谷草转氨酶(AST)_IFCC速率法
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1-丙氨酸氨基转移酶测定程序（速率法）一、原理：ALT 催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
LDH 催化丙氨酸还原的同时将NADH 氧化成NAD+。
NADH 吸光度的下降速率和ALT 的活力成正比。
IFCC 推荐法含磷酸吡哆醛（P-5-P ），是为了稳定ALT 活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。
健康人血清中磷酸吡哆醛含量适中，国内试剂一般不含磷酸吡哆醛。
化学反应式＋LDH ＋ALT乳酸＋NAD丙酮酸＋NADH＋H −−→−+−−→−-+丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸α二、临床意义1 ALT 存在于各种组织细胞内，以肝细胞中含量最多，正常时血清中ALT 活性很低。
2 肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT 从细胞内逸出至血液中，血清中ALT 活性可明显升高，因此是各种肝炎患者检查的一个重要指标。
3 某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可至肝脏受损，亦可以ALT 活性升高反映4 实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性黄疸、肝内胆汁瘀滞、胆管炎、胆囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血等，均可成为血清ALT 升高的原因。
4 ALT 与AST 联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT ／AST 比值小于1，但在传染性肝炎及其它原因引起的肝脏炎症时，ALT ／AST 比值升高；肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肌炎时，AST 升高的幅度高于ALT 。
三、结果计算：ALT (U/L) ＝ 3)410340(10min min--⨯⨯⨯⨯∆=⨯∆εl V V A K A sTnm四、医学决定水平1 20U/L 此为排除值，低于此值可排除许多与ALT 升高有关的病种，而考虑其他诊断。
此值可以作为病人自身的ALT 的对照，与过去和（或）将来的值进行比较。
2 60U/L 高于此值时，对可引起ALT 增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。
谷草转氨酶（AST）IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的A ST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
ASTL-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
GOT
单独检验项目申请：测定天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒（缩写AST/GOT ）；组合项目申请肝功：。
临床医生根据需要提出检验申请。
2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1 使用血清或血浆，应避免溶血。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清，避免溶血。
离心必须达到4000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：ALT在室温中稳定性差，采血后应尽快置于冰箱储存。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
3．实验原理：AST催化下述反应：ASTL-天门东氨酸+ a-酮戊二酸---------------草酰乙酸+L-谷氨酸MDHNADH+草酰乙酸+H+---------------L-苹果酸+NAD+NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST的活性。
4．试剂及其他用品R1：（反应液终浓度）L-天门冬氨酸 200mmol/LLDH ≥1200U/LMDH ≥ 800U/LTris缓冲液PH=7.8 80mmol/LNADH 0.18mmol/LR2：起动试剂α-酮戊二酸 12mmol/L生化仪：日立7175．室内质控与室内质控规则5.1质控品：采用罗氏公司的罗氏质控品（定值详见定值表）5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。
谷草转氨酶(AST)_IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
ASTL-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
生物学生化试剂产品及临床意义介绍
白蛋白的检测
溴甲酚绿终点法
血清中白蛋白与溴甲酚绿（BCG）在 pH4.15环境中结合生成绿色复合物，溶 液由黄色变为绿色，在600nm有吸收峰， 其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而 测出白蛋白含量。
白蛋白+溴甲酚绿→白蛋白-BCG复合物
与溴甲酚紫法的比较
溴甲酚绿法操作简单、快速，既可手工 操作，也能自动化分析，是目前国内最 常用方法。
2.排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄 3.解毒功能：生物转化功能（同化、异化） 4.物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因
子的生成及对活性凝血因子的灭活清除
2.肝功能实验的内容
▪ 蛋白质代谢功能检查 (TP、ALB、PA、 AFP)
▪ 胆红素代谢检查（TBIL、DBIL） ▪ 胆汁酸代谢检查（TBA） ▪ 摄取、排泄功能检查 ▪ 血清肝酶谱的检查（ALT、AST、ALP、
酶循环法测定反应式
Thio-NAD+
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Thio-NADH + H+
胆汁酸
3α-羟基类固醇脱氢酶
3-酮类固醇
NAD+
NADH + H+
临床意义
▪ 总胆汁酸升高
• 肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌 • 胆道阻塞：胆管梗阻引起的胆汁淤积 • 小肠污浊综合症
与第一代胆汁酸测定试剂相比
成倍提高了测定灵敏度，克服了第一代酶 比色法试剂在测定低值标本时的重复性差的问 题。
Zn
Fe
5’-NT GPDA AFP NAG CSF CYS-C MALB HbA1c D3-H ACE
LDH1 C3
C4
IgA IgG
IgM TRF
生化试剂分类：
高三学生体检转氨酶结果分析
高三学生体检转氨酶结果分析摘要】目的分析参加高考的高三学生转氨酶增高情况，以利做好高考学生体检表结论。
方法通过全自动生化分析仪，使用速率法对遂宁5693 例参加高考的高三学生在招生体检时转氨酶进行检测。
结果 5693 例遂宁市高三学生转氨酶增高442 例，增高率7.76%。
遂宁实验中学高考的学生转氨酶为10.29%， P<0.01，实验中学高考的学生转氨酶增高率与其他中学有差异，且高于其他中学。
遂宁一中高考的学生转氨酶增高率为5.26%， P<0.05，遂宁一中高考的学生转氨酶增高率与其他中学有差异，且低于其他中学。
结论对参加体检的高三学生转氨酶测定进行分析，了解高三学生转氨酶各增高阶段的比例，对于给参加高考的高三学生作出体检结论非常重要。
由于引起转氨酶增高的因素很多，为了避免给临近高考的学生带来思想上的包袱和压力，以更好的状态学习迎接高考，我们认为对于参加高考体检的学生，ALT 测定结果在40 ～ 160 U/L 以内的，内科肝脏检查正常，可以不复查，下合格结论，体检表涂正常框。
内科肝脏检查异常和ALT ≥ 160 U/L 的10 天再复查ALT 和作B 超检查，再根据检查结果下体检表上的转氨酶结论。
【关键词】高考体检转氨酶结果【中图分类号】R194.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0039-02根据人力资源和社会保障部、教育部、卫生部联合下发的《关于进一步规范入学和就业体检项目，维护乙肝表面抗原携带者入学和就业的权力》的通知和教育部、卫生部联合下发的《关于普通高等学校招生学生入学身体检查取消乙肝项目检测有关问题的通知要求，从去年高考体检开始，取消了之前《普通高等学校招生体检工作指导意见》中，乙肝表面抗原携带者不能录取到学前教育、航海技术、飞行技术、面点工艺、西餐工艺、食品科学与工程专业的限制，不再检查乙肝表面抗原，开始检查转氨酶。
现对遂宁高考招生体检中学生的转氨酶结果分析如下。
天门冬氨酸氨基转移酶测定
7.正常参考值：
男11～49U/L女11～40U/L（37℃）
建议各实验室建立自己的正常参考值范围
注意事项：
1.如果试剂变混浊或试剂空白吸光度值（340nm）小于1.0，试剂已失效。
2.如果标本中AST活力＞700U/L（30℃）或＞1000U/L（37℃），需用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
测定管（T）
工作液
300μl
300μl
蒸馏水
15μl
-
标本
-
15μl
混合，置37℃孵育90秒，在主波长340 nm/辅助波长410nm下连续监测1～3分钟各管吸光度变化，计算ΔA/min。
6.结果计算：
AST活性（U/L）=（D A测定/min－D A空白/min）×3376（340nm/410nm，1cm光径）
3.精密度：批内CV：1.8～3.5%批间CV：2.2～3.8%
NADH
0.18mmol/L
LDH
≥0.8KU/L
MDH
≥0.6KU/L
-
-
R2
L－门冬氨酸
200mmol/L
α－酮戊二酸
12mmol/L
使用方法：
1.仪器要求：适用于各类自动生化分析仪或半自动生化分析仪。
2.标本要求：样品为空腹新鲜血清、EDTA或肝素抗凝血浆，溶血会产生干扰。
3.稳定性与保存：试剂在2～8℃避光保存可稳定一年。单试剂工作液2～8℃避光保存可稳定一周。
R1
200μl
200μl
蒸馏水
15μl
-
标本
谷氨酰转肽酶IFCC速率法作业指导书
谷氨酰转肽酶IFCC速率法作业指导书1、前言试验名称：γ-谷氨酰转肽酶测定，英文名称：γ-GT，方法：IFCC速率法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的γ-GT活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中γ-GT的活力。
γ-GT存在于人体不同组织中，血清中γ-GT主要来源于肝胆系统，因此肝脏疾病或肝脏受损时，均可引起γ-GT升高，临床上常用于阻塞性黄疸、胆管炎和胆囊炎等疾病的诊断，某些药物如酒精、镇静药、抗癫痫药等亦可引起γ-GT水平升高。
2、测定原理本试验测定原理基于IFCC推荐的方法，反应原理如下：L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺＋甘氨酰甘氨酸γ-GTL-γ-谷氨酰甘氨酰甘氨酸＋5-氨基-2-硝基苯甲酸盐在上述反应中，5-氨基-2-硝基苯甲酸盐的生成速率与样本中γ-GT的活力成正比，通过在405nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中γ-GT的活力。
3、试剂试剂生产商：长海科华公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*40ml R2：2*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2401168号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：Trist缓冲液100mmol/l甘氨酰甘氨酸125mmol/l试剂2Trist缓冲液100mmol/lL-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺14.5mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
启用后2―10℃可稳定30天，18－25℃可稳定5天，若试剂混浊，或空白在405nm下吸光度值大于0.8A时，则不能使用。
4、标准品：生产商：上海科华公司生产的多项标准。
剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶。
保存条件：2――8℃稳定至有效期。
5、质控品：生产商：英国Randox公司。
剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶，完全溶解30分钟后使用。
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目录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
AST
L-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸
MDH
NADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
当试剂空白吸光度低于0.8时，试剂按照失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。
参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
ΔA/min×Vt×1000
AST(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F
e×Vs×d
式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率； e ——18.5 摩尔吸光系数；
Vt——反应液总体积（ml）；d ——1 比色杯光径（cm）；
1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV<0.34%，批间CV<3.81%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
谷草转氨酶浓度为：300U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.126～0.154。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:12时，测定上限为600U/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
0～38U/L
9．临床意义
天冬氨酸氨基转氨酶又称谷草转氨酶，它催化L—天门冬氨酸氨基的转移。
病毒性肝炎、急性风湿性心肌炎、中毒性肝炎等此酶活性显著增高，AST/ALT比值对鉴别肝脏损害程度和病情变化有重大意义。
附录A: 参数。