小鼠小肠粘膜上皮细胞使用说明
4种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较_孙秀梅
第４１卷 第５期２０１３年５月西北农林科技大学学报（自然科学版）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）Ｖｏｌ．４１Ｎｏ．５Ｍａｙ ２０１３网络出版时间：２０１３－０５－０２ １０：５４网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１３０５０２．１０５４．０１３．ｈｔｍｌ４种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较 ［收稿日期］ ２０１２－０８－１１ ［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３１００１０１９）；安徽省自然科学基金项目（１１０４０６０６Ｍ９１） ［作者简介］ 孙秀梅（１９８７－），女，黑龙江富裕人，在读硕士，主要从事反刍动物营养转运研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：６０５９２３７２８＠ｑｑ．ｃｏｍ ［通信作者］ 王菊花（１９７５－），女，内蒙古锡盟人，副教授，博士，硕士生导师，主要从事动物营养生理研究。
李培英（１９５３－），女，安徽省泗县人，教授，硕士生导师，主要从事兽医寄生虫与寄生虫病学研究。
孙秀梅ａ，程 帆ｂ，刘 维ａ，孙 涛ａ，薛秀恒ｂ，李培英ａ，王菊花ａ（安徽农业大学ａ动物科技学院，ｂ茶与食品科技学院，安徽合肥２３００３６）［摘 要］ 【目的】比较４种小鼠肠黏膜上皮细胞（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ＩＥＣｓ）分离方法的分离效果，建立小鼠ＩＥＣｓ的有效分离培养方法，获得小鼠ＩＥＣｓ原代细胞，为后续研究做准备。
【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法以及胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ联合消化法共４种方法分离小鼠ＩＥＣｓ并培养，通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的ＩＥＣｓ进行细胞特异性鉴定，比较４种方法的分离效果。
【结果】组织块培养法所获ＩＥＣｓ活力好，增殖能力强，但成纤维细胞污染较严重，细胞纯度低；胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ分离法获得的ＩＥＣｓ数量少且细胞增殖能力弱；嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶Ⅰ联合消化法所获得的小鼠ＩＥＣｓ纯度较高，原代培养时增殖能力稍弱于组织块培养法，但传代后增殖能力趋于稳定。
小鼠 小肠he染色形态描述
小鼠小肠he染色形态描述
小鼠小肠是小鼠消化系统中的一个重要器官，其内部结构复杂，包括了许多不同的细胞类型和组织结构。
其中，小肠上皮细胞是小肠内最主要的细胞类型，其表面上有许多微绒毛，这些微绒毛有助于增加小肠的表面积，从而提高小肠对营养物质的吸收效率。
在小鼠小肠中，常用的染色方法是HE染色。
HE染色是一种组织学染色方法，可以同时染色细胞核和细胞质，从而使细胞和组织的结构更加清晰可见。
通过HE染色，我们可以观察到小鼠小肠的细胞和组织结构，进而了解其生理和病理状态。
在HE染色下观察小鼠小肠，我们可以看到小肠上皮细胞排列有序，形成了小肠绒毛。
小肠绒毛上有许多微绒毛，这些微绒毛可以增加小肠表面积，从而提高小肠对营养物质的吸收效率。
此外，小肠绒毛上还有一些小肠腺，这些小肠腺可以分泌消化酶和黏液，帮助消化和吸收食物。
在小肠绒毛下方，我们可以看到一层称为基底膜的结构。
基底膜是一层由胶原蛋白和其他分子组成的薄膜，它可以支持小肠上皮细胞的生长和分化。
基底膜下方是肌层，肌层由平滑肌细胞组成，可以帮助小肠进行蠕动，从而促进食物的消化和吸收。
除了上述结构外，我们还可以看到一些免疫细胞，如淋巴细胞和浆细胞。
这些免疫细胞可以帮助小肠对病原体和其他外来物质进行免疫防御。
总之，小鼠小肠是一个复杂的器官，其内部结构包括了许多不同的细胞类型和组织结构。
通过HE染色，我们可以清晰地观察到小鼠小肠的细胞和组织结构，从而了解其生理和病理状态。
小鼠小肠上皮内淋巴细胞的提取与抗原表型测定和功能的...
小鼠小肠上皮内淋巴细胞的提取与抗原表型测定和功能的初步研究①周正任 叶晓卉 杨晓临 王 丹 (中国医科大学病原生物学教研室,沈阳110001) 中国图书分类号 R392112 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2001)0320135203摘 要 目的:建立一种提取小肠上皮内淋巴细胞的方法,并对其功能进行初步研究。
方法:采用机械分离法和Percoll 非连续密度梯度离心法提取小鼠小肠上皮内淋巴细胞,经间接荧光染色后用流式细胞仪检测表型。
应用乳酸脱氢酶法检测其自然杀伤功能。
结果:应用该法可获得小鼠小肠上皮内淋巴细胞2×106～4×106Π只鼠,活力测定>95%。
抗原表型中7318%以上表达C D8分子,T CRγδ为4318%。
而且自然杀伤活性明显高于小鼠脾淋巴细胞。
结论:表明采用该法提取小鼠小肠上皮内淋巴细胞有效。
IE L具有自然杀伤活性。
关键词 小肠上皮内淋巴细胞 自然杀伤活性 抗原表型Studies on isolation phonotype and natural cytotoxicity of murine intraepithelial lymphocytesZHOU Zheng2Ren,YE Xiao2Hui,Y ANG Xiao2Lin et al.China Medical Univer sity,Pathogenic Microbiology Department, Shenyang110001Abstract Objective:T o extract a method for is olating murine intraepithelial lymphocyte and analyze its main function.Methods:Murine intestinal intraepithelial lymphocyte was is olated by a mechanical technique and Percoll discontinous density gradient centrigugation.Its surface antigens were measured by using indirect immunoflurescence.Its natural killing activity was examined by LDH method.R esults:2×106～4×106iIE LsΠper m ouse were acquired by using this method,add its vitality>95%.O f phenotypic antigen,m ore than73.8%showed C D8+cell, T CRγδ43.8%.IE L’s natural killing activity was higher than P BMCs.Conclusion:This method is effective of is olating IE Ls.IE Ls has natural killing activity.K ey w ords Intraepithelial lymphocyte Natural killing activity Phonotype 小鼠小肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithe2 lial lym phocyte,iIE L)主要见于小肠粘膜绒毛上皮细胞之间,9512%位于上皮基底部,317%在上皮层, 111%在顶端。
小鼠肠道细胞类型
小鼠肠道细胞类型摘要：1.小鼠肠道细胞类型的概述2.小鼠肠道上皮细胞的特征与功能3.小鼠肠道免疫细胞的种类与作用4.小鼠肠道共生菌的影响5.总结：小鼠肠道细胞类型在维持肠道健康中的重要作用正文：小鼠肠道细胞类型：深入了解小鼠肠道生态系统的关键组成部分肠道是生物体中至关重要的器官，不仅负责消化和吸收养分，还承担着免疫防御、微生物共生等多种功能。
在过去的几年里，科学家们对肠道细胞类型的研究取得了重大进展。
本文将重点介绍小鼠肠道细胞类型，包括肠道上皮细胞、免疫细胞等，并探讨它们在维持肠道健康中的重要作用。
一、小鼠肠道上皮细胞的特征与功能肠道上皮细胞是小鼠肠道中最主要的细胞类型。
它们具有以下特征：1.高度分化：肠道上皮细胞具有特定的形态和功能，如吸收养分、屏障保护等。
2.快速更新：肠道上皮细胞具有较强的再生能力，损伤后可迅速修复。
3.紧密连接：肠道上皮细胞之间存在紧密连接，构成完整的肠道屏障，防止病原菌入侵。
二、小鼠肠道免疫细胞的种类与作用肠道免疫细胞是小鼠肠道防御病原菌的重要组成部分。
主要包括：1.淋巴细胞：包括B细胞和T细胞，负责产生抗体和发挥细胞免疫作用。
2.巨噬细胞：摄取和消化病原菌，激活免疫应答。
3.自然杀伤细胞（NK细胞）：直接杀伤病原菌和肿瘤细胞。
4.粒细胞：参与急性炎症反应，清除感染。
三、小鼠肠道共生菌的影响肠道共生菌是小鼠肠道内一种重要的微生物群落，对肠道健康具有重要作用。
共生菌可以：1.协助消化：与肠道上皮细胞共生，促进养分吸收。
2.抑制病原菌：竞争共生空间，抑制病原菌生长。
3.调节免疫：影响免疫细胞的分化和功能。
四、总结：小鼠肠道细胞类型在维持肠道健康中的重要作用肠道细胞类型相互协作，共同维护肠道生态平衡。
上皮细胞提供屏障保护，免疫细胞负责防御病原菌，共生菌调节肠道微环境。
一旦这种平衡被打破，可能导致肠道疾病的发生。
因此，保持肠道细胞类型的健康与平衡是维护肠道健康的关键。
通过对小鼠肠道细胞类型的研究，科学家们可以深入了解肠道健康的生理机制，为预防和治疗肠道疾病提供新的策略。
大鼠小肠粘膜上皮细胞电镜超微结构
文章标题：探秘大鼠小肠粘膜上皮细胞的电镜超微结构一、引言在生物学研究领域中，电镜技术被广泛应用于观察细胞的微观结构。
本文将深入探讨大鼠小肠粘膜上皮细胞的电镜超微结构，从而帮助我们更深入地理解生物细胞的内部组织和功能。
二、大鼠小肠粘膜上皮细胞的形态特征1. 微绒毛大鼠小肠粘膜上皮细胞的特征之一就是其表面覆盖着许多微绒毛。
这些微绒毛起到增加细胞表面积的作用，有利于吸收和分泌。
2. 紧密连接在电镜下观察，可以看到大鼠小肠粘膜上皮细胞之间存在着紧密连接，这些连接结构有助于维持细胞间的紧密联系，防止物质的渗透和细胞的损伤。
3. 着丝粒和线粒体通过电镜观察，可以清晰地看到大鼠小肠粘膜上皮细胞内部含有大量的着丝粒和线粒体，这些细胞器对于细胞的代谢和能量供应起着重要的作用。
三、大鼠小肠粘膜上皮细胞的功能1. 吸收营养物质大鼠小肠粘膜上皮细胞通过其丰富的微绒毛和线粒体，能够高效地吸收肠腔中的营养物质，为机体提供所需的营养和能量。
2. 分泌消化酶大鼠小肠粘膜上皮细胞还具有分泌消化酶的功能，这些消化酶可以帮助机体更好地消化和吸收食物中的营养成分。
3. 维持肠道屏障功能紧密连接结构的存在可以帮助大鼠小肠粘膜上皮细胞维持肠道屏障功能，防止有害物质的渗透，保护机体免受外界环境的侵害。
四、个人理解与观点通过对大鼠小肠粘膜上皮细胞的电镜超微结构进行深入研究，我对细胞的微观结构和功能有了更深入的理解。
细胞作为生物体的基本组成单位，其结构和功能对于整个生物体的生存和发展至关重要。
电镜技术的应用使我们能够更加清晰地观察和理解细胞的微观结构，为生物学研究提供了重要的工具和方法。
总结回顾通过本文的阐述，我们对大鼠小肠粘膜上皮细胞的电镜超微结构有了更深入的认识。
通过电镜观察，我们可以清晰地看到细胞的微细结构和功能特征，这些特征对于维持生物体的正常生理功能至关重要。
电镜技术的应用也为细胞学研究提供了重要的工具和方法。
在文章的撰写过程中，我们逐步深入讨论了大鼠小肠粘膜上皮细胞的微观结构、功能特征和意义，希望可以帮助读者更加深入地理解细胞生物学的重要知识点。
小鼠肠切片实验报告
1. 掌握小鼠肠切片的基本操作流程。
2. 观察小鼠肠黏膜的形态结构，了解其生理功能。
3. 学习显微镜下观察细胞和组织结构的方法。
二、实验原理小鼠肠切片实验是研究小肠形态结构和功能的重要方法。
通过制作肠切片，可以观察肠黏膜的形态、绒毛结构、腺体分布等，进而了解其生理功能。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：昆明小鼠1只2. 仪器：手术显微镜、解剖显微镜、切片机、显微摄影仪、显微镜、载玻片、盖玻片、染色液、生理盐水、酒精、二甲苯等3. 试剂：4%多聚甲醛、HE染色液、苏木精染色液、伊红染色液等四、实验方法1. 实验动物处死：采用颈椎脱位法处死小鼠，取出小肠。
2. 小肠清洗：将小肠置于生理盐水中，轻轻揉搓，去除内容物和脂肪。
3. 小肠固定：将清洗干净的肠管置于4%多聚甲醛溶液中固定，时间约24小时。
4. 小肠脱水：将固定好的肠管依次放入不同浓度的酒精溶液中脱水，直至100%酒精。
5. 小肠透明：将脱水后的肠管置于二甲苯中透明。
6. 小肠浸蜡：将透明后的肠管浸入石蜡中，使石蜡充分渗入组织内部。
7. 小肠包埋：将浸蜡后的肠管放入包埋盒中，冷却凝固成蜡块。
8. 切片：使用切片机将蜡块切成厚度约5-7μm的薄片，贴于载玻片上。
9. 染色：将切片依次进行HE染色、苏木精染色和伊红染色。
10. 观察：使用显微镜观察切片，记录观察结果。
1. 小肠切片的HE染色结果显示，肠黏膜层分为黏膜层、黏膜下层和固有层。
2. 黏膜层：由黏膜上皮、固有层和黏膜肌层组成。
黏膜上皮为单层柱状上皮，细胞排列整齐，细胞核呈椭圆形，位于细胞基底部。
固有层含有丰富的血管和淋巴管，有利于营养物质和水分的吸收。
3. 黏膜下层：主要由结缔组织、血管和淋巴管组成，起到支持作用。
4. 固有层：由密集的结缔组织、平滑肌纤维和神经纤维组成，有利于调节肠道运动和分泌。
六、实验讨论1. 本实验成功制作了小鼠肠切片，并观察到了肠黏膜的形态结构。
2. HE染色结果显示，小肠黏膜层由黏膜上皮、固有层和黏膜肌层组成，具有吸收营养物质和水分的功能。
小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书
小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理。
一．小鼠小肠粘膜上皮细胞贴壁细胞客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。
如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。
二．小鼠小肠粘膜上皮细胞悬浮细胞1.接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5.1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。
小肠粘膜SP细胞移植治疗小鼠致死量放射性损伤的实验研究
小肠粘膜SP细胞移植治疗小鼠致死量放射性损伤的实验研究韩钦，†1李宁†2，何东南†2，刘艳宁†1，顾星星，3朱维铭，2高翔，3严熙，1于宝军，2王星波，2廖联明，1黎介寿，*2赵春华。
*11、中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程中心 （100005）2、南京大学医学院临床学院，南京军区南京总医院全军普通外科研究所 （210002）3、南京大学模式动物研究所 （210093）†为共同第一作者. *为共同通讯作者E mail ：ljsnjjl@ E-mail: chunhuaz@public.tpt.tj.c摘要：研究背景：小肠粘膜干细胞是小肠粘膜正常更新的源泉。
小肠粘膜干细胞可以分化成小肠粘膜的四种主要成熟上皮细胞。
目前小肠粘膜干细胞尚在研究中，尚缺乏主要的细胞表面标志，其细胞特性尚不明确。
我们主要研究从小肠粘膜类器官片段中分离的小肠粘膜SP细胞治疗放射性损伤的治疗效果。
方法：从小肠粘膜类器官片段中分离Hoechst33342不染的SP细胞，然后将细胞注射到经过全腹腔照射的小鼠的小肠粘膜下，使用LacZ染色和特殊细胞染色追踪供者来源的细胞及观察它们在受者体内的分化潜能。
结果：我们能够观察到注射到受者体内的SP细胞能够分化成小肠粘膜的四种成熟上皮细胞即柱状上皮细胞、内分泌细胞、杯状细胞及潘氏细胞。
更加重要的是注射的SP细胞能够保护小肠粘膜细胞避免凋亡及从放射损伤中恢复。
提高小鼠经致死量照射后的生存率。
结论：我们的结果显示局部注射小肠粘膜SP细胞能够有效的治疗小肠的放射性损伤。
关键词：干细胞 致死量放射 分化 SP细胞中图分类号：R361+.3Local injection of small intestinal SP cells rescues mice from lethal irradiationQinHan,†1 Ning Li,†2Dongnan He,†2Yanning Liu,†1 Xingxing Gu,3Weiming Zhu,2 Xiang Gao,3 Yan Xi,1 Baojun Yu,2Xinbo Wang,2 Lianming Liao,1JieShou Li, *2 Robert Chunhua Zhao.*11. Institute of Basic Medical Science & School of Basic Medicine, Chinese Academy of Medical Science & Peking Union Medical College, Beijing, P.R. China, Center of Excellence in Tissue Engineering, Chinese Academy of Medical Science & Peking Union Medical College, Beijing, P.R. China2. Clinical School of Nanjing University, Department of General Surgery, Jinling Hospital, Nanjing, P.R.China3. Model Animal Research Center, State Key Laboratory of Pharmaceutic Biotechnology, Nanjing University, Nanjing , P.R.China†These authors contributed equally to this work.*Correspondence :JieShou Li, Academician of Chinese Academy of Engineering, Professor. Department of General Surgery, Jinling Hospital305#East ZhongShan Road Nanjing 210002. P.R.ChinaTelephone: 86-25-81515025 Fax: 86-25-86703441E-mail: ljsnjjl@Robert Chunhua Zhao, M.D., Ph.D., ProfessorInstitute of Basic Medical Sciences and School of Basic MedicineDirector of Center for Tissue EngineeringChinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College5# Dongdansantiao Beijing 100005. P.R. ChinaTel: 86-10-65123207, Fax: 86-10-65125311E-mail: chunhuaz@public.tpt.tj.cAbstract：Background & Aims: The adult intestine is maintained by proliferation of stem cells that reside in the crypt compartment. Stem cell progeny undergo terminal differentiation to form the four differentiated cell types of the intestine. Presently the stem cells in the small intestinal epithelium have not been well defined. The present study was aimed to evaluate the differentiation potential of side population (SP) cells from the small intestinal organoid and their possible use in the treatment of irradiation disease. Methods: SP cells were isolated form intestinal organoid by Hoechst-33342 dye staining. In an abdominal irradiation model, SP cells were injected the intestinal submucosa. LacZ staining and intestinal cell-type specificstaining was used to trace the donor cells and observe their differentiation potential. Results: We showed that SP cells from the intestinal organoid can differentiate into all of the four major cell types in vivo: enterocytes, goblet cells, enteroendocrine cells, and Paneth cells in vivo. More importantly, local injection of SP cells could protect the intestinal cells from apoptosis and greatly enhance the intestinal recovery from irradiation damage, resulting in higher survival rate of the mice subject to lethal irradiation. Conclusions: Our results suggest that local injection of intestine SP cells may be a useful approach for the treatment of irradiation-induced intestinal disease. Keywords: stem cell lethal irradiation differentiation side population cells1．引言小鼠小肠是由单层上皮覆盖的，单层上皮折叠成不同的隐窝和绒毛结构，各自的功能有所不同。
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小鼠小肠粘膜上皮细胞
小鼠小肠粘膜上皮细胞产品介绍:
为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
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同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠小肠粘膜上皮细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
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