结核病实验室诊断
痰标本采集 (五)
注意:由于当患 者咳嗽、咳痰时,易 产生含有结核菌的气 溶胶,感染周边人群 的机率较高,故采集 痰标本时应在远离人 群的开放空间进行, 或在通风良好的室内 进行。
痰标本性状 (一)
1、干酪痰:标本外观以黄色 ( 或奶酪色 ) 、脓样、团块状的 肺部分泌物为主,粘度较粘液 痰低,制片时较易涂抹;涂片 染色后镜检,可发现大量脓性 炎症细胞、肺上皮脱落细胞。 由于此类标本是由肺部深处咳 出,对肺结核的诊断最有价值, 故AFB的检出率较高。
非结核分枝杆菌 III 群 鸟-胞内、蟾
快速生长 非结核分枝杆菌 IV 群 偶发、龟
结核分枝杆菌结构
结核分枝杆菌组成:
细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质
细胞壁
厚度为10~35nm,较一般细菌的细胞壁厚。 含有大量脂类,具有坚韧性和疏水性。 功能:
• •
保护细菌的固有形态 抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和 杀伤
概 述
分枝杆菌呈分支状生长,
营养要求比
普通细菌高,是一种生长缓慢的革兰氏
阳性杆菌。
经石炭酸复红染液着色后,不被盐酸酒
精脱色,故称此类细菌为抗酸菌。
分枝杆菌分类
类别 缓 慢 生 长 Rubyun 分群 结核分枝杆菌复合群 非结核分枝杆菌 I 群 非结核分枝杆菌 II 群 对人致病的分枝杆菌 人型、牛型、非洲型 堪萨斯、海、猿 瘰疬
盐 类
• 钙、钾、镁、铁、磷等,约占菌体成 分的 6%。
营养与发育
• 结核菌是需氧菌,但在含有比较低氧的环 境下也能生存,比如骨结核,淋巴结核。
• 在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。
• 结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C
• 结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、 氢、磷、钾、镁等。
结核分枝杆菌形态
我国结核病现状
—我国历次流调疫情
肺结核 病人数 涂(+) 病人数 1 800 000 1 620 000 1 510 000 1 500 000
时间 1979
肺结核 患病率
涂(+) 患病率
717/10 万 187/10 万 6 900 000
1984/85 550/10 万 156/10 万 5 700 000 1990 2000 523/10 万 134/10 万 5 930 000 367/10 万 122/10 万 5 000 000
多 糖
• 由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、 甘露聚糖和葡聚糖等组成。 • 多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式 存在。 • 是免疫反应的重要抗原物质。
蛋白质
• Mtb含多种蛋白质组分,由不同菌体蛋白及 活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋 白组成。 • 结核菌的主要抗原性物质。
• 结核菌素、PPD为多种蛋白的复合抗原, 可刺激机体免疫应答。
如果细胞壁有缺陷,细菌只能在高渗环境下
生存,则称此类细菌为L型细菌。
细 胞 膜
细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的
半透膜。 主要成分是脂类(磷脂)和蛋白质。 功能:
– 细菌与外界环境进行物质交换 – 在细胞内一系列代谢活动中起重要作用
菌 体 成 分
• • • • • 脂类 多糖 蛋白质 核酸 盐类
如何正确留痰
查痰对于结核病的诊断是非常重要的,通过痰检可以知道您是否痰中带菌。如 果痰中带有结核菌说明您患有肺结核,具有传染性,应该及时遵医嘱治疗。 送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下列要求和方 法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取1~2口痰,请不要将1口痰分开放到2 或3个痰盒中。 正确的咳痰方法: 1、咳嗽前应缓慢地深吸气,吸气后稍屏气片刻。 2、躯干略向前倾,两侧手臂屈曲,平放在两侧胸壁下部,内收并稍加力。 3、咳嗽时腹肌用力快速收缩,使腹壁内陷。一次深吸气,可连续咳嗽三声。 4、停止咳嗽后,收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。 5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻,准备再次咳嗽的动作。 * 注意:部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽,您可以尝试缓慢或分几次吸气, 争取肺泡内充分充气,以增加咳嗽的效率。在这一过程中,要注意动作的连贯性, 一气呵成。同时,也可以叩击前胸,或由家属协助叩击后背胸壁。这样震动支气 管内的分泌物,能够增加咳嗽排痰的力度。
试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭,
主要方法
1、痰涂片抗酸染色、镜检技术 2、分枝杆菌分离培养技术 3、分枝杆菌快速培养技术 4、药物敏感性实验技术 5、分枝杆菌菌种鉴定技术
痰标本采集 (一)
容器:采用 WHO 推荐的国际通用 螺旋盖痰瓶,或可密封塑料盒、 蜡纸盒收集痰标本(参考规格: 直径4 cm,高度2 cm)。容器上 应清晰标注患者姓名、病例号、 检查项目。
痰标本性状 (三)
3、粘液痰:标本外观以白色、粘稠度 较高的肺部和支气管分泌物为主,制片时需 仔细涂抹;涂片染色后镜检时,镜下可见支 气管内膜纤毛柱状上皮细胞 ( 细胞较长且形 态不规则、细胞核和细胞质着色均较深,细 胞一端可见着色较浅的纤毛 ) ,伴有少量肺 上皮脱落细胞 ( 多数形态不规则、细胞核较 小且着色较细胞质深,核质比大于 1:3) 、 脓性炎症细胞 ( 卵圆形、细胞核占细胞比例 较大且着色较深,核质比低于 1:1) 、口腔 脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本的 AFB 检 出率较唾液高。
基层镜实验室布局范例
可以开关的窗户
染色池 采 光 用 窗 户 (固定)
收集标本 用的桌子
显微镜
记录用 的桌子
工作台
试 剂 柜
实验室门
废弃标本和污染物的处理
废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢
弃或清洗;
如需焚烧处理,须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底
或暴露焚烧是危险的; 专业化处理 再用紫外线灭菌灯照射2小时
结核病实验室涂片镜检技术
王 甦 民 北京结核病控制研究所 2010年12月
结核病基本情况:
(1)
结核病是一个古老的疾病,至今仍然严重 威胁着人类健康。
近十几年来,由于结核菌的耐药性、
HIV/TB双重感染
移民(流动人口)问
题 使全球结核病控制工作面临严重挑战。
全球结核病告急
据世界卫生组织估计目前全球约有:
结核病细菌学检查的重要作用
是结核病临床诊断和治疗的重要依据 是直接发现病原菌的诊断方法,比影象学、免疫 学等检查具有更高的特异性 是确定、调整化疗方案的重要依据 是国家结核病控制规划(NTP)的重要组成部分
是发现传染源的最主要途径和手段
是考核疗效、评价防治效果的可靠指标
分 枝 杆 菌 生 物 学 基 础
痰标本采集 (二)
合格的痰标本:应是患者深呼吸后,由肺部深 处咳出的分泌物。包括干酪痰、粘液痰和血痰。 按采集的时间,可将标本分为三类 即时痰:就诊时深呼吸后咳出的痰液; 晨痰:患者晨起立即用清水漱口后,咳出的第 2口、第3口痰液; 夜间痰:送痰前一日,患者晚间咳出的痰液;
痰标本采集 (三)
对疑似肺结核病者,临床医护人员 应通过解释,使其充分了解标本性状、 质量对相应检查项目的重要性,示范并 指导其掌握从肺部深处咳痰的方法;如 患者识字,可提供宣教材料。
抗 酸 性
抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学 基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高, 并含有大量分枝菌酸。
抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切, 若菌体自溶(如标本保存时间过长、温度 过高)、结核菌的异型相(如:L-型菌、 干酪或脓液中的结核菌)可能失去抗酸性。
生 长 特 性
生长适宜温度37C,PH6.8-7.2。营养要求较高。 在常用的罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基上 生长的菌落粗糙、凸起、致密,有表面皱折, 呈颗粒、结节或菜花样,乳白色或米色,不透 明。 结核菌生长缓慢,在一般培养基上分裂一代需 要10多小时,根据接种菌量的多少,一般10-30 天肉眼可见菌落生长。
痰标本性状 (二)
2 、血痰:此类标本是因粘液痰 或干酪痰标本中混有血液而形 成,颜色为褐色或深褐色、鲜 红色或伴有血丝;涂片染色后 镜检除能够观察到粘液痰或干 酪痰的细胞特征外,含新鲜血 液的标本中可见到被染色的血 细胞。由于含血标本易干扰 AFB 镜检的结果 ,故在制片时 应尽量避免挑取含血标本。
概 述
结核分枝杆菌是1882年郭霍(Robert Koch) 从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核 病的主要病原菌。
分类
• 结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌 门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌 科的分枝杆菌属,分枝杆菌属种类甚 多,目前已命名的有200多种,一般可 分为缓慢生长和快速生长两大类。
•
•
痰标本采集 (四)
患者留取的痰标本,应由检验人员或经过培 训的专人目视检查标本性状质量 ( 特别是用于初 次诊断的痰标本):标本量一般在3~5 ml,标本 性状属于干酪痰、褐色血痰或含少量新鲜血液的 血痰、粘液痰者为合格的标本;唾液为不合格标 本。 确定诊断检查时痰标本不合格者,医务 人员应予以进一步指导并要求其重新送检。 进行AFB 涂片检查时应在登记本和检验报 告单上注明标本性状,以供分析结果时参考。
2000年全国结核病流行病学抽样调 查初步结果显示:
– 全国受结核菌感染人口超过5.6亿; – 全国现有传染性肺结核病人200万,传染性肺结核患病率为 157.8/10万。 – 结核病死亡率为9.8/10万,在各种死亡原因中占第11位。 – 结核菌耐药率:27.8%,初始耐药率18.6%,获得性耐药率: 46.5%。INH:17.6%,SM:17.3%,RFP:16.6%,EMB:1.5%, MDR:10.7%。 – 非结核分枝杆菌感染:11%
核
酸
• RNA含量比DNA高4-5倍。 • RNA分布于细胞质内,DNA存在于细胞核 物质中。 • DNA是遗传物质,将遗传信息传给子代, 并指导RNA的合成。 • RNA是蛋白质和其他细胞成分合成必须的 物质。
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤:
1.痰液样本收集:患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本,
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理:痰液样本经过预处理,包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养:将预处理后的痰液接种到培养基上,通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定:通过常规培养、染色和生化试验等方法,鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验:对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验,以确定
哪些药物对其具有抗菌作用,从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准,因为它能够准确检测到结核分枝杆菌,并且可以确定其对药物的敏感性,为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是,该方法需要相对较长的时间(通常需要几周)来进行培养和鉴定,因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
结核实验室检查项目
结核实验室检查项目包括痰涂片、痰培养、结核菌素试验和胸部X线检查等。
1. 痰涂片:通过显微镜观察痰液中的结核杆菌是否存在,是诊断结核病的常用方法之一。
2. 痰培养:将痰液置于培养基上进行培养,检测结核杆菌的生长情况,可以确定病原体的种类和药物敏感性。
3. 结核菌素试验:注射结核菌素后观察皮肤反应,判断是否感染了结核杆菌。
阳性结果需要进一步确认是否为活动性结核病。
4. 胸部X线检查:通过X光照射胸部,观察肺部是否有结核病变,如结节、空洞等。
对于早期病变或隐匿性病变的发现具有重要意义。
这些检查项目可以帮助医生确定患者是否患有结核病,并指导治疗方案的选择和调整。
同时,这些检查也有助于监测治疗效果和预防结核病的传播。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病,通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核,而也可以通过血液传播到其他部位,如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方,特别是在发展中国家,结核病仍然是一种普遍的疾病,因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测,例如:1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌,因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织,也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性,则可以确诊结核病。
但是,该方法也存在一些局限性,例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌,如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA(酶联免疫吸附试验)或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体,如果测试结果呈阳性,则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是,结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况,这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA,并且非常特异和灵敏,因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中,PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA,以确认病原体的存在。
但是,该方法对样本中的DNA污染非常敏感,因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之,结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点,并且结果可能受到许多因素的影响。
因此,必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现,以取得最佳的诊断结果。
同时,实验室技术人员必须受过专业培训,严格遵守操作规程,以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病实验室诊断技术介绍
1.结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法,其操作简单快捷,特异性高,设备要求低,但是灵敏度较低,不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜(LED荧光显微镜)发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源,延长了显微镜使用寿命,不需要暗室,且价格低廉,可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高,已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下,特殊的引物和特异性探针在酶的作用下,反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时,最短半小时。
目前应用玻璃化试剂,稳定性好,便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本(或其它标本)用专用消化灭活液充分消化,完全暴露并保留抗酸杆菌,通过自动离心涂片机(或半自动制片染色机)对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色,取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷,便于标准化操作,通过消化灭活,安全性改善,阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式,适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增,扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定,诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染,整个反应过程只需一个小时即可完成,通过肉眼观察荧光判读结果。
2.结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准,也是获得分离菌株开展耐药检测的前提,我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法,包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准,但是花费时间长,需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂,改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室诊断技术
GenoType MTBDR and 诊断结核感染及对利福 MTBDRplus;INNO- 平和异烟肼药物敏感性 LiPA Rif.TB
Frane; LW Scientific; Zeiss
诊断结核患者
Cepheid GeneXpert
诊断结核感染及对利福 平的耐药性
WHO推荐的结核新诊断技术
方法 DNA微阵列芯片法
有前景的几种新技术
❖ 分子诊断技术:GeneXpert(Cepheid公司) ❖ 分子线性探针技术:INNO-LIPA(Innogenetics公司) ❖ 反向点杂交技术:GenoType MTBDR (Hain Lifescience)
分枝杆菌菌种鉴定试剂盒(亚能生物) ❖ 基因芯片技术:微阵列芯片法(博奥生物) ❖ 细胞免疫学技术:T-SPOT.TB(Oxford Immunotec公司)
目前诊断方法回顾
细菌学检测方法 : 涂片、常规培养、快培 其他辅助检查方法:皮试、结核抗体
目前诊断方法的局限性
涂片的缺点: 敏感性低; 特异性差; 无法区别死菌与活菌
培养的缺点: 耗时久,一般需4~8周; 阳性率低,约30%~50%;特异性差, 无法区别MTB与NTM
皮试的缺点: 敏感性低特异性差 抗体检测缺点:敏感性低特异性差
新型诊断技术产品比较
企业 美国 Cepheid
比利时 Innogenetics 德国 Hain Lifescience 中国 亚能生物
中国 博奥生物
英国 Oxford Immunotec
方法
产品特点
GeneXpert
同时检测MTBC和判断利福平耐药; 快速;简便;安全
线性探针杂交法 (INNO-LIPA)
➢ 新的实验诊断技术可弥补传统方法的不足,提高诊 断的灵敏度和特异性,但各有缺点或不足,难以完 全满足临床检测需求,因此,新型结核杆菌诊断技 术及产品的研发势在必行。
结核病实验室诊断技术2017.10.13
• 绝对浓度法 • 比例法
• 液体培养法
基于固体培养基;时间:4周 多种药物
基于液体培养基,时间:4-12天 INH/RFP/SM/EMB/PZA
结核分枝杆菌药物敏感试验
不同药敏方法的差异
三者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差 别,导致结果有很少一部分不相符
比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以上,对于 结核分支杆菌,二种方法测试 SM INH RFP EMB的耐药率均无显著 性差异
涂片显微镜检查的敏感性
观察到的AFB
AFB估计数量 涂片阳性的可能性(%)
数量
( /ml)
• 0 in ≥100 fields
< 1,000
<10
• 1-2 in 300 fields 5,000 – 10,000
50
• 1-9 in 100 fields about 30,000
80
• 1-9 in 10 fields
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别:
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理:硝基苯甲酸还原酶机制
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸(PNB )还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸(PABA),而 绝大部分(98%以上)MTBC缺乏对硝基-苯甲酸(PNB )还原酶活性,为对氨基-苯甲酸(PABA)将对硝基苯甲酸(PNB)还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 (PABA) • 局限:鉴定周期长15天-30天,特异性不高
诊断结核的三个标准
诊断结核的三个标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,其传播途径主要为空气传播。
诊断结核病需要依据一定的标准,而且需要综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面的信息。
在临床实践中,医生们通常会根据以下三个标准来诊断结核病。
首先,临床症状是诊断结核病的重要依据之一。
结核病的临床表现多样,常见的症状包括慢性咳嗽、咳痰、低热、盗汗、消瘦等。
特别是慢性咳嗽伴有咳痰,尤其是带血丝的痰,是结核病的典型症状。
此外,结核病还可引起胸痛、呼吸困难、乏力等症状。
因此,对于有这些症状的患者,医生应高度怀疑结核病的可能性。
其次,实验室检查也是诊断结核病的重要手段之一。
结核分枝杆菌的培养和鉴定是确诊结核病的金标准。
此外,结核分枝杆菌的抗酸染色检查和基因扩增技术(PCR)检测也是常用的实验室检查手段。
这些检查可以直接检测结核分枝杆菌的存在,对于临床疑似结核病的患者具有重要的诊断意义。
最后,影像学检查对于诊断结核病也是至关重要的。
胸部X线检查是最常用的影像学检查手段,可以发现肺部结核病的病变。
而对于肺外结核病,如骨关节结核、淋巴结结核等,CT、MRI等影像学检查则具有更高的诊断敏感性和特异性。
因此,在诊断结核病时,医生们需要充分重视影像学检查的结果。
综上所述,诊断结核病需要综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面的信息。
只有综合运用这三个标准,才能更准确地诊断结核病,为患者提供及时有效的治疗。
因此,医生们在临床实践中应当重视这三个诊断标准,提高对结核病的诊断水平,为控制结核病的传播做出积极的贡献。
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,其传染性强,严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病,实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面,介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步,其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行,采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时,应让患者深呼吸数次,然后咳出痰液,避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时,应在穿刺前进行消毒,并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时,应让患者在清晨第一次排尿时采集,避免尿液的稀释。
采集脑脊液时,应在穿刺前进行消毒,并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法,其操作简单、快速,但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”,其灵敏度高,但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法,其灵敏度高、特异性强,但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行,避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告,确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病,但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病,但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生,以便制定合理的治疗方案。
综上所述,结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行,实验室检测应遵循相应的操作规范,结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作,才能确保结核病的及时发现和诊断,保障人民群众的健康。
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求结核病诊断实验室是用于结核病痰涂检测和结核杆菌培养、药敏试验等实验诊断的专用场所。
因结核杆菌主要通过呼吸道传播感染,所以,规范结核病诊断实验室建设和实行严格的个人防护及推行科学的实验室规范化管理显得十分重要。
结核病诊断实验室的建设应根据不同的实验内容和实验性质来考虑。
在实验室建设、设备配置和个人安全防护方面遵循相关的管理规定,确保实验人员和实验环境的安全。
从生物安全防护基本要求考虑,结核病诊断实验室应尽量和其他区域分开,宜形成一个相对独立的实验区域。
结核病诊断实验室主要分为涂片实验室和培养与药敏实验室。
其实验室建设的基本要求分述如下:结核病诊断实验室中的涂片实验室应符合BSL-2实验室要求,但开展结核菌培养与药敏实验时实验室应符合BSL-3实验室的基本要求。
(一)涂片实验室基本要求1.涂片实验室应进行合理分区布局,并应在实验室出口处设专用洗手池。
2.实验室的墙面、地板和天花板应平整、防滑,便于清洁,不渗水,并耐化学品和消毒剂的腐蚀。
3.实验台面应耐高温、耐酸碱、防水。
4.实验台柜应牢固、平稳,台柜间应留有一定距离,便于清洁。
5.实验室如采用开窗自然通风时,应设置防蚊虫纱窗。
6.实验室应有符合要求的照明,但要防止强光和避免反光。
7.实验室应配备必要消毒设备,如高压灭菌器和消毒喷雾装置。
8.实验室人口处宜设置更衣处。
(二)培养与药敏实验室基本要求本实验室除满足涂片实验室的要求外,还应达到以下要求:1.实验室应设带锁并能自动关闭装置及可视窗。
2.实验室应设实验操作区和准备区,应具有足够的空间用于实验操作和实验用品的放置。
3.实验区域内应配备高压灭菌器及其他消毒装置。
4.实验操作区应配置Ⅱ级生物安全柜。
5.实验室宜设应急洗眼和喷淋冲洗装置。
6.实验室应有可靠的电力供应保障和应急照明系统。
重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等应有备用电源或UPS等辅助电源。
7.实验室入口处应有明显的生物危害标识,实验室内应设有在黑暗中能辨别方向的标识。
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件:因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性,1)需P2及以上实验室,目前我院实验室条件基本具备即将投入运行,2)日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限,工作人员生物安全得不到保障,应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养,只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准,是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准,是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化,其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多,抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变,作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括:主要是DNA序列分析法,聚合链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明,检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变,但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷,检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
