脱细胞猪小肠粘膜下层基质材料中生长因子的 定量检测
Material Sciences 材料科学, 2018, 8(5), 595-602
Published Online May 2018 in Hans. http://www.hanspub.org/journal/ms https://doi.org/10.12677/ms.2018.85070
文章引用: 张扬, 夏磊磊, 高建萍, 门福民, 郑晓龙, 张晋辉, 陈毅, 赵博. 脱细胞猪小肠粘膜下层基质材料中生长因
子的定量检测[J]. 材料科学, 2018, 8(5): 595-602. DOI: 10.12677/ms.2018.85070
Quantitative Detection of Growth Factors in
Porcine Small Intestinal Submucosa Matrix
Materials
Yang Zhang1, Leilei Xia1, Jianping Gao2, Fumin Men1, Xiaolong Zheng1, Jinhui Zhang1,
Yi Chen1*, Bo Zhao1*
1Beijing Biosis Healing Biological Technology Co., Ltd., Beijing
2State Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, CAS, Beijing
Received: May 4th, 2018; accepted: May 20th, 2018; published: May 28th, 2018
Abstract In this study, three growth factors including basic fibroblast growth factor (FGF2), transforming growth factor β1 (TGFβ1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in two SIS products
(VIDASISTM and Biodesign®) were quantified by enzyme linked immune sorbent assay (ELISA) kit
through the preliminary treatment of liquid nitrogen freezing and grinding technology which was
aimed to release the growth factors from the tissue. Results showed that contents of TGFβ1, VEGF
and FGF2 in VIDASISTM were 8375 ± 2125 pg/g, 5486 ± 1043 pg/g and 3990 ± 1372 pg/g respec-
tively; while the corresponding contents in Biodesign® were 11517 ± 1331 pg/g, 5432 ± 272 pg/g
and 5417 ± 947 pg/g.
Keywords
Porcine Small Intestinal Submucosa, Acellular Matrix, Transforming Growth Factor, Basic
Fibroblast Growth Factor, Vascular Endothelial Growth Factor
脱细胞猪小肠粘膜下层基质材料中生长因子的
定量检测
张 扬1，夏磊磊1，高建萍2，门福民1，郑晓龙1，张晋辉1，陈 毅1*，赵 博1*
1北京博辉瑞进生物科技有限公司，北京
2中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京
*通讯作者。 张扬 等
DOI: 10.12677/ms.2018.85070 596 材料科学
收稿日期：2018年5月4日；录用日期：2018年5月20日；发布日期：2018年5月28日
摘 要
采取液氮冷冻粉碎技术将猪小肠粘膜下层脱细胞基质(SIS, Small Intestinal Submucosa)粉碎，再通过预
处理将SIS材料中的三种活性生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、转化生长因子(TGFβ1)和血
管内皮生长因子(VEGF)释放出来，以便采用特异性酶联免疫(ELISA)试剂盒检测，进而得到样品中三种
活性生长因子的含量。两种不同的SIS产品(VIDASISTM和Biodesign®)中的检测结果表明：VIDASISTM中
TGFβ1的的含量为8375 ± 2125 pg/g、VEGF的含量为5486 ± 1043 pg/g、FGF2的含量为3990 ± 1372
pg/g；Biodesign®中TGFβ1的的含量为11517 ± 331 pg/g、VEGF的含量为5432 ± 272 pg/g、FGF2的
含量为5417 ± 947 pg/g。
关键词
猪小肠粘膜下层，脱细胞基质，转化生长因子，碱性成纤维细胞生长因子，血管内皮生长因子
Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
1. 引言
猪小肠粘膜下层脱细胞基质(SIS, Small Intestinal Submucosa)是猪小肠粘膜下层通过脱细胞、成型和
灭菌等工艺制备而成的膜状材料，具有生物相容性高、生物可降解和可吸收等优点，广泛用于肌腱、硬
脑膜、腹壁和皮肤等组织的修复或重建[1] [2]。传统修补术手术时间较长、张力大等缺点影响患者的恢复，
SIS材料可在一定程度上改善这些缺陷，其诱导细胞黏附生长、感染率低等特点可证实SIS是一种良好的
动物源植入材料。SIS补片的成分主要包括I、III型胶原、纤维连接蛋白和多种生长因子(TGF-β、VEGF
和FGF等) [2] [3]。生长因子是由多种细胞分泌，作用于特定的靶细胞，调节细胞分裂、基质合成与组织
分化的细胞因子，有助于细胞功能的增强和血管化的形成[4] [5]。在体内组织中，细胞、生长因子及ECM
共处于一个动态环境之中，三者之间的多重相互作用构成了体内细胞生存的微环境[6]。它们是高活性、
多功能的多肽或蛋白质，主要在近距离发挥局部作用，它们与受体的亲和力极高，也极容易受外界影响
而失活。创面愈合是一个复杂的生物学过程，生长因子在改善各种生理和病理状态、促进组织再生、修
复及创伤愈合过程等方面日益发挥着重要的作用，其关键在于在促进肉芽组织形成的同时，加速创面再
上皮化进程[7]。
TGF-β是一种丰富的骨基质蛋白，也是一种肽类抗炎症生长因子，广泛存在于正常组织及转化细胞
中，在血小板和骨组织中含量较高，在骨形成和骨重建过程中发挥着极其重要的作用，可以通过控制免
疫细胞(T细胞、B细胞等)的增殖、分化和活化来进行免疫调节，促进伤口愈合以及血管发生等[8] [9] [10]。
VEGF是对血管内皮细胞具有高度特异性的血管源性生长因子，由血小板、血管平滑肌细胞、内皮细胞、
成骨细胞或肿瘤细胞等合成和分泌，对于新血管形成至关重要，具有增加血管通透性和促进内皮细胞增
殖等功能，还具有保护神经的作用，其中对VEGF的研究最多也最深入[8] [11]。FGF是一组具有相似结
构特征的多肽，广泛存在于机体组织内，目前已知FGF家族至少包括23个可编码相关结构蛋白的基因。张扬 等
DOI: 10.12677/ms.2018.85070 597 材料科学
FGF具有很强的促细胞分裂和增殖活性的作用，可诱导毛细血管的生成。在FGF2提取中使用到肝素，
肝素与FGF2结合形成稳定的复合物，可以保持此类生长因子的生物活性，肝素也可以直接结合到FGF2
受体上[6] [8] [12]。
ELISA试剂盒多用于检测血清或血浆中的生长因子，而组织中的生长因子不易提取和检测，本实验
采用三种方法对样品进行预处理，进而释放出SIS中的活性生长因子，再通过ELISA试剂盒检测生长因
子的含量，通过对比筛选出SIS中不同生长因子适宜的前处理方法，并与进口同类产品中生长因子的含
量进行了比较。
2. 实验部分
2.1. 主要材料
SIS (VIDASISTM)由北京博辉瑞进生物科技有限公司提供；SIS (Biodesign®)购自美国库克公司；ELISA
试剂盒购自武汉云克隆科技股份有限公司；尿素购自西陇化工股份有限公司；肝素钠购自国药集团化学
试剂有限公司；I型胶原酶购自北京欣经科生物技术有限公司。
2.2. 主要仪器
冷冻粉碎机(LT-100)，中科耐驰(北京)技术有限公司；LGJ-100F真空冷冻干燥机，北京松源华兴科
技发展有限公司；HC-2518R高速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；Thermo全波扫描多功
能酶标仪VARIOSKAN FLASH，美国Thermo Fisher公司。
2.3. 主要试剂的配制
1) Buffer 1：2.5 mg/mL肝素钠；2 mol/L尿素。
2) Buffer 2：50 mmol/L Tris-HCl，pH 7.4；0.36 mmol/L CaCl2。
2.4. 实验方法
2.4.1. 冷冻粉碎步骤
将干燥SIS补片材料用无菌手术剪刀剪成尺寸小于1 × 1 cm2的小片，便于SIS材料进入粉碎机内部；
将粗碎的SIS材料放在进料台上，使用不锈钢进料棒将SIS材料送进冷冻粉碎机进料口，并向进料口处
持续注入适量液氮，在进料口处混合SIS与液氮，利用粉碎机粉腔体内部的负压，使SIS粉料与液氮吸
入粉碎腔，粉碎温度−196℃；粉碎腔出口处设有不锈钢筛网，孔径80~100目，利用出口处的正压，将符
合尺寸的SIS粉送出粉碎腔，出口处用透气性好的无菌布袋收集粉碎好的SIS粉料；在停止供液氮后需
迅速将SIS粉料放入无菌密封罐或自封袋中备用，待恢复室温后方可打开取用。
2.4.2. 活性生长因子提取方法
通过以下三种方法分别提取三种活性生长因子：
方法一：称取SIS材料粉碎后样品5 mg，加入1 mL Buffer 1，高速低温匀浆20~30 min至液体呈胶
体状，14000 rpm高速离心30 min，提取上清液，定容到1 mL，4℃保存。
方法二：称取SIS材料粉碎后样品5 mg，加入1 mL Buffer 1，高速低温匀浆20~30 min至液体呈胶
体状，于4℃匀速搅拌24 h，14000 rpm高速离心30 min，提取上清液，定容到1 mL，4℃保存。
方法三：称取SIS材料粉碎后样品50 mg，加入8 mL Buffer 2，100℃变性10 min，冷却后加入200 μg
组织工程试题解答
D fd
1、组织工程的三要素是什么?基本原理是什么?
三要素:a)种子细胞; b)支架材料; c)生长因子
基本原理:a) 由人体取出细胞;b) 在体外将细胞培养到足够的数量;c) 将这些细胞填入、养在人工支架里;d) 有时需要再加一些化学物或生长因子促进细胞的分化;e) 将此人工组织移植到患者身上。
2、组织工程的生长因子有哪些分泌方式?为什么生长因子需要控制性释放?根据生长因子产生细胞与接受生长因子作用的细胞相互之间的关系,可概括为以下三种模式:(1)内分泌(endocrine),生长因子从细胞分泌出来后,通过血液运输作用于远隔靶细胞。如:血小板源生长因子(PDGF)源于血小板,作用于结缔组织细胞。(2)旁分泌(paracrine),细胞分泌的生长因子作用于邻近的其他类型细胞,对合成、分泌该生长因子的自身细胞不发生作用,因为它缺乏相应受体。(3)自分泌(autocrine),生长因子作用于合成及分泌该生长因子的细胞本身。生长因子以后两种作用方式为主。
生长因子优点诸多,但是也存在很多问题,主要是高扩散性和半衰期短,生物学活性难以长期保存。局部直接应用生长因子可在较短的时间内发挥作用,但在生理环境下很容易使之迅速失活,不产生预期的生理效应。因此,采用控制性释放技术,对生长因子进行保护,使之在有水环境下即能保持活性,又能持续释放或控制释放,是使生长因子得到有效应用的关键。
3、组织工程用支架材料的基本要求是什么?为什么需要多孔结构?
良好的生物相容性
良好的生物降解性
具有三维多孔立体结构
可加工性和有一定的机械强度
良好的材料-细胞界面
良好的消毒性能
合适的孔尺寸、高的孔隙率和相连通的孔形态,以利于大量细胞的种植、细胞和组织的生长、细胞外基质的形成、氧气和营养的传输、代谢物的排泄以及血管和神经的内长入。A
4、组织工程种子细胞的基本要求是什么?
5、组织工程皮肤和骨骼等器官构建路线是什么?所构建的人工器官优缺点各是什么?采用动物实验检测所构建的器官的大概步骤是什么?
胎猪脱细胞主动脉作为小口径组织工程血管替代物的体内试验研究
胎猪脱细胞主动脉作为小口径组织工程血管替代物的体内试验研究
[摘要]目的：研究胎猪脱细胞主动脉（decellularized aorta of
fetal pigs，dafp）的生物相容性，确定其是否有作为支架材料用于小口径组织工程血管移植的潜力。方法：利用胰酶和核酸酶联合的脱细胞方法来制备胎猪主动脉脱细胞基质(dafp)，将其作为小口径组织工程血管的生物支架材料移植在成年犬单侧颈总动脉处，并监测其移植处的血流通畅情况，后期又通过组织学染色观察组织工程血管的组织学结构；扫描电镜观察血管的内表面结构；透射电镜观察其内表面的内皮细胞再生情况。结果：组织学染色结果表明构建的小口径组织工程血管具有完整的内膜层及中膜层结构；扫描电镜结果显示组织工程血管内表面覆盖着完整的内皮细胞层。结论：dafp有作为小直径组织工程血管支架用于体内移植的潜力。
[关键词]组织工程；血管移植；生物支架材料；细胞外基质
[中图分类号]r318 [文献标识码]a [文章编号]1008-6455（2012）05-0773-03
the vivo study on decellularized aorta of fetal figs can
be substituted for tissue engineered small-diameter blood
vessel
zhang ying-bo,liu guo-feng,li qing-chun,yang da-ping
(department of plastic surgery,the second affiliated
hospital of harbin medical university,harbin
150086,heilongjiang,china)
组织工程医疗产品第25部分动物源性生物材料DNA残留量测定法
组织工程医疗产品 第25部分动物源性生物材料DNA残留量测定法
ICS
C
中华人民共和国医药行业标准
YY/T XXXX.3,20XX
组织工程医疗产品 第25部分
动物源性生物材料DNA残留量测定法:
荧光染色法
Quantification of Residues DNA in Biological Materials:
Fluorescence Method
(送审稿)
20XX-XX-XX 发布 20XX-XX-XX 实施
国家食品药品监督管理局 发 布
YY/T XXXX.3,20XX
目 次
前言------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------2 引言------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------3 1 范围--------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----4 2 规范性引用文献------------------------------------------------------------------------------------------------------4 3 术语、定义及缩略词------------------------------------------------------------------------------------------------4 4 实施标准概要---------------------------------------------------------------------------------------------------------5 5 意义和使用------------------------------------------------------------------------------------------------------------6 6
实时荧光定量PCR检测猪病料中的PRRSV与CSFV
动物医学进展。２Ｏ１ｌ，３２（２）：１４—１８ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
实时荧光定量ＰＣＲ检测猪病料中的ＰＲＲＳＶ与ＣＳＦＶ
陈钟鸣，张志成，方光远
（金陵科技学院，江苏南京２１００３８）
摘要：根据ＧｅｎＢａｎｋ发表的ＰＲＲＳＶ、ＣＳＦＶ基因核苷酸序列，应用Ｐｒｉｍｅｒ ５．０软件分别设计了２对
特异性引物。以重组质粒作为阳性标准品，应用ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测两种病毒的核酸含量。
在样品稀释到１０ ～１Ｏ 拷贝时，能得出良好的线性关系，相关系数为Ｒ。一０．９９９ ８。用此法检测猪细小病
毒（ＰＰＶ）、伪狂犬病毒（ＰＲＶ），结果均为阴性。建立了ＰＲＲｓＶ、ＣＳＦＶ的标准曲线。该方法具有线性关系
好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点，为分析ＰＲＲＳＶ、ＣＳＦＶ共感染猪体内病毒的含量提供了有效地检
测方法。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪瘟病毒；实时荧光定量ＰＣＲ；重组质粒；标准曲线
中图分类号：￥８５２．６５９．６；￥８５８．２８ 文献标识码：Ａ
猪繁殖与呼吸综合征（Ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ
ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）是由猪繁殖与呼吸综
合征病毒（ＰＲＲＳＶ）引起的一种病毒病。它以母猪
一 ［９］ 文章编号：１００７—５０３８（２０１１）０２—００１４—０５
发热、厌食和流产、死产、产弱仔等繁殖障碍以及仔
猪的呼吸道症状和高死亡率为特征 。ＰＲＲＳＶ属
于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，是有囊膜的单
收稿日期：２０１０—０８—１７ 基金项目：江苏省自然科学基金项目（ＢＫ２０ｏ７５３６） 作者简介：陈钟鸣（１９５４一），男，河南人，教授，主要从事猪病毒性疾病研究。 索 求书崇 刘胜旺，杜恩岐，孔宪刚，等．鸡传然性支气管炎病毒ＬＸ４株 ［１１］ ｍＲＮＡｓ和ｍＲＮＡｓ ｃＤＮＡ的分子特征［Ｊ］．中国病毒学报， ２００３，１８（３）：２６５—２７０． ［１Ｏ］贺秀嫒，张淑霞，张君涛，等．鸡传染性支气管炎病毒ｗ株膜 ［１２３ 蛋白基因的分子特征［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然科学 版，２００９，３７（９）：２７—３３． Ｂｉｎｎｓ Ｍ Ｍ，Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ Ｍ Ｅ，Ｔｏｍｌｅｙ Ｆ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅ－ ｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ＩＢＶ ｓｔｒａｉｎ ６／８２ ＥＪ］．Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒａｓ，１９８６，１４（１３）：５５５８． 聂磊，张庆霞，韩宗玺，等．中国１９９５－２００４年鸡传染性支气 管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析［Ｊ］．病毒学 报，２００７，２３（４）：２９８—３０４．
脱细胞组织基质的研究进展
第２８卷第３期 ２００７年６月 大连大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＤＡＬＩＡＮ ＵＮｌＶＦＲ５１ＴＹ ＶＯＩ．２８ Ｎｏ．３ Ｊｕｎ．２００７
脱细胞组织基质的研究进展
张晨，王志军，高景恒
（大连大学附属新华医院，辽宁大连１１６０２１）
摘要：脱细胞组织基质是近年来在组织修复领域的热门话题．它是通过对异体组织进行脱细胞处理，去除移 植相关抗原，从而获得的一种具有一定生物活性的生物衍生材料．目前在外科各分科均已开展了脱细胞组织基 质的相关研究，主要有用于血管、瓣膜、泌尿道、皮肤、筋膜等的修复，作者重点介绍了脱细胞组织基质的基本结 构、相关基础研究、临床应用方式及转归．脱细胞组织基质在直接修复组织缺损及作为组织工程的支架材料具 有广阔的应用前景．但植入后早期炎症及血运来源等问题仍需进一步深入的研究． 关键词：脱细胞基质；组织移植；组织工程 中图分类号：Ｒ３２９．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－２３９５（２００７）０３—００５７—０４ 收稿日期：２００７—０３－２５ 作者简介：张晨（１９６３一），男，教授，主任医师，医学博士，主要研究方向：组织移植、组织工程、移植免疫．
脱细胞组织基质（Ａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍａｔｒｉｘ，以下简称ＡＣＴＭ）是应用物理或化学方法将异体或异种组
织进行脱细胞处理，从而去除组织移植过程中引起排斥反应的相关抗原，以用于修复损伤组织的一种新 型生物材料．Ｐｅｅｒ（１９５５）最先提出了这一假说，并尝试用胰蛋白酶消化法处理软骨，但没有成功．Ｍｅｅｚａｎ
（１９７５）使用化学除垢剂制作了一些组织的无细胞基底膜．现有的很多方法都是以此为基础发展而来 的．１９９２年，脱细胞真皮基质ＡｌｌｏＤｅｒｍ在美国应用于临床．至１９９０年代后期，随着组织工程学研究在全
球范围内的展开，ＡＣＴＭ越来越引起相关领域的重视并成为研究的热点之一．本文就ＡＣＴＭ近年来的研
究进展综述如下．
2015版IWGDF糖尿病足慢性创面管理指南
2015
有关糖尿病足慢性创面管理方案的临床证据比较缺乏，特别需要确切的临床研究给予支持。IWGDF对于提高糖尿病足部慢性溃疡愈合的干预指南主要根据3篇系统性综述确定，这3篇综述跨越了最近10年有关糖尿病足慢性创面的最新研究。该指南根据GRADE系统给予的建议强度和证据质量高低标准进行判断，建议支持了一些干预方法，但反对用一些没有确切数据支持的方法进行干预。指南推荐共包括9个方面。
建议1：应用干净清水或生理盐水清洗创面、必要时进行清创以清除创面上的组织碎片，应用无菌惰性敷料包裹创面以吸收创面过多的分泌物、保持创面温暖湿润，促进伤口愈合。(建议强度：强;证据强度：低)
建议2：首先应用尖锐器具清除创面的腐烂坏死组织、伤口周围痂皮，这一措施优先于其他措施，但要注意相对禁忌证，例如严重的缺血。(建议强度：强;证据强度：低)
理由:清创在这里被定义为去除创面表层的组织碎片、坏死组织、感染组织，以达到创面清洁、出现有活力的组织。有足够专业训练的机构可以在可能的情况下应用清创达到清洁创面。有研究证据证明普通清创是有效的，并不需要非常特殊的方法进行清创。清创可以用物理的方法，如手术、尖锐的器物等;生物的方法，如蛆;自溶的方法，如水凝胶;生物化学的方法，如酶;有关应用手术及尖锐物品清创的证据非常少，在对之前的文献进行系统审阅中，发现有些是临床研究的亚组分析。虽然本指南重点在锐器清创，认为其是有效的伤口处理最关键的步骤，但还是要注意其相对禁忌证，如严重的下肢缺血。
IWGDF系统评阅了三篇主要文献。早期发表在IWGDF的杂志上，建议应用水凝胶进行创面的清创较单纯盐水浸润的绷带来处理更有利于伤口的愈合。但这些研究的偏倚风险比较高，但其结论还是得到了Cochrane的肯定。类似应用含有生物酶或水凝胶的清创敷料不能得到可以应用的证据支持，这些研究的缺陷是均只研究了单一方法的疗效。蠕虫(蛹)治疗方法没有获得这些综述的支持，仅仅只有4个小型的研究进行了探讨，每篇都有高偏倚风险。当然，最近有两篇RCT研究探讨蠕虫(蛹)治疗方法在下肢静脉性溃疡的应用，对于伤口的愈合并没有显示特别有意义的益处。
剪切力对内皮细胞及其与小肠黏膜下基质复合培养的形态学影响
剪切力对内皮细胞及其与小肠黏膜下基质复合培养的形态学影响
冷晔;丁祖泉;高艳琴;徐根林
【期刊名称】《中国康复理论与实践》
【年(卷),期】2007(013)009
【摘 要】目的 探讨切变应力对猪髋动脉内皮细胞单独培养和猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质联合培养形态学特征的影响.方法 对猪髋动脉内皮细胞单纯培养组,小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞联合培养组均施与40×10-5 N/cm2的剪切应力,持续12 h,两组均每隔30 min记录细胞图像,计算定向角.结果 单纯培养组:第1小时可见有明显的细胞脱落,细胞形态变化不明显;第4小时,细胞脱落已不明显,细胞由多角形逐渐变圆;第8小时,看不到明显的细胞脱落,细胞由第4小时时的类圆形向长梭形发展,细胞变得细长,局部可见细胞沿流场方向排列;第12小时,细胞变得更加细长,细胞沿流场方向排列趋势更为明显;定向角第12小时时与剪切前相比有显著性差异.联合培养组:第1小时有少数细胞脱落,但不如单纯培养组第1小时细胞脱落明显;第2小时后看不到明显的细胞脱落;定向角在12 h内未发生显著性变化.结论 40×10-5 N/cm2的脉动剪切力对猪髋动脉细胞的形态和排列在12 h内产生影响;但对与猪小肠黏膜下基质复合培养的内皮细胞影响不大.
【总页数】4页(P853-855,封3)
【作 者】冷晔;丁祖泉;高艳琴;徐根林 【作者单位】同济大学生命科学与技术学院,上海市,200092;同济大学生命科学与技术学院,上海市,200092;同济大学生命科学与技术学院,上海市,200092;上海市医疗器械专科学校,上海市,200093
【正文语种】中 文
【中图分类】R318.5
【相关文献】
1.猪小肠黏膜下层基质支架材料复合脂肪基质干细胞的生物相容性 [J], 杨浩;吴迪;李世和;朱晓松
2.猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的联合培养 [J], 冷晔;高艳琴;丁祖泉
猪小肠黏膜下层生物补片在盆腔器官脱垂手术中的应用价值
国妇 型 盘查 生 箜 卷第２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ（）ｈｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｉ Ｍａｒｃｈ ２０１４，Ｖｏ１．１５，Ｎ ０．２
・综述・
猪小肠黏膜下层生物补片在盆腔器官脱垂手术中的应用价值
孙秀丽 王建六
【摘要】 应用移植替代物进行盆底重建的新式手术近十年来发展迅速。聚丙烯合成网片套盒手术虽能显著
降低盆腔器官脱垂的复发率，但一些网片特有的并发症如侵蚀、感染、挛缩等越来越引起关注。寻求理想的移
植替代物是医患共同的目标。猪小肠黏膜下层生物补片有强大的组织再生功能，且胶原丰富，支撑力度较强，
近年来国外已应用于盆底重建手术，国内也开始尝试应用。本文概述了猪小肠黏膜下层生物补片的结构、功能
及其在盆底重建手术的应用。
【关键词】 盆腔器官脱垂；盆底重建术；生物补片
自从２００８年美国食品与药品监督管理局（ＦＤＡ）对
合成网片的使用提出警告，要求医生关注网片的副反应以
来，应用聚丙烯网片套盒来进行女性盆底重建手术的热潮
受到遏制。有些合成网片套盒因此宣布退市。但由于传统
手术的高复发率，医生们还是期待能有更好的移植替代物
用于盆底重建手术，理想的移植替代物应既能象聚丙烯合
成网片那样给薄弱的盆底提供强有力的支撑，又能避免侵
蚀挛缩感染等并发症，生物补片似乎是最有希望达到这一
标准的替代物ｌ１］。
所谓生物补片，是指取材于动物或人的组织，经脱细
胞处理去除组织细胞但保留细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａ—
ｔｒｉｘ，ＥＣＭ）的框架结构。移植到人体内后经过一段时间可
以完全被吸收。根据来源的物种、部位、消毒及交联制作
等的不同，生物补片分为多种，常用的有来源于人尸体或
猪的脱细胞真皮、牛心包、牛腹膜、猪小肠等补片。每种
补片有其各自的特点。与合成网片相比，生物补片的侵蚀、
感染及瘘形成率明显降低¨２ ］。
取材于猪小肠黏膜下层的生物补片（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
ｓｕｂｍｕｃｏｓａ，Ｓｕｒｇｉｓｉｓ），因制作工艺的特殊性，具有其他生
小肠黏膜下层：一种可降解的天然生物支架材料(本刊中文部)
ＷＷＷ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ Ｌｕ ＹＭ，ｅｔ ａｌ Ａｃｅｌｌｕｌａｒｐｏｒｃｉｎｅ ａｏｒｔａ ｍａｔｒｉｘ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｃａｆｆｏｌｄ：Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
应用猪主动脉脱细胞基质制备新型组织工程血管支架：生物相容性及力学性能评价木木术☆
吕玉明’，黄华梅２ ９王秋玲３，谢德明。（’广州医学院附属第三医院骨科，广东省广 １市５１０１５０；暨南大学， 医学院形态学实验中心，。生物
医学工程系，广东省广州市５１０６３２）
吕玉明☆，男，１９６８年生，江西省吉安市人，
汉族，副主任医师，在读博士，主要从事骨
与关节损伤和组织工程的研究。
通讯作者：谢德明，博士，暨南大学生物医
学工程系，广东省广州市５１０６３２
摘要
背景：组织工程血管构建的关键依赖于理想的 支架 猪瓶管作为组织工程血管构建材料已有
广泛应用，但其较高的免疫原性及较差的力学
强度限制了该材料作为组织工程支架的应用。
目的：应用猪主动脉脱细胞基质制各一种新的
具有良好机械性能及生物相容性的组织工程
血管支架。
方法：对猪主动脉进行脱细胞处理和热交联改 性制备脱细胞血管基质支架，采用苏木精伊
红染色及生物力学分析评估其脱细胞效果及
虹管基质的力学性能。将人脐静脉血管内皮细
胞接种于脱细胞血管基质支架中进行体外培
养，评估其生物相容性。
结果与结论：用１％的＂ｒｒｉｔｏｎ Ｘ－１００溶液处理
猪主动脉８４ ｈ可完全脱除血管细胞，同时不 破坏疵管基质结构：经真空下１２０℃热交联处
理１２ ｈ，脱细胞基质的拉伸断裂强度得到明显
提高，达到１＿７Ｏ ＭＰａ。在该改性血管基质支
架上接种人脐带静脉内皮细胞体外培养７ ｄ，
扫描电镜显示内皮细胞呈现典型的血管内皮
层状结构 表明猪主动脉经过脱细胞处理能够
维持血管基质完整，冷冻干燥和真空热交联处 理可有效提高其拉伸强度，且对血管内皮细胞
猪小肠黏膜下层作为组织工程肌腱支架材料的实验研究
天津医药２０１０年１１月第３８卷第１１期
猪小肠黏膜下层作为组织工程肌腱支架材料的实验研究
刘忠玉阚世廉 李秀兰张杨田旭 ９９３
摘要 目的：探讨猪小肠黏膜下层（ＳＩＳ）作为组织工程肌腱支架的可行性。方法：将培养的肌腱细胞以５ｘｌ０ｑｍＬ的 密度接种到经过处理的ＳＩＳ卷轴上，形成细胞一支架复合物。２４只罗曼鸡随机均分为实验组和对照组。２组动物均在左 腿中趾切断趾深屈肌腱造成２ ｃｍ的缺损，实验组植入细胞一支架复合物，对照组中将切断的自体肌腱原位缝合。于术 后第３、６，９周分别从实验组和对照组随机取出４只动物，并进行大体形态、组织形态学、体式显微镜观察和生物力学 测定。结果：２组所有鸡趾伤口术后２周均愈合。组织学检查显示，实验组中３周时胶原纤维数量相对少，排列紊乱；６ 周时细胞数量增多，形态也略显规则；９周时纤维数量多且排列规则。对照组为正常的肌腱纤维组织。生物力学测定证 实９周后２组植人物抗拉力强度，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：以ＳＩＳ与肌腱细胞构建的肌腱组织能够达到替 代肌腱缺损的要求，ＳＩＳ可作为肌腱组织工程的一种理想的支架材料。 关键词肠黏膜肌腱病组织工程组织支架猪
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａＩ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ＳｍａｌＩｌｎｔｅｓｔｉｎａＩ Ｓｕｂｍｕｃｏｓａ ａｓ ａ Ｓｃａｆｆｏｌｄ ｆｏｒ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｎｄｏｎ ＬＩＵ Ｚｈｏｎｇｙｕ，ＫＡＮ Ｓｈｉｌｉａｎ，ＬＩ Ｘｉｕｌａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙａｎｇ，ＴＩＡＮ Ｘｕ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００２１１，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｕｂｍｕｃｏｓａ（ＳＩＳ）ａｓ ａ ｓｃａｆｆｏｌｄ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒ－ ｉｎｇ ｔｅｎｄｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｓｅｅｄｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ＳＩＳ ｆｏｒ ５ｘ １０６／ｍＬ，ｆｏｒｍｉｎｇ ｔｈｅ ｅｅＨ－ｓｅｅｄｅｄ ＳＩＳ．Ｔｗｅｎｔｙ－ｆｏｕｒ Ｒｏ— ｍａｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ（１２ ｗｅｅｋｓ ｏｌｄ）ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｐｒｏｆｏｕｎｄ ｆｌｅｘｏｒ ｔｅｎｄｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｌｅｇｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ２ ｃｍ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｏｆ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｄｅｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐａｉｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｅｌｌ—ｓｅｅｄｅｄ ＳＩＳ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ａｕｔｏｔｅｎｄｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｕｔｕｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｆｅｃｔ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｔ ３， ６，ｏｒ ９ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｇｅｎｅｒａｌ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｓｏｍａｔｏ—ｔｙｐｅｍｉｅｒｏｓｅｏｐｅ，ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｔｔｅｒｎ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｗｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｈｅａｌｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｏｆ ２ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａ— ｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｆｅｗ ｆｉｂｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｆｕｓｅｄ ａｌｉｎｅｍｅｎｔ ｏｆ ｆｉｂｅｒｓ ａｔ ｔｈｅ ３ｒｄ ｗｅｅｋ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ａｌｉｎｅ— ｍｅｎｔ ｏｆ ｆｉｂｅｒｓ ｂｅｃａｍｅ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｔ ｔｈｅ ６ｔｈ ｗｅｅｋ．Ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｆｉｂｅｒｓ ｗａｓ ｓｅｅｎ ａｎｄ ｓｐｒｅａｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ａｔ ｔｈｅ ９ｔｈ ｗｅｅｋ．Ｎｏｒｍａｌ ｔｅｎｄｏｎ ｆｉｂｒｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｔ ｔｈｅ ９ｔｈ ｗｅｅｋ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｃｅｌｌ—ｓｅｅｄｅｄ ＳＩＳ ｓｃａｆｆｏｌｄ ｍａｙ ｂｅ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｆｅｃｔｅｄ ｔｅｎｄｏｎｓ．ＳＩＳ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｉｄｅａｌ ｓｃａｆｆｏｌｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｎｄｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｏｓａ ｔｅｎｄｉｎｏｐａｔｈｙ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ｓｗｉｎｅ