蛙心灌流实验报告

实验二离体蛙心灌流实验

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1. 学习离体器官（蛙心）灌流的方法。

2. 观察理化因素对蛙心活动的影响。

二、实验原理

蛙心的灌流：蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。

心肌：

受体受体激动剂效应

B i 肾上腺素去甲肾

上腺素心率增快、房室传导加速、心肌收缩力加强。

M 乙酰胆碱

心率减慢、房室传导减

慢、心肌收缩力减弱。

1. 任氏液：正常对照

含有 NaCI、CaCb、KCI、NahPQ、Na z HPO

和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。2.0.65%NaCI 灌流：0_ 65%N aCJ® 流

细胞WCa24^

心肌细胞动作电k期间C/十内流H

J

心肌细胞胞浆C屛+浓度井

J

心肌收缩力卄

3.2%CaC2 灌流:

实验目的

细胞外裁cE 浓度显著升髙 膜内-外C/浓度梯度增大

一 ~一一

慢反应细胞4期牛 工作细胞动作电位期间C 』内流怦

自动去极速度1

肌浆cf 浓度料 1 肌浆cf 浓度 持续

升高

自律性* A C*与肌钙

■■

蛋白结合数量啊 Ca 与肌钙蛋白

心率J ■

只结合不解高

心肌收缩力忖

心肌持续收睹

4.1%KCI 灌流:

细斛液K 理般度牖

T |

K 加制冒内沆

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T Ca%巔少

电血姬对值財

E 的兴奋-憾 解作

用对1

*

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鮎电位与龜住 水平的电雌减小 WM'

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门测瞅甜升高

6.1:10000 Ach 灌流

乙酰胆M(Ach) 心肌细胞膜M 受体结合

抑制钙通道

细胞膜对K*通透性丰

窦房结细胞最大复极电位绝

对值增大.4期K 亠外流增加

I & 自律性* I

心率*

7. 心得安

B 1受体阻断剂，抑制肾上腺素与 B 1受体结合，使E 不能发挥作用

细胞外液疋浓度显著升高 膜内■外丘浓度梯度减小 群息电位绝对值减小至-55 mV

Na 通道失活

心肌细胞兴奋性丧失

*

心脏停搏于舒张状态

5.1:10000 E 灌流

肾上腺素(E) 心肌细胞膜厉受体结合

C/与肌钙蛋白亲细胞膜对C 尹通透性齐 和力* II ；1 ■ -一

肌浆网摄C 代速度个

4期自动去扱化速度卒 肌浆网对A C

汙逋透性I 复极期肌浆匚£ 浓度降低速度 自律性牛 心肌舒张丰 心率宀

动作电位期忖

间U 弦内流1

*

心肌收缩力存 对Oi 鈿通逶性4 /

动作电冷.期间：产內流柴 心肌收缩力井

8. 阿托品

M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力

三、实验器材

离体蛙心

任氏液、I % KCI溶液、2%CaC1溶液、0.65%NaCI溶液、1:10000肾上腺素、1:10000 乙酰胆碱、心得安、阿托品

四、实验步骤

1.离子试剂任氏液清洗任氏液清洗

任氏剂 -------k 0.65%NaCI --------------- 2%CaCl2 ----------------

1%KCI k任氏液

2. 药物试剂

任氏液清洗任氏液清洗E 心得安+E —

任氏液清洗Ach

阿托品+Ach 任氏液 分析：细胞外液中Ca 浓度降低，2期Ca 内流减少，胞浆中Ca 减少，心肌收缩 力降低。

图3 2%CaCl 2灌流脉搏曲线

分析：心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。 心肌肌浆网不发 达，储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中 Na ；与CeT 有竞 争性抑制，细胞外液Cf 浓度升高，细胞兴奋时内流Ca 增加，心肌收缩力增强。 慢反应细胞4期去极速度加快，心率增快。

心率：38次/min 最大收缩力：3.5g 最小收缩力：1.1g

五、结果与分析

分析：K +与Cf 在细胞膜上有竞争性抑制，细胞外液中 K ；浓度升高，K +

抑制细胞 膜对Cf 转运，因此进入细胞内Ca 降低，心肌的兴奋一收缩耦联作用减小，心

肌收缩力减弱

心率：35次/min 最大收缩力：3.5g 最小收缩力：0.9g

分析：肾上腺素与心肌细胞膜上的B i受体结合，心肌细胞和肌浆网膜 CeT通透性增强，肌浆中CeT浓度升高，心肌收缩力增强。而且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离子亲和力下降，肌钙蛋白对钙离子的释放增强，肌浆网膜摄取钙离子的速度加快，钠-钙离子的交换增加，复极期向细胞外排出钙离子增多，心肌舒张速度增快，整个舒张过程明显加强。

分析：心得安是B 1受体阻断剂，能够抑制肾上腺素与B 1受体结合，使E不能发挥作用，因此心率及心肌收缩力保持不变。

分析：乙酰胆碱与心肌细胞膜上的 M受体结合，心肌细胞膜K通道的通透性增强, 促进K+外流，动作电位期间Cf内流减少，心肌收缩力降低。同时乙酰胆碱可直接抑制CaT通道，导致Cf内流减少，心肌收缩力降低。

心率：34次/min 最

大收缩力：2.5g 最

小收缩力：l.lg