羟脯氨酸的测定方法

合集下载

分光光度法测定乳及乳制品中L(-)-羟脯氨酸的改进研究

ｓｉｍｐｌｉｉｆａｓｔｈｅｓｔｅｐｓｏｆｏｐｅｒａｉｔｎｇｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｉｔｏｎｏｆＬ（一）一ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ，ｂｕｔｌｓａｏｉｓａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｆｅａｓｉｂｌｅ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｖｅｇｏｏｄａｃｃｕｒａｃｙ，
Ⅵｒ、删．ｃｈｉｎａｄａｉｒｙ．ｎｅｔ
பைடு நூலகம்
中国乳品工业
ｄｑｊｒｙＩＮＤＵＳＴＲＹ
ｚｇｒｐｇｙ＠１６３．ｃｏｎｒ
分光光度法测定乳及乳制品中Ｌ（一）一羟脯氨酸的改进研究
赵玉童，咸伟月
（黑龙江省质量监督检测研究院，哈尔滨１０００５０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｒｅｉｓｎｏｆｏｒｍａｌｎａｉｔｏｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｍｅｔｈｏｄｓｏｒｆＬｅａｔｈｅｒｍｉｌｋｉｄｅｎｉｔｉｆｅｄａｌｏｎｇｔｉｍｅ．ＡｂｓｔｒａｃｔＴｗｏｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｓｏｆｓａｍｐｌｅｓｉｎ
ｉｎｍｉｌｋａｎｄｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓ
ＺＨＡＯＹｕ—ｆｕ，ＸＩＡＮＷｅｉ —ｙｕｅ

医学知识之脯氨酸

脯氨酸脯氨酸介绍：脯氨酸是构成蛋白质的基本单位，是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一，氨基酸除了脯氨基酸为亚氨基酸外，其他氨基酸均为α氨基酸。

组成蛋白质分子的氨基酸都是L-氨基酸，但近年内证实了它们可以异构为D-氨基酸，具体机制还未研究。

脯氨酸正常值：102～336μmol/L。

脯氨酸临床意义：异常结果：升高：遗传性高脯氨酸血症。

需要检查人群：遗传性高脯氨酸血症疑似病例需要确诊的患者脯氨酸注意事项：检查前注意：1、患者进素食2～3天2、食物中胶原蛋白摄入量影响尿中羟脯氨酸的排泄量。

检查时要求：1、告知医生最近2~3天内的进食情况。

不适宜人群：没有不适宜人群。

脯氨酸检查过程：取对照品溶液或供试品溶液200μL，加正亮氨酸内标溶液20μL，加入0.1mol/ L异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，1mol/L三乙胺乙腈溶液100μL，混匀，室温下放置1h，加入正己烷400μL，振摇，放置10min，取下层溶液，即得。

精密吸取衍生化后供试品溶液及对照品溶液各1μL，按上述色谱条件测定脯氨酸及内标峰面积，计算脯氨酸面积与内标峰面积比值，采用内标法计算脯氨酸浓度。

【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。

2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。

3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。

如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。

大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。

本文到此结束，谢谢大家!。

HPLC-ELSD法测定花丹安神合剂中N-甲基-反式-4-羟基-L-脯氨酸的含量

中医药杂志，
2017（6）：2801-2804.
［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：
中国医药科技出版社，2015.
［5］周浩，黄鑫，吴秀兰，等. HPLC-ELSD 法测定苏氨
酸中脯氨酸的含量［J］.中国现代药物应用，2011（23）：
131-132.
于 ELSD 的上述优点，采用该检测器对 N-甲基-反式-
工程师，本科；研究方向：新药开发和质量控制。
- 44 -
Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
第 18 期
2020 年 6 月
江苏科技信息 · 基础研究
反式-4-羟基-L-脯氨酸对照品溶液 1.0 mL，分别按
即得。
2.4
No.18
进样量在 5.00~20.00 μg 范围内与其峰面积积分值呈
2.5
精密度试验
精密吸取对照品 N-甲基-反式-4-羟基-L-脯氨
酸溶液 10 μL 进样，重复 6 次，测得峰面积 RSD 为
0.74%（n=6），
表明该实验所用仪器精密度良好。
2.6
稳定性试验
精密吸取供试品溶液 10 μL 进样分析，然后分
G306 文献标志码：
A
0
引言
花丹安神合剂是以落花生枝叶为君药、丹参为臣
药的现代中药复方制剂，具有良好的镇静、催眠作用，
与传统苯二氮䓬类及其他催眠药相比，呈现出安全、
副作用小的特点。物质基础研究表明，N-甲基-反
式-4-羟基-L-脯氨酸和丹参素是其有效成分
，因
［1-3］
此在新药研发过程中，建立以 N-甲基-反式-4-羟
基-L-脯氨酸和丹参素（丹参的指标性成分）为花丹

氨基酸的定量测定教材

1、甲醛滴定法
特点：简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析结果相近应用：脯氨酸与甲醛作用时产生不稳定的化合物，使结果偏低酪氨酸含有酚羧基，滴定时也会消耗一些碱而致使结果偏高溶液中若有铵存在也可与甲醛反应，往往使结果偏高试剂：40%中性甲醛溶液（以百里酚酞作指示剂，用氢氧化钠溶液将 40%甲醛中和至淡蓝色） 1g/L百里酚酞乙醇溶液 1g/L中性红50%乙醇溶液 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液
(VHClO4 cHClO4 VNaAC cNaAC ) M m
100%
（含有两个氨基的氨基酸，如赖氨酸、胱氨酸和精氨酸在此计算式中还应该除以2）式中：VHClO4——所消耗的高氯酸标准溶液的体积 cHClO4——所消耗的高氯酸标准溶液的浓度 VNaAC——所消耗的醋酸钠溶液的体积 cNaAC——所消耗的醋酸钠溶液的浓度 M——被测氨基酸的摩尔质量 m——被测氨基酸的质量
②样品测定：吸取澄清的样品溶液1～4mL，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A值，测得的A值在标准曲线上可查得对应的氨基酸质量。
3、茚三酮比色法
结果计算：
m 100 氨基酸含量= （mg/100g） m1 1000
式中：m——从标准曲线上查得的氨基酸的含量，μg m1——测定的样品溶液相当于样品的质量，g
100%
式中：VHClO ——所消耗的高氯酸标准溶液的体积 cHClO ——所消耗的高氯酸标准溶液的浓度 M——被测氨基酸的摩尔质量 m——被测氨基酸的质量
4
4、非水溶液滴定法
②回滴法（适用于不易溶解于冰醋酸而能溶解于高氯酸的氨基酸）：精确称取氨基酸样品30~40mg 左右，溶解于5mL高氯酸标准溶液中，加2滴甲基紫指示剂，剩余的酸以醋酸钠溶液滴定，颜色变化由黄，经过绿、蓝至初次出现不褪的紫色为终点。氨基酸含量=

高效液相色谱法检测酱油中羟脯氨酸的含量研究

高效液相色谱法检测酱油中羟脯氨酸的含量研究李晨辉;周小虎【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)015【总页数】1页(P113-113)【作者】李晨辉;周小虎【作者单位】邵阳学院生物与化学工程系;邵阳学院生物与化学工程系【正文语种】中文酱油是人们日常生活中必备的调味品之一，在酱油当中，具有羟脯氨酸的成分，在检测酱油中羟脯氨酸含量的实验中，可应用高效液相色谱法。

利用乙醇提取样品，衍生试剂采用2，4-二硝基氟苯，采用360 n m的波长，采用5 μm 4.6mm×250 mm的色谱柱。

通过相应的实验操作，获得酱油当中羟脯氨酸的含量数据。

实验材料和实验仪器在实验当中，采用了羟脯氨酸二甲基甲酰胺、2，4-二硝基氟苯、乙腈、碳酸氢钠、乙酸钠、磷酸二氢钾、冰乙酸、氢氧化钠、盐酸、1%DNFB衍生溶液、羟脯氨酸对照品储备液以及羟脯氨酸对照品工作溶液等实验材料。

实验仪器则主要包括离心机、工作站、柱温箱、自动进样器、紫外检测器以及高效液相色谱仪等。

实验样品的来源主要是自制酸水解蛋白液、自购样品等。

实验方法和实验步骤在实验当中，首先在1 mL样品中加入3 m L乙醇，混合离心之后，在10 mL棕色容量瓶中放置0.25 mL上清液，将1.0 mL碳酸氢钠、0.75 mL水加入其中，并加入1 mL DNFB，均匀混合后进行30 min、60℃的衍生。

冷却到室温，再加入磷酸二氢钾溶液，摇匀过滤，最后进行进样分析。

实验中采用5 μm 4.6mm×250 mm色谱柱，流动相分别为乙腈-水、乙酸钠，柱温为30℃、流速为每分钟1.0 m L，检测波长为360 mm，进样量为10 μL。

检测条件在选择检测条件的过程中，首先对样品进行前处理，对于样品不进行水解，而是直接进行提取，选择乙醇作为提取溶剂，消除样品中色素的干扰。

在选择衍生试剂的过程中，根据实际要求，采用了DNFB试剂，因为其具有稳定性好、重现性好、成本低、时间短的优势。

脯氨酸含量测定

逆境胁迫下植物体脯氨酸含量测定【实验目的】1.了解脯氨酸在植物抗逆性决定中的作用。

2.掌握脯氨酸提取和测定的方法。

【实验原理】1.逆境条件下（干旱、盐碱、热、冷害、冻害）,植物体内脯氨酸含量会显著增加，并且积累指数与植物的抗逆性有关，因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

2.测定脯氨酸含量目前一般使用的方法是茚三酮法。

酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。

用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色,再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

【实验材料】1.材料：小麦幼苗：（1）对照（2）100mM、200mM NaCl处理48h（3）5%、15% PEG-6000处理48h2.试剂：3%磺基水杨酸；冰醋酸；甲苯；2.5% 酸性茚三酮溶液；脯氨酸母液50 μg/ml3.器材：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅【实验内容】1.脯氨酸标准曲线的测定（2）分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml 2.5％的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。

（3）冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。

（4）轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。

2.样品的测定（1）称取不同处理的小麦叶片各0.5 g，于2.5 ml 3%磺基水杨酸试管中，沸水浴中提取10 min。

（2）吸取1ml上清于另一试管中，加入1 ml水、1 ml冰乙酸、2 ml 2.5％的酸性茚三酮，混合液于沸水中显色30 min。

（3）冷却后加入4 ml甲苯，摇荡30S，萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在520nm比色。

【实验结果】查标准曲线，得脯氨酸含量c（µg）脯氨酸含量（µg.g-1）＝c ×(v／a )／w其中V为提取液总体积ml; a为测定液体积ml；W为样品质量g。

医学检验·检查项目：尿羟脯氨酸(HYP)_课件模板

谢谢！
医学检验·各论：尿羟脯氨酸（HYP） >>>
简介：
临床常用测量方法有24小尿羟脯氨酸与空腹2小时尿羟脯氨酸，以及尿羟脯氨酸与肌酐比值。
饮食中的胶原含量对24小时尿羟脯氨酸含量影响较大。因此在测试时应让患者进素食2～3天。
空腹2小时尿羟脯氨酸排出量不受饮食的影响，故更能反映病人的基础代谢状况。
医学检验·各论：尿羟脯氨酸（HYP） >>>
正常值：
24小时尿羟脯氨酸排出量测定可随年龄的不同而有所差异： 1～5岁： 150～ 496μmol/24h (20～65mg/24h)。 6～10 岁： 270～755μmol/24h (35～ 99mg/24h)。 11～17岁：480～ 1370μmol/24h (63～180mg/2
尿羟脯氨酸(HYP)
医学检验·各论：尿羟脯氨酸（HYP骨基质中氨基酸、骨胶原分解后，不再参加骨胶原合成，从尿中排出的产物。因为HYP的排出量与骨吸收率显著相关，因此可通过尿羟脯氨酸与肌酐的比值(HYP/Cr)来判断骨质吸收的情况。HYP/Cr随年龄的增长而升高，在绝经后骨质疏松症中HYP/Cr明显升高。在骨
医学检验·各论尿羟脯氨酸（HYP）
内容课件模板
医学检验·各论：尿羟脯氨酸（HYP） >>>
别名： 24小时尿羟脯氨酸,空腹2小时尿羟脯氨酸, 尿羟脯氨酸与肌酐的比值。
医学检验·各论：尿羟脯氨酸（HYP） >>>
简介：
尿羟脯氨酸既能反映骨吸收，又能反映骨形成，它的排出量受到诸多的激素的影响，如甲状腺激素、生长激素、肾上腺皮质激素、性激素等。尿羟脯氨酸排出量增加的可见于儿童生长期、骨破坏性疾病 (如甲状腺功能亢进、骨转移癌)、骨矿化不良疾病(如软骨病、佝偻病、高转换型骨质疏松症、畸形性骨炎)等

胶原蛋白羟脯氨酸含量计算

胶原蛋白羟脯氨酸含量计算
胶原蛋白是人体内最主要的蛋白质之一，它是构成皮肤、骨骼、肌肉和软骨等组织的重要成分。

羟脯氨酸是胶原蛋白中重要的氨基酸之一，它能够提高胶原蛋白的稳定性和生物活性，是一种非常有价值的营养成分。

为了更好地了解胶原蛋白中羟脯氨酸的含量，在进行补充和保健时，需要进行计算。

计算方法比较简单，主要需要以下几个步骤：首先，需要确定所用胶原蛋白的种类和来源。

不同来源的胶原蛋白羟脯氨酸的含量可能存在差异。

例如，鱼鳞胶原蛋白中羟脯氨酸的含量较高，而猪皮胶原蛋白中羟脯氨酸的含量则较低。

其次，需要确定胶原蛋白中总氨基酸的含量。

这可以通过检测进行得到，也可以从产品的营养成分表中查看。

一般情况下，胶原蛋白中氨基酸的含量在20-30%之间。

最后，根据所用胶原蛋白的来源和总氨基酸含量，可以计算出羟脯氨酸的含量。

例如，如果使用鱼鳞胶原蛋白，总氨基酸含量为25%，则羟脯氨酸的含量大约为8%左右。

需要注意的是，羟脯氨酸含量的计算只是作为参考，实际情况可能会有所差异。

因为胶原蛋白的制备方法和加工流程也会影响其中羟脯氨酸含量的变化。

因此，在选择胶原蛋白补充品时，需要选择品牌信誉好、生产工艺先进的产品。

总的来说，胶原蛋白羟脯氨酸的含量计算相对简单，只需要了解所用胶原蛋白的种类和来源，以及总氨基酸的含量，即可计算出羟脯
氨酸的含量。

这对于选择合适的胶原蛋白补充品和进行营养保健具有一定的参考价值。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

1羟脯氨酸含量测定
2羟脯氨酸标准曲线绘制
3试剂的配制【6-7】
[6] 李秋营,姚汝琳.细胞中羟脯氨酸的测定.山西医科大学学报.2001,32(6):558-559
[7] David J Etherington, Trevor J Sims. Detection and Estimation of Collagen[J]. J Sci Food Agric, 1981,32:539-546
柠檬酸缓冲液：柠檬酸钠120g、冰醋酸12mL、柠檬酸46g、氢氧化钠34g 溶解于蒸馏水中，调整pH 值至6.0，然后定容至1000mL。

0.05mol/L 氯胺T 溶液：称取氯胺T 7.05g，溶解于100mL 蒸馏水中，然后加入乙二醇独甲醚150mL，再加入250mL 柠檬酸缓冲液混合均匀。

对二甲基氨基苯甲醛: 试剂 A：取无水乙醇20mL，慢慢加入浓硫酸2.74mL；试剂B：取对二甲基氨基苯甲醛12.0g，慢慢加入无水乙醇40mL，水浴加热使其完全溶解并冷却至室温，然后将A 液慢慢加入B，混合均匀。

3.5mol/L 高氯酸溶液：取27mL 高氯酸，以蒸馏水定容到100mL。

羟脯氨酸标准曲线的绘制羟脯氨酸标准储存液：准确称取L-羟基脯氨酸标准品50mg，加入0.01mol/L 盐酸中溶解，稀释并定容到100mL，在冰箱中保存。

羟脯氨酸标准工作液：吸取羟脯氨酸标准储存液10mL到50mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到50mL(临用前配)，浓度为100μg/mL。

4标准曲线绘制
分别吸取羟脯氨酸标准工作液1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5mL，用蒸馏水定容到50mL容量瓶中。

以蒸馏水为空白，分别吸取上述标准液1mL，加入1mL 柠檬酸缓冲液和1mL 0.05mol/L 氯胺T 溶液，室温(25 ℃) 氧化10min 后，加入高氯酸1mL(3.5mol/L)，放置10min，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，在65℃水浴显色10min，冷却后在560nm处测吸光度。

以羟脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程。

浓度μg/mL0.50 1.00 1.25 1,50 1,75 2.00 2.25
0.612
吸光度A560 0.134 0.284 0.347 0.409 0.477 0.55
6样品水解将样品反复绞碎，充分混合。

称取5.000g样品放入250ml三角瓶中，加
入6M盐酸（SnCl2 0.75%）100ml，置于电热鼓风干燥箱中105℃下水解16h，分两天进行。

7样品转化和测定
将水解完的水解液过滤？ml容量瓶中，蒸馏水定容到刻度。

混合均匀后，吸取5ml 滤液于烧杯中，用10M和1M的氢氧化钠调滤液的pH值为8.0±0.2。

将调好的滤液用滤纸过滤于250ml容量瓶中，蒸馏水定容到刻度。

准确吸取此溶液1ml于20ml的比色管中，以下操作同标准曲线绘制。

按标准曲线和稀释倍数计算羟脯氨酸含量。