限制性内切酶酶切位点-方便搜索(word版本)
AatII识别位点GACGTC
CTGCAG
Acc65I识别位点GTMKAC CAKMTG
AccI识别位点GTMKAC CAKMTG
AciI识别位点CCGC
GGCG
AclI识别位点AACGTT TTGCAA
AcuI识别位点CTGAAG GACTTC
AfeI识别位点AGCGCT TCGCGA
AflII识别位点CTTAAG GAATTC
AflIII识别位点ACRYGT TGYRCA AgeI识别位点ACCGGT TGGCCA
AhdI识别位点GACNNNNNGTC CTGNNNNNCAG
AleI识别位点CACNNNNGTG GTGNNNNCAC
AluI识别位点AGCT
TCGA
AlwI识别位点GGATC CCTAG
AlwNI识别位点CAGNNNCTG GTCNNNGAC
ApaI识别位点GGGCCC CCCGGG
ApaLI识别位点GTGCAC CACGTG
ApeKI识别位点GCWGC
CGWCG
ApoI识别位点RAATTY YTTAAR
AscI识别位点GGCGCGCC CCGCGCGG
AseI识别位点ATTAAT TAATTA
AsiSI识别位点GCGATCGC CGCTAGCG
AvaI识别位点CYCGRG GRGCYC
AvaII识别位点GGWCC CCWGG
AvrII识别位点CCTAGG GGATCC
BaeI识别位点NACNGTAYCN BamHI识别位点GGATCC CCTAGG
BanI识别位点GGYRCC CCRYGG
BanII识别位点GRGCYC CYCGRG
BbsI识别位点GAAGAC CTTCTG
BbvCI识别位点CCTCAGC GGAGTCG
BbvI识别位点GCAGC CGTCG
BccI识别位点CCATC GGTAG
BceAI识别位点ACGGC TGCCG
BcgI识别位点CGANTGN GCTNACG
BciVI识别位点GTATCC
CATAGG
BclI识别位点TGATCA
ACTACT
BfaI识别位点
CTAG
GATC
BfuAI识别位点ACCTGC
TGGACG
BglI识别位点GCCNNNNNGGC CGGNNNNNCCG
BglII识别位点AGATCT
TCTAGA
BlpI识别位点GCTNAGC CGANTCG
Bme1580I识别位点GKGCMC
CMCGKG CACGTC GTGCAG
BmrI识别位点ACTGGGN TGACCCN
BmtI识别位点GCTAGC CGATCG
BpmI识别位点CTGGAGN GACCTCN
Bpu10I识别位点CCTNAGC GGANTCG
BpuEI识别位点CTTGAGN GAACTCN
BsaAI识别位点YACGTR RTGCAY
BsaBI识别位点GATNNNNATC CTANNNNTAG
BsaHI识别位点GRCGYC CYGCRG
BsaI识别位点GGTCTCN CCAGAGN
BsaJI识别位点CCNNGG GGNNCC
BsaWI识别位点WCCGGW WGGCCW
BsaXI识别位点NACNCTCCN NTGNGAGGN
BseRI识别位点GAGGAGN CTCCTCN
BseYI识别位点CCCAGC GGGTCG
BsgI识别位点GTGCAG CACGTC
BsiEI识别位点CGRYCG GCYRGC GWGCWC CWCGWG
BsiWI识别位点CGTACG
GCATGC
BslI识别位点CCNNNNNNNGG GGNNNNNNNCC
BsmAI识别位点GTCTCN
CAGAGN
BsmBI识别位点CGTCTCN GCAGAGN
BsmFI识别位点GGGAC
CCCTG
BsmI识别位点GAATGCN CTTACGN
BsoBI识别位点CYCGRG
GRGCYC
Bsp1286I识别位点GDGCHC CHCGDG
BspCNI识别位点CTCAGN GAGTCN
BspDI识别位点ATCGAT TAGCTA
BspEI识别位点TCCGGA AGGCCT
BspHI识别位点TCATGA AGTACT
BspMI识别位点ACCTGCN TGGACGN
BspQI识别位点GCTCTTCN CGAGAAGN
BsrBI识别位点CCGCTC GGCGAG
BsrDI识别位点GCAATGNN CGTTACNN RCCGGY YGGCCR
BsrGI识别位点TGTACA ACATGT
BsrI识别位点ACTGGN TGACCN
BssHII识别位点GCGCGC CGCGCG
BssKI识别位点CCNGG GGNCC
BssSI识别位点CACGAG GTGCTC
BstAPI识别位点GCANNNNNTGC CGTNNNNNACG
BstBI识别位点TTCGAA AAGCTT
BstEII识别位点GGTNACC CCANTGG
BstNI识别位点CCWGG GGWCC
BstUI识别位点CGCG
GCGC
BstXI识别位点CCANNNNNNTGG GGTNNNNNNACC
BstYI识别位点RGATCY YCTAGR
BstZ17I识别位点GTATAC CATATG
Bsu36I识别位点CCTNAGG GGANTCC
BtgI识别位点CCRYGG GGYRCC
BtgZI识别位点GCGATG CGCTAC GCAGTGNN CGTCACNN
BtsI识别位点GCAGTGNN CGTCACNN
Cac8I识别位点GCNNGC CGNNCG
ClaI识别位点ATCGAT TAGCTA
CspCI识别位点NCAANGTGGN NGTTNCACCN
CviAII识别位点CATG
GTAC
CviKI-1识别位点RGCY
YCGR
CviQI识别位点GTAC
CATG
DdeI识别位点CTNAG
GANTC
DpnI识别位点GATC
CTAG
DpnII识别位点GATC
CTAG
DraI识别位点TTTAAA AAATTT
DraIII识别位点CACNNNGTG GTGNNNCAC
DrdI识别位点GACNNNNNNGTC CTGNNNNNNCAG
EaeI识别位点YGGCCR RCCGGY
EagI识别位点CGGCCG GCCGGC
EarI识别位点CTCTTC
GAGAAG EciI识别位点GGCGGA
CCGCCT
EcoNI识别位点CCTNNNNNAGG GGANNNNNTCC
EcoO109I识别位点RGGNCCY YCCNGGR
EcoP15I识别位点CAGCAG
GTCGTC
EcoRI识别位点GAATTC
CTTAAG
EcoRV识别位点GATATC
CTATAG
FatI识别位点CATG
GTAC
FauI识别位点CCCGC
GGGCG
Fnu4HI识别位点GCNGC
CGBCG
FokI识别位点GGATGN
CCTACN
FseI识别位点GGCCGGCC
CCGGCCGG
FspI识别位点TGCGCA
ACGCGT
HaeII识别位点RGCGCY
YCGCGR
HaeIII
HgaI识别位点GACGC
CTGCG
HhaI识别位点GCGC
CGCG
HincII识别位点GTYRAC CARYTG HindIII识别位点AAGCTT
TTCGAA
HinfI识别位点GANTC
CTNAG
HinP1I识别位点GCGC
CGCG
HpaI识别位点GTTAAC
CAATTG
HpaII识别位点CCGG
GGCC
HphI识别位点GGTGA
CCACT
Hpy188I识别位点TCNGA
AGNCT
Hpy188III识别位点TCNNGA
AGNNCT
Hpy99I识别位点CGWCG
GCWGC
HpyAV识别位点CCTTC
GGAAG
HpyCH4III识别位点ACNGT
TGCCA
HpyCH4IV HpyCH4V识别位点TGCA
ACGT
KasI识别位点GGCGCC
CCGCGG
KpnI识别位点GGTACC
CCATGG
MboI识别位点GATC
CTAG
MboII识别位点GAAGA
CTTCT
MfeI识别位点CAATTG
GTTAAC ACGCGT TGCGCA
MlyI识别位点GAGTC
CTCAG
MmeI识别位点TCCRAC AGGYTG
MnlI识别位点CCTC
GGAG
MscI识别位点TGGCCA ACCGGT
MseI识别位点TTAA
AATT
MslI识别位点CAYNNNNRTG GTRNNNNYAC
MspA1I识别位点CMGCKG GKCGMC
MspI识别位点CCGG
GGCC
MwoI识别位点GCNNNNNNNGC CGNNNNNNNCG
NaeI识别位点GCCGC CGGCCG
NarI识别位点GGCGCC CCGCGG
NciI识别位点CCSGG
GGSCC
NcoI识别位点CCATGG GGTACC
NdeI识别位点CATATG GTATAC
NgoMIV识别位点GCCGGC CGGCCG
NheI 识别位点GCTAGC CGATCG CATG
GTAC
NlaIV识别位点GGNNCC CCNNGG
NmeAIII识别位点GCCGAG CGGCTC
NotI识别位点GCGGCCGC CGCCGGCG
NruI识别位点TCGCGA AGCGCT
NsiI识别位点ATGCAT
TACGTA
NspI识别位点RCATGY
YGTACR
PacI识别位点TTAATTAA AATTAATT
PaeR7I识别位点CTCGAG GAGCTC
PciI识别位点ACATGT TGTACA
PflFI识别位点GACNNNGTC CTGNNNCAG
PflMI识别位点CCANNNNNTGG GGTNNNNNACC
PhoI识别位点GGCC
PleI识别位点GAGTCN CTCAGN
PmeI识别位点GTTTAAAC CAAATTTG
PmlI识别位点CACGTG GTGCAC
PpuMI识别位点RGGWCCY YCCWGGR GACNNNNGTC CTGNNNNCAG
PsiI识别位点TTATAA
AATATT
PspGI识别位点CCWGG GGWCC
PspOMI识别位点GGGCCC CCCGGG
PspXI识别位点VCTCGAGB BGAGCTCV
PstI识别位点CTGCAG GACGTC
PvuI识别位点CGATCG GCTAGC
PvuII识别位点CAGCTG GTCGAC
RsaI识别位点GTAC
CATG
RsrII识别位点CGGWCCG GCCWGGC
SacI识别位点GAGCTC CTCGAG
SacII识别位点CCGCGG GGCGCC
SalI识别位点GTCGAC CAGCTG
SapI识别位点GCTCTTCN CGAGAAGN
Sau3AI识别位点GATC
CTAG
Sau96I识别位点GGNCC CCNGG
SbfI识别位点CCTGCAGG GGACGTCC AGTACT
TCATGA
ScrFI识别位点CCNGG
GGNCC
SexAI识别位点ACCWGGT TGGWCCA
SfaNI识别位点GCATCN CGTAGN
SfcI识别位点CTRYAG GAYRTC
SfiI识别位点GGCCNNNNNGGCC CCGGNNNNNCCGG
SfoI识别位点GGCGCC CCGCGG
SgrAI识别位点CRCCGGYG GYGGCCRC
SmaI识别位点CCCGGG GGGCCC
SmlI识别位点CTYRAG GARYTC
SnaBI识别位点TACGTA ATGCAT
SpeI识别位点ACTAGT TGATCA
SphI识别位点GCATGC CGTACG
SspI识别位点AATATT TTATAA
StuI识别位点AGGCCT TCCGGA
StyD4I识别位点CCNGG GGNCC
StyI识别位点GCWWGG GGWWCC
SwaI识别位点ATTTAAAT TAAATTTA
TaqαI识别位点TCGA
AGCT
TfiI识别位点GAWTC
CTWAG
TliI识别位点CTCGAG GAGCTC
TseI识别位点GCWGC
CGWCG
Tsp45I识别位点GTSAC
CASTG
Tsp509I识别位点AATT
TTAA
TspMI识别位点CCCGGG GGGCCC
TspRI识别位点NNCASTGNN NNGTSACNN
Tth111I识别位点GACNNNGTC CTGNNNCAG
XbaI识别位点TCTAGA
AGATCT
XcmI识别位点CCANNNNNNNNNTGG GGTNNNNNNNNNACC
XhoI识别位点CTCGAG
GAGCTC
XmaI识别位点CCCGGG
GGGCCC
XmnI识别位点GAANNNNTTC CTTNNNNAAG
ZraI识别位点GACGTC
CTGCAG
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常用限制性内切酶酶切位点汇总
Acc65I识别位点AccI识别位点AciI识别位点AclI识别位点AcuI识别位点 AfeI识别位点AflII识别位点AflIII识别位点AgeI识别位点AhdI识别位点AleI识别位点AluI识别位点AlwI识别位点AlwNI识别位点ApaI识别位点ApaLI识别位点ApeKI识别位点ApoI识别位点AscI识别位点AseI识别位点AsiSI识别位点AvaI识别位点AvaII识别位点AvrII识别位点BaeI识别位点BamHI识别位点BanI识别位点BanII识别位点
BbvCI识别位点BbvI识别位点 BccI识别位点BceAI识别位点BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点 BlpI识别位点 Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点BmtI识别位点BpmI识别位点Bpu10I识别位点BpuEI识别位点BsaAI识别位点BsaBI识别位点BsaHI识别位点BsaI识别位点BsaJI识别位点BsaWI识别位点BsaXI识别位点BseRI识别位点BseYI识别位点
BsiEI 识别位点BsiHKAI 识别位点BsiWI识别位点BslI 识别位点BsmAI识别位点 BsmBI识别位点BsmFI识别位点BsmI识别位点BsoBI识别位点Bsp1286I识别位点BspCNI识别位点BspDI识别位点BspEI识别位点BspHI识别位点BspMI识别位点BspQI识别位点BsrBI识别位点BsrDI识别位点BsrFI识别位点BsrGI识别位点BsrI识别位点BssHII识别位点BssKI识别位点BssSI识别位点BstAPI识别位点BstBI识别位点BstEII识别位点BstNI识别位点
限制性内切酶酶切位点汇总
Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点 AsiSI识别位点 AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点
BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点 BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点 BlpI识别位点 Bme1580I识别位点 BmgBI识别位点 BmrI识别位点 BmtI识别位点 BpmI识别位点 Bpu10I识别位点 BpuEI识别位点 BsaAI识别位点 BsaBI识别位点 BsaHI识别位点 BsaI识别位点 BsaJI识别位点 BsaWI识别位点 BsaXI识别位点 BseRI识别位点 BseYI识别位点
BsiEI识别位点 BsiHKAI识别位点 BsiWI识别位点 BslI识别位点 BsmAI识别位点 BsmBI识别位点 BsmFI识别位点 BsmI识别位点 BsoBI识别位点 Bsp1286I识别位点 BspCNI识别位点BspDI识别位点 BspEI识别位点 BspHI识别位点 BspMI识别位点 BspQI识别位点 BsrBI识别位点 BsrDI识别位点 BsrFI识别位点 BsrGI识别位点 BsrI识别位点 BssHII识别位点 BssKI识别位点 BssSI识别位点 BstAPI识别位点 BstBI识别位点 BstEII识别位点 BstNI识别位点
常用限制性内切酶酶切位点保护残基
酶切位点保护碱基-PCR引物设计用于限制性内切酶 发布: 2010-05-24 20:19| 来源:生物吧| 编辑:刘浩| 查看: 161 次 本文给出了分子克隆中常用限制性内切酶的保护碱基序列,如AccI,AflIII,AscI,AvaI,BamHI,BglII,BssHII,BstEII,BstXI,ClaI,EcoRI,HaeIII,HindIII,KpnI,MluI,NcoI,NdeI,NheI,NotI,NsiI,PacI,PmeI,PstI,PvuI,SacI,SacII,SalI,ScaI,SmaI,SpeI,SphI,StuI,XbaI,XhoI,XmaI, 为什么要添加保护碱基? 在分子克隆实验中,有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点,用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开,因此在设计PCR引物时,人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列,即保护碱基,用来提高将来酶切时的活性。 其次,在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时,相临的两个酶切位点往往不能同时使用,因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边的酶切位点切割。 该如何添加保护碱基? 添加保护碱基时,最关心的应该是保护碱基的数目,而不是种类。什么样的酶切位点,添加几个保护碱基,是有数据可以参考的。 添加什么保护碱基,如果严格点,是根据两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量。如果某条引物Tm值偏小,GC%较低,添加时多加G或C,反之亦反。 为了解不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求,NEB采用了一系列含识别序列的短双链寡核苷酸作为酶切底物进行实验。实验结果对于确定双酶切顺序将会有帮助(比如在多接头上切割位点很接近时),或者当切割位点靠近DNA末端时也很有用。在本表中没有列出的酶,则通常需在识别位点两端至少加上6个保护碱基,以确保酶切反应的进行。 实验方法:用γ-[32P]ATP在T4多聚核苷酸激酶的作用下标记0.1A260单位的寡核苷酸。取1μg已标记了的寡核苷酸与20单位的内切酶,在20°C条件下分别反应2小时和20小时。反应缓冲液含70mM Tris-HCl (pH 7.6), 10 mM MgCl2, 5 mMDTT及适量的NaCl或KCl(视酶的具体要求而定)。20%的PAGE(7M尿素)凝胶电泳分析,经放射自显影确定酶切百分率。 本实验采用自连接的寡核苷酸作为对照。若底物有较长的回文结构,切割效率则可能因为出现发夹结构而降低。
限制性内切酶酶切位点_方便搜索
GACGTC CTGCAG Acc65I 识别位点 GTMKAC CAKMTG AccI 识别位点 GTMKAC CAKMTG AciI 识别位点 CCGC GGCG AclI 识别位点 AACGTT TTGCAA AcuI 识别位点 CTGAAG GACTTC AfeI 识别位点 AGCGCT TCGCGA CTTAAG GAATTC AflIII 识别位点 ACRYGT TGYRCA AgeI 识别位点 ACCGGT TGGCCA AhdI 识别位点 GACNNNNNGTC CTGNNNNNCAG AleI 识别位点 CACNNNNGTG GTGNNNNCAC AluI 识别位点 AGCT TCGA AlwI 识别位点 GGATC CCTAG
CAGNNNCTG GTCNNNGAC ApaI 识别位点 GGGCCC CCCGGG ApaLI 识别位点 GTGCAC CACGTG ApeKI 识别位点 GCWGC CGWCG ApoI 识别位点 RAATTY YTTAAR AscI 识别位点 GGCGCGCC CCGCGCGG AseI 识别位点 ATTAAT TAATTA GCGATCGC CGCTAGCG AvaI 识别位点 CYCGRG GRGCYC AvaII 识别位点 GGWCC CCWGG AvrII 识别位点 CCTAGG GGATCC BaeI 识别位点 NACNGTAYCN BamHI 识别位点 GGATCC CCTAGG BanI 识别位点 GGYRCC CCRYGG
常用限制性内切酶酶切位点
AatII 识别位点 Acc65I 识别位点 AccI 识别位点 AciI 识别位点 AclI 识别位点 AcuI 识别位点 AfeI 识别位点 AflII 识别位点 AflIII 识别位点 AgeI 识别位点 AhdI 识别位点 AleI 识别位点 AluI 识别位点 AlwI 识别位点 AlwNI 识别位点 ApaI 识别位点 ApaLI 识别位点 ApeKI 识别位点 ApoI 识别位点 AscI 识别位点 AseI 识别位点 AsiSI 识别位点
AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI 识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点 BbsI识别位点 BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点BcgI识别位点BciVI识别位点BclI识别位点 BfaI识别位点BfuAI识别位点BglI识别位点BglII识别位点BlpI识别位点Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点
BmtI 识别位点 BpmI 识别位点 Bpu10I 识别位点 BpuEI 识别位点 BsaAI 识别位点 BsaBI 识别位点 BsaHI 识别位点 BsaI 识别位点 BsaJI 识别位点 BsaWI 识别位点 BsaXI 识别位点 BseRI 识别位点 BseYI 识别位点 BsgI 识别位点 BsiEI 识别位点 BsiHKAI 识别位点 BsiWI 识别位点 BslI 识别位点 BsmAI 识别位点 BsmBI 识别位点 BsmFI 识别位点 BsmI 识别位点
史上最全限制性内切酶酶切位点汇总
A系列 AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点 AsiSI识别位点 AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点
BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点 BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点 BlpI识别位点 Bme1580I识别位点 BmgBI识别位点 BmrI识别位点 BmtI识别位点 BpmI识别位点 Bpu10I识别位点 BpuEI识别位点 BsaAI识别位点 BsaBI识别位点 BsaHI识别位点 BsaI识别位点 BsaJI识别位点 BsaWI识别位点 BsaXI识别位点 BseRI识别位点 BseYI识别位点
BsiEI识别位点 BsiHKAI识别位点 BsiWI识别位点 BslI识别位点 BsmAI识别位点 BsmBI识别位点 BsmFI识别位点 BsmI识别位点 BsoBI识别位点 Bsp1286I识别位点 BspCNI识别位点BspDI识别位点 BspEI识别位点 BspHI识别位点 BspMI识别位点 BspQI识别位点 BsrBI识别位点 BsrDI识别位点 BsrFI识别位点 BsrGI识别位点 BsrI识别位点 BssHII识别位点 BssKI识别位点 BssSI识别位点 BstAPI识别位点 BstBI识别位点 BstEII识别位点 BstNI识别位点
ppinkHC限制性酶切位点
pPink-HC bp 7667 Restriction Map Enzyme # of cuts Positions AatI 1965 AatII 17202 Acc65I 1971 4836 AccI 22759 3871 AccIII 2946 AciI 46321 657 1066 1277 1279(c) 1283 1361 1870(c) 2630 2837 3190(c) 4721(c) 5077 5180 5236(c) 5246(c) 5270 5313(c) 5320(c) 5341(c) 5432 5460 5587 5606 5727 5837(c) 5972 5981(c) 6343 6434 6625(c) 6671 6792(c) 6836 6913 7022 7121(c) 7168 7342(c) 7381(c) 7391(c) 7417(c) 7455(c) 7468 7494 7551(c) AcsI 6747 942 1167 2990 3080 5002 AcyI 36817 7199 7503 AflII 14777 AflIII 61192 2169 3030 4269 4766 5387 AluI 32207 318 798 838 875 1270 1338 1486 1999 2011 2467 3285 3568 3881 3980 4144 4181 5030 5052 5147 5211 5329 5555 5645 5691 5948 6469 6569 6632 7311 7330 7575 Alw44I 5623 1930 5701 6947 7444 AlwI 141268(c) 1281 1458 2394 4620(c) 4881(c) 5948(c) 6034(c) 6036 6132(c) 6133 6596(c) 6913 6917(c) AlwNI 42041 2509 2665 5803 AosI 31433 6502 7525 ApaLI 5623 1930 5701 6947 7444
限制性内切酶的一般原则和建议!
限制性内切酶的一般原则和建议! 1.如何做酶切反应? 该问题看似什么简单: DNA中加上酶,然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中,我们不断听到:切不动,装不上。问题在什么地方?能系列生产限制性内切酶的公司国际上,就那么几个,位列前 3 的是NEB, Fermentas, SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题,但是更多的问题来源于模板是否合适酶切要求。下面几点对你的酶切是有帮助的。 1) 成功酶切的关键是准备好模板DNA。DNA样品中不能含有有机溶剂(会使酶变性或产生星号货性),不能含有干扰酶活性的污染物质,不能含有高浓度的EDTA (TE中的EDTA浓度较低,对Mg的浓度影响较小);同时要对DNA甲基化程度及其对酶切效率的影响要做到心中有数。 2) 选用合适的酶。根据酶切序列选用,特别注意选用甲基化对酶活性的干扰。 3) 正确使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低温环境中,只是在需要用酶才从冰箱中取出来。运输和临时存放时需要将酶至于冰上。手拿酶管时不要接触酶管下步含酶的部分,移酶时尽可能用长TIP, 避免污染。用完后需要及时送回原处。注意:酶通常是最后加。所有4) 反应体积需要根据实验目的定,常规的酶切一般要维持在10-50ul,酶切鉴定10-20ul就可以了。 5) 模板浓度问题:浓度过高,溶液黏度过大,酶不能有效扩散,酶切效果不会好。浓度过低,也会影响酶活性。 6) 注意模板用量和反应体积的关系。对酶用量,模板用量,反应体积等要素的确定需要的是时间和经验的积累。 7) 酶切反应的各个组分加完后,需要用TIP小心混匀几次,short spin 一下就可以保温了。一般不能使用振荡器混匀。 8) 反应温度的选择。一般反应都用37度,但是 Sma I 的最适合温度是25度,37度时酶仍表现出活性,但是效率下降50%。部分从耐热菌制备的酶需要在37度以上的温度反应,如Taq I的最适温度为65度,37度保温,效率仅为前者的1/10。 9) 反应时间的选择。一般酶切鉴定30分钟就可以了。要完全酶切可以采用少量的酶长时间反应,或较高的酶量短时间处理都可以达到。在使用高酶量的时候需要注意甘油的最终浓度不要超过5%,也就是说10ul的体系,酶的用量不要超过1ul。 10) 是否和如何终止反应?酶切鉴定之类的实验不需要特殊处理。灭活的手段:加入高浓度的EDTA;65度或80度热处理20-30分钟;部分从高温菌纯化出来的内切酶由于最适的反应温度比较高,热处理灭活不一定完全,需要用苯酚/氯仿/乙醇方法纯化;电泳回收也是实验室常用除酶的手段。 2.如果遇到酶切不动或切不完全,该怎么办? 要回答这么问题常常需要了解酶活性单位是如何确定,我们多次接到这样的问题:1个单位的酶能在60分钟内切1ug的DNA,为什么我们的DNA那么少切那么长时间也不能切开或切完全?从下面几个因素去考虑: 1) 酶是否有活性:酶的活性单位通常是在60分钟酶切1ug lambda DNA或特定线状DNA所需要的酶量。鉴定酶的活性高低不是用您待切的DNA模板,也不是别的公司的酶来判定。因为不同公司酶可能是从不同系统中纯化的,虽然识别位点相同,但是酶的特性可能是有差异的。鉴定酶必须使用使用说明书上认定的酶活确定的方式,通常需要用lambda DAN做模板来判定。同时如果酶对甲基化敏感,还需要用Dcm-, Dam-的DNA.不排除由于运输或分装不当导致酶活性下降,这种情况是很少发生。我们公
常用限制性内切酶酶切位点汇总
ApaI识别位点Acc65I识别位点 ApaLI识别位点AccI识别位点 ApeKI识别位点AciI识别位点 ApoI识别位点AclI识别位点 AscI识别位点AcuI识别位点 AseI识别位点AfeI识别位点 AsiSI识别位点AflII识别位点 AvaI识别位点AflIII识别位点 AvaII识别位点AgeI识别位点 AvrII识别位点AhdI识别位点 BaeI识别位点AleI识别位点 BamHI识别位点AluI识别位点 BanI识别位点AlwI识别位点 BanII识别位点AlwNI识别位点
BmrI识别位点BbvCI识别位点 BmtI识别位点BbvI识别位点 BpmI识别位点BccI识别位点 Bpu10I识别位点BceAI识别位点 BpuEI识别位点BcgI识别位点 BsaAI识别位点BciVI识别位点 BsaBI识别位点BclI识别位点 BsaHI识别位点BfaI识别位点 BsaI识别位点BfuAI识别位点 BsaJI识别位点BglI识别位点 BsaWI识别位点BglII识别位点 BsaXI识别位点BlpI识别位点 BseRI识别位点Bme1580I识别位点 BseYI识别位点BmgBI识别位点
BspMI识别位点BsiEI识别位点 BspQI识别位点BsiHKAI识别位点 BsrBI识别位点BsiWI识别位点 BsrDI识别位点BslI识别位点 BsrFI识别位点BsmAI识别位点 BsrGI识别位点BsmBI识别位点 BsrI识别位点BsmFI识别位点 BssHII识别位点BsmI识别位点 BssKI识别位点BsoBI识别位点 BssSI识别位点Bsp1286I识别位点 BstAPI识别位点BspCNI识别位点 BstBI识别位点BspDI识别位点 BstEII识别位点BspEI识别位点 BstNI识别位点BspHI识别位点
酶切位点设计和选择
引物设计原则及酶切位点选择和设计 [整理]:最初的时候,由于害怕设计酶切位点最后且不开,所以经常采用最通用的方法,用T载体克隆解决问题,但后来发现她也有问题,就是浓度提不上去,你需要体大量的载体来酶切,所以感到还是直接扩增好一点。但这就需要你仔细设计引物。连入质粒中的重要目的就是进行酶切和连接,当然首先就是在想要合成或者是进行PCR扩增出靶基因的时候在核酸的两端接入酶切位点,酶切位点是与你的质粒的特点相关的,可以在质粒的图谱说明书上找取相应的位点,进行设计。 (一)设计引物前应做的准备工作: 准备载体图谱,大致准备把片断插在那个部分 对片断进行酶切分析,确定一下那些酶切位点不能用 准备一本所买公司的酶的商品目录,便于查酶的各种数据及两种酶是否可以配用 (二)设计引物所要考虑的问题 两个位点应是载体上的,,所连接片断上没有这两个位点,且距离不能太近,往往导致两个酶都切不好。因此,紧挨在一起,只能切一个,除非恰好是与上面两个酶在一起的酶切位点。我看promega的说明书上说,最好隔四个。还有一种情况是:不能有碱基的交叉,比如AGATCTTAAG,这样的位点比较难切。 两个酶切点最好不要是同尾酶(切下来的残基不要互补),否则效果相当于单酶切。 最好使用酶切效率高的。 最好使用双酶切有共同buffer的酶。 最好使用较常用的酶(如hind3,bamh1,ecor1等),最好使用自己实验室有的酶,这样可以省钱。 Tm的计算,关于Tm的问题,很多的战友都有疑惑。其实园子里有很多的解释了。 Tm叫溶解温度(melting temperature, Tm),即是DNA双链溶解所需的温度。大家可以理解,这个温度是由互补的DNA区域决定的,而不互补的区域对DNA的溶解是没有作用的。因此,对于引物的Tm,只有和模板互补的区域对Tm才有贡献。计算Tm时,只计算互补的区域(除非你的酶切位点也与模板互补)。不少战友设计的引物都Tm过低,是因为他们误把保护碱基和酶切位点都计算到Tm里了,最后的结果是导致了PCR反应的诸多困难。所以,设计引物的时候,先不管5'端的修饰序列,把互补区的Tm控制在55度以上(我喜欢控制在58以上,具体根据PCR的具体情况,对于困难的PCR,需要适当提高Tm),再加上酶切位点和保护碱基,这样的引物通常都是可用的,即使有小的问题,也可以挽回。Tm温度高的引物就比较容易克服3‘发卡、二聚体及3'非特异结合等问题。简单的计算公式可以用2+4的公式。若你计算的Tm值达到了快90 ,不包括酶切位点。引物公司给你发的单子是包括酶切位点的。自己可以再估计一下。如你设计了带酶切位点的引物,总长分别为29、33个碱基,去掉酶切位点和保护碱基,分别为17、21个碱基。引物公司给的单子是70多度,实际用的只有50度,用55度扩的结果也差不多。 其它关于Tm值的计算,有用PP5.0进行评价的,需要考虑的参数包括:base number、GC%、Tm、hairpin、dimer、false priming、cross dimer。退一般退火温度为Tm-5度,退火温度的计算可以不把加入的酶切位点及保护碱基考虑进去,如上所言,PCR几个循环后,引物外侧的序列已经参入了扩增片断中,所以你可以在预变性后多加几步,温度比你Tm值低些(这样可能会增加非特异性),Tm值是你包括酶切位点及保护碱基的Primer计算出来的。1.一般在5'端加保护碱基,如果你扩增后把目的条带做胶回收转入T-VECTOR或者其它的载体的话,酶切时可以不需加保护碱基2.有人的经验加入酶切位点的引物可以和未加入时使用相同的退火温度,结果也还是令人满意。
限制性内切酶酶切位点汇总
限制性内切酶酶切位点汇AatII识别位点 Acc65I识别位点AccI识别位点AciI识别位点AclI识别位点AcuI识别位点AfeI识别位点AflII识别位点AflIII识别位点AgeI识别位点AhdI识别位点AleI识别位点AluI识别位点AlwI识别位点AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点 AsiSI识别位点 AvaI识别位点 AvaII识别位点 AvrII识别位点 BaeI识别位点 BamHI识别位点 BanI识别位点 BanII识别位点 BbsI识别位点 BbvCI识别位点 BbvI识别位点 BccI识别位点 BceAI识别位点 BcgI识别位点 BciVI识别位点 BclI识别位点 BfaI识别位点 BfuAI识别位点 BglI识别位点 BglII识别位点
BlpI识别位点 Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点 BmtI识别位点BpmI识别位点 Bpu10I识别位点BpuEI识别位点BsaAI识别位点BsaBI识别位点BsaHI识别位点BsaI识别位点BsaJI识别位点BsaWI识别位点BsaXI识别位点BseRI识别位点BseYI识别位点 BsgI识别位点 BsiEI识别位点 BsiHKAI识别位点 BsiWI识别位点 BslI识别位点 BsmAI识别位点 BsmBI识别位点 BsmFI识别位点 BsmI识别位点 BsoBI识别位点 Bsp1286I识别位点 BspCNI识别位点 BspDI识别位点 BspEI识别位点 BspHI识别位点 BspMI识别位点 BspQI识别位点 BsrBI识别位点 BsrDI识别位点 BsrFI识别位点 BsrGI识别位点 BsrI识别位点 BssHII识别位点 BssKI识别位点 BssSI识别位点 BstAPI识别位点 BstBI识别位点 BstEII识别位点 BstNI识别位点 BstUI识别位点 BstXI识别位点
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)
The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5-phosphates and 3-hydroxyls. Usually they require Mg 2+ ions as a cofactor, although some have more exotic requirements. The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous. Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R-M systems forming either C5-methylcytosine, N4-methylcytosine or N6-methyladenine. ApaI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5'GGGCC^C 3' BamHI(类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^GATCC 3' BglII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^GATCT 3' EcoRI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^AATTC 3' HindIII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^AGCTT 3' KpnI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GGTAC^C 3' NcoI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' C^CATGG 3' NdeI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' CA^TATG 3' NheI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^CTAGC 3' NotI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GC^GGCCGC 3' SacI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GAGCT^C 3' SalI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^TCGAC 3' SphI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GCATG^C 3' XbaI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' T^CTAGA 3' XhoI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' C^TCGAG 3' 当然,上面总结的这些肯定不全,要查找更多内切酶的识别序列,你还可以选择下面几种方法: 1. 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站;NEB网站上提供的识别序列图表下载 2. 用软件如:Primer Premier5.0或Bioedit等,这些软件均提供了内切酶识别序列的信息;
限制性内切酶酶切位点方便搜索(word版本)
AatII 识别位点GACGTC CTGCAG Acc65I 识别位点GTMKAC CAKMTG AccI 识别位点GTMKAC CAKMTG AciI 识别位点CCGC GGCG AclI 识别位点AACGTT TTGCAA AcuI 识别位点CTGAAG GACTTC AfeI 识别位点AGCGCT TCGCGA AflII 识别位点CTTAAG GAATTC AflIII 识别位点ACRYGT TGYRCA AgeI 识别位点ACCGGT TGGCCA AhdI 识别位点GACNNNNNGTC CTGNNNNNCAG AleI 识别位点CACNNNNGTG GTGNNNNCAC AluI 识别位点AGCT TCGA AlwI 识别位点GGATC CCTAG AlwNI 识别位点CAGNNNCTG GTCNNNGAC ApaI 识别位点GGGCCC CCCGGG ApaLI 识别位点GTGCAC CACGTG ApeKI 识别位点GCWGC
BamHI 识别位点 GGATCC CCTAGG BanI 识别位点 GGYRCC CCRYGG BanII 识别位点 GRGCYC CYCGRG BbsI 识别位点 GAAGAC CTTCTG BbvCI 识别位点 CCTCAGC GGAGTCG BbvI 识别位点 GCAGC CGTCG BccI 识别位点 CCATC GGTAG BceAI 识别位点 ACGGC TGCCG BcgI 识别位点 CGANTGN GCTNACG CGWCG ApoI 识别位点 RAATTY YTTAAR AscI 识别位点 GGCGCGCC CCGCGCGG AseI 识别位点 ATTAAT TAATTA AsiSI 识别位点 GCGATCGC CGCTAGCG AvaI 识别位点 CYCGRG GRGCYC AvaII 识别位点 GGWCC CCWGG AvrII 识别位点 CCTAGG GGATCC BaeI 识别位点 NACNGTAYCN
如何做好酶切
该问题看似什么简单:DNA中加上酶,然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中,我们不断听到:切不动,装不上。问题在什么地方?能系列生产限制性内切酶的公司国际上,就那么几个,位列前3 的是NEB, Fermentas, SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题,但是更多的问题来源于模板是否合适酶切要求。下面几点对你的酶切是有帮助的。 1) 成功酶切的关键是准备好模板DNA。DNA样品中不能含有有机溶剂(会使酶变性或产生星号货性),不能含有干扰酶活性的污染物质,不能含有高浓度的EDTA (TE中的EDTA 浓度较低,对Mg的浓度影响较小);同时要对DNA甲基化程度及其对酶切效率的影响要做到心中有数。 2) 选用合适的酶。根据酶切序列选用,特别注意选用甲基化对酶活性的干扰。 3) 正确使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低温环境中,只是在需要用酶才从冰箱中取出来。运输和临时存放时需要将酶至于冰上。手拿酶管时不要接触酶管下步含酶的部分,移酶时尽可能用长TIP, 避免污染。用完后需要及时送回原处。注意:酶通常是最后加。 4) 反应体积需要根据实验目的定,常规的酶切一般要维持在10-50ul,酶切鉴定10-20ul就可以了。 5) 模板浓度问题:浓度过高,溶液黏度过大,酶不能有效扩散,酶切效果不会好。浓度过低,也会影响酶活性。 6)注意模板用量和反应体积的关系。对酶用量,模板用量,反应体积等要素的确定需要的是时间和经验的积累。 7) 酶切反应的各个组分加完后,需要用TIP小心混匀几次,short spin 一下就可以保温了。一般不能使用振荡器混匀。 8) 反应温度的选择。一般反应都用37度,但是Sma I 的最适合温度是25度,37度时酶仍表现出活性,但是效率下降50%。部分从耐热菌制备的酶需要在37度以上的温度反应,如Taq I的最适温度为65度,37度保温,效率仅为前者的1/10。 9) 反应时间的选择。一般酶切鉴定30分钟就可以了。要完全酶切可以采用少量的酶长时间反应,或较高的酶量短时间处理都可以达到。在使用高酶量的时候需要注意甘油的最终浓度不要超过5%,也就是说10ul的体系,酶的用量不要超过1ul。 10) 是否和如何终止反应?酶切鉴定之类的实验不需要特殊处理。灭活的手段:加入高浓度的EDTA;65度或80度热处理20-30分钟;部分从高温菌纯化出来的内切酶由于最适的反应温度比较高,热处理灭活不一定完全,需要用苯酚/氯仿/乙醇方法纯化;电泳回收也是实验室常用除酶的手段。 2.如果遇到酶切不动或切不完全,该怎么办? 要回答这么问题常常需要了解酶活性单位是如何确定,我们多次接到这样的问题:1个单位的酶能在60分钟内切1ug的DNA,为什么我们的DNA那么少切那么长时间也不能切开或切完全?从下面几个因素去考虑: 1)酶是否有活性:酶的活性单位通常是在60分钟酶切1ug lambda DNA或特定线状DNA 所需要的酶量。鉴定酶的活性高低不是用您待切的DNA模板,也不是别的公司的酶来判定。因为不同公司酶可能是从不同系统中纯化的,虽然识别位点相同,但是酶的特性可能是有差异的。鉴定酶必须使用使用说明书上认定的酶活确定的方式,通常需要用lambda DAN做模板来判定。同时如果酶对甲基化敏感,还需要用Dcm-, Dam-的DNA.不排除由于运输或分装不当导致酶活性下降,这种情况是很少发生。我们公司销售的SibEnzyme公司的酶,在分装前严格检验过,不合格的东西(很少)都退回原厂,所以不合格的产品是不会送到用户手头的。 2)模板性质是否清楚:如果DNA的类型变了所需要的酶量也不同。酶切效果与DNA的
常见限制性酶切位点
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)(BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等)分子生物学实验室技术2009-11-17 17:46:32 阅读2235 评论2 字号:大中小订阅. 在分子克隆实验中,限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体,要根据载体选择合适的内切酶(当然,使用T载就不必考虑了)。先将引物设计好,然后添加酶切识别序列到引物5’端(英语怎么说?)。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列,不过为了保险起见,还是得查证一下。 下面,我就总结了一些常用的内切酶的识别序列,仅供各位参考。下面这些内切酶都属于II型内切酶。 先介绍一下什么是II型内切酶吧。 The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant positions at or close to that sequence to produce 5-phosphates and 3-hydroxyls. Usually they require Mg 2+ ions as a cofactor, although some have more exotic requirements. The methyltransferases usually recognize the same sequence although some are more promiscuous. Three types of DNA methyltransferases have been found as part of Type II R-M systems forming either C5-methylcytosine, N4-methylcytosine or N6-methyladenine. ApaI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5'GGGCC^C 3' BamHI(类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^GATCC 3' BglII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^GATCT 3' EcoRI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^AA TTC 3' HindIII (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' A^AGCTT 3' KpnI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GGTAC^C 3' NcoI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' C^CA TGG 3' NdeI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' CA^TATG 3' NheI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' G^CTAGC 3' NotI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GC^GGCCGC 3' SacI (类型:Type II restriction enzyme )识别序列:5' GAGCT^C 3'
限制性内切酶酶切位点-方便搜索(word版本)
AatII识别位点GACGTC CTGCAG Acc65I识别位点GTMKAC CAKMTG AccI识别位点GTMKAC CAKMTG AciI识别位点CCGC GGCG AclI识别位点AACGTT TTGCAA AcuI识别位点CTGAAG GACTTC AfeI识别位点AGCGCT TCGCGA AflII识别位点CTTAAG GAATTC AflIII识别位点ACRYGT TGYRCA AgeI识别位点ACCGGT TGGCCA AhdI识别位点GACNNNNNGTC CTGNNNNNCAG AleI识别位点CACNNNNGTG GTGNNNNCAC AluI识别位点AGCT TCGA AlwI识别位点GGATC CCTAG AlwNI识别位点CAGNNNCTG GTCNNNGAC ApaI识别位点GGGCCC CCCGGG ApaLI识别位点GTGCAC CACGTG ApeKI识别位点GCWGC
CGWCG ApoI识别位点RAATTY YTTAAR AscI识别位点GGCGCGCC CCGCGCGG AseI识别位点ATTAAT TAATTA AsiSI识别位点GCGATCGC CGCTAGCG AvaI识别位点CYCGRG GRGCYC AvaII识别位点GGWCC CCWGG AvrII识别位点CCTAGG GGATCC BaeI识别位点NACNGTAYCN BamHI识别位点GGATCC CCTAGG BanI识别位点GGYRCC CCRYGG BanII识别位点GRGCYC CYCGRG BbsI识别位点GAAGAC CTTCTG BbvCI识别位点CCTCAGC GGAGTCG BbvI识别位点GCAGC CGTCG BccI识别位点CCATC GGTAG BceAI识别位点ACGGC TGCCG BcgI识别位点CGANTGN GCTNACG
常用限制性内切酶酶切位点汇总
Aatll 识别位点 5...GAVGT'b. , ,3' r CJGCAG 宁 Acc65l 识别位点 b…G fMKAC ...r p CAKMJ6 5 AccI识别位点 6;,.GTMKAC. . .3^ P . CAKiMJG .5- Acil识别位点 F…C七GG.3 p. .GGqO. . 51 Acll识别位点 t , . A A'C&TT .3^ p . TTGC^AA h Acul 5.. 3 Afel 6... AGC'GGT .. .3* &. .TCG^CGA .5^ Aflll 识别位点 A.E T T AAC,. ,丁b _ G AATTjC 5" Afllll 识别位点 5 …血RY GT... 3「 3;TG Y R I^A. .5^ Agel 识别位点 5-...心CGGT Vl r TGGCC^A ..5| Ahdl 识别位点 b;G ACNNI^T MIN G I TC T B:CTGN\NNIhCAG,亍 Alel识别位点 5 …CACN 編NGTG,. ■丁 妇GTGN 密NGAC 5’ Alul识别位点 5. .. A tfCT …玄 厂 Alwl J 5..-CAGMiNN^TG, 3* 3」…GTqMNNGAC Apal识别位点 厂GGGCUt …3' 3, CpCGGG,..5^ Ap aLI 识别位点 5 …&TGCAC. 3 3. CACGT;G. .5^ ApeKI 识别位点 h—GtwGC 3 3 . .CGWC^G . . 5〔 Apol 识别位点 5* PTAATT V 3^ 3; . Y7TA A^R. 5^ AscI识别位点 应...GGCGCGCC (3) 3 .CCGCG I CJ J G .5 Asel识别位点 鼠…A F T A AT…3- 3 . . TAATJA .5^ AsiSI识别位点 5'..,GCGAll2GC.. .3 3' .CG<^T A GCG 5 AvaI识别位点 5;. .C>CGRG, ,.3* 3, GRGCyCS AvaII 识别位点 E ...cfewcc (3) 3…ccwqp…纠 AvrII 识别位点 5;. <^TAGG . 3- y GGATGf …h BaeI 识别位点 5; :"JN) AC (NX GTA Y C 3" 3;.,JN)TG(NXCATRG(M)^^ 5^ BamHI 识别位点 5, .GISATCC . 31 3:. CGTAG/5 5」 Ba nl识别位点 氣...Gfe¥RCC? (3) 3. .CCH¥¥ . 5 Banll 识别位点 识别位点 CTGA AG(N)^/...玄 GACTTC (INI),,^. .. h 识别位点 T qp A 5 识别位点 GGATC(N)「3 CCTAG(N)^^. 5 AlwNI 识别位点