厌氧菌

厌氧菌鉴定试验 介绍Finegold的二级鉴定方法


一级鉴定 抗生素纸片鉴定：常用有六种，包括红霉素(60µg/ml)、青霉素 (2u/ml) 、 (5µg/ml) 、 多 粘 菌 素 (10µg/ml) 、 卡 那 霉 素 (1000µg/ml) 、利福平 (15µg/ml) 。其中多粘菌素、卡那霉素和 万古霉素最常用。一般情况下，革兰阳性菌对万古霉素是敏感 的，阴性菌则耐药；类杆菌大部分对卡那霉素耐药，梭杆菌和 厌氧球菌则敏感；多粘菌素除脆弱类杆菌和阳性球菌耐药外， 其它无芽胞厌氧菌均敏感；青霉素除脆弱类杆菌组外，其它均 敏感；红霉素和利福平相似，即梭杆菌对其均耐药，其它细菌 均敏感。 部分生化反应项目：如触酶、吲哚、尿素酶、硝酸盐还原、 20%胆汁、 SPS( 聚茴香脑磺酸钠 ) 纸片、卵黄琼脂、乙醇芽胞 等试验。
标本的采集方法

不同部位标本的采集法
标本来源 封闭性脓肿 收集方法 针管抽取
(破溃的脓肿，用无菌棉拭子擦去表面脓液后取深部分泌物) 妇女生殖道 后穹隆穿刺抽取 下呼吸道分泌物 肺穿刺术(目前多通过纤维支气管镜采标) 胸 腔 胸腔穿刺术 窦道、子宫腔、深部创伤 用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽取 组 织 无菌外科切开 泌尿道 膀胱穿刺术(目前仍用清洁的中段尿培养为主)
临 床意义

正常情况下，人体内的正常菌群对人无害。 只有在机体防御功能减弱时； 或由于寄居部位的改变；
或由于某种原因破坏了正常菌群内各种微生物种之间相
互制约的关系，如长期使用广谱抗生素等，导致体内正 常菌群失调，可引起内源性感染。

厌氧菌感染绝大多数是内源性感染，外源感染较少，如
破伤风、肉毒梭菌引起的食物中毒、气性坏疽等。

并在室温中放半小时，菌落变绿色或褐色。卵黄平板
可用于卵磷脂酶聂格尔(Nagler)试验。
标本的接种


要求培养基新鲜，培养基限定 1-2 天用完，接 种前培养基要预还原 24 小时 ( 至少 4 小时 ) ，液 体培养基用前要煮沸10分钟。 根据直接涂片选择数种选择培养基和一块基础 培养基与接种量，分区划线，并在第一、二区 交界处贴一片 5µg / 片灭滴灵纸片，进行分离 培养。
种内窥镜检查。
第二节 厌氧性细菌的检验
采标原则：

标本绝对不能被正常菌群污染； 应尽量避免接触空气。
标本的采集方法
标本采集： 应从无正常菌群寄生的部位，并通过无菌技术采 取标本。 皮肤表面用2%碘酒消毒10min后，无菌操作采集 标本，液体标本可用无菌针筒抽取（标本量少时， 可先用针筒吸取1 ml左右无菌生理盐水或还原溶 液，注入病变部位再回抽标本）；
厌氧菌感染条件

长期使用广谱抗菌素：氨基糖苷类抗生素、头孢菌素等。
这两类抗生素对厌氧菌无效，同时破坏了正常菌群内各种
微生物种之间相互制约的关系。

手术、穿刺术、各种内窥镜检查及侵入性外科技术的发展
均可导致细菌寄居部位的改变。

细菌间的协同作用：厌氧菌多数情况是与需氧菌、兼性厌 氧菌混合感染，表现为一种细菌为另一细菌提供生长发育 条件，提供生长因子或养料等。
厌氧菌感染的临床及细菌学指征

感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下
有捻发音—气性坏疽梭菌群引起的感染。 发生在粘膜附近的感染---体内厌氧菌多数是寄生在有腔脏

器内。

深部外伤、人和动物咬伤后继发感染。--可造成组织氧张 力或Eh降低。 分泌物有恶臭，或为暗红色，并在紫外光下发出红色荧光 （产黑色素普雷沃菌和不解糖紫单胞菌）；分泌物或脓液
厌氧细菌学总论
第一节 概 述
厌氧菌的概念 厌氧菌的种类(分类) 厌氧菌的分布 临床意义 厌氧菌感染的临床及细菌学指征



厌氧菌概念: 是一群在有氧条件下不能生长，必须在无氧 环境条件下才能生长繁殖的细菌。

特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位
厌氧菌分类
特点 种类 分布 芽胞厌氧菌 1个菌属 自然界 无芽孢厌氧菌 40多属 人和动物体内
厌氧菌鉴定试验 介绍Finegold的一级鉴定方法



从标本来源估计厌氧菌种类(即根据厌氧菌在人体 中分布情况来估计) 标本性状估计厌氧菌种类: 如脓汁标本恶臭、带气 泡者厌氧菌感染可能性极大。血性标本，发黑， 紫外灯下见粉红色荧光 --- 产黑色素普雷沃菌感染； 标本见硫磺颗粒---放线菌感染。 标本直接涂片、染色、镜检结果。 初代培养菌落特性、细菌形态(注：在细菌革兰染 色阴、阳判断有疑问时，可借助于3%KOH拉丝试 验。拉丝者为阴性细菌)、荚膜、芽胞(包括芽胞形 态和位置)、耐氧试验。
厌氧菌鉴定试验 介绍Finegold的三级鉴定方法

在一、二级鉴定基础上，进一步检查生化性状，使用气液 相色谱分析其代谢产物，然后参照《Bergey 氏系统细菌 学手册》鉴定。 根据API-20A等进行编码鉴定，可在较短时间内(约4小时) 得出结果，且无需厌氧培养。
厌氧菌的确定


一般初代培养48~72h作第一次分纯；若疑放线菌 感染，应培养一周才分纯；连续培养三周，无生 长者方可报告厌氧培养阴性。 厌氧菌的确定---耐氧试验：每块平板至少挑选5个 以上性状不同的菌落，每个菌落同时接种于 2~3 块血平板，分别置厌氧、需氧、微需氧环境培养； 在这同时还应进行涂片染色镜检。然后比较在不 同生长环境下，细菌生长情况，以此判定厌氧菌、 兼性厌氧菌、需氧菌和微需氧菌。进一步作生化 和/或气液相色谱分析。
选择性培养基： 卡那-万古霉素冻溶血琼脂(KVLB)：卡那为75-100µg/ml, 抑制大多数革兰阴性肠道杆菌;万古75µgml可抑制大多数 革兰阳性菌;及梭杆菌和厌氧球菌,而大多数类杆菌生长 良好,并使产黑色素普雷沃菌早期形成黑色素（一般2-3 天就能形成典型黑色素菌落,普通血平板4-5天才出现黑 色菌落）。


对败血症病人，采血时机最好在病人畏冷或发热 时；对正在使用抗生素的病人，应在停用抗生素 至少24 h后采血为宜，采血量一般为5-10ml(抗凝 剂最好用多聚茴香磺酸钠)。 厌氧菌培养最理想的是能取得组织标本，因厌氧 菌在组织较渗出物更易生长，且组织标本能真实 反映传染过程的细菌变化。
标本的采集方法

培养基的种类

七叶苷胆汁平板(BBF)：含20%胆汁，1g/L七叶苷和 100µg/ml庆大霉素。只有耐受胆汁的脆弱类杆菌组的 细菌与多变梭杆菌和死亡梭杆菌能生长，并且因水解 七叶苷,在菌落周围形成棕黑色的晕。 卵黄平板(EYA)和兔血平板：主要用于选择产气荚膜梭 菌。产气荚膜梭菌在兔血平板可呈现典型的双溶血圈，
厌氧菌分布
主要厌氧菌的种类在正常人体中的分布情况 部 位 主 要 菌 种 皮 肤 痤疮丙酸杆菌 口 腔 类杆菌属、普雷沃菌属、紫单胞菌属、 梭杆菌属、
韦荣球菌、放线菌等。
呼吸道 肠 道
专性厌氧菌较少
脆弱类杆菌、消化球菌属、消化链球菌属、梭菌 属及革兰氏阳性无芽胞杆菌 。
泌尿生殖道乳杆菌、类杆菌属、消化球菌属和消化链球菌属。
塞，并用铝盖密封。用小针头抽去瓶中的空气充以N2，连续充抽 3 次，最后充以 CO2。用蜡封住小针孔，高压灭菌后置冰箱备用。
使用前要检查，若瓶内培养基变粉红应弃去不用。

血液输送瓶制作与之相类似。血液和培养基比为1：10，一般抽 血5-10ml。
厌氧袋（厌氧罐）运送法

可用于床边接种、组织块运送或长途运送。即将床边 接种的血平板或无菌采集的组织块，置于无氧状态密 封的厌氧袋（厌氧罐）携回实验室。 短途运送组织块标本也可用灌满 CO2 的无菌输送瓶运 送。

不宜做厌氧菌培养的标本:
鼻咽拭子；牙龈拭子；痰和气管抽取物；胃和肠道内容物、肛拭； 接近皮肤和粘膜的分泌物；褥疮溃疡及粘膜层表面；尿（导尿）； 阴道或子宫拭子；前列腺分泌物等。（若需要培养时，应做定性、 定量分析方有参考价值。）此外，紧急情况下，可用棉拭子取材。 如临床上疑为伪膜性结肠炎时，可用棉拭子从肛门取材，并用合 适的培养基传送。
临 床意义

鉴于厌氧菌分布之广，种类和数量之多，因此造成厌氧菌
感染在所有感染性疾病中占有相当大的比重，涉及临床各
个学科 (在肺脓疡、牙周脓肿、盆腔脓肿厌氧菌感染发生 率可达80%)。大多数厌氧菌感染是与需氧菌混合感染。

检出最多菌种是脆弱类杆菌,厌氧消化链球菌等。
厌氧菌感染条件

组织缺氧或氧化还原电势降低是造成厌氧菌生长繁殖的

半定量。可初步进行菌群分析，并指导接种量。

标本的质量控制。通过直接镜检与培养结果作比较为
实验室衡量工作质量提供依据。
培养基的种类

非选择性培养基—强化血琼脂平板（BAP）：是以布 氏、牛心、牛脑浸出液等为基础，加上 0.5% 酵母浸 膏、5-10%动物血、维生素K1 10μ g/ml和5μ l/ml氯 化血红素组成。几乎能培养出所有的厌氧菌。

中有硫磺颗粒（放线菌ຫໍສະໝຸດ 染）。厌氧菌感染的临床及细菌学指征

标本涂片有细菌（尤其见到细菌染色不均，着色淡，形态
呈多形性等），而常规需氧菌培养阴性；或在液体及半固
体培养基深部生长的细菌。

长期使用氨基糖苷类抗菌素治疗无效的病例。--氨基糖苷 类抗菌素对厌氧菌无效

近期有流产史，或胃肠道术后发生的感染；施穿刺术或各
厌氧菌培养方法

培养方法有多种，但都必须降低氧化还原电势构
成无氧环境。常用有：

厌氧罐(厌氧袋)培养法：
抽气换气法 ( 物理法 ) ：此法厌氧环境建立迅速，
大约需20min可达无氧状态。
厌氧菌培养方法


冷触酶法(化学法)： 利用产气袋产生的H2和 CO2 在触酶钯的作用 下，与罐(或袋)内的O2结合生成H2O，将氧消 耗，此过程大约需1~1.5h可造成无氧环境。 注意事项：厌氧罐(袋)使用前要检查有无漏气； 产气袋有无过期；钯粒是否失效等。此外，在 用此法培养时，最好在罐底放一些吸水纸，吸 干产气袋在反应过程溢出的水分，以免污染培 养基。