微生物检验
绪论
一、微生物：人们把那些形体微小，结构简单用肉眼难以看到，必须借助于光学显微镜或电子显微镜才能看清的低等微小生物体成为微生物。
微生物学；研究微生物在一定条件下的形态结构、营养与代谢、遗传与变异，生态与进化，分类与坚定等问题的一门学问。
微生物的主要特点：个体微小，结构简单，代谢能力强，繁殖速度快，种类繁多，分布广泛容易发生变异
二、1．什么是微生物检验？食品微生物检验是应用微生物学的理论和方法，研究外界环境和食品中有害微生物的种类、数量、性质，活动规律及对人和动物健康的影响。
2．食品微生物检验研究任务：①研究各类食品中存在的微生物种类、分布及其特性②研究微生物的污染及其控制③研究微生物与食品保藏的关系④研究各类食品微生物的检验方法及标准
3．食品微生物检验研究特点：⒈研究范围广（一类为致病性微生物、二类为致食物中毒性微生物、三类为致腐性微生物）⒉涉及学科多⒊应用性强⒋标准化
4．食品微生物检验发展历史：⑴致病菌检测阶段⑵指示菌检测阶段⑶微生物制剂检测阶段⑷现代基因工程菌的检测阶段两个主要人物：巴斯德（法国）、柯赫
三、食品与微生物的关系？既有有益的一面，也有有害的一面，微生物在食品工业的有益作用是非常广泛的如酸油制作面包、酱油、乳酸饮料的生产，通过酵母菌、乳酸菌，根霉菌等多种，微生物的作用是食品变得更有营养、更易消化和风味更好，但也有些微生物引起食品腐败变质，变质食品往往失去营养价值或使其风味口感令人难以接受，有些微生物在生长代谢过程中向食品体系中排放大量的毒素，食用后可导致人中毒死亡。
第一章食品中微生物的污染和消长
食品污染：只食品中原来含有或者加工时认为添加的生物性或化学性物质，这些物质对人类健康都具有急性的或慢性的危害。
污染物物质的种类：⒈生物性污染⒉化学性污染⒊放射性污染
生物性污染：是指食品受到了微生物极其毒素、寄生虫、有毒生物组织及昆虫的污染
污染食品的微生物：细菌、真菌及其毒素，病毒，寄生虫，有毒生物组织和昆虫。
⒈生物性污染（细菌、病毒、寄生虫、昆虫、有毒生物组织污染）⒉化学性污染（工业三废、农药、其它化学污染）⒊放射性污染，天然放射性污染
放射性污染：当食品吸收的外来物质的放射性高于天然放射性本身时。天然放射性污染：是指自然界本身存在的放射性核素的量。
食品中微生物的污染途径：一内源性污染：凡是作为食品原料的动植物体在是生活过程中，由于本身带有的微生物而造成食品的污染，也为第一次污染。二外源性污染：食品在生产加工运输、储藏、销售、食用过程中，通过水、空气、人、动物、机械设备及用具等而使食品发生微生物污染，也为第二次污染
食品污染的危害：⒈食物污染⒉食物中毒⒊“三致”作用⒋经济损失和社会后果
食源性疾病：世界卫生组织将其定义为“凡是通过摄入而进入人体的病原体使人体患感染性或中毒性疾病流称为食源性疾病。
食物传染：通过接触或食用某种食品而引起人类某种传染性疾病。
食物中毒：凡是由于经口进食正常数量，“可食状态”的含有致病菌，生物性或化学性毒物以及动植物天然毒素食物而引起的，以急性感染或中毒为主要临床特征的疾病，可以统称为食物中毒。食物中毒的特征：⑴集体性⑵与事物有关⑶人与人之间不传染⑷发病急⑸病原相同，临床症状也相同。
“三致”作用：指致癌、致畸、致突变作用。
食品中微生物的消长：食品微生物出沉的数量增多或减少，即称为食品微生物的消长，开始平稳、再增加、后减少。
食物腐败变质:是指食品受到各种内外因素的影响,造成其原有化学性质或物理性质发生变化,降低或失去其营养价值和商品价值的过程.
腐败:食品中蛋白质被微生物分解造成的腐败变质叫腐败.
酸败:食品中碳水化合物和脂肪发生分解造成的腐败变质叫酸败.
腐败变质的实质是:食品在微生物酶,食品固有酶和其他因素的作用下,使食品组成成分发生了分解.⒈食品中蛋白质的分解
蛋白质（微生物蛋白质酶）多肽（肽链内切酶）氨基酸（脱羧基作用）氨+胺+硫化氢等。分解蛋白质类食品的微生物主要是细菌，霉菌和酵母菌，它们多数的通过分解细胞外蛋白质酶来完成。⒉食品中脂肪的分解
脂肪（微生物的解脂酶等）脂肪酸（醛+酮）+甘油+其他产物
脂肪酸：特臭的醛类和醛酸类：即“哈喇”气味。
碳水化合物：有机酸+酒精+气体等
微生物：霉菌，放线菌
影响食品腐败变质的因素：分析食品腐败变质的影响因素从三个方面入手：食品的组分和理化性状，环境因素，微生物种类这三个因素中食品的组分和理化性状是腐败变质的基础。食品的组分和理化性状：⒈食品的营养成分⒉食品的水分⒊氢离子浓度（PH值）⒋渗透压营养成分：蛋白质、糖类、脂肪、无机盐、维生素和水分。
水分活度：指食品在密闭容器内的水蒸气压与纯水蒸汽压之比即Aw=P/Po，纯水的Aw=1 无水的Aw=0 食品的Aw在0.60以下认为微生物不能生长。
PH值：一般规定PH值在4.5以上者属于非酸性食品，PH值在4.5以下者为酸性食品。
环境因素对食品腐败变质的影响：⒈温度⒉气体⒊湿度
食品腐败变质的鉴定：⒈感官鉴定（⒈色泽⒉气味⒊口味⒋组织状态）⒉物理鉴定⒊化学鉴定（⒈挥发性盐基总氮⒉三甲胺⒊组胺⒋K值⒌PH的变化）⒋微生物鉴定
第四节各类食品的腐败变质现象
肉类食品的腐败变质感官变化：⒈表面发粘⒉颜色变化⒊味道变化⒋产生霉斑
菌群交替现象：指食品中的菌群和优势菌随着生存环境的变化发生改变的现象。菌群交替现象为三个时期：表层-中层-深层⒈需氧菌繁殖期（各种球菌继而大肠杆菌，变形杆菌，枯草杆菌）⒉兼性厌氧菌期（产气夹膜杆菌）⒊厌氧期（腐败杆菌）
如何控制食品腐烂变质？答：预防微生物污染食品；低温保藏；加热保藏；高渗；干燥；辐射；化学添加剂。乳液的消毒和灭菌方法：①低温长时消毒法。②高温短时消毒法（灭菌率99.9%）③高温瞬时消毒法。④超高温瞬时灭菌法（75-85度预热4-6分。136-150度高温2-3秒主要杀死耐热的芽孢细菌）。乳液的变质过程：抑制期；乳链球菌期；乳杆菌期；真菌期；腐败期（胨化期）罐头腐败变质现象：胀罐；平酸；黑变；发霉。引起罐藏食品变质微生物：芽孢杆菌，非芽孢杆菌，酵母菌，霉菌。
微生物实验室构造：实验室、无菌室、缓冲间。实验室常用仪器：电热恒温培养箱、水浴锅、超净工作台、干燥箱、高压蒸汽灭菌器。干热灭菌——干燥箱（用于玻璃仪器、金属用具等的灭菌，含有水分的物质不能用着种方法。也可用于洗涤好的玻璃仪器）灭菌时间：160~170度，2小时。湿热灭菌——高压蒸汽灭菌器（可用于培养基、生理盐水、废弃的培养物以及耐高热药品、纱布、敷料、工作服等物品的灭菌）灭菌时间：121度半小时。为什么湿热灭菌比干热灭菌的效率高？答：湿热灭菌的温度低，时间短，灭菌率高因为（1）菌体内含水量越高则凝固温度越低（2）饱和蒸汽的穿透力强（3）蒸汽冷凝防出潜热。|带菌玻璃仪器
洗涤方法：现在2%媒酚皂液或0.25%新洁尔灭消毒液中浸泡24小时，而后常法洗涤。食品检验程序：样品的采集、检验测定、数据分析、数据处理与报告。S型菌群（表面光滑，有致病性）R型菌群（表面粗糙。无致病性）。抗原：Ag指能被机体免疫活性细胞识别受体及由其产生的抗体所识别的物质。抗体：Ab指抗原刺激免疫系统后形成的能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。指示剂：指本身参与化学反应而使自身发生颜色变化的试剂。它的作用是指示反应终点。微生物常规检验方法：形态结构和培养特性观察、生理生化实验、血清学实验。血清学反应：指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀凝集现象。血清学反应可分为3种：凝集反应，沉淀反应和补体结合反应。微生物指标包括食品质量指标和食品安全指标。三大检验指标：菌落总数、大肠菌群MPN和致病菌。菌落总数---评定食品微生物质量的指标。大肠菌群---评定食品安全性的指标。菌落总数的定义：是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得的1ml(g)检样中所含菌落的总数。单位（Cfu）。菌落总数的卫生学意义：（1）判定食品被微生物污染程度的标志。（2）用来预测食品可存放的期限。大肠菌群系：指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群MPN的检测意义：（1）食品被粪便污染的指标（2）肠道致病菌存在的可能性。大肠菌群（MPN）：每100g或100ml检样中大肠菌群最近似数以MPN表示。常规MPN检验（国标法）：一般采用三步，乳糖发酵实验、分离培养和证实实验。胆盐作用：抑制肠道菌以外的细菌生长。抑菌剂作用：抑制其它杂菌特别是革兰氏阳性菌生长。典型大肠菌落（紫黑色有金属光泽）解释报告方式表？（1）选择平均菌落在30~300之间的稀释度乘以稀释倍数报告。（2）若两者均可则视两者之比决定：小于或等于2，报告其平均数；大于2报告较小的数字（3）若具均大于300按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；若均小于30按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（4）若稀释度均无菌落生长则以小于1乘以最低稀释倍数报告。|超净工作台注意事项？（1）超净工作台用三根四线380V 电源，通电后检查风机转向是否正确，风机转向不对则风速很小，将电源输入线调整即可。（2）使用前30分打开紫外灯对工作区域进行照射，可把细菌病毒全部杀死。（3）使用前10分将通风机启动，用海绵或白纱布将台面抹干净。（4）操作时把开关按纽拨至照明处，工作室紫外灯即熄灭（5）工作完毕后停止风机运行，把防尘帘放下。（6）使用过程中如发现问题应立即切断电源，报检修人员检查。
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
微生物实验室现场检查
微生物实验室要求 微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验 室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、 检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告； 药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开 实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告， 造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经 计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。
微生物检验重点知识
一、名词解释： 1、溶原性细菌：获得温和噬菌体核酸的细菌。 2、前噬菌体：温和噬菌体整合于细菌染色体（宿主基因组）中的核酸称为前噬菌体。 3、侵袭力：病原微生物能突破宿主的防御系统，在机体内定植、繁殖和扩散的能力。 4、正常菌群MIC（最低抑菌浓度）：在体外试验中，抗菌药物抑制培养基中某种细菌生长最低药物浓度，是药物 抗菌活性指标，提示药物的抑菌能力（μg/ml） 5、MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 6、迁徙生长现象：变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长，形成以菌种接种部位为中心的，厚薄交替同心圆型 的层层波状菌苔 7、菌丝：真菌在适宜的环境中，由孢子出芽形成芽管，逐渐延长呈丝状，称为菌丝。 8、二相性真菌：有些真菌在不同寄生环境和培养条件下可出现两种形态，称二相性真菌 9、病毒体：一个成熟有感染性的病毒颗粒称为病毒体 二、填空、判断、选择、问答部分 （一）革兰氏染色的三个原理，操作步骤与临床意义【选择题】 1、原理： （1）渗透学说：革兰阳性菌细胞壁结构较紧密，肽聚糖层厚，含脂质少，脱色时乙醇不易渗入，反而使细胞壁 脱水，通透性下降，胞内结晶紫与碘的复合物不易渗出。格兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层薄，含脂质多，易被乙醇溶解，是细胞壁通透性增加，胞内结晶紫与碘的复合物易被乙醇溶解溢出而被脱色。【主要学说——细 胞壁结构学说：G+菌和G-菌的细胞壁成分差异大，对脱色剂的反应不同】 （2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐可与结晶紫、碘牢固结合，而不易被乙醇脱色。革兰阴性菌内 所含核糖核酸镁盐少，故易被脱色。 （3）等电点学说：革兰阳性菌的等电点（pH2~3）比格兰阴性菌（pH4~5）低，在相同pH的条件下，革兰阳性菌 比格兰阴性菌所带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料结合较牢固，而不易脱色。 2、操作步骤：①细菌涂片、干燥，经火焰固定（菌膜>1cmX1cm）②结晶紫染色1min，水洗甩干③加碘液媒染 1min，水洗甩干④加95%乙醇脱色30s，水洗甩干⑤用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检 3、临床意义：①鉴别细菌②选择治疗用药③与细菌致病性有关 （二）细菌的基本结构及功能、细菌的特殊结构及功能、细菌的变异机理【选择题】 细菌蛋白质的合成场所：核糖体（同时也是药物作用的部分） 细菌内毒素的化学成分：脂多糖 1、细菌的基本结构 基本结构：由外向内依次为细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等。 （1）细胞壁 a.主要功能：①维持细菌固有形态②抵抗低渗作用③物质交换作用 2、化学组成和结构 a.肽聚糖：是细菌细胞壁的主要成分，也是原核细胞所特有的成分 革兰阳性菌的肽聚糖（多）：聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分构成的三维网架结构 革兰阴性菌的肽聚糖（少）：聚糖骨架、四肽侧链两部分构成的二维网架结构 b.磷壁酸：革兰阳性菌细胞壁特有。作用：调节、维护细菌细胞内离子平衡作用，是革兰阳性菌重要的表面抗原，与细菌致病性有关。 壁磷壁酸：由肽聚糖延伸；膜磷壁酸：由细胞膜延伸 c.外膜层：革兰阴性菌细胞壁特有。细胞壁肽聚糖外侧，由外向内依次为脂多糖、脂质双层、脂蛋白三部分①脂 多糖：格兰阴性菌内毒素，脂质A为主要毒性成分 第1/12页 （2）细胞膜：一层柔软而富有弹性的半渗透性双层脂质生物膜结构，脂质双层中镶嵌有多种蛋白质。中介体： 细胞膜内陷折叠而成的囊状结构。 （3）细胞质 有质粒（是染色体外遗传物质） 包括：F质粒（至育性质粒）R质粒（耐药性质粒）Vi质粒（毒力质粒） 2、细菌的特殊结构（鞭毛、荚膜、芽孢和菌毛） （1）鞭毛：附着在菌体上面胞壁外的细长呈波浪形弯曲的丝状物。 a.类型：周毛菌，单毛菌，双毛菌，丛毛菌。 b.作用和意义：①是细菌的运动器官②与细菌致病性有关③与细菌鉴定、分类及分型有关 （2）菌毛：是指菌体表面具有比鞭毛更细、短而直的丝状附属物。化学本质：蛋白质 a.普通菌毛：是细菌的黏附器官，与细菌致病性密切相关 b.性菌毛：F质粒控制，表面有性菌毛的称为雄性菌（F+），无性菌毛称为雌性菌（F-） （3）荚膜：某些细菌在细胞壁外包绕的一层黏液性物质。化学本质：多糖类，少数为多肽 通常在机体内和营养丰富的培养基中易形成荚膜 a.作用：①抗吞噬②抗杀伤③抗干燥④与致病性有关⑤细菌鉴别和分型的依据⑥免疫原性 （4）芽孢：是某些细菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个折光性很强，具有多层膜状结构、通 透性很低的圆形或卵圆形的小体。 a.形成条件：缺乏营养物质，有害代谢产物的堆积
检验科微生物实验室生物安全事件应急预案
检验科微生物实验室生物安全事件应急预案 This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th, 2012.
检验科微生物实验室生物安全事件应急预案为了有效的预防微生物实验室生物污染，有效应对实验室突发污染事件，保证实验结果的科学准确，保障实验工作人员的健康、生命财产安全，防止实验室污染对周围环境造成严重污染，加强检验工作的质量控制和实验室的管理，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》和《实验室生物安全通用要求》等相关法律法规的规定，特制定本预案，确保一旦发生实验室污染事件及安全事故时，能及时、规范、科学、迅速有效地控制。 一、适用范围 本预案适用于微生物实验室发生的、与实验室安全相关的、危害科室工作人员健康以及社会公众健康和社会稳定的所有事件。主要包括：1．病原微生物的实验室污染事件； 2．工作人员受到实验室内有毒病原微生物的感染或侵害； 3．病原微生物被泄漏出实验室事件。 4．由于停电、火灾等不可预测因素所引起的实验室其他污染事件。 当出现以上适用范围中的任意情况，启动本预案。 二、应急管理小组 有微生物实验室生物安全事件应急管理小组，科主任任组长，制定实验室生物安全防护指导方针，规划对实验室的硬件建设、组织实施科学管理。在实验室生物安全事件发生时，决策指挥，调动人员，全面部署。发生突发事件后应急处理小组全体成员，应立即按实验室污染突发事件处理
的技术规范，采取有效措施控制事件、调查原因，减少人员伤亡和财产损失。 三、预防措施 1．加强实验室标准化建设，对实验室设备的配置、个人防护和实验室安全行为应按《实验室生物安全通用要求》做出明确规定。 2．建立实验室病原微生物专库，对于传染病病原样本建立严格的监督管理制度。 3．增强安全意识，合理完善实验室生物安全的各项规章制度。把生物安全管理责任和措施落到实处，消除安全隐患。实验室工作人员应自觉遵守实验室生物安全管理规定，严格按照操作规程和技术规范开展研究工作。 4．提高警惕，加强安全保卫，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害化学试剂，用于对人群进行生物化学恐怖攻击，对公众健康产生严重损害，影响社会稳定。 5．建立有效的预警机制，为各种病原微生物和有毒有害化学试剂建立档案和使用纪录，填写准确。每次使用后及时登记，发现遗失或被盗，立即报告。 6．建立实验室工作人员健康档案，定期体检。发现与实验室生物安全有关的人员感染或伤害应立即报告。 7．定期开展自查，及时发现安全隐患，发出预警通报。 四、应急控制措施
什么是微生物检验
什么是食品微生物检验 吴崇食质12级1班学号：20122629 微生物是个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。 微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。在人类疾病中有50%是由病毒引起。微生物导致人类疾病的历史，也就是人类与之不断斗争的历史。在疾病的预防和治疗方面，人类取得了长足的进展，但是新现和再现的微生物感染还是不断发生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。一些疾病的致病机制并不清楚。大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力，使许多菌株发生变异，导致耐药性的产生，人类健康受到新的威胁。一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次流感大流行流感病毒都与前次导致感染的株型发生了变异，这种快速的变异给疫苗的设计和治疗造成了很大的障碍。而耐药性结核杆菌的出现使原本已近控制住的结核感染又在世界范围内猖獗起来。 微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌，或者讲每夸脱牛奶中细菌总数约为50亿。也就是一滴牛奶中可能含有50 亿个细菌。 微生物能够致病，能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂，但微生物也有有益的一面。最早是弗莱明从青霉菌抑制其它细菌的生长中发现了青霉素，这对医药界来讲是一个划时代的发现。后来大量的抗生素从放线菌等的代谢产物中筛选出来。抗生素的使用在第二次世界大战中挽救了无数人的生命。一些微生物被广
食品微生物学检验系列知识点汇总
食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总 GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则 一、2016版总则变更内容 1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。 2.删除了规范性引用文件。 3.修改了实验室基本要求： 微生物专业教育或培训经历（如生物学、植 物学、医学、食品科学与工程、食品质量与安全等与微 生物有关的相关专业），具备相应的资质（应有岗位上岗 证、生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够理解并正 确实施检验。 ①人员修改为检验人员实验室生物安全操作和消毒知识（相关标准及培训， 如GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求、消毒技术 规范（2002））。 品。 确保自身安全。
有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验（即无颜 色视觉障碍）。 ②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。 生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应: 灭的微生物，如天花病毒。 间传播如霍乱弧菌。 病原微生物分类 沙门氏菌、单增李斯特氏菌。 第四类：通常不会引起人或动物疾病的微生物。 BSL-1）：操作第四类病原微生物（属于正压，适用 ） 实验室生物安全级别BSL-2）：操作第三类病原微生物（属于负压，适用 II级生物安全 ） BSL-3）：操作第二类病原微生物
四级（BSL-4）：操作第一类病原微生物 消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。 灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。 蒸法消毒） 消毒剂表面消毒 微生物实验 高压灭菌 干热灭菌（180℃1h或170℃2h） 培养基和试剂灭菌 过滤除菌 紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而达到灭菌目的。紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于表面灭菌，对固体物质灭菌不彻底。
医学检验微生物实习自我鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除医学检验微生物实习自我鉴定 篇一：检验科细菌室实习小结 检验科细菌室实习小结 1、检验科细菌室实习小结 细菌是的工作中，无菌操作很重要，不管是在细菌接种、鉴定还是药敏的时候，必须严格进行规范操作，否则将导致交叉污染，同时无菌操作也能更好的保护好自己。 在实习和工作中一定要将理论联系实际，要善于思考，在观察菌落形态和细菌镜下形态时更应仔细认真，临床微生物的工作是一个经验积累的过程，要想成为一名优秀的检验医师，今后在微生物方面的学习中还得加倍努力。 在细菌室实习生活结束之际，我要特别感谢细菌室的每一位老师，感谢他们耐心、和蔼的教导，是他们严谨、一丝不苟的科学态度教育了我，是他们团结协作、融洽的工作气氛感染了我。他们循循善诱给我讲解，他们耐心规范了我的操作，他们给予我很大的信任与鼓励，放手让我操作。而我能做的是在今后的学习和工作中带着一颗感恩的心认真负
责地工作，培养高尚的职业道德、严肃的科学态度和一丝不苟的工作作风，使自己成为一名合格的检验专业的的优秀人员。 祝福细菌室每一位老师工作顺利、阖家幸福。 2、检验科细菌室实习小结 还记得，实习第一天的时候，老师就说，在细菌室，这短短的两个月时间是远远不够的。确实啊，我的细菌室实习是暂时告一段落了，但在微生物的学习之路还是很长的。现在我们所学到的仅仅只是入门啊！ 在实习和工作中一定要将理论联系实际，要善于思考，要严谨对待，临床微生物的工作即是一个不断积累经验的过程也是一个要随时更新知识的过程。要想成为一名合格的检验医师，今后在微生物方面的学习中还得加倍努力。 在细菌室实习生活结束之际，我要特别感谢细菌室的每一位老师，感谢他们耐心、和蔼而又严厉的教导，是他们严谨、一丝不苟的科学态度教育了我，是他们团结协作、融洽的工作气氛感染了我。他们循循善诱给我讲解，他们耐心规范了我的操作，他们给予我 很大的信任与鼓励，放手让我操作。也很谢谢你们包容我的错误，并给予我改正错误的机会，而我能做的是在今后的学习和工作中更认真负责地工作，培养高尚的职业道德、严肃的科学态度和一丝不苟的工作作风，使自己成为一名合
微生物检验方法验证方案
微生物限度检查方法（平皿法） 验证方案 目录 一、验证方案的制定 二、验证方案的起草与审批 三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 2．验证方法步骤 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.2验证试验操作 3.3试验结果 4．验证结果评价分析
5．附件 微生物限度检查方法（平皿法）验证文件一、验证方案的制定 二、验证方案的起草与审批 1验证方案的起草
2．验证方案的审核与批准 验证方案审核人：审核日期：年月日验证方案批准人：批准日期：年月日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 1.1 验证目的 为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。 1.2 原理 通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。 2．验证方法步骤 2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。 2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。 2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.1.1主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、
微生物实验室要求
微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、
普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。 2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。 4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。 5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。 6．仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。 7．使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。 三、药品管理、使用制度 1．依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立帐目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。 2．药品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。
(完整)微生物学检验重点知识总结(DOC),推荐文档
绪论 1.微生物的定义与特点;微生物的分类。 一、微生物的概念与特点 1.微生物（microorganism）是一群个体微小，结构简单，肉眼不能直接看见，必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能观察到的微小生物的总称。 2.微生物的特点 个体微小，结构简单 比表面积大，吸收多，转化快 繁殖快，代谢强 适应强，易变异 种类多，分布广 1.微生物类型 根据微生物大小、结构和组成不同分为三类型 2.病原微生物的定义病原微生物：是指能引起动物、植物或人类产生疾病的微生物。 3.医学微生物学的发展简史。 .微生物的发现与研究 （1）列文虎克发明显微镜，最早观察到微生物；微生物学研究的创始人：巴斯德、科赫、李斯特 第一章细菌的基本性状 第一节细菌的形态与结构 1.细菌细胞壁的结构和功能，肽聚糖结构及其化学组成；革兰阳性与革兰阴性细菌细胞壁的主要区别 （一）细胞壁 化学组成与结构，革兰染色共有组分：肽聚糖 特殊组分：G+ 菌、G-菌不同 革兰阳性菌细胞壁特殊组分：磷壁酸 革兰阴性菌细胞壁特殊组分：外膜
革兰阴性菌细胞壁肽聚糖:聚糖骨架、四肽侧链 2.细胞壁的功能： （1）维持细菌固有形态和抵抗低渗作用。（2）物质交换作用。（3）屏障作用。（4）免疫作用。（5）致病作用。（6）与细菌药物敏感性有关。 G+菌与G-菌细胞壁结构比较 ?细菌细胞膜的结构与真核细胞基本相同，由磷脂和多种蛋白质组成，但不含胆固醇。 ?细菌细胞膜可形成一种特有的结构，称中介体。 2.细菌荚膜、鞭毛和菌毛的功能。 荚膜： 功能： 有抗吞噬和抵抗杀菌物质的杀菌作用，增强细菌的侵袭力，构成细菌致病力的重要因素之一。②具有免疫原性。③鉴别细菌和血清学分型 鞭毛：功能：细菌的运动器官 菌毛 普通菌毛：具有黏附性，与细菌致病性有关。 性菌毛：与细菌的遗传变异相关 3.芽胞结构特点、意义、与消毒灭菌的关系；细菌L型的形态特征、检验要点。 芽胞：某些细菌（主要为革兰阳性杆菌）在一定条件下，细胞质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形的小体。 L型细菌：细胞壁缺陷的细菌。 常发生在作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中。 根据细胞壁缺陷程度分： 原生质体（完全失去细胞壁，见于G+菌，仅在高渗环境中存活) 原生质球（细胞壁部分缺损，见于G-菌，在高渗或非高渗环境中均能存活） 4.G+菌和G-菌细胞壁结构的差异及其意义。 第二节细菌的生理 细菌的生长条件,生长周期及各期的特点;IMViC试验的组成及机制;细菌分解及合成代谢产物的种类及意义。
微生物检验(完整版)
微生物检验（完整版） 名解 微生物：是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称 种：亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征 微生物学：生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学 抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质 细菌素：是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质 条件致病菌：正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病 消毒：指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌：指杀灭物体上所有的微生物的方法 防腐：指防止或抑制微生物生长繁殖的方法 无菌：指没有货的微生物的存在 质粒：是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制 突变：是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代 基因转移：外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程 基因重组：供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程 病毒：是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的
非细胞型微生物 复制周期：病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程 缺陷病毒：是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒 顿挫感染：病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象 干扰现象：两种病毒感染同一种细胞时可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 人工自动免疫：是将疫苗等免疫原接种于人体刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答使机体获得特异性免疫力 人工被动免疫：是指注射含某种病毒特异性中和抗体的免疫血清等一系列细胞因子是机体立即获得特异性免疫 干扰素：是由病毒或干扰素诱生剂作用于中性粒细胞成纤维细胞或免疫细胞产生的一种糖蛋白 致病性：一定种类的病原微生物在一定的条件下能在特殊的宿主体内引起特定疾病的能力半数致死量：在规定时间内通过一定途径能使一定体重或年龄的某种动物半数死亡或感染需要的最小病原体数量或毒素量 急性感染：发作突然病程较短一般是数天或数周 局部感染：病原体侵入机体后局限就在一定部位生长繁殖引起病变的一种感染类型 毒血症：致病菌侵入宿主体后只在机体局部生长繁殖病菌不进入血液循环但其产生的外毒素入血引起特殊的毒性症状 败血症：致病菌侵入血流后在其中大量繁殖并产生毒性产物引起全身性毒性症状 内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流并在其中大量繁殖崩解后释放出大量毒素也可有病灶
微生物检验知识点
微生物检验知识点
1、微生物的分类：（三型八大类)**全部是重点** 三型八大类特点 非细胞型微生物病毒、亚病毒和朊粒无细胞结构，结构最简单，体积最微小，能通过 滤菌器； 单一核酸； 活细胞内寄生。 自我复制方式进行增殖 原核细胞型微生物细菌、放线菌、螺旋体、 支原体、衣原体、立克 次体仅有原始核； 缺乏完整细胞器。 真核细胞型微生物真菌、原虫细胞核分化程度较高； 有丝分裂进行繁殖； 有多种完整细胞器。 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌 酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛— 粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质） *将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G 型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有 机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细 菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长 才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。 17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体 着色）。 18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱 19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。因选择性过强，可影响检出率，所以，使用 时最好加一种弱选择平板以配对互补。
检验科微生物室工作制度
检验科微生物室工作制度 1、临床细菌室守则：临床细菌室是进行细菌学实验的场所，在此完成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和药敏试验等工作。细菌室必须符合以下条件： 1.1细菌室必须安装严密的门窗，以防外部污浊气体和昆虫进入室内污染环境。室内禁用电扇，以避免加速气体流动，造成细菌播散。 1.2菌室必须装有供空气消毒的紫外线灯，置于离操作台面1m的高度，每天开始工作前照射20min。对紫外线灯的消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。 1.3室内备有工作人员洗手使用的肥皂和自来水源。此水源不可与处理标本相关的水源共用，须设置消毒剂水盆，供操作后浸手用。 1.4室内必须常备消毒剂，如来苏或过氧乙酸，一旦发生菌液溅落试验台或地面，应能立即进行消毒处理。 1.5室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少每周用消毒剂擦洗1次。 1.6室内对接收的标本和消毒过的器具，要分别指定地点放置，特别是对无菌和有菌器具要明显分开。用过的试管、平皿必须及时高压灭菌处理。 1.7不能或不便高压灭菌的标本和废弃物品须焚化处理。 1.8细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。 1.9设置必要的消防设备。 2、无菌室守则：对无菌实验室以及在其中操作的要求如下： 2.1无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。无菌室与外界可开一拉门小窗，供传递器具用。 2.2在无菌室中仅限于分装无菌的培养基等操作，不进行有菌标本的分离及其它操作。 2.3用前应以紫外灯消毒30min，定期用乳酸蒸熏，彻底消毒。 2.4工作人员进入无菌室前应换专用鞋、专用衣。在无菌室内进行无菌操作时，应戴口罩，口罩每次用后消毒。 2.5无菌室应仅限操作人员进入，操作时应严格关门，其他人员可在室外观看或经拉门小窗进行协助。 2.6条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。超净工作台应选择垂直气流通风方式。 2.7无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。 对临床细菌检验人员的要求： 2.8负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。 2.9一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。 2.10通晓细菌室守则，并严格遵守。 2.11负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。
微生物检验知识点
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17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体 着色）。 18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱 19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。因选择性过强，可影响检出率，所以，使用 时最好加一种弱选择平板以配对互补。 20、碱性琼脂或TCBS琼脂用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。 21、痰标本：血平板、中国蓝／麦康凯、巧克力平板作分离。 22、中国蓝／麦康凯用于筛选G-杆菌； 23、含杆菌肽的巧克力平板（含有V和X因子）用于筛选嗜血杆菌 24、连续划线分离法：杂菌不多的标本。 分区划线分离法：杂菌量较多的标本。 25、斜面接种法：该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性 26、倾注平板法：牛乳、饮水和尿液细菌计数 27、涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。 28、半固体培养基用于观察细菌的动力（沿穿刺线生长呈模糊或根须状，并使培养基变混浊为动力阳性） 29、α溶血：菌落周围血培养基变为绿色环状；红细胞外形完整无缺。 β溶血：红细胞的溶解在菌落周围形成一个完全清晰透明的环。 γ溶血：无溶血。 双环：在菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。 30、氧化-发酵试验（O/F试验）：有氧参加——氧化型；无氧降解——发酵型；不分解葡萄糖而分解蛋白 胨——产碱型。（肠杆菌科细菌发酵型全+） 31、甲基红试验(与V-P试验相反)：阳性红色，阴性黄色。大肠埃希菌（+），产气肠杆菌(-) 32、白喉棒状杆菌：G+，异染颗粒、毒力试验，Elek平板，亚碲酸钾血琼脂。外毒素（毒血症）只有携 带β-棒状噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素。 33、内毒素测定主要用于确诊患者是否发生G-细菌感染。常采用鲎试验。本方法灵敏度高，可检查出 0.0005～0.005μg/ml内毒素。 外毒素主要用于确诊患者是否感染革兰阳性菌及部分阴性菌。常用体内及体外毒力试验检测，也可通过ELISA法测定。 34、葡萄球菌属：G+，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。 凝固酶阳性葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）：表皮葡萄球菌（新生霉素敏感，医院感染，血培养污染）、腐生葡萄球菌（新生霉素耐药，凝固酶阴性。尿路感染） 蛋白抗原：葡萄球菌A蛋白（SPA）：完全抗原，有种属特异性，无型特异性。抗吞噬作用。多糖抗原：半抗原，型特异性。 35、金黄色葡萄球菌：触酶试验、凝固酶试验（最简单）、耐热DNA酶试验、甘露醇发酵试验均阳性。对新生霉素敏感。透明溶血环。 致病性：感染（化脓性感染，食物中毒，表现为急性胃肠炎），医院内感染，毒素性疾病。主要致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合征毒素等。
检验科微生物室室内质量控制流程
检验科微生物室室内质量控制流程 一、实验室仪器设备的性能维护 微生物室常用仪器设备主要包括：细菌培养箱、细菌鉴定及药敏测试仪、显微镜、高压灭菌器、冰箱、水浴箱等。这些仪器设备的质量维护对于检验结果的质量保证至关重要。性能维护方法及维护频率参照制造商提供的使用手册进行。如使用手册中未详细注明或实验室自身无法完成，由生产厂家协助解决，每年至少一次。 二、培养基的质量控制 要求对培养基进行两方面的质量控制：无菌试验以及已知菌生长试验。无菌试验一般为随机抽样3-5%，在35℃条件下培养48h，每批培养基至少进行一次无菌试验；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。已知菌生长试验应明确预期结果。每批培养基至少进行一次已知菌生长试验。三、细菌染色的质量控制 在临床细菌学检查过程中，革兰染色和抗酸染色使用频率最高。 1．革兰染色IQC要求：利用标准菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923及大肠埃希菌ATCC25922)或其他已知的革兰阳性菌及革兰阴性菌至少每周进行一次质量验证。 2．抗酸染色：利用已知的抗酸杆菌(AFB)阳性涂片每周或在更新炭酸复红染液时至少进行一次质量验证。 四、细菌鉴定或鉴别常用试验的质量控制 细菌鉴定或鉴别试验的IQC就是利用已知菌或标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)进行鉴定或鉴别试验相关影响因素的质量监控。应用频率较高的试验IQC每周至少一次，频率较低的试验IQC随标本一同进行。五、微生物药物敏感试验的质量控制 临床常用抗微生物药物敏感试验包括一般β-内酰胺酶测试、超广谱β-内酰胺酶(ELBLs)测试、纸片扩散法药敏试验以及定量药敏试验(即MICs测定法)。 1．一般β-内酰胺酶测试的质量控制：至少每周一次。质控菌株可使用临床分离的已知菌株，但最好使用标准菌株，如淋病奈瑟菌ATCC31426(β-内酰胺酶阳性绿脓杆菌ATCC27853)和淋病奈瑟菌ATCC43069(β-内酰胺酶阴性或金黄色葡萄球菌ATCC25923)。 2．ESBLs测试的质量控制：美国临床实验室标准化协会(CLSI：原NCCLS)目前仅提供了肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌ESBLs的测试标准。其测试标准参照最新的CLSI文件。质量控制随临床测试菌株一同进行。 3．纸片扩散法及MIC测定法药敏试验的质量控制：质控试验条件、质控菌株选择及质控允许范围参照最新的CLSI规定。频率为每周至少一次。 4．某些耐药菌检测的质量控制：一些耐药菌株如高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌、苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌以及万古霉素耐药的肠球菌等的IQC具体方法、质
微生物实验室的要求
微生物实验室的基本要求 实验室总体面积应在70平米以上，要求水、电供应充足，畅通，排污设施与安全措施齐备。 一、选址： 1. 实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道； 2. 实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离； 3. 实验室应选择在方便取样与检验，距离车间较近的工作场所。 二、结构和布局： 应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。 1. 办公室 2. 理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室） ②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器） 3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室； ③培养基制作室； ④洗涮消毒室； 一般布局要求如下： 1. 办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2. 细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜； f. 实验室围护结构采用彩钢板材料，表面光滑、耐腐蚀、防水，所有缝隙可靠密封，便于清洁消毒，且防震、防火； g. 墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜。 3. 无菌室：无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局： a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有工作台（中心与边台皆可），紫外灯距工作台面要小于1.5m； e. 微生物室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮，地面应光滑，并应有缓冲间，设双层传递窗传递物件； f.门窗应是不锈钢的； g．室内温度18～26℃，相对湿度为45～65%，室内必须保持整洁； h．墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜； i. 地面采用PVC材料，防渗漏、无接缝、光洁、防滑。 4. 培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品橱。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药橱分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用。 5. 洗涮消毒室：洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10平米。 为满足洗涮消毒的功能，洗涮消毒室应设有： a.1-2个洗涮池，洗涮池上下水网要畅通；
临床微生物检验知识点
临床微生物检验 1、微生物的分类：（三型八大类)**全部是重点** 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质） *将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标 8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。
关于微生物学检验
微生物学检验 2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。 3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素） 4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白） 5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位） 6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子 7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质） *将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标
8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星） 9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。 10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。 11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长 12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。 13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法； 14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。 15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。 16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。 17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体着色）。 18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱 19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。因选择性过强，可影响检出率，所以，使用时最好加一种弱选择平板以配对互补。 20、碱性琼脂或TCBS琼脂用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。 21、痰标本：血平板、中国蓝／麦康凯、巧克力平板作分离。 22、中国蓝／麦康凯用于筛选G-杆菌； 23、含杆菌肽的巧克力平板（含有V和X因子）用于筛选嗜血杆菌 24、连续划线分离法：杂菌不多的标本。 分区划线分离法：杂菌量较多的标本。 25、斜面接种法：该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性 26、倾注平板法：牛乳、饮水和尿液细菌计数