游离血红蛋白检测方法
血浆游离血红蛋白检测操作规程
血浆游离血红蛋白检测操作规程1. 目的确保血浆游离血红蛋白检测实验过程准确、规范。
2．适用范围适用于全血及红细胞类血液制品储存末期溶血率的抽样检测过程控制。
3．职责全血及成分血抽样检测岗负责血液制品血浆游离血红蛋白的抽样检测工作。
4. 原理检测原理详见《紫外可见分光光度计操作规程》 .5.设备、材料与试剂5.1 仪器：紫外可见分光光度计、微量移液器、 37℃恒温水浴箱、台式离心机。
5.2 材料: 洁净试管、试管架、一次性吸头、一次性手套。
5.3 试剂：血浆游离血红蛋白检测试剂盒（ R1、R2、R3、标准液）。
6．检测环境条件实验室温度 18 ～ 27℃、湿度 30 ～ 70%7．步骤与方法7.1 检测前准备７ . １ .1 仪器设备准备：执行《紫外可见分光光度计操作规程》 。
７ . １ .2 试剂准备：检查试剂盒内试剂瓶是否完好、有无渗漏，瓶内试剂有无浑 浊、沉淀、变色及异物，容量是否满足工作需要。
查看批号和有效期，确保在有准备紫外分光光度计预热 30分钟标本处理取不含红细胞血浆分析、报告加样加样完毕， 37℃孵育 20 分钟检测505nm 波长检测效期内使用。
７ . １ . ３其他物品准备：检查 EP 管、一次性吸管、硬塑试管无破损、变形及污染，整齐摆放于实验台上；用记号笔在 3 支硬塑试管壁上分别标识测“试管”和“标准管”、“空白管”。
7.2 标本处理打开离心机，将容量相近标本试管对称放入离心机转子内，3000r/min，离心5 分钟，吸取上层血浆，将获得的血浆再次离心，吸取不含红细胞的血浆待用。
7.3 检测7.3.1 加样7.3.1.1 用微量移液器按照表 21-1 所示步骤，将试剂和标本分别加入对应的硬塑试管内。
表21-1 血浆游离血红蛋白检测加样步骤测试管标准管空白管1．血浆（μl）2．Hb 标准液（μl）3．生理盐水（μl）4．R1（μl）5．R2（μl）6．R3（μl）100－－10001000100－100－10001000100－－100100010001007.3.1.2加样完毕，取三支试管帽，将3支试管盖上，手持试管两端，来回颠倒3～5 次，混匀，放于试管架上；打开37℃恒温水浴箱，将试管连同试管架一起放入水浴箱中，孵育 20 分钟。
基于分光光度法的游离血红蛋白便携检测装置的研制
基于分光光度法的游离血红蛋白便携检测装置的研制付志刚;刁春红;关洋;吴太虎;刘文萍;刘国巾【摘要】目的:研制一款基于分光光度法的便携式仪器,快速检测游离血红蛋白,为安全输血提供可靠的依据.方法:基于分光光度原理,通过光电转换电路测量联苯胺法反应物醌亚胺在505 nm波长处的显色深度,来测定血浆游离血红蛋白的含量.结果:使用该装置与721分光光度计相比,测量结果和标准值之间的相关系数r2=0.999 8,且体积小,便于携带,操作快捷,测量准确.结论:该装置可快速、准确地测量血浆中的游离血红蛋白含量,实现对血液制品贮存质量和输注效果的快速评估.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】3页(P35-37)【关键词】游离血红蛋白;红细胞;分光光度法;检测;便携【作者】付志刚;刁春红;关洋;吴太虎;刘文萍;刘国巾【作者单位】300142 天津,解放军254医院;300142 天津,解放军254医院;300142 天津,解放军254医院;300161 天津,军事医学科学院卫生装备研究所;300142 天津,解放军254医院;300142 天津,解放军254医院【正文语种】中文【中图分类】R318.6;TH776全血或血液制品在分离、制备、冷藏和贮运过程中，因人为操作或保存条件不当极易引起红细胞破裂，发生溶血[1]。
即使是严格按照操作规程制备的红细胞制品，在（4±2）℃条件下保存，仍然会发生溶血[2]。
溶血后血红蛋白被释放形成游离血红蛋白，后者将裂解成二聚体与结合珠蛋白结合，进而通过网状内皮系统清除，一旦超出结合珠蛋白的结合能力，患者输血后将会发生血红蛋白血症[3]。
通过对输注不同浓度游离血红蛋白血液的猪失血性休克损伤模型的研究，证实输注高浓度游离血红蛋白血液对心、肺、肝、肾等重要器官功能和组织结构产生严重影响，并能造成不可逆转的损伤[4-5]。
我国目前对于储存期的全血游离血红蛋白有统一标准，以最常使用的CPDA-1保养液为例，血浆内游离血红蛋白不超过0.72 g/L[6]。
离心参数对冰冻红细胞解冻时游离血红蛋白检测的影响
手段。游离血红蛋白（FHB）是冰冻解冻去甘油红细胞质 量评价的重要指标[1]，离心力对检测结果有较大的影响。
《全国临床检验操作规程》等相关检验资料中未明确血液 质量抽检标本的离心参数，为探讨不同离心参数对冰冻解 冻去甘油红细胞游离血红蛋白的影响，笔者对2015年1月以 来质量抽检的所有冰冻解冻去甘油红细胞分别用三种不同
临床输血与检验 2018年2月第20卷第1期
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离心参数对冰冻红细胞解冻时游离血红蛋白检测的影响
卢珍萍 吴宪彬
【关键词】 去甘油红细胞 游离血红蛋白 质量控制
【中图分类号】 R331.1+41 【文献标识码】 B 【文章编号】 1671-2587（2018）01-0095-02
随着医疗事业的发展，RH（D）阴性等稀有血型患
清液检测游离血红蛋白。 2.1 游离血红蛋白检测：操作过程严格按照试剂说明书和 本站《冰冻解冻去甘油红细胞质检操作规程》进行，使用 半自动生化仪进行测定。 2.2 相关质控项目检测：根据冰冻解冻去甘油红细胞的制
备过程和特征、GB18469-2012《全血及成分血质量要求》
和《血站技术操作规程（2015版）》，质量抽检除游离血 红蛋白含量外，同时检测血红蛋白含量、白细胞残留量、 甘油残留量及容量等四项质控项目[1，2]。35袋冰冻解冻去甘 油红细胞抽取血液标本检测相关质控项目，检测结果达标
6124半自动生化仪。 1.4 耗材：四川南格尔生物医学股份有限公司生产的配套 解冻耗材。 1.5 试剂：北京瑞尔达生物科技有限公司生产的血浆游离 血红蛋白测定试剂盒。 1.6 血液：2015年1月～2016年2月质量抽检的35袋冰冻解 冻去甘油红细胞。 2 方法 所有质量抽检的标本分别用3种离心参数离心10
溶血实验报告的结果(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过溶血实验，观察红细胞在不同条件下的溶血情况，探讨溶血的原因，为临床诊断和治疗提供参考。
二、实验材料1. 实验动物：小白鼠2只2. 生理盐水：500ml3. 10%葡萄糖溶液：500ml4. 0.9%氯化钠溶液：500ml5. 1%戊二醛溶液：100ml6. 2%醋酸溶液：100ml7. 0.5mol/L氢氧化钠溶液：100ml8. 0.5mol/L盐酸溶液：100ml9. 显微镜：1台10. 血细胞计数板：1块三、实验方法1. 实验动物处死，取血液5ml，用生理盐水洗涤红细胞，离心后弃去上清液，保留红细胞沉淀。
2. 将红细胞沉淀分为6组，每组1ml，分别加入以下溶液：A组：生理盐水B组：10%葡萄糖溶液C组：0.9%氯化钠溶液D组：1%戊二醛溶液E组：2%醋酸溶液F组：0.5mol/L氢氧化钠溶液3. 将各组溶液放入37℃水浴中，观察红细胞溶血情况。
4. 每隔10分钟观察一次，记录溶血现象，直至红细胞完全溶血。
四、实验结果1. A组（生理盐水组）：观察60分钟，红细胞无溶血现象。
2. B组（10%葡萄糖溶液组）：观察40分钟，红细胞开始溶血，60分钟时红细胞完全溶血。
3. C组（0.9%氯化钠溶液组）：观察60分钟，红细胞无溶血现象。
4. D组（1%戊二醛溶液组）：观察30分钟，红细胞开始溶血，60分钟时红细胞完全溶血。
5. E组（2%醋酸溶液组）：观察10分钟，红细胞开始溶血，60分钟时红细胞完全溶血。
6. F组（0.5mol/L氢氧化钠溶液组）：观察20分钟，红细胞开始溶血，60分钟时红细胞完全溶血。
五、结果分析1. 在本实验中，A组和C组红细胞未发生溶血，说明生理盐水和0.9%氯化钠溶液对红细胞无溶血作用。
2. B组红细胞在10%葡萄糖溶液中发生溶血，说明高浓度葡萄糖对红细胞有溶血作用。
3. D组、E组和F组红细胞在1%戊二醛溶液、2%醋酸溶液和0.5mol/L氢氧化钠溶液中均发生溶血，说明这些溶液对红细胞有溶血作用。
捐献单采血小板后献血者红细胞内肌酸、游离血红蛋白指标变化的探讨
捐献单采血小板后献血者红细胞内肌酸、游离血红蛋白指标变化的探讨目的：分析捐献单采血小板后献血者外周血红细胞内肌酸、游离血红蛋白指标的变化及其对机体红细胞的影响。
方法：选择生活工作环境相同，饮食种类和运动量基本一致的捐献单采血小板者56名：年龄18～30周岁；按血液采集标准约定在捐献前（0小时），捐献后1小时、7～10天、15～20天采集外周静脉血，分别测定其红细胞内肌酸、游离血红蛋白并进行比较。
结果：与捐献前比较，捐献后不同时间捐献者外周血中红细胞内肌酸、游离血红蛋白指标差异均无统计学意义（P>0.05）。
结论：捐献单采血小板能启动捐献者机体应激反应，并不会影响外周血中红细胞内肌酸、游离血红蛋白含量，科学合理，正常间隔时间捐献单采血小板对捐献者红细胞无影响。
标签：献血者；单采血小板；红细胞；红细胞内肌酸；游离血红蛋白自从1998年《中华人民共和国献血法》颁布以来，我国无偿献血事业取得显著成绩。
现实中全血捐献基本能满足临床用血需求，而单采血小板捐献量还不能满足临床用血需求，给采供血机构带来极大的压力。
造成这一情况的原因：一是血小板单采机器均来自国外，适用我国献血人群的参数还在不断地摸索调整中；二是捐献单采血小板是一个体外循环采集血小板的过程且捐献血小板时间长，捐献者更关注捐献后对自身健康状况有无不良影响。
红细胞内肌酸含量与红细胞总数的平均年龄有关，是判断红细胞寿命的灵敏指标。
游离血红蛋白是判断血管内溶血或红细胞机械损伤的辅助诊断指标之一。
因此，我们通过对单采血小板捐献者捐献前后的外周血中红细胞内肌酸及游离血红蛋白含量测定，并了解其变化规律对捐献者招募及捐献者自身红细胞的影响与否，均有重要意义。
现报道如下。
1 材料与方法1.1 标本来源2013年1月至2014年10月选取在市区内同一环境下生活，工作且饮食种类和运动量基本一致，曾有捐献过全血并愿意在约定时间采集血样的某部队官兵及某高校学生志愿献血者56人参加本组研究，年龄18～30周岁。
血浆游离血红蛋白检说明书
血浆游离血红蛋白测定试剂盒说明书(Trinder 法）【产品名称】血浆游离血红蛋白测定试剂盒 【包装规格】R1 100m l ×1 R2 100m l ×1 R3 10m l ×1 血红蛋白标准液 2.00ml ×1 【预期用途】本试剂用于体外在生化分析仪或分光光度计上测定血浆中游离血红蛋白。
【检测原理】血管内溶血时，血浆游离血红蛋白浓度增高。
血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化酶的作用，过氧化氢经过血红蛋白中亚铁血红素催化TBHBA 与4-氨基安替比林生成红色醌亚胺色素，吸收峰为505nm 。
根据显色深度，可测出血浆游离血红蛋白的含量。
【主要组成成份】 R1 TBHBA 稳定剂 R2 4-氨基安替比林 R3 过氧化氢血红蛋白标准液 100 mg/L 【储存条件及有效期】 1. 储存条件 试剂在2-8℃保存 2. 有效期 自生产日期起有效期6个月 【适用仪器】生化分析仪：F-6124；4040； 5010, 分光光度计 【样本要求】血浆 应注意采样及分离血浆过程不得发生溶血 【检验方法 (按表操作) 】 表 操作步骤测定管 标准管 空白管 血浆 (ml) 0.10 - - Hb 标准液 (ml) - 0.10 - 生理盐水 (ml) - - 0.10 R1 (ml) 1.00 1.00 1.00 R2 (ml) 1.00 1.00 1.00 R3 (ml)0.100.100.10混匀，37℃反应20分钟，于生化分析仪或分光光度计上测定，光径10mm ，波长505nm ，空白管调零比色。
计算：标准管吸光度测定管吸光度×100=血浆游离血红蛋白 ( mg/L)【参考值范围】 小于 40 mg/L 【检验结果的解释】血浆游离血红蛋白增加是血管内溶血白的指标，当血管溶血释放的血红蛋白量超过结合珠蛋白所能结合的量时，血浆中游离血红蛋白升高。
多见于较严重的血管内溶血，如阵发性睡眠性血红蛋白尿溶血性输血反应，阵发性寒冷性血红蛋白尿，行军性血红蛋白尿，运动性血红蛋白尿以及各种微血管病性溶血性贫血和一些机械损伤，如体外循环血管内溶血时血浆游离血红蛋白的浓度可达60mg/L ，阵发睡眠性血红蛋白尿可达200-2500mg/L ，血型不合输血可达150-5000mg/L 。
血浆游离血红蛋白测定
血浆游离血红蛋白测定[原理]血红蛋白中亚铁血红素具有类似过氧化物酶的作用，使联苯胺(或邻甲苯胺)氧化，在醋酸溶液中变成绿色、黄色，紫红色。
当血管内溶血时，血浆游离血红蛋白可明显增高。
[试剂](1)联苯胺(或邻甲苯胺)0．1g，加冰醋酸2ml，加蒸馏水3ml，溶解后加95％乙醇至10ml置于4℃冰箱内保存可用1-2周。
(2)取30％H2O2 0．5ml，加蒸馏水14．5ml(新鲜配制)。
(3)10％(v／v)醋酸溶液。
(4)Hb标准液，即用HiCN法精确测得Hb含量，然后配成100mg/L的Hb水溶液.[操作]取大试管(容量为30—50m1)3、支，依次加入下列各液见表(1—3—5)。
表1-3-5 血浆游离血红蛋白测定用波长515nm比色，以空白调零，读取各管吸光度。
[计算]游离血红蛋白(mg／L)＝测定管吸光度／标准管吸光度×100。
[参考值]正常人血浆游离血红蛋白＜100mg/L(10mg／dl)。
换算系数：mg／L=mg／d1×10编写：孙利制定日期：2011.12.1[临床意义]血管内溶血性贫血、PNH及输不合型的血液后均明显增高，尤其后者可高达5000mg／L以上。
[附注](1)本法系测定细胞溶解，抽血后分离过程应特别注意红细胞破坏而导致结果升高。
(2)显色受温度干扰，要严格遵守测定条件，注意标准管与测定管的比色时间。
(3)由于灵敏度较高，当肉眼见到溶血现象时，标本就应稀释，必要时同时应作1管稀释5倍标本。
(4)因联苯胺具有毒性；测定时可用邻甲苯胶或四甲基联苯胺替代。
(5)纯品联苯胺为无色结晶，纯度不好但可提纯。
联苯胺10g溶于 lmol儿HCl 200ml中，加活性炭1—2g，用力振摇(可稍加热)后过滤，滤液一般无色，否则继续再振摇1—2分钟后，向滤液中加入浓HCl 30ml，混匀置于冰箱过夜即可见大量白色结晶析出，用滤纸过滤后，再用乙醇—乙醚等量混合液洗涤结晶数次，最后用乙醚洗2次即可。
人游离血红蛋白(F-Hb)说明书
人游离血红蛋白(F-Hb)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人全血样本中游离血红蛋白(F-Hb)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人游离血红蛋白(F-Hb)水平。
用纯化的人游离血红蛋白(F-Hb)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入游离血红蛋白(F-Hb)，再与HRP标记的游离血红蛋白(F-Hb)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的游离血红蛋白(F-Hb)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人游离血红蛋白(F-Hb)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：540μg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
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游离血红蛋白检测方法
游离血红蛋白（free hemoglobin）指的是血浆中存在的不与红细胞
结合的血红蛋白。
正常情况下，游离血红蛋白的浓度很低，但在一些疾病
状态下，如贫血、溶血等，会导致血浆中游离血红蛋白的浓度增加。
因此，对游离血红蛋白进行检测对于评估一些疾病的严重程度和治疗方案的制定
具有重要意义。
以下是一些常用的游离血红蛋白检测方法：
1.光学法检测：光学法是一种简单但有效的游离血红蛋白检测方法。
该方法根据游离血红蛋白具有的特殊吸收光谱特性来测定其浓度。
通过测
量在550至600纳米范围内的吸光度，可以推断游离血红蛋白的浓度。
2.分光光度法：分光光度法是一种利用分光光度计来测量游离血红蛋
白浓度的方法。
它利用游离血红蛋白在450至700纳米波长范围内的吸收
特性，通过测量吸光度来确定其浓度。
3.糖基化血红蛋白方法：糖基化血红蛋白是由于高血糖状态导致血红
蛋白分子上发生糖化反应而形成的一种血红蛋白变异物。
检测糖基化血红
蛋白可以间接评估血浆中游离血红蛋白的浓度。
目前，一些商业化的糖基
化血红蛋白检测试剂盒已经上市，可以通过测量糖基化血红蛋白的浓度来
推测游离血红蛋白的水平。
4.凝胶电泳法：凝胶电泳法可以通过将血浆样品电泳分离来检测游离
血红蛋白。
在凝胶电泳过程中，血浆样品中的游离血红蛋白会沿电泳槽向
阳极迁移，然后通过染色剂染色后可观察到游离血红蛋白的带状图案。
5.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种高灵敏度的游离血红蛋白
检测方法。
该方法利用高效液相色谱仪的柱分离功能，根据游离血红蛋白
与固定相之间的亲和作用，将游离血红蛋白从血浆样品中分离出来，并通
过检测峰面积或峰高来测定其浓度。
除了上述方法，还有一些新兴的游离血红蛋白检测技术正在研究中。
例如，传感器技术结合了生物传感器和游离血红蛋白的特异性反应，可用
于快速和准确地检测游离血红蛋白。
此外，质谱分析技术也被用于游离血
红蛋白的检测，通过比较样品与标准的质谱图谱来确定游离血红蛋白的浓度。
总的来说，游离血红蛋白的检测对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
随着科学技术的发展，越来越多的游离血红蛋白检测方法被引入临床实践中，为医生提供更准确和高效的判断依据。