HPLC法测定头孢呋辛钠中EDTA含量-2019年文档
HPLC法测定头孢噻肟钠的有关物质
第53卷第1期 辽 宁 化 工 Vol.53，No. 1 2024年1月 Liaoning Chemical Industry January，2024HPLC法测定头孢噻肟钠的有关物质张建廷，张巍（东北制药集团股份有限公司， 辽宁 沈阳 110027）摘 要：建立对头孢噻肟钠有关物质的检测方法。
使用安捷伦C18色谱柱，以pH6.2的磷酸氢二钠缓冲液-乙腈作为流动相。
235 nm的检测波长，30 ℃的柱温，4 ℃的进样室温度，1.0 mL·min-1的流速，10 μL的进样量。
能够对头孢噻肟钠有关物质进行准确的定性和定量。
测试结果表明，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质7-ACA、杂质J检测限分别为0.007 8、0.015 1、0.012 6、0.005 3、0.010 8、0.005 4、0.020 1、0.012 9、0.021 4、0.014 0 μg·mL-1，定量限分别为0.026 6、0.051 4、0.043 0、0.018 8、0.035 9、0.018 0、0.067 4、0.043 1、0.071 5、0.047 2 μg·mL-1，浓度线性范围0.018 0～16.614 μg·mL-1内线性关系较好，相关系数≥0.999；回收率在90%~108%范围内。
该方法具有较强专属性、灵敏度高且耐用性好，能够满足检测要求。
关 键 词：HPLC法； 头孢噻肟钠； 有关物质中图分类号：O657 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2024）01-0170-03头孢噻肟钠属于β-内酰胺类抗生素，名称为(6R,7R)-3-[(乙酰氧基)甲基]-7-[2-氨基-4-噻唑基-(甲氧亚氨基)乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸钠盐，20世纪70年代由Hoechst（德国）公司和Russel（法国）公司联合研制，作为第3代头孢菌素类抗生素，其临床应用十分广泛[1-3]。
不同厂家注射用头孢呋辛钠的质量考察
不同厂家注射用头孢呋辛钠的质量考察李 云【摘要】 目的 对市售5个厂家生产的注射用头孢呋辛钠进行质量考察。
方法 对注射用头孢呋辛钠的性状、p H值、标示含量3个项目,分别进行质量考察。
结果 上述项目在各个厂家之间存在一些差异,但均在中国药典规定的合格范围内。
结论 5个厂家生产的注射用头孢呋辛钠质量均可靠。
【关键词】 头孢呋辛钠 高效液相色谱法 含量测定 头孢呋辛钠(Cef uroxime Sodium),又名头孢呋肟,为半合成的第二代头孢类抗生素,因其具有对革兰氏阴性菌的β-内酰胺酶稳定、能穿透血脑屏障等特点,所以临床上广泛应用于敏感菌引起的呼吸道、泌尿系统、皮肤和软组织、骨和关节、女性生殖器等组织器官的感染,对败血症、脑膜炎也有效[1]。
目前市场上有不同厂家的诸多同类药品,我们依据《中国药典》2005年版二部,以性状、p H值及含量测定结果了解不同厂家产品的质量情况,指导临床使用质量可靠的药品,为临床选择用药提供参考。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂、试药作者单位:广西医科大学第四附属医院(柳州)邮 编 545005 收稿日期 2007-08-291.1.1 仪器 Agilengt1100高效液相色谱仪(包括G1314A紫外检测器);岛津UV-2401紫外分光光度计;P HS-3CT酸度计;CP225D电子天平。
1.1.2 试剂与试药 注射用头孢呋辛钠,规格0.75g(A:广东某厂,批号:060806、061105;B:山西某厂,批号:060730、061219;C:广西某厂,批号: 061105、070203;D:湖北某厂,批号:060103、060411; E:国外进口,批号:A06042315、A06072716)。
头孢呋辛钠对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 130493-200302,含量95.6%)。
乙腈为色谱纯,醋酸、醋酸钠等试剂为分析纯。
1.2 考察项目与方法1.2.1 性状 目视检测。
头孢呋辛钠原料药贮存条件和充氮对色级的影响
头孢呋辛钠原料药贮存条件和充氮对色级的影响目的注射用头孢呋辛钠溶液颜色不稳定，该研究探讨在原料生产过程贮存条件和充氮与否对色级稳定性的影响。
方法2013年2—3月生产的194批无菌原料药每批各8瓶分别贮存冷处和阴凉处，其中4瓶模拟生产过程充入高纯液氮，0、3、6、12个月按《中国药典》溶液颜色检查法的第一法观察颜色变化。
将色级<YG1规定为0.5，色级=YG1规定为1.0，依次类推。
比较冷库和阴凉库贮存、充氮与不充氮情况下色级的差异。
结果在不充氮情况下，阴凉库贮存12个月已有19.1%批次的达到最高色级<6，而冷库只有7.2%批次的达到最高色级=5。
阴凉贮存条件下，3、6和12个月后充氮原料药的色级比不充氮分别下降了0.6、0.8和0.7，而冷库贮存条件下色级则分别下降了0.2、0.5和0.7。
结论原料冷处贮存时色级稳定性明显好于阴凉贮存，原料充氮时色级稳定性明显好于不充氮。
标签：头孢呋辛钠；色级；充氮；原料头孢呋辛钠为第二代头孢菌素类抗生素，分装而成的注射用头孢呋辛钠治疗范围广、副反应少，广泛应用于临床[1]。
但是该品稳定性差[2]，在全国药品评价抽检试验中，注射用头孢呋辛钠不符合要求的主要项目为溶液颜色，在各类终端市场反馈中，注射用头孢呋辛钠溶液颜色为最主要的投诉项目。
2005版《中国药典》规定头孢呋辛钠贮存条件为遮光，密封，在冷处（2～10℃）贮存；2010版《中国药典》规定该品贮存条件为遮光，密封，在阴凉处（≤20℃）贮存[3]。
充氮可以有效保证注射用头孢呋辛钠稳定性，延缓色级变化，但头孢呋辛钠原料充氮对延缓色级的作用没有引起关注，该研究把头孢呋辛钠色级控制由制剂环节推移到前段工序进行控制，即在原料生产过程中进行充氮，同时探索不同贮存条件下，原料充氮对产品的色级稳定性影响。
2013年2—3月生产的194批无菌原料药每批各8瓶分别贮存冷处和阴凉处，现报道如下。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器头孢呋辛钠无菌原料药（纯度≥99.4%）；液氮（纯度≥99.995%）；EDTA-2Na （AR级）。
HPLC-MS法测定牛奶中头孢噻呋残留量的不确定度评估
HPLC-MS法测定牛奶中头孢噻呋残留量的不确定度评估朱勇抗（广东宏科检测技术有限公司，广东惠州 516100）摘 要：依照《动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21314—2007）测定牛奶中头孢噻呋的残留量，并评估测量结果的不确定度。
结果表明，头孢噻呋测定结果为（64.8±5.8）μg·kg-1，置信区间为95%，包含因子k=2。
测定牛奶中头孢噻呋的不确定度主要来源于标准工作液配制、标准曲线校准样品浓度。
对此，应根据待测目标物的预估进样浓度，使用高精度量具配制标准工作液，以提高检测结果的准确性。
关键词：液相色谱-质谱/质谱法；头孢噻呋；不确定度Evaluation of Uncertainty in the Determination of CeftiofurResidue in Milk by HPLC-MSZHU Yongkang(Guangdong Hongke Testing Technology Co., Ltd., Huizhou 516100, China) Abstract: The residue of ceftiofur in milk was determined according to GB/T 21314—2007, and the uncertainty of the measurement results was evaluated. The results showed that the result of ceftiofur was (64.8±5.8) μg·kg-1 with the confidence interval of 95% and the inclusion factor k=2. The uncertainty of the determination of ceftiofur in milk was mainly due to the preparation of the standard working solution and the concentration of the sample for calibration of the standard curve. In this regard, the standard working solution should be prepared according to the predicted injection concentration of the target to be measured, and the standard working solution should be prepared using a high-precision gauge to improve the accuracy of the results.Keywords: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; ceftiofur; uncertainty头孢类抗菌药物对革兰氏菌所致的炎症具有显著疗效[1]，所以在畜禽养殖业中，它作为一种特殊的药物用于防治呼吸道感染、消化道感染、尿路感染等疾病。
HPLC法测
HPLC法测定头孢呋辛钠中乳酸钠的含量目的建立头孢呋辛钠中乳酸钠的含量测定方法。
方法采用依利特ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；以0.1%磷酸水溶液为流动相，流速1.0 mL/min；检测波长210 nm；柱温为25℃。
结果乳酸钠的浓度与峰面积在0.25～0.75 mg/mL范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=483.93X-4.6586，r=0.9999；平均回收率101.2%，RSD为0.37%。
结论本方法操作简便，测定快速，结果准确可靠。
标签：头孢呋辛钠；乳酸钠；含量；HPLC头孢呋辛钠是葛兰素史克公司于20世纪70年代开发的第2代头孢菌素类抗生素，随后我国从80年代开始进口注射用头孢呋辛钠，并开始仿制。
在头孢呋辛钠最后一步反应过程中使用到了乳酸钠，乳酸钠作为头孢呋辛钠杂质之一，需要对其进行检测。
目前，测定头孢呋辛钠中的乳酸钠含量，中国药典及部颁标准并未记载，本实验参照文献[1-5]采用高效液相色谱法测定其中乳酸钠的含量，操作简便、快速、结果准确可靠，并不受其他成分的干扰，可用于本产品中乳酸钠的含量测定。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂1.2 方法1.2.2 溶液制备（1）对照品溶液的制备：精密称取乳酸钠50.00 mg，加水稀释定容至100 mL，摇匀，即配成乳酸钠对照品溶液，浓度为0.50 mg/mL。
（2）供试品溶液的制备：精密称取头孢呋辛钠样品500.00 mg左右，加水稀释定容至10 mL，摇匀，做为供试品溶液。
2 结果2.1 方法学考察2.1.1 线性关系的考察精密称取乳酸钠100.00 mg，加水稀释定容至100 mL，摇匀，即配成乳酸钠对照品储备液，精密量取对照品储备液5.0、8.0、10.0、12.0、15.0 mL，分别置于20 mL量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，配成每1 毫升分别含0.25、0.40、0.50、0.60、0.75 mg系列浓度的对照品溶液，按“1.2.1项”色谱条件精密进样20μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以乳酸钠浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=483.93X-4.6586，r=0.9999，结果表明，乳酸钠的浓度与峰面积在0.25～0.75 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
HPLC法检测头孢呋辛钠含量验证方案
3.最终由数据处理系统处理的色谱图，有时会因为方法建立不完善等原因出现积分不合理（峰值未积出，积分错误等原因）时，检验记录中必须附积分不合理图谱，申请积分重建方法表后，方可更改方法。
4.检测波长的选择：因为用醋酸盐缓冲液：乙腈（85：15）的溶液溶解供试品，照紫外可见分光光度法测定，200~400nm之间在273nm处有最大吸收度，所以选择273nm 的波长进行检测。
五、附件材料
图(一）空白图谱图、（二）对照图谱图、（三）供试品图谱
六、参考资料
[1]裘晓华.头孢呋辛钠含量测定的改进[J].江苏药学与临床研究,1998(03):18-19.
[2]薛闻鹂,钟帼英,胡新.HPLC法测定头孢呋辛钠的含量[J].药物分析杂志
[3]头孢呋辛钠药动学的研究进展[J]. 高硕,杨错,王红. 中国药房. 2012(01）
[4]头孢呋辛钠在注射液中的稳定性考察[J]. 王斐. 中国药业. 2000(12)。
HPLC法测定注射用头孢尼西钠的含量
HPLC法测定注射用头孢尼西钠的含量陶余兵(金陵药业股份有限公司利民制药厂,安徽合肥 230088)摘要:目的 建立用HP LC法测定注射用头孢尼西钠含量的测定方法。
方法 采用高效液相色谱法,以0101m ol・L-1磷酸盐溶液2乙腈(75∶25)为流动相,检测波长261nm,流速1ml・min-1。
结果 头孢尼西钠线性浓度范围在60～140mg・L-1。
r= 019999。
结论 该方法简便、灵敏、准确,专属性强。
关键词:HP LC;头孢尼西Determination conctent of cefouicid sodium for injection by HPLCT AO Y u2bin(Jingling Pharmaceutical Co.Ltd.Ltd.Limin Pharmaceutical Factory,H e fei 230088,China)Abstract:Aim T o establish the method for determinging the content of cefouicid s odium for injection.Mehtods A HP LC was set up to deter2 mine the content of cefouicid s odium for injection.the m obile phase consisted of0101m ol・L-1phosphate:Acetonitrile=75∶25,and the UV ab2 s orbance derector was set up at261nm,and the flow rate was110ml・min-1.R esult A g ood linearity of cefouicid was obtained from60mg・L-1)to140mg・L-1with r=01999.Conclusion The method is simple,accurate and sensitive.K ey w ords:HP LC;cefouicid 头孢尼西(Cefouicid铭乐希)为第二代头孢菌素,具有更为广谱的抗菌活性,对β2内酰胺酶稳定。
HPLC法测定头孢呋辛钠的含量word精品文档4页
HPLC法测定头孢呋辛钠的含量本文中所检测的头孢呋辛钠属于二代抗生素，头孢呋辛钠可广泛用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，适用于敏感细菌早晨的感染治疗，并对于治疗呼吸道感染、泌尿系统等具有重要的意义。
通常情况下，这些问题都是由革兰氏阴性菌导致的。
因此对头孢呋辛钠进行检测具有重要的意义，在治疗重大疾病的过程中只有严格控制头孢呋辛钠的含量，才能起到良好的治疗效果。
本文主要通过高效液相色谱法对头孢呋辛钠的含量进行检测，采用国内较为普遍的C18柱测定，具有良好的效果。
希望通过本文的论述能够为今后检测工作带来一定的帮助。
1 试剂与仪器的选择在本实验中，选用某公司生产的Waters高效液相色谱仪，其中包含四个组成部分，一是501泵，二是486检测器，三是U6K进样器以及746数据处理机，对测定的最终结论起到了重要的帮助。
在试剂的选用上，主要包括以下几项试剂，色谱纯为乙腈，分析纯为苔黑酚、醋酸钠与醋酸。
英国某药厂提供了用于进行工作对照的对照品，而供试品则选取了两家药厂生产的头孢呋辛钠，分别为意大利以及英国的药厂。
2 色谱条件色谱柱：SpherisorbC1810μ，4.6mm×200mm；流动相：0.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH3.4）-乙腈（90：10）；流速：1ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；柱温：室温。
3 实验方法首先要对内标液进行制备。
采用设备精良的称取600mg苔黑酚，并且将其放置在容量为200ml的量瓶中，加入适量的水后进行溶解，直至其稀释到应有的标准，达到指定的刻度。
然后对供试液进行制备。
同苔黑酚的称量一样，选择适量的头孢呋辛钠进行称取，标准值为50mg，将其放置在容量为100ml的量瓶中，然后进行稀释，直至达到标准的刻度为止，将稀释后的溶液进行摇匀处理。
分别称量出不同容积的溶液放置在容量为50ml 的量瓶中，再加入适量的内标液，容量为10ml，同样仿照先前的步骤进行稀释并且摇匀，随即取得相应标准的溶液，分别为0.02mg/ml；0.04mg/ml；0.06mg/ml；0.08mg/ml以及0.10mg/ml。
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HPLC法测定头孢呋辛钠中EDTA含量
头孢呋辛钠是第二代头孢抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效，临床多用于敏感菌所致的呼吸道，耳鼻喉，尿道，软组织，骨骼关节，产科等感染[1]。
华北制药集团河北华民药业有限责任公司在生产头孢呋辛钠的过程中使用EDTA作为络合剂，EDTA对人体有害，根据WHO规定，EDTA二钠的每日允许摄入量为0-2.5mg/kg。
测定不同介质中EDTA的方法有比色法[2]、滴定法和高效液相色谱法[3]、离子色谱法[4]等。
滴定法和比色法会受到头孢呋辛钠的干扰，测定结果不能令人满意。
高效液相色谱法是通过检测EDTA的金属络合物EDTA - Cu对EDTA 进行测定，本文通过对EDTA- Cu进行测定，来检测EDTA在头孢呋辛钠中的残留量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器。
安捷伦1260液相色谱仪，梅特勒托利多XS105电子天平。
1.2 试剂。
头孢呋辛钠，华北制药河北华民药业有限责任公司提供，批号C2091306001；EDTA，优级纯，含量99.9% ；四丁基氢氧化铵，离子对试剂；乙腈，色谱纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件。
色谱柱Venusil XBP C18 （4.6mm×250mm，5.0μm）；柱温30℃；检测器波长254nm，流速1.5ml/min。
在
此情况下，样品中EDTA获得了良好的分离。
结果见图1。
2.2 对照品溶液制备。
精密称取EDTA二钠约33mg，置100ml 量瓶中，加水使溶解并定量稀释成0.33mg/mlEDTA对照品储备液。
2.3 样品溶液制备。
精密称取头孢呋辛钠供试品约1.0g，置100ml量瓶中，加水适量使溶解，加1%硫酸铜溶液5ml，加水稀释至刻度，过滤，即得。
2.4 线性关系。
精密量取贮备液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.5ml至100ml容量瓶中，加1%硫酸铜溶液5mL用纯化水稀释至刻度，得浓度为0.66μg/ml、1.65μg/ml、2.64μg/ml、
3.3μg/ml、3.96μg/ml、
4.95μg/ml溶液，依次进样20μl，按照上述色谱条件测定。
以EDTA浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=8.3559x-0.2102，R2=0.9992。
当信噪比（S/N）为3：1时，EDTA的浓度为0.1674μg/ml。
2.5 中间精密度。
按照色谱条件，采用不同人不同时间进行样品测定，测得EDTA检测结果分别为
3.35、3.32、3.32、3.33、3.34、3.32，RSD为0.4%。
2.6 回收率实验。
准确称取0.5g样品，分别加入不同浓度的对照品，按照上述色谱条件进行检测的回收率结果见表1。
3 讨论
3.1 本实验建立了HPLC检测头孢呋辛钠中EDTA的含量，以外标法进行计算，该方法具有检测限低，准确度及精密度高，样
品检测时间短的优势。
3.2 由于本法进样量较大，容易使色谱柱过载，在样品检测完后，应及时冲洗色谱柱。