坐骨神经腓肠肌标本制备
简述制备坐骨神经腓肠肌标本的步骤
简述制备坐骨神经腓肠肌标本的步骤
1、取材：从新鲜的成年能鼠死亡的腹部或颈部部分取出支配双腿的坐骨神经及其腓肠肌。
2、清理材料：洗去血清、脂肪、臀神经和肌纤维，只保留神经路径及肌肉纤维。
3、固定：将取出的神经和肌肉泡入4％氯化钠溶液中，浸泡数小时以固定神经肌肉。
4、浸泡：将固定的标本浸泡在硝酸甘油溶液中，以去除表面的脂肪和蛋白质。
5、染色：将固定好的材料放入硝酸胆红素油溶液中，以对不同组织标记其区分度。
6、切片：将显色的材料放入冷冻机中，以切成薄片状，并加以处理，使染色物能牢固地粘结在薄片上。
7、培养：将处理过的固定薄片置于玻片上，再加入培养基以促进细胞生长。
8、包埋：将培养的材料包埋于涂有胶或塑料的玻片上，以便对样本进行后续处理。
9、切片：将包埋的材料切成薄片，以便观察样本的形状和细胞特征。
10、观察：将薄片浸入染色剂中，并进行实时光学显微镜下的观察，观察样品的细胞结构及形态特征。
11、分析：利用扫描电镜或透射电镜观察样本的内部细微结构，以深入研究坐骨神经腓肠肌标本。
12、保存：将完成制备的腓肠肌标本用脱脂性液体物质覆盖起来，以便保存并达到常温下稳定性。
坐骨神经腓肠肌标本制备实验结论
坐骨神经腓肠肌标本制备实验结论一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、实验结果五、实验结论一、实验目的本次实验的主要目的是通过坐骨神经腓肠肌标本制备，了解人体肌肉组织的结构和特点。
同时，通过对标本制备过程中各个步骤的操作，掌握标本制备技能和方法。
二、实验原理1. 坐骨神经腓肠肌标本制备原理坐骨神经腓肠肌标本制备是指将动物或人体组织切割成薄片并进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。
在这个过程中，需要进行以下几个步骤：（1）取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。
（2）固定：将组织样品放入固定液中进行固定处理。
（3）包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理。
（4）切片：将包埋后的组织样品切成薄片。
（5）染色：将切片进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。
2. 坐骨神经腓肠肌结构原理坐骨神经腓肠肌是人体下肢的一部分，由坐骨神经支配。
它主要由三个部分组成：大腿后侧的半膜状肌、半腱状肌和小腿后侧的胫长伸肌。
这三个部分都是由肌纤维束组成的，每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。
三、实验步骤1. 取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。
2. 固定：将组织样品放入10%福尔马林液中进行固定处理，固定时间为24小时。
3. 包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理，包埋时间为48小时。
4. 切片：将包埋后的组织样品切成厚度为5微米左右的薄片。
5. 染色：将切片进行染色处理，常用染色方法有HE染色法和Masson染色法等。
本次实验采用HE染色法进行染色处理。
6. 封片：将染好色的切片放入玻璃片上，加上封片胶，用玻璃片盖住，使其能够在显微镜下观察。
四、实验结果经过以上步骤的操作，制备出了坐骨神经腓肠肌标本。
在显微镜下观察到了肌纤维束组成的三个部分：半膜状肌、半腱状肌和胫长伸肌。
每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。
五、实验结论通过本次实验，我们了解到了坐骨神经腓肠肌标本制备的基本步骤和操作方法，并且通过观察标本结构，掌握了人体肌肉组织的结构和特点。
生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备
生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备
本实验旨在通过制备坐骨神经腓肠肌标本的过程，掌握基础的组织学实验技能，同时加深对神经肌肉解剖结构的理解。
材料与方法：
材料：成年大鼠标本、无水乙醇、石蜡、光学显微镜、麻醉手套、组织取样器、组织取样盒、理化试管架等。
1.准备标本
用麻醉手套将成年大鼠净化神经集中于坐骨神经下1-2厘米范围内，然后将腓肠肌标本从骨骼中取出。
2.固定标本
将取出的腓肠肌标本置于10%的无水乙醇中固定24小时；
3.去水
从10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%到80%的无水乙醇渐次去除，每步时间为1小时；
4.透明
将固定去水的腓肠肌标本分别置于50%敌敌畏-乙醇溶液、70% 敌敌畏-乙醇溶液和100% 敌敌畏透明液溶液中，每步时间为2小时，至标本彻底透明。
5.包埋
取出已透明的腓肠肌标本，置于石蜡组织取样盒中，根据实验需求，选择合适的包埋方向。
6.取薄片
将石蜡包埋的腓肠肌标本取出，用微型切片机切制厚度为5微米的切片，将切片拉直后在干净的水晶片上展开。
7.染色与制成玻片
用哈里斯血液染色将切片染色，脱色后洗净水片后，在水晶片上滴几滴覆盖剂，然后用平凡玻片将组织接口反过来盖住薄片，压紧即可。
实验成果：
经过制备和染色后，我们取得了成年大鼠坐骨神经腓肠肌的标本，通过光学显微镜的观察与检测，我们发现该标本包含完整的腓肠肌结构及肌纤维分离范围。
切片上清晰可见腓肠肌内有明显的核团和细胞质呈透明状，同时染色后肌纤维呈现出红色，血管呈现出蓝色，系统性地展示了腓肠肌肌纤维和血管位置的分布情况。
结论与意义：。
坐骨神经-腓肠肌标本制备
坐骨神经-腓肠肌标本制备骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用二、实验目的：1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。
3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。
三、实验原理：腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。
当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。
而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。
当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。
这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。
肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。
单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。
当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。
当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。
四、实验材料：青蛙五、实验步骤：1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：1) 洗干净实验动物2) 双毁髓，剥制后肢，分离两后肢3) 分离坐骨神经4) 游离腓肠肌5) 分离股骨头6) 标本检验7) 电刺激极性法则的验证2. 连接实验装置：将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。
然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。
将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。
3. 设置通道放大器和刺激器：1) 打开PowerLab电源，检查USB线连接2) 打开Chart5中文版3) 设置通道数为24) 设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零5) 设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通道1，频率1Hz,持续时间1mS,4. 开始测试：1) 打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮2) 点右上角调节采样速度（“走纸速度”）3) 菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板4) 调节走纸速度为400六、实验结果：图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图（二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
8、检验标本
01.
用经任氏液蘸湿的锌铜弓的两极，接触 神经，观察腓肠肌是否收缩！
02.
此标本用于神经干兴奋传导、神经-肌肉 接点的传递以及骨骼肌收缩等实验研究
பைடு நூலகம்意：
1. 保护标本——神经和肌肉：不用赃的皮肤碰标 本，不用自来水冲洗标本，不用金属接触神经以 及损伤肌肉。
2. 注意标本的完整，尤其注意保存股骨头一定的长 度
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坐骨神经——腓 肠肌标本的制备
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目的要求： 学习蛙类动物毁髓的方法 学习掌握蛙类腓肠肌及坐骨神经——腓肠肌标本的制备
步骤：
双毁髓
剥离后肢标本
分离两后肢
分离坐骨神经
分离股骨头
游离腓肠肌
检验标本
完整的神经肌肉标本应包括以下几个部分
1、首先准备手术所需的用品
动物瘫软如泥。
3、剥离后肢标本
动物腹面向上放置于蜡盘，手术镊轻轻提 起耻骨联合上方，剪开皮肤，再剪开体壁 肌肉，然后轻轻提起内脏，自耻骨部剪断 （勿伤脊神经），把内脏拨向头端，剪断 脊柱。然后一手捏住脊柱后端，另一手向 后撕剥皮肤，并除去头端肢体和内脏
4、分离两后肢
把去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上， 于耻骨联合处按压刀刃，切开耻骨联合。 然后用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉， 并纵向剪开脊柱。
5、分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外 侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本 固定在玻璃板下面的蛙板上。用玻璃分针 分离坐骨神经。股部的坐骨神经在股二头 肌与半膜肌之间。
6、分离股骨头或胫腓骨头
动物小，留股骨头 1cm
动物大，留胫腓骨 头1cm
7、游离腓肠肌
坐骨神经-腓肠肌标本实验报告
华南师范大学实验报告一、实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本制备、骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用二、实验目的：1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。
3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。
三、实验原理：腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。
当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。
而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。
当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。
这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。
肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。
单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。
当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。
当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。
四、实验材料：青蛙五、实验步骤：1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：1)洗干净实验动物2)双毁髓，剥制后肢，分离两后肢3)分离坐骨神经4)游离腓肠肌5)分离股骨头6)标本检验7)电刺激极性法则的验证2. 连接实验装置：将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。
然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。
将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。
3. 设置通道放大器和刺激器：1)打开PowerLab电源，检查USB线连接2)打开Chart5中文版3)设置通道数为24)设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零5)设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通道1，频率1Hz,持续时间1mS,4. 开始测试：1)打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮2)点右上角调节采样速度（“走纸速度”）3)菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板4)调节走纸速度为400六、实验结果：（一）坐骨神经-腓肠肌标本制备股骨脊柱骨坐骨神经腓肠肌图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图（二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。
生理学实验报告-《坐骨神经-腓肠肌标本的制备》
实验二-坐骨神经标本—腓肠肌标本的制备一、实验目的：1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌的制备方法。
3.了解电刺激的极性法则。
二、实验原理：1、牛蛙作为实验动物的优势：离体实验是动物生理学主要的实验方法之一。
两栖动物是冷血动物，其基本生理机能与温血动物近似，而其离体组织器官维持活性所需要的条件比较简单，因此它常被选为生理学实验提供离体组织或器官的实验动物。
蟾蜍或青蛙坐骨神经—腓肠肌在任氏液中可维持生理活性数小时，在其基础上还可进一步制作神经干标本、腓肠肌标本，可用于研究肌肉收缩的特性，神经和肌肉的兴奋性、传导性，刺激与反应的关系，神经肌肉接头活动等生理活动及相关机制，甚至还可以用于药物筛选如抗疲劳药物的模型。
其中牛蛙人工养殖成本低产出率高，相对蟾蜍要更安全。
因此，本次实验选择牛蛙作为实验对象。
2、锌铜弓刺激检测标本活性的原理：锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子,里面形成正离子。
当用锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌一活组织→铜的方向流动而产生刺激效应。
所以锌相当于正极,面铜相当于负极发挥刺激作用；当断开时，则发生相反的效应。
锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。
三、实验器材：牛蛙，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针)，蜡盘，蛙板（木质或硬泡沫塑料），玻璃板，固定针，锌铜弓，培养皿或不锈钢盘，污物缸，滴管，纱布，粗棉线，任氏液。
四、实验流程和步骤：1.牛蛙的双毁髓一手握住牛蛙，背部向上。
用拇指压住牛蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。
大学课件坐骨神经腓肠肌标本制备
1毁损中枢神经系统
2 捏住骶骨，在骶髂关节上2cm横 断脊柱
3.横断脊柱，去除内脏
4. 剥离皮肤
5. 放入盛有任氏液的培养皿中
6. 沿正中剪开
7.坐骨神经朝上，腓肠肌向上摆在托盘中
8.玻璃分针分离神经至腘窝源自9.玻璃分针提起坐骨神经，在其下方剪断脊柱残骨
10.在膝关节上方分离肌肉
11.分离股骨干残端1cm，剪断股骨
12.在跟腱下穿线，图片上用的玻璃 分针，也可以用小镊子穿过跟腱
13.用线结扎跟腱，在跟腱远端剪断 跟腱
14.提线，分离腓肠肌
15.剪断胫骨
16.制备完成
17.用铜锌弓检查兴奋性
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坐骨神经-腓肠肌标本制备
一、实验目的要求
1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
２、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。
3、了解电刺激的极性法则。
二、实验原理
１、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似,而其离体组织生活条件易于掌握,在任氏液的浸润下,神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。
因此,在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
２、细胞的静息膜电位为外正内负,电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。
膜电位减小时,细胞去极化,细胞兴奋;膜电位增大时,细胞超极化,细胞兴奋性被抑制。
蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时,可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。
三、实验材料与仪器
1、实验材料:牛蛙
２、实验器材:手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液
四、实验步骤
1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证
2、双毁髓
一只手握住牛蛙,使其背部向上。
用拇指压住牛蛙背部,食指按压其头部前端,另一只手持毁髓针,由两眼之间沿中线向下触划,触及凹陷处即为枕骨大孔。
将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。
将针尖向前刺入颅腔内搅动,此时为单毁髓;将毁髓针退回枕骨大孔,针尖转向后方,与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓,完成双毁髓。
3、坐骨神经-腓肠肌标本制备
（1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙,自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。
轻轻托起后肢,瞧清坐骨神经位置,沿脊柱两侧横向切口剪断体壁,去除断口以上肢体与内脏放入污物缸。
剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。
（2）分离两后肢:用粗剪刀纵向剪开脊柱,并剪断两后肢相连的肌肉,一只用于剥制标本,一只放入任氏液中保存。
（3）分离坐骨神经:将后肢标本脊柱端腹面向上,趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。
先在腹腔面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经,然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的肌肉缝内将坐骨神经与周边的结缔组织分离直到腘窝,但不要伤及神经,其分支待以后用手术剪剪断肌肉。
（4）游离腓肠肌:同样用玻璃分针将腓肠肌与其下的结缔组织分离并在其跟腱处穿线、结扎;
（5）分离股骨头:捏住股骨,剪去并刮净周围肌肉,保留股骨的后2/3,剪断股骨;
（6）检验标本:用手术镊轻提标本的脊椎片,再用经任氏液蘸湿的锌铜弓接触坐骨神经,如腓肠肌发生收缩,则表示标本机能正常。
轻提腓肠肌上的结扎线,将标本放入任氏液中保存１5-2０分钟后进行实验。
（7）电刺激的极性法则验证:用棉线在神经干中间部位进行结扎,以阻断神经传导兴奋的能力。
用锌铜弓跨越结扎线刺激坐骨神经干。
使锌极在腓肠肌一端刺激,观察腓肠肌收缩发生在通电(接触神经干)时还就是断电(离开神经干)时;调转锌铜弓的极性,使铜极在腓肠肌一端
刺激,观察腓肠肌收缩实在通电时还就是断电时。
比较不同极性电极刺激时腓肠肌的收缩强度就是否一样,那个收缩强度比较大?
五、注意事项
1、避免血液污染标本,压挤、损伤与用力牵拉标本,不可用金属器械触碰神经干。
２、在操作过程中,应给神经与肌肉滴加任氏液,防止表面干燥,以免影响标本的兴奋性。
3、标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟,使标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
六、实验结果
通过任氏液浸泡,刺激后,瞧到肌肉有收缩的反应,调换电极进行刺激后也同样有收缩反应。
通过铜—锌与锌—铜的两种刺激比较后,铜—锌更强。
七、总结
通过本次试验更加深刻的认识了肌细胞收缩的机制,熟悉了单毁髓与双毁髓的方法与操作,掌握ｌ坐骨神经－腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法的基本操作。
由于实验过程中提取腓肠肌时候,肌肉过度兴奋,进行电极刺激时现象不就是非常明显。
综上所述实验时需小心操作,尽量避免肌肉失活。
八、思考题
1、剥去皮肤的后肢,能用自来水冲洗不？为什么?
答:不能。
因为自来水中还有例如氯离子、钙离子等许多离子,它们会影响细胞膜的点位分布,最终就会影响到刺激反应现象的观察;另外自来水里有许多微生物如果它们附着与誓言材料上,也会影响实验效果的。
2、金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌,可能引起哪些不良后果？
答:金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌会损伤腓肠肌细胞膜,使肌肉中的神经收到过度刺激,而过度兴奋最终失活,刺激时候就没有现象。
3、如何保持标本的机能正常?
答:首先在制备腓肠肌的过程时,金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠肌,以及实验者不要触碰到肌肉;其次,过程中要保持腓肠肌的湿润,常加任氏液,最好先泡一会;另外,在第一次电刺激后,需要让肌肉休息一段时间,在进行下一次刺激。
实验一蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
一、实验目的
ﻩ掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本基本操作技术,掌握蛙类手术器械的使用方法。
二、材料与方法
１、材料
蟾蜍;任氏液;探针、剪刀、培养皿、瓷盆、玻璃分针、蛙板、玻璃板、大头针、镊子、线、锌铜弓。
2、实验方法
2、1 毁脑脊髓取蟾蜍一只,用左手握住,以食指压其头部前端使其尽量前俯,右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入,到达椎管,即将探针改变方向刺入颅腔,向各侧不断搅动,彻底捣毁脑组织;再将探针原路退出,刺向尾侧,捻动探针使逐渐刺入整个椎管内,捣毁脊髓。
此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失,四肢松软,即成为一毁脑脊髓的蟾蜍。
否则须按上法再行捣毁。
2、２剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。
左手握住蟾蜍脊柱,右手将粗剪刀沿两侧(避开坐骨神经)剪开腹壁。
此时躯干上部及内脏即全部下垂。
剪除全部躯干上部及内脏组织,弃于瓷盆内。
２、3剥皮避开神经,用右手拇指与食指夹住脊柱,左手捏住皮肤边缘,逐步向下牵拉剥离皮肤。
拉至大腿时,如阻力较大,可先剥下一侧,再剥另一侧。
将全部皮肤剥除后,将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
2.4洗净双手与用过的全部手术器械,再进行下列步骤。
2.5分离双腿避开坐骨神经,用粗剪刀从背侧剪去骶骨,然后沿中线将脊柱剪成左右两半,再从耻骨联合中央剪开(为保证两侧坐骨神经完整,应避免剪时偏向一侧)。
将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。
2、６游离坐骨神经取腿一条,先用剥离分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部,然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。
用玻璃分针循股二头肌与半膜肌之间的坐骨神经沟,纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分,直至分离至腘窝颈神经分叉处。
然后剪断股二头肌腱、半膜肌与半膜肌肌腱,并绕至前方剪断股四头肌腱。
自上向下剪断所以坐骨神经分支。
将连着3－４节椎骨的坐骨神经分离出来。
2、7完成坐骨神经小腿标本将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。
用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所以大腿肌肉,在距膝关节约1cm处剪断股骨。
弃去上段股骨,保留部分即为坐骨神经小腿标本。
2、８完成坐骨神经腓肠肌标本用尖子镊子在上述坐骨神经腓肠肌标本的跟腱下方穿孔,穿线结扎之。
提起结扎线,在结扎线下方剪断跟腱,并逐步游离腓肠肌至膝关节处,左手握住标本的股骨部分,使已游离的坐骨神经与腓肠肌下垂,右手持粗剪刀水平方向伸进腓肠肌与小腿之间,在膝关节处剪断,与小腿其余部分分离。
左手保留部分即为附着于股骨之上的、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本。
将标本浸入盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。
2、９实验观察
２、9、1蟾蜍毁脑脊髓前后四肢肌张力的变化。
２.9、2用锌铜弓分别刺激坐骨神经与腓肠肌,观察肌肉的反应。
三、实验结果
用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。
四、分析
锌铜弓用金属锌与铜铆接而成,锌铜弓在极性溶液中形成回路时,锌与铜两极产生约0.５-０、7V的直流电压,电流的刺激作用于神经肌肉标本,由于产生生物电流,因而引起肌肉的收缩。
制备标本的过程中,要不断滴加任氏液,以防标本干燥,丧失正常生理活性;操作过程中应避免强力牵拉与手捏神经或夹伤神经肌肉;毁脑脊髓时防止蟾蜍皮肤分泌的蟾蜍毒液射入操作者眼内或污染实验标本。
五、结论
蛙类的某些基本生命活动与生理功能与哺乳类动物有相似之处,而且其离体组织的生活条件比较简单,易于控制与掌握,来源也较丰富,由此在生理学实验,尤其就是细胞生理学的某些实验中,常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。
制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本就是生理学实验的基本操作技术之一。