大孔吸附树脂对竹叶兰中总黄酮的分离纯化
通过大孔树脂柱层析和制备HPLC分离和纯化竹叶中具有抗氧化活性的4种C
通过大孔树脂柱层析和制备HPLC分离和纯化竹叶中具有抗氧化活性的4种C-糖苷黄酮摘要：目前已研究了4种C-糖苷黄酮，即荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的制备方法,而这些C-糖苷黄酮是从乙醇提取物水溶液(即竹叶抗氧化物AOB)里通过AB-8大孔树脂和制备HPLC(流动相:10%和15%(V/V)/1%醋酸)制得的。
近而通过用甲醇和水分别作为抗溶剂和盐析剂的结晶法来纯化得到这些C-糖苷黄酮。
纯度是由分析HPLC谱图来估算的，而化学结构的确定是由IR，MS,NMR和UV谱图来确定的。
由5LAOB浓缩液得到的6.5g原料柱层析部分制得了荭草苷（49mg）、异荭草苷（142mg）、牡荆苷(15mg)、异牡荆苷(62mg)。
这些方法比较适用于制备纯C-糖苷黄酮的可利用的量，也适用于在竹叶中的荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的量。
关键词：C-糖苷黄酮；大孔树脂；制备HPLC；结晶作用；竹叶抗氧化物1.简介在生物学上，二级植物代谢物是有活性的与人体的蛋白质有关联的非营养物。
黄酮——植物多酚二级代谢物的一大类——广泛分布于药草、果实、茶叶等中。
黄酮，存在于人类的食物中，对人体健康产生了特殊的作用，包括抗氧化活性，心脏血管疾病的防治，癌症的预防等。
C-糖苷黄酮是黄酮家族的一个重要的一类，在一些植物中被发现，例如，紫檀树和葫芦科果实中。
C-糖苷黄酮的多种生物活性已被报道过，包括异荭草苷（毛地黄黄酮-6-糖苷）和牡荆苷（芹菜素-8-糖苷）的抵抗金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，绿脓杆菌的抗菌活性，也包括毛地黄黄酮-7-糖苷对于抵抗由CCl4引起的肝伤。
竹叶抗氧化物（AOB）是一种从竹叶中提取出来的灰褐色粉末，能够阻碍液体自动氧化的链反应，这种自动氧化会螯化过渡态的金属离子，净化亚硝酸化合物和阻碍亚硝胺的合成，另外，AOB已被证明对于过渡金属离子和自由基（包括在体外的高分子的衰减）具有强的抗氧化活性和抑制功效。
在中国，AOB已被证明是一种新的食物抗氧化剂，它能够被加进疏松的食品，水产品，肉类，可食用油，谷类，面包，水果及蔬菜汁，茶饮料和油炸食品中，这些都已经过中国卫生部门认证。
大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮的研究
大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮的研究李月;陈莹【摘要】利用4种大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮.结果表明,HPD100型大孔吸附树脂最适合分离纯化银杏叶总黄酮,该树脂的静态饱和吸附量(以干树脂计)为63.8 mg·g-1,静态洗脱率为91.2%,动态饱和吸附-洗脱量为14.0 mg·g-1,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为4倍树脂体积,树脂可重复使用7个周期.%The total flavones from Folium ginkgo leaves were seperated and purified by four kinds of macroporous adsorption resin. The results showed that resin HPD100 was the most efficient one with static adsorption capacity of 63.8 mg·g-1, static elution rate of 91.2% and dynamic saturated adsorption capacity of 14.0 mg·g-1 with 4 BV 70% ethanol as elutingreagent.Furthurmore,resin HPD100 could be repeatly used for 7 cycles.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)007【总页数】3页(P55-57)【关键词】银杏叶总黄酮;大孔吸附树脂;分离纯化【作者】李月;陈莹【作者单位】中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】TQ461大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，广泛应用于中草药化学成分的分离与富集。
提取纯化制备竹叶黄酮的研究
提取纯化制备竹叶黄酮的研究作者：曹亚兰罗艳萍罗锦杰来源：《现代食品·下》2019年第03期摘要：目的：制备符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
方法：将竹叶先进行优化提取，得到粗制竹叶黄酮，再经大孔吸附树脂柱纯化，得到符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
结论：竹叶经水提工艺得到的总黄酮总量为9.72%;乙醇提取工艺的总量为12.65%;水提醇沉工艺的总量为16.03%;水提或醇提工艺后，再经大孔吸附树脂柱后总量为24.13%或29.57%，均达到新资源食品要求。
关键词：竹叶黄酮;提取;纯化中图分类号：TQ914.1竹叶是卫生部确定的药食两用的天然植物，是一种资源丰富且廉价的林业资源。
但相关研究较少，对其的开发利用相对较滞后，这无疑是对自然资源的严重浪费。
研究发现，竹叶中含有大量的活性成分，如黄酮及其苷类、活性多糖、特种氨基酸及其肽类、微量元素及芳香成分等”。
其中黄酮类物质是一类重要的抗氧化剂，具有抗氧化、抗疲劳、抑菌、降血脂与增强免疫力等多种生理功能。
本研究从安全性、经济效益、大规模产业化等方面考虑，研究楠竹竹叶的提取工艺及纯化方案，以期得到符合新资源食品要求的竹叶黄酮，同时为充分利用竹子加工业的副产品，开发利用竹叶资源，提高产品的附加值，实现产业化提供科学依据。
1材料与仪器1.1材料与试剂新鲜的楠竹竹叶，采自四川长宁，将楠竹竹叶晾晒，于60C左右烘干，适度粉碎后，装入塑料袋中密封，干燥贮存备用。
芦丁标准品（纯度为92.6%，批号：100080-201409），购于广东省药品检验所;AB-8大孔吸附树脂，购于西安蓝晓科技新材料股份有限公司;甲醇、氢氧化钠、乙醚、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。
1.2试验仪器UV-2450型紫外可见分光光度计：岛津仪器（苏州）有限公司;DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司;118B摇摆式八两装高速中药粉碎机：浙江温州瑞安市永历制药机械有限公司;ABT220-5DM十万分之一天平：广州得翔科技有限公司;AUY120EXP岛津万分之一天平：日本岛津;RE-3000旋转蒸发器：上海亚荣生化儀器厂;SHB-II型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司。
大孔树脂处理方法步骤
1、大孔树脂处理方法步骤：将大孔树脂用无水乙醇浸泡24h后湿法装柱；用乙醇2BV/h通过树脂层，冲至流出液加水不呈白色浑浊为止，并用去离子水以同样流速冲洗至无醇味（大概5倍柱体积）；然后用2BV/h 0.5% HCl(2-3倍柱体积)以2.5ml/min流速通过树脂层，并浸泡2—4h后用水以同样流速洗至流出液pH值呈中性；最后用2BV 2%NaOH 溶液以2.5ml/min流速通过树脂层，并浸泡2—4h后，用水以同样流速洗至流出液pH 呈中性。
而长时间不用保存，待活化后，再用95%乙醇浸泡，即可。
2、装柱树脂分别浸没在蒸馏水中，避免气泡产生对总黄酮分离纯化的影响。
树脂加到预定的柱体积后，再用蒸馏水反复过柱，使柱内的树脂充分压紧。
装好的树脂柱静置过夜，使柱内的树脂继续压紧直至充分稳定下来后才能使用。
上样时将柱上部蒸馏水放至与树脂面基本齐平后，沿管壁从柱上部缓慢加入待分离纯化的样品溶液。
应注意不要冲松表层树脂而使之浮起。
自柱下放出少许液体，至样品液面与树脂表面基本齐平。
3、大孔树脂对麻黄总黄酮吸附的研究（静态吸附实验）精密称取已处理好的5种大孔树脂D101、AB-8、D-4020、HP-20、SP-70适量（相当于树脂5.0g）,置于250ml锥形瓶中，精确加入已知浓度的发酵液溶液100ml，用振荡器振荡24h,充分吸附后，滤过，分别取各树脂的滤液1ml进行吸光度的分析，测定滤液剩余黄酮的含量，按吸附率：E%E% =C0 —C e / C0 ×100% C0 —吸附前溶液的浓度mg/ml C e —吸附后溶液浓度吸附量Q=（C0 —C e）×V/W Q—吸附量mg/g W 干树脂重 V溶液体积计算各树脂在室温下的吸附量，吸附率。
按上述试验方法，取充分吸附后的树脂过滤抽干，分别精密加入95%的乙醇各30ml,室温下浸泡振摇24h,滤过，测定滤液中黄酮浓度，根据下式：解吸率%=C2V2/（C0-C1）×V1×100%计算解吸率。
大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展
大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展摘要:黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物, 具有多种生物活性。
大孔吸附树脂纯化是一项不需复杂设备、操作条件温和的新型分离技术。
综述了大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展。
关键词: 黄酮; 大孔吸附树脂; 分离纯化; 进展正文1 前言黄酮类化合物(Flavonoids) 是在植物中分布非常广泛的一类天然产物, 其在植物体内大部分与糖结合成苷类, 也有一部分以游离态(苷元) 形式存在, 对植物的生长、发育、开花、结果及防菌防病等起着重要的作用。
黄酮类化合物是许多中草药的有效成分, 具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、免疫调节、解毒护肝、细胞保护、防治心血管疾病、调节机体内分泌和代谢、影响细胞生长等多种生物活性, 近年来国内外学者对其颇为重视。
近十年来, 黄酮类化合物的研究倾向于其药用价值的开发, 更多地涉及提取分离纯化方法、含量测定及制剂研究等。
黄酮类化合物的分离包括黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离、黄酮类化合物中的单体分离。
黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离方法主要有提取法、色谱法、超临界萃取法、膜分离法、双水相萃取分离法等;单体分离方法主要是色谱法, 除经典的柱色谱法和薄层色谱法外,还有高效液相色谱法(HPLC)、高速逆流色谱法(HSCCC)等。
本文在此仅对大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展进行综述。
2 大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物2 1 黄酮类化合物与非黄酮类化合物的分离纯化大孔吸附树脂于20世纪70年代末逐步应用于中草药有效成分的提取分离。
大孔吸附树脂的型号有HP-30、D101、DA-201、AB-8、XAD-4、XAD-16 等, 其特点是吸附容量大、再生简单、效果可靠, 尤其适用于黄酮类、皂苷类等成分的分离纯化及其大规模生产]21[、。
李兆龙]3[等用日本产非极性大孔吸附树脂(如Diaion HP-10、HP-20、HP-21) 等分离银杏叶黄酮。
大孔吸附树脂分离纯化甘草废渣中总黄酮的工艺研究
０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ ｍＬ，分别置 ２５ ｍＬ 容量瓶中，各加水
至 ３．０ ｍＬ，加 ５％ 亚硝酸钠溶液 １ ｍＬ，混匀，放置６ ｍｉｎ，加
１０％硝酸铝试液 １ ｍＬ，混匀，放置 ６ ｍｉｎ，加氢氧化钠试液
１０ ｍＬ，再加水至刻度，摇匀，放置 １５ ｍｉｎ，以相应的试剂为空
合并滤液。 减压蒸馏除去溶剂，５０ ℃ 鼓风干燥，即得甘草黄
酮粗提物。
２．２ 甘草总黄酮含量测定
２．２．１ 对照品溶液制备。 取芦丁对照品 ２０ ｍｇ，精密称定，置
５０ ｍＬ 容量瓶中，加无水乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放
冷，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，备用。
２．２．２ 标准曲线的绘制。 参考《中国药典》 （２０２０ 版） 一部槐
安徽农业科学，Ｊ．Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃ．Ｓｃｉ． ２０２４，５２（８） ：１５９－１６２
大孔吸附树脂分离纯化甘草废渣中总黄酮的工艺研究
范 博１ ，舒泉湧２ ，李宗霖３ ，翟 帆３
（ １． 陕西医药控股集团有限责任公司，陕西西安 ７１００７５；２． 陕西中药研究所，陕西咸阳 ７１２０９９；
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｌｉｃｏｒｉｃｅ Ｗａｓｔｅ Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｕｓｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ Ｒｅｓｉｎ
ＦＡＮ Ｂｏ１ ，ＳＨＵ Ｑｕａｎ⁃ｙｏｎｇ２ ，ＬＩ Ｚｏｎｇ⁃ｌｉｎ３ ｅｔ ａｌ （１．Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｈｏｌｄｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．， Ｘｉ’ ａｎ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１００７５；２．Ｓｈａａｎｘｉ
大孔吸附树脂对竹叶兰中总黄酮的分离纯化
大孔吸附树脂对竹叶兰中总黄酮的分离纯化摘要:大孔吸附树脂分离纯化竹叶兰总黄酮的最佳工艺条件为上样液浓度 2.50 g/L,上样速率3.0 BV/h,洗脱剂80%乙醇,洗脱速率3.0 BV/h,洗脱剂用量4.0 BV,按此工艺条件纯化后的竹叶兰总黄酮纯度达81.58%｡AB-8型大孔吸附树脂对竹叶兰总黄酮有较好的吸附和解吸效果｡关键词:大孔吸附树脂;总黄酮;分离纯化;竹叶兰Study on Separation and Purification of Total Flavones from p Abstract: The separation and purification of total flavones from Arundina graminifolia by AB-8 macroporous adsorption resin was investigated. The optimum colum conditions were as follows the concentration and current velocity of the original solution was 2.50 g/L and 3.0 BV/h respectively; the eluant was 80% ethanol; the eluting velocity was 3.0 BV/h, and the consumption of eluant was 4BV respectively. The purity of total flavones reached up to 81.58% under these conditions. Thep Key words: macroporous adsorption resins; total flavones; separation and purification; Arundina graminifolia竹叶兰(Arundina graminifolia)为兰科竹叶兰属植物,又名黄竹参[1],傣药名为纹尚海[2],主要分布于热带和亚热带地区,是一种重要的傣族解药,其药用部位主要为根茎,具有清热解毒､祛风除湿､散瘀止痛､消炎､利尿等作用[3-5]｡黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物｡到目前为止,已经发现有5 000多种植物中含有黄酮类化合物[6]｡对植物黄酮类化合物进行纯化以获得高纯度黄酮具有重要意义[7]｡大孔树脂分离技术是20世纪60年代末发展起来的继离子交换树脂后的分离新技术之一｡大孔吸附树脂的孔径与比表面积都比较大,在树脂内部具有三维空间立体孔结构,由于具有物理化学稳定性高､比表面积大､吸附容量大､选择性好､吸附速度快､解吸条件温和､再生处理方便､使用周期长等诸多优点[8],广泛应用于中草药化学成分的提取､分离､富集和中药复方制剂去除杂质等方面[9]｡近年来报道了许多大孔树脂在黄酮､皂甙等天然活性物质的分离纯化方面的研究[10,11]｡通过对大孔吸附树脂法纯化竹叶兰中总黄酮工艺进行探讨,以期得到高纯度竹叶兰总黄酮,为竹叶兰总黄酮类产品的开发和研究提供参考｡1材料与方法1.1材料1.1.1竹叶兰竹叶兰(干品,购于西双版纳傣医医院),用前粉碎至80目以下｡1.1.2试剂AB-8型大孔吸附树脂(南开大学化工厂),使用前按说明进行预处理;芦丁标准品购于Sigma公司,乙醇,石油醚,甲醇,5%NaNO2溶液,10% A1(NO3)3溶液,4%NaOH溶液,所用试剂均为分析纯｡1.1.3仪器7200型紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);AS3120A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司);层析柱;旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂) ;TH2-82B气浴恒温振荡器;AL204电子天平｡1.2方法1.2.1竹叶兰粗提取液的制备[12]准确称取竹叶兰粉末1.00 g于100 mL具塞锥形瓶中,加入10 mL 60%乙醇溶液,超声提取30 min后,抽滤｡滤渣再用70%的乙醇超声浸提30 min,共浸提3次｡过滤后合并3次滤液,于旋转蒸发仪浓缩至干｡称重,备用｡用70%乙醇溶液定容至25 mL作为待测液｡1.2.2总黄酮含量的测定1)对照品溶液的制备｡精确称取105 °C干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,置于100 mL容量瓶中,加80%乙醇溶解至刻度,摇匀得浓度为0.2 mg/mL的对照品溶液,备用｡2)标准曲线的制作[13]｡分别吸取0､1.0､2.0､3.0､4.0､5.0､6.0､7.0､8.0 mL对照品溶液,分别置于25 mL比色管中,各加30%乙醇定容至10 mL,加5%NaNO2溶液1 mL,摇匀放置6 min,再加10%Al(NO3)3溶液1 mL,摇匀,再放置6 min,加4%NaOH溶液10 mL,用去离子水定容至刻度,摇匀放置15 min,以去离子水作参比,用1 cm的比色皿于波长510 nm处测定其吸光度,以吸光度A为纵坐标,以芦丁标准溶液的浓度C(mg/mL)为横坐标绘制标准曲线,用最小二乘法进行回归,得到吸光度和芦丁标准溶液浓度的回归方程:A=12.546 0C+0.005 8,r=0.999 8｡该方法在0.008~0.064 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系｡3)总黄酮含量的测定｡采用NaNO3-A1(NO3)3比色法,按照标准曲线制作的方法对竹叶兰样品溶液中总黄酮含量进行测定,得到不同条件下的吸光度值,利用芦丁标准曲线方程进行计算,从而得到测定液中的总黄酮含量｡1.2.3AB-8树脂的预处理[14]大孔树脂用95%乙醇浸泡24 h,充分溶胀后,用乙醇洗至洗出液加适量水无白色浑浊,再用去离子水洗尽乙醇;用5%HCl溶液浸泡8 h,再用去离子水洗至pH值为7,接着用5% NaOH溶液浸泡8 h,再用去离子水洗至pH值为7,浸泡于去离子水中备用｡。
大孔吸附树脂分离纯化千斤拔总黄酮的工艺研究
千斤 拔 购 于 安 徽 省 毫 州 市 华 申药 业 有 限 公 司， 经吉林 大学 药 学 院 王 广树 教 授 鉴 定 为 豆科 植 物蔓 性千 斤拔 的根 ， 大孔 脂 Ｄ１ ０ １ 、 ＡＢ 一 ８ 、 Ｌ Ｓ Ａ一 ２ １ 、 Ｘ Ｄ Ａ一 ６ 、 ＸＤ Ａ一 ８ 、 Ｌ Ｓ Ａ 一 ７ 、 Ｌ Ｓ Ａ一 １ ９购 于西 安 蓝 晓科 技 有 限 公 司 ，芦 丁 对 照 品 （ 批 号 ：ＭＵＳ Ｔ 一 １ ２ １ ２ ２ ０ ０ ３ ） 纯 度≥ ９ ８ ％， 购 于成都 曼斯 特生物 科技 有 限公 司 ， 甲醇为 色谱 纯 ， 购 于天 津大 茂化学 试剂 厂， 其它试 剂 均为分 析 纯 。 ＴＵ 一 １ ８ １ ０ Ｐ Ｃ型 紫外 分光 光度 计 （ 北 京普 析通 用仪 器有 限责 任有 限公 司） 、 Ｒ － ５ ２ ＡＡ 型旋 转蒸 发 仪 （ｆ － 海 亚荣 生化仪 器 厂） 、 Ｓ ＨＡ— Ｂ型 水 浴恒 温振 荡器 （ 常 州 国华 电器有 限公 司） 、 Ｓ ＨＺ — Ｄ型 循 环水 真 空泵 （ 河南 巩义市英峪仪器厂） 、 ＤＨＺ 一 ９ ０ ７ ５型 电热 鼓风 干燥 箱 （ 上 海 一 恒科 学 仪 器 有 限 公 司 ） 、 ＡＵＹ２ ２ ０型 电子 天 平 （ 日本 岛 津） 、 Ｂ Ｓ ５ ０ — １ Ａ 型恒 流泵（ 保 定 思 诺 流 体 科 技 有 限公 司 ） 、 Ｐ ＨＳ － ２ Ｃ 型 酸 度计 （ 上海精密科学仪器厂） 和Ｃ Ｂ Ｓ — Ｂ型 自动 部 分收集 器 （ 上海 沪西 分析仪 器 厂） 。 １ ． ２ 方 法 １ ． ２ ． １ 供 试 品 溶 液 的 制 备 称 取 适 量 千 斤 拔 药 材， 粉碎 ， 过 ４ ０目筛 ， 依次 加 入 １ ５倍 量 ７ ０ 乙 醇 回流提 取 ， 提取 ３ 次， 每次 ２ ｈ ， 合 并提 取液 ， 过滤 ， 滤 液减压 回收 乙醇至无 醇 味 ， 浓 缩液加 水稀 释 ， 静 置， 滤 去不 溶 性 物质 ， 将 滤液 以蒸 馏 水 定 容 ， 即得 千斤 拔供 试 品溶液 。 １ ． ２ ． ２ 标 准 曲 线 的 建 立 精 密 称 取 芦 丁 对 照
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大孔吸附树脂对竹叶兰中总黄酮的分离纯化
摘要:大孔吸附树脂分离纯化竹叶兰总黄酮的最佳工艺条件为上样液浓度 2.50 g/L,上样速率3.0 BV/h,洗脱剂80%乙醇,洗脱速率3.0 BV/h,洗脱剂用量4.0 BV,按此工艺条件纯化后的竹叶兰总黄酮纯度达81.58%｡AB-8型大孔吸附树脂对竹叶兰总黄酮有较好的吸附和解吸效果｡
关键词:大孔吸附树脂;总黄酮;分离纯化;竹叶兰
Study on Separation and Purification of Total Flavones from p Abstract: The separation and purification of total flavones from Arundina graminifolia by AB-8 macroporous adsorption resin was investigated. The optimum colum conditions were as follows the concentration and current velocity of the original solution was 2.50 g/L and 3.0 BV/h respectively; the eluant was 80% ethanol; the eluting velocity was 3.0 BV/h, and the consumption of eluant was 4BV respectively. The purity of total flavones reached up to 81.58% under these conditions. Thep Key words: macroporous adsorption resins; total flavones; separation and purification; Arundina graminifolia
竹叶兰(Arundina graminifolia)为兰科竹叶兰属植物,又名黄竹参[1],傣药名为纹尚海[2],主要分布于热带和亚热带地区,是一种重要的傣族解药,其药用部位主要为根茎,具有清热解毒､祛风除湿､散瘀止痛､消炎､利尿等作用[3-5]｡
黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物｡到目前为止,已经发现有5 000多种植物中含有黄酮类化合物[6]｡对植物黄酮类化合物进行纯化以获得高纯度黄酮具有重要意义[7]｡
大孔树脂分离技术是20世纪60年代末发展起来的继离子交换树脂后的分离新技术之一｡大孔吸附树脂的孔径与比表面积都比较大,在树脂内部具有三维空间立体孔结构,由于具有物理化学稳定性高､比表面积大､吸附容量大､选择性好､吸附速度快､解吸条件温和､再生处理方便､使用周期长等诸多优点[8],广泛应用于中草药化学成分的提取､分离､富集和中药复方制剂去除杂质等方面[9]｡
近年来报道了许多大孔树脂在黄酮､皂甙等天然活性物质的分离纯化方面的研究[10,11]｡通过对大孔吸附树脂法纯化竹叶兰中总黄酮工艺进行探讨,以期得到高纯度竹叶兰总黄酮,为竹叶兰总黄酮类产品的开发和研究提供参考｡
1材料与方法
1.1材料
1.1.1竹叶兰竹叶兰(干品,购于西双版纳傣医医院),用前粉碎至80目以下｡
1.1.2试剂AB-8型大孔吸附树脂(南开大学化工厂),使用前按说明进行预处理;芦丁标准品购于Sigma公司,乙醇,石油醚,甲醇,5%NaNO2溶液,10% A1(NO3)3溶液,4%NaOH溶液,所用试剂均为分析纯｡
1.1.3仪器7200型紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);AS3120A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司);层析柱;旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂) ;TH2-82B气浴恒温振荡器;AL204电子天平｡
1.2方法
1.2.1竹叶兰粗提取液的制备[12]准确称取竹叶兰粉末1.00 g于100 mL具塞锥形瓶中,加入10 mL 60%乙醇溶液,超声提取30 min后,抽滤｡滤渣再用70%的乙醇超声浸提30 min,共浸提3次｡过滤后合并3次滤液,于旋转蒸发仪浓缩至干｡称重,备用｡用70%乙醇溶液定容至25 mL作为待测液｡
1.2.2总黄酮含量的测定
1)对照品溶液的制备｡精确称取105 °C干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,置于100 mL容量瓶中,加80%乙醇溶解至刻度,摇匀得浓度为0.2 mg/mL的对照品溶液,备用｡
2)标准曲线的制作[13]｡分别吸取0､1.0､2.0､3.0､4.0､5.0､6.0､7.0､8.0 mL对照品溶液,分别置于25 mL比色管中,各加30%乙醇定容至10 mL,加5%NaNO2溶液1 mL,摇匀放置6 min,再加10%
Al(NO3)3溶液1 mL,摇匀,再放置6 min,加4%NaOH溶液10 mL,用去离子水定容至刻度,摇匀放置15 min,以去离子水作参比,用1 cm的比色皿于波长510 nm处测定其吸光度,以吸光度A为纵坐标,以芦丁标准溶液的浓度C(mg/mL)为横坐标绘制标准曲线,用最小二乘法进行回归,得到吸光度和芦丁标准溶液浓度的回归方程:A=12.546 0C+0.005 8,r=0.999 8｡该方法在0.008~0.064 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系｡
3)总黄酮含量的测定｡采用NaNO3-A1(NO3)3比色法,按照标准曲线制作的方法对竹叶兰样品溶液中总黄酮含量进行测定,得到不同条件下的吸光度值,利用芦丁标准曲线方程进行计算,从而得到测定液中的总黄酮含量｡
1.2.3AB-8树脂的预处理[14]大孔树脂用95%乙醇浸泡24 h,充分溶胀后,用乙醇洗至洗出液加适量水无白色浑浊,再用去离子水洗尽乙醇;用5%HCl溶液浸泡8 h,再用去离子水洗至pH值为7,接着用5% NaOH溶液浸泡8 h,再用去离子水洗至pH值为7,浸泡于去离子水中备用｡。