猪小肠粘膜上皮细胞的分离及体外原代培养模型的建立
奶牛小肠上皮细胞热应激模型的建立
奶牛小肠上皮细胞热应激模型的建立金钊;张艳芳;周华;纪雯雯;魏筱诗;王翀;茅慧玲【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2022(43)12【摘要】该试验旨在构建奶牛小肠上皮热应激模型,为研究热应激状态下的肠道养分吸收机制提供平台。
43℃处理奶牛小肠细胞0、2、4、8、12 h,其中0 h即为37℃对照组,CCK-8测定细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)含量。
结果发现,随着处理时间的增长细胞存活率显著下降(P<0.05),其中处理4 h时存活率为62.6%,且4 h的ROS含量较对照组显著上升(P<0.05),因此选择4 h为后续试验的处理时间。
比色法测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及培养液中丙二醛(MDA)含量。
结果显示:与对照组(37℃)相比,43℃处理细胞4 h,细胞内T-SOD、CuZn-SOD和GSH-Px活性均显著降低(P<0.05),培养液中MDA含量显著上升(P<0.05)。
综上所述,43℃作用奶牛小肠上皮细胞4 h,可构建奶牛小肠上皮细胞热应激模型。
【总页数】5页(P64-68)【作者】金钊;张艳芳;周华;纪雯雯;魏筱诗;王翀;茅慧玲【作者单位】浙江农林大学动物科技学院·动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S811.5;S823;S852.3【相关文献】1.鸡胚小肠上皮细胞的分离培养及其热应激效应2.热休克蛋白70上调表达对热应激猪小肠上皮细胞凋亡的影响3.白藜芦醇对热应激诱导的山羊小肠上皮细胞炎性反应调节作用的研究4.精氨酸对热应激处理的奶牛原代小肠上皮细胞增殖和凋亡的影响5.奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的建立及奶牛脂肪间充质干细胞对其迁移的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪肠道屏障功能与营养调控的相互作用研究
猪肠道屏障功能与营养调控的相互作用研究猪肠道屏障功能与营养调控之间的相互作用在畜牧养殖领域具有重要意义。
猪肠道是消化道中最长的一部分，对食物的消化吸收起着关键作用。
同时，猪肠道也是免疫防御的主要场所。
研究表明，肠道屏障功能的变化与营养的调控密切相关。
本文将探讨猪肠道屏障功能与营养调控的相互作用，并提出相关研究进展和应用前景。
一、猪肠道屏障功能的概述猪肠道屏障功能是指肠道内上皮细胞紧密连接形成的屏障，主要通过肠道黏膜、黏膜屏障和免疫屏障三个层次来实现。
肠道黏膜是肠道上皮和间质组织的结合，具有物理屏障和免疫调节功能。
黏膜屏障由上皮细胞和黏膜分泌物组成，可以防止有害物质的侵入。
免疫屏障则通过肠道黏膜上皮细胞和免疫细胞相互作用，调节免疫应答和病原体侵入。
二、猪肠道屏障功能与营养调控的相互影响1. 营养对肠道屏障功能的影响研究发现，营养成分可以影响肠道黏膜屏障的完整性和通透性。
例如，富含纤维素的饲料可促进肠道上皮细胞的结合和细胞膜的稳定，增强屏障功能。
而高蛋白饲料可能对黏膜屏障产生负面影响，引起炎症反应和屏障功能损伤。
另外，脂肪的摄入也会影响肠道屏障功能，并可能导致黏膜屏障的破坏。
2. 猪肠道屏障功能对营养吸收的调控肠道的主要功能之一是吸收和转运营养物质。
研究发现，肠道屏障功能的改变可能影响营养物质的吸收。
例如，肠道黏膜屏障的损伤可导致蛋白质和脂肪的吸收效率降低，从而影响猪的生长和健康状况。
此外，某些营养素如维生素D和维生素B12的吸收也受到肠道屏障功能的调控。
3. 猪肠道屏障功能与免疫调节的关系肠道屏障功能与免疫调节密切相关。
研究发现，肠道屏障功能的改变可能引发肠道炎症和免疫反应。
一方面，炎症反应可能导致肠道屏障功能的损伤；另一方面，屏障功能的损伤又可能引发免疫反应，形成恶性循环。
猪肠道屏障功能的调节不仅与保护猪免于致病菌感染有关，还与免疫耐受和免疫应答的调节有关。
三、猪肠道屏障功能与营养调控的研究进展目前，研究者们对猪肠道屏障功能与营养调控的关系进行了广泛而深入的研究。
原代猪微血管内皮细胞培养及鉴定
206原代猪微血管内皮细胞培养及鉴定周常喜（北京农学院动物科学技术学院，北京 102206）摘 要：【目的】建立一种简便有效的猪肺微血管内皮细胞原代培养方法。
【方法】选取新生SPF长白仔猪，剪取肺边缘组织，在血清中剪碎至1mm3大小，最后将组织块在六孔板中贴壁培养。
对培养出的原代细胞进行形态学观察及免疫学鉴定。
【结果】组织块贴壁12h后血细胞大量游出，24h后内皮细胞开始从组织块边缘迁出，48h后内皮细胞呈多角形或梭形聚集在组织块边缘，60h后弃掉组织块。
细胞汇合状态时呈典型的铺路石形态，免疫学鉴定CD31特异性抗原阳性。
【结论】组织块贴壁法成功培养出原代猪肺微血管内皮细胞。
关键词：猪；肺；微血管内皮细胞；原代培养；组织块贴壁肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVECs）不仅是肺脏血液与组织液之间的物理屏障，而且在止血、免疫、损伤修复、维持渗透压平衡、维持血管紧张度、内分泌、炎症反应等方面都有重要作用，因此培养猪肺脏的微血管内皮细胞在研究猪肺脏生理、病理等方面都有意义。
免疫磁珠法和化学消化法都可以用来培养微血管内皮细胞，但需要用到昂贵的消化酶及磁珠，实验条件较高。
本试验尝试用组织块法培养猪肺脏微血管内皮细胞，降低了试验成本和操作难度。
1 试验材料SPF级新生长白仔猪，购于北京清泉湾养猪有限公司；澳洲胎牛血清FBS（货号1099141），购于Gibco公司，；DMEM培养基（货号12100），Hanks平衡液（货号H1025），FITC标记羊抗兔IgG（SF134），抗荧光衰减封片剂（含DAPI，货号S2110）均购于索莱宝生物科技有限公司；胰酶（货号M38036- 250G）购于MERYER公司，CD31抗体（货号ab7388），购于Abcam公司；荧光倒置显微镜（型号货号ab7388），购于OLYMPUS公司；二氧化碳培养箱（型号MCO17AC），购于三洋公司。
小鼠肠道分离实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过分离和培养小鼠肠道组织，建立肠道类器官培养模型，为进一步研究肠道生理、病理以及药物代谢提供实验基础。
二、实验材料1. 实验动物：昆明小鼠4只，体重20-25g。
2. 试剂：胰蛋白酶、EDTA、DMEM/F12培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、肝素钠、PBS缓冲液。
3. 仪器：手术显微镜、手术器械、无菌操作台、培养箱、离心机、超净工作台。
三、实验方法1. 小鼠处死与肠道采集将小鼠麻醉后处死，无菌条件下取出小鼠回肠，置于含有PBS缓冲液的平皿中。
2. 肠道清洗将肠道置于无菌手术显微镜下，用剪刀将肠道剪成约1cm长的肠段，用PBS缓冲液反复冲洗，去除肠道内容物。
3. 肠道消化将清洗后的肠道剪成约1mm长的肠段，加入胰蛋白酶和EDTA混合液（1:1），在37℃水浴中消化30min。
4. 肠道细胞分离将消化后的肠道组织转移至离心管中，加入PBS缓冲液，以1000r/min离心5min，弃上清液。
5. 细胞计数与稀释将沉淀细胞重悬于DMEM/F12培养基中，计数并调整细胞浓度为1×10^6个/ml。
6. 肠道类器官培养将细胞悬液接种于培养皿中，置于培养箱中培养，培养条件为37℃、5%CO2。
7. 观察与记录定期观察细胞生长情况，记录细胞形态变化。
四、实验结果1. 肠道细胞形态观察培养过程中，肠道细胞逐渐聚集形成类器官结构，细胞形态呈立方形或圆形，细胞间连接紧密。
2. 肠道类器官生长情况随着培养时间的延长，肠道类器官体积逐渐增大，细胞数量增加，形态更加成熟。
五、讨论1. 肠道细胞分离与培养本实验采用胰蛋白酶和EDTA混合液消化肠道组织，成功分离出肠道细胞。
通过培养，肠道细胞逐渐聚集形成类器官结构，为后续研究提供了实验基础。
2. 肠道类器官应用前景肠道类器官在肠道生理、病理以及药物代谢研究方面具有广泛的应用前景。
通过研究肠道类器官，可以深入了解肠道功能，为疾病诊断、治疗和药物研发提供新思路。
小肠解剖观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解小肠的结构特点。
2. 观察小肠内表面皱襞和小肠绒毛。
3. 掌握小肠解剖观察的实验方法。
二、实验原理小肠是人体消化系统的重要组成部分，具有消化和吸收食物的功能。
小肠内表面有皱襞和小肠绒毛，增大了消化吸收的面积，有利于营养物质的吸收。
三、实验材料1. 猪的新鲜小肠一段2. 解剖剪3. 镊子4. 放大镜5. 培养皿6. 清水四、实验步骤1. 将猪的新鲜小肠用解剖剪纵向剪开，露出小肠内表面。
2. 将小肠放在盛有清水的培养皿中，观察小肠的外形。
3. 用手指抚摸小肠内表面，感受其滑腻的感觉。
4. 用放大镜仔细观察小肠内表面，观察皱襞和小肠绒毛的存在。
5. 记录观察到的结构特点。
五、实验结果与分析1. 小肠外形呈管状，两端封闭，中间开口。
2. 小肠内表面有环形皱襞，皱襞表面有许多绒毛状突起，即为小肠绒毛。
3. 皱襞和小肠绒毛的存在增大了小肠的表面积，有利于营养物质的吸收。
六、实验结论通过本次实验，我们观察到了小肠的结构特点，了解到小肠内表面皱襞和小肠绒毛的存在及其作用。
小肠的皱襞和小肠绒毛增大了消化吸收的面积，有利于营养物质的吸收，体现了结构与功能相适应的生物学观点。
七、实验心得1. 通过本次实验，我对小肠的结构和功能有了更深入的了解。
2. 实验过程中，我学会了如何使用解剖剪、镊子、放大镜等实验器材，提高了自己的实验操作能力。
3. 在实验过程中，我明白了观察细节的重要性，只有仔细观察，才能发现生物体的结构与功能之间的关系。
八、实验注意事项1. 实验过程中，注意安全，避免使用解剖剪等尖锐物品划伤自己。
2. 实验过程中，保持实验台整洁，避免污染实验器材。
3. 实验结束后，将实验器材洗净，放回原处。
九、实验拓展1. 研究不同动物的小肠结构特点及其功能差异。
2. 探讨小肠疾病对消化吸收功能的影响。
3. 研究小肠黏膜的再生机制及其应用。
第2篇实验名称：小肠解剖观察实验实验时间：2023年10月25日实验地点：生物实验室实验目的：1. 观察小肠的结构，了解小肠的形态特点。
猪胰腺干细胞分离与培养
猪胰腺干细胞分离与培养猪腺干细胞分培细胰离与王细～细忠英～细海～细～细春细婷;西北细林科技大家干细胞生物技细中心细西分中心～细西细凌学国712100, 摘要,【目的】探细一细细细的腺干细胞的分方法胰离,以便细糖尿病的细胞治细究提供富的细研丰【方法】采用细消化法分细得细胞～利用细含有胰离 5%的血的清 RPMI 1640 培细基培细细胞～低细度的细胞大量死亡漂浮～只留下少细壁的小细细胞数。
而后血细度提高到将清 15%以上细细培细;采用免疫细细得的细胞是否具有腺干细胞特征予以细细胰～细定了细胞的生细曲细并。
【细果】在血细度提高后每清胞能快速增殖形成一克隆～细细细细增殖后的细胞可以细细细代～目前已细至并个 60 代。
细免疫细化细表达 PDX-1、GLUT-2、vimentin 等腺干细胞的细志胰;细胞也表达Glucagon、insulin、somatostatin、pol等胰腺内分泌细胞的细志.【细细】通细本方法细得的细胞细细细定确细胰腺干细胞,在体外可自细分化分泌部内 4 细主要细胞。
细细细,胎猪～细～腺干细胞～糖尿病胰胰Isolation and Culture of Porcine Fetus Islet Stem CellWANG Yun, DOU Zhong-ying, QIAO Hai, ZHAO Ting, YANG Chun-rong(Shaanxi Province Branch Center of National Stem Cell Engineering Technology Center, Northwest Agricultural aUniversity, Yangling 712100, Shaanxi)Abstract:【Objective】To find an easy method for islet stem cell isolation.【Method】Cells derived fromporcinhave been cultured in RPMI 1640 with only 5% serum. This method made most of those cells die. Only a few lsurvived. These cells proliferated quickly when medium was changed to RPMI 1640 with 15% serum and could foIslet stem cell’s marker was noticed and detected by immunochemical method.【Result】Cells possess strongproliferawere sub cultured over 60 passages till now. It expressed islet stem cell’s marker such as PDX-1, GLUT-2, and vimen expressed insulin, Glucagon, somatostatin and polypeptide.【Conclusion】Cells derived by this method were determincells. It can differentiate into islet endocrine cell in vitro. This study has provided a reference for isolation and expansicell. Also, it has provided materials for diabetes therapy.Key words: Porcine fetus; Islet; Islet stem cell; Diabetes成熟～细细胞移植已成细治愈糖尿病胰[2]0引言法。
小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书
小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书小鼠小肠粘膜上皮细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理。
一．小鼠小肠粘膜上皮细胞贴壁细胞客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。
如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。
二．小鼠小肠粘膜上皮细胞悬浮细胞1.接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5.1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。
观察小肠结构实验报告
一、实验目的1. 了解小肠的结构特点。
2. 观察小肠绒毛和环形皱襞等结构。
3. 掌握观察小肠结构的方法。
二、实验原理小肠是人体消化系统中最重要的器官之一，其主要功能是消化和吸收营养物质。
小肠的结构特点使其能够有效地进行消化和吸收。
本实验通过观察小肠的横切面和纵切面，了解小肠的结构和功能。
三、实验材料1. 新鲜猪小肠一段2. 解剖剪3. 镊子4. 放大镜5. 培养皿6. 清水四、实验步骤1. 取一段新鲜猪小肠，用解剖剪将其剪成长约5cm的小段。
2. 将小肠放入清水中，用镊子轻轻搓洗，去除杂质。
3. 用解剖剪将小肠横切，用肉眼观察横切面，观察小肠壁的环形皱襞。
4. 将小肠纵剖，放入装有清水的培养皿中，用放大镜观察小肠内表面。
5. 观察小肠绒毛的形态和结构特点。
6. 观察小肠绒毛中的毛细血管和毛细淋巴管。
7. 记录观察结果。
五、实验结果1. 小肠横切面观察：可见小肠壁的内表面有许多环形皱襞，皱襞呈凹凸不平状，这是小肠黏膜向肠腔突出而形成的结构。
2. 小肠纵切面观察：可见小肠内表面有一层绒毛状突起，这些突起即为小肠绒毛。
在放大镜下，小肠绒毛呈指状细小突起，每个突起就是一个小肠绒毛。
3. 小肠绒毛中的毛细血管和毛细淋巴管：在放大镜下，可见小肠绒毛中含有丰富的毛细血管和毛细淋巴管，这些血管和淋巴管负责吸收营养物质。
六、实验分析1. 小肠的环形皱襞：小肠壁的环形皱襞使小肠内表面积增大，有利于食物与消化液充分接触，提高消化效率。
2. 小肠绒毛：小肠绒毛的指状细小突起增加了小肠内表面积，有利于食物中的营养物质充分吸收。
3. 毛细血管和毛细淋巴管：小肠绒毛中的毛细血管和毛细淋巴管负责吸收营养物质，为人体提供能量和营养。
七、实验结论通过本次实验，我们了解了小肠的结构特点，包括环形皱襞、小肠绒毛、毛细血管和毛细淋巴管等。
这些结构特点有利于小肠进行消化和吸收，保证了人体对营养物质的吸收和利用。
八、实验反思1. 在实验过程中，我们应注意观察小肠绒毛的形态和结构特点，以便更好地了解小肠的功能。
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离了猪 小肠粘膜 上 皮细胞 （ｎｅｔ ａ ｅ ｉ ｅ ａ ｃｉ， Ｅ ） Ｉｔ ｉ ｌ ｐｔ ｌ ｌ ｅｌ Ｉ Ｃ 且在体 外培 养传代 ， ｓｎ ｈ ｉ ｓ 并采 用碱 性磷 酸 酶和 角
蛋 白免 疫学试验鉴 定 ， 果表 明 ： 结 体外培 养的猪 ＩＣ在 Ｄ Ｅ Ｆ ２培养基 中， Ｅ Ｍ Ｍ— １ 细胞在 １２ｄ贴壁 ，～ ～ ５６
Ｉ７ Ｘ ０型倒 置 生 物显 微镜 （ｌ ｕ 公 司 ， Ｏｙ ｓ ｍｐ 日本１５ ０ Ｒ ；８４ 型高速 大容量 冷冻离 心机（ｐ ｅ ｄｒ公 司， 国） Ｗ— Ｅ ｐｎｏ ｆ 德 ； Ｓ Ｃ Ｆ型超 净 丁作 台（ 州净 化 ， 国）ＨＶ 一 ０型高 卜１ 苏 中 ； Ｅ５
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细胞 系的研 究结果 来解 释正常细 胞的行 为 ， 显有其 酶标仪 （ 明 山东高密 彩虹仪器公 司 ）Ｃ １ １２ Ｂ型鼓 风 ；Ｓ ０ — Ａ 不足 。 原代培养 是从供体 取得组织 绌胞 后在体 外进 行 干燥箱 （ 庆试验设备 厂）７ — 型磁 力加热搅 拌器ｆ 重 ；９ １ 江
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肠 道 的 重 要 功 能 细 胞 ， 与肠 道 食 糜 的 消 化 、 收 、 参 吸 免 疫 屏 障 和应 激 反 应 等 ， 与 肠 道 的 内 、 分 泌 功 能 关 并 外 系 １ 分 密 切 长 期 以来 ， 研 究 Ｉ Ｃ的 生 物 学 功 能 、 在 Ｅ 细 胞 增 殖 和分 化 的调 控 因素 ， 质 吸 收 与 代 谢 等 多 采 用 物 肠 道 肿 瘤 细 胞 系 为试 验 模 型 【 ｌ １ 。然 而 癌 细 胞 是 非 正 常 的 细 胞 ， 生 理 特 征 明 显 不 同 于 常 细 胞 ， 纯 由 癌 其 单 １ 主 要 仪 器 设 备 与 试 剂 ． ２ Ｎ 一 ５ ０型 Ｃ 胞 培 养 箱 Ｎ ａ ｅ 司 ， 国） Ｕ ２０ Ｏ细 － ｕｉ 公 ｒ 美 ；
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内关 于动物体 细胞 原 代培养 的报 道 多集 中住其 它动
物 身 【 ， 天 于 猪 ＩＣ原 代 培 养 的 方 法 一 直 属 于 空 叫 ｆ 而＿ Ｅ ｈ 。 试 验 的 目的就 是 通 过 机 械 和 酶 消 化 结 合 的方 法 本 建立 猪 Ｉ Ｃ原 代 培 养 的 系 统 ， 猪 肠 道 营 养 的 研 究 提 Ｅ 为 供 新 的 试 验 材 料
１ 试 验 材 料
丙酮 、 硝酸钙 、 硫酸镁等试 剂均为 国产 、 分析纯 。
２ 试 验 方 法
２１ 猪 ＩＣ 的分 离 培 养 ． Ｅ
２１１ 主 要 试 剂 配 制 ．．
按 照 说 明 书 配 制 Ｄ Ｅ Ｆ ２不 完 全 培 养 基 ． Ｍ Ｍ— １
１Ｉ 试 验 动 物 ． 新 生 ＊ ｘ长×久 元 杂 交 仔 猪 （ 吮奶 ） 购 于 广 东 ｋ 术 。
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收 稿 日期 ：０ ９ ｌ — ６ ２０ 一 ０ ２
（形成 细胞 克隆 ，～ ｌ Ｊ ９ Ｊ ｄ融合 成片 ； 碱性磷 酸酶 和生物 素标记 的细胞 角蛋 白抗 体鉴定 结果显 示 ９ ％培 ０
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关键词 猪； 小肠粘膜 细胞 ； 原代培 养
最 能 反 映 和 接 近 体 内 生 长 特 性 ， 一 种 良好 的 试 验 载 是
苏金 坛 荣 华仪 器 总 厂１Ｏ ｉ ４ ０ ＋ ： ｒ ｎ ２ Ａ 型酸 度计 Ｔ ｅｍ ｏ ｈｒｏ
Ｅｅ ｔ ｎ公 司 ， 国 ）Ｄ Ｍ 培 养 基 、 牛 血 清 、 酶 ｌ ｒ ｃｏ 美 ； ＭＥ 胎 胰
体。 同外 存 １ ９ 年就有猪肠细胞原代 培养的报道 ， ９３
其 它 类 型 的 猪 组 织 细 胞 原 代 培 养 的报 道 也 不 少 ， 国
和胶原 酶 Ⅱ￣（ ｉｉ 公 司）标 准胎 牛血清 （ ６ｂｃ ｏ ， 杭州 四季 青公 司 ）青霉 素 、 霉 素 、 一 ， 链 ｐ 甘油磷 酸 钠 、 酸钴 、 硝 硫 化铵（ ｇ ａ 司）Ｎ Ｃ 、 Ｃ 、ａ ２Ｏ ・２ ２ ＫＨ Ｏ 、 Ｓ ｍ 公 ｉ ， ａ １ １ Ｈ， ４１ ＨＯ， ２ Ｐ ４ Ｋ Ｎ Ｐ ，