神经实验1 坐骨神经腓肠肌标本的制备

实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备

一、实验目的

1. 学习蛙类动物双毁髓的实验方法

2. 学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法

3. 通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴奋组织的概念。

二、实验原理

蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。因此，常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。

三、实验器材

蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液

四、实验步骤

1. 制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）

取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。

2. 剥制后肢标本

剪除上肢和内脏在骶髂关节上0.5-1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。

剥皮左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。

3. 分离两后肢

将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。

4. 分离坐骨神经

将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在蛙板上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部(即与脊神经相接的部位)，背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断(或用玻璃分针扯断)梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处。取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移离开股骨。

5. 分离股骨头

沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，保留1 cm股骨头并剪断股骨。提起腓肠肌上的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。

6. 游离腓肠肌

用手术镊(尖头镊)在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。提起结线，游离腓肠肌。7. 检验标本

用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板。再用任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经，如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。提起腓肠肌上的结扎线，

不使神经受到牵拉，轻轻将标本放入任氏液中保存。稳定15-20min后即可进行实验。此标本可以用于神经干兴奋的传导、神经—肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验研究。

五．注意事项

1. 已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物。

2. 分离神经时，一定要用玻璃分针，不能随便用刀、剪进行操作。

3. 不能过分牵拉神经，以免造成损伤。

4. 标本制备过程中经常用任氏液湿润标本。

5. 避免用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分。

思考题

1.剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？

2.金属器械碰压，触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？

3.如何保持标本的机能正常？