标绘制标准曲线。
２、实验仪器：
天平，研钵，移液管，水浴锅，离心机，试管，722型分光 光度计
4
实验步骤：
1、准备实验材料
提前7-10天培养小麦材料并根据实验目的对其分组处理， 以备后用。
小麦种子黑暗中25℃下用蒸馏水浸泡24h,使其充分吸涨， 然后将吸涨的种子置于培养皿中黑暗25℃下萌发48h。将萌发 一致的种子播种于培养皿中,用1/2的Hoagland营养液培养.
6
3、NaCl胁迫对小麦脯氨酸含量的影响
分别取对照和ＮaCl处理的小麦幼苗的地上部分（芽鞘 和叶子）0.3g，用３%磺基水杨酸５ml研磨提取，匀浆移 至试管中，在沸水浴中提取10分钟，加入0.5g人造沸石充 分震荡，冷却后转移至离心管中，3000r/min离心10min， 取上清液待测。
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实验报告
一、实验目的：
了解植物体内水分亏缺与脯氨酸积累的关系
二、实验所用仪器、药品、材料：
1.仪器
分光光度计,水浴锅,漏斗,大试管（20ml）,具塞刻度试管（20ml）,注射器或滴管（5-10ml）。
2.材料
植物小麦叶片
3.试剂
（1）3%磺基水杨酸
（2）甲苯
（3）2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol·l-1磷酸以3:2混合，作为溶剂进行配制，此液在4℃下2-3天有效
（4）脯氨酸标准溶液：准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100μg·ml-1。
再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成10μg·ml-1的脯氨酸标准溶液。
三、实验步骤：
1、标准曲线的绘制：
（1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。
混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。
（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。
静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色。
（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。
表9．2．1各试管中试剂加入量
2、待测物的提取、显色、比色等测定的数据记录：
3、计算结果：
从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度
脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)] =(C．V)·(A·W)－1
式中：C一提取液中脯氨酸浓度(PS)，由标准曲线求得： V －提取液总体积（ml）
A --- 测定时所吸取得体积（ml）
W----- 样品重（g）
脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)] =(C．V)·(A·W)－1=
四、实验小结：（本次实验成败之处和原因分析以及改进措施）
1.配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现用现配。
2.测定样品若进行过渗透胁迫处理，结果会更显著。
3.试剂添加次序不能出错。