恒温扩增技术综述
转录介导恒温扩增技术
转录介导恒温扩增技术
1. 反转录，首先，RNA模板与逆转录酶和引物结合，形成RNA-cDNA杂交复合物。
逆转录酶将RNA模板转录成相应的cDNA。
2. 引物延伸，引物结合到cDNA上，并通过DNA聚合酶的作用
进行引物延伸，形成双链DNA。
3. 温度循环，TMA技术在恒温条件下进行，通过不同温度的循
环来完成RNA转录、DNA扩增和信号产生等步骤，无需PCR仪器。
4. 信号检测，在扩增过程中，常使用荧光探针或其他检测方法
来监测产生的DNA数量，从而实现对目标基因或病原体的检测和定量。
TMA技术具有以下优点：
高度特异性，引物设计和反转录酶的选择可以确保对目标序列
的高度特异性识别。
高灵敏度，TMA技术能够在较低的RNA或DNA浓度下进行扩增，
具有高灵敏度。
高效，由于在恒温条件下进行，TMA技术通常比PCR技术更快速、更高效。
总的来说，转录介导恒温扩增技术是一种高效、高灵敏度和高度特异性的分子生物学技术，可用于临床诊断、病原体检测和基因表达分析等领域。
恒温扩增技术在分子诊断中的应用
恒温扩增技术在分子诊断中的应用摘要：既往临床诊断中主要对聚合酶链反应（PCR）技术进行应用，但其存在一定程度的缺陷，而恒温扩增技术因为具有引物种类的多样性，所以检测方法相对多变，能够对传统PCR中存在的缺陷有效弥补，并在分子诊断工作中得到了广泛应用。
关键词：恒温扩增技术；分子诊断；应用相对于常规PCR技术，对恒温扩增技术进行应用，其不仅不需要应用专门的仪器，且更加的快速和高效。
当前广泛应用的恒温扩增技术主要包括依赖核酸序列扩增（NASBA）、转录介导扩增（TMA）、环介导等温扩增（LAMP）等多种形式，其各具优缺点，且能够在分子诊断工作之中起到不同的作用。
一、依赖核酸序列扩增（NASBA）NASBA是主要适合应用于RNA的扩增之中，针对体外特异、连续均一且引物介导的单链RNA实施恒温扩增，需要于42℃的环境中使用两个小时左右的时间，将模板RNA扩增至其109——1012倍。
对NASBA进行应用：（1）在NASBA电化学发光技术检测法方面，需要对电化学发光技术原理进行应用，针对RNA产物实施检测工作，完成扩增反应以后，使用经过生物素标记的探针与RNA产物结合形成复合物，并由寡核苷酸饱和磁珠携带至电极处，受到低电压影响，钌离子能够出现氧化还原反应并产生光子，并于三丙胺作用下再生，可见电极处的RNA产物与光信号强度具有密切关联性，二者呈正相关关系，所以可以通过电化学发光检测技术对620nm位置的发光强度进行检测并明确RNA定量；（2）核酸杂交检测法的应用，将NASBA为基础结合原位杂交技术形成原位NASBA，使用原位杂交技术探针及RNA扩增产物进行杂交，再使用紫外分光光度计对探针量进行监测，可以实现RNA产物的定量分析工作[1]。
二、环介导等温扩增（LAMP）LAMP属于一项新型的核酸扩增技术，其具有扩增效率较高的特点，其扩增效率最高能够达到普通PCR的100倍左右，同时特异性较强，并且所需的反应时间较短，一般30——60min即能够实现一次扩增反应，在临床样本量大时，可以实现快速的检测，另外，对LAMP进行应用的成本相对较低，仅需恒温器即可。
rna恒温扩增技术报告_概述说明以及解释
rna恒温扩增技术报告概述说明以及解释1. 引言1.1 概述RNA恒温扩增技术是一种重要的分子生物学工具，用于在低温环境下扩增RNA 序列。
与传统的PCR技术相比，RNA恒温扩增技术拥有更高的特异性和敏感性。
它能够通过使用适当的引物和酶，在简单的反应条件下直接从源RNA中合成大量目标RNA。
1.2 文章结构本文将首先介绍RNA恒温扩增技术的原理及其方法步骤，然后探讨其在不同领域的应用，并分析该技术的优势和局限性。
最后，通过具体实例展示RNA恒温扩增技术在医学研究中的应用，并给出结论。
1.3 目的本报告旨在全面了解和阐述RNA恒温扩增技术在生物学领域以及医学研究中的发展现状和应用价值。
深入了解该技术可以帮助我们更好地利用其优势并克服其中的局限性，进而推动该技术在相关领域的广泛应用。
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2. RNA恒温扩增技术2.1 原理介绍RNA恒温扩增技术，也被称为RT-LAMP（Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification），是一种在恒温条件下进行的RNA扩增技术。
该技术通过结合反转录和等温DNA聚合酶链式反应（LAMP）的原理，可以在简单实验室设备中高效、快速地扩增RNA分子。
具体而言，RNA恒温扩增技术利用反转录酶将RNA模板转录成相应的互补DNA。
然后，在适当的缓冲液中加入聚合酶、引物和酶切酶，使得DNA模板与特定引物结合，并产生“环状”DNA片段。
接着，使用聚合酶链式反应（LAMP）的原理，在恒温条件下利用多个特异性引物选择性地扩增目标序列。
这些引物将形成特殊结构，促进大量的目标序列复制和放大。
2.2 方法步骤RNA恒温扩增技术包含以下主要步骤：1. 反转录：首先，将待检测的RNA样本与反转录酶以及反向引物一起孵育，在适当的温度下完成反转录过程，将RNA转录成互补的DNA。
技术丨搞定恒温扩增分子诊断（RPARAA）
技术丨搞定恒温扩增分子诊断（RPARAA）展开全文2020-9-14|编辑: 归去来兮|查看: 114|评论: 0|来源: IVD学习笔记 | 作者：iAnny摘要: 分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。
恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问，决定开小灶，包会！哈 ...分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。
恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问，决定开小灶，包会！哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释•重组酶聚合酶扩增技术，RPA, recombinase polymerase amplification•重组酶介导的扩增技术，RAA, recombinase-aidamplification •重组酶，recombinase，同引物形成蛋白-核酸复合物，指导引物与模板结合，起到定位作用；帮助DNA 模板的解链和促使模板与引物之间发生链替换。
•单链DNA结合蛋白，SSB, single stranded DNA binding。
同置换出来的单链DNA结合，防止DAN配对两条链再次结合。
•DNA聚合酶，DNA polymerase，以DNA为模板，利用dNTP 合成子代DNA。
•核酸内切酶，endonuclease，可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸。
•Nfo，来源于细菌的核酸内切酶，且更倾向于作用于3′凹末端的双链DNA，参与DNA损伤修复。
RPA和RAA的工作原理相同点：•3种关键酶或蛋白：重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶；•在37℃恒温下进行核酸快速扩增；唯一不同点：酶的来源不同，推测主要时因为专利限制问题。
•RPA的重组酶来源于T4噬菌体；•RAA的重组酶来源于细菌或者真菌。
恒温扩增技术综述
摘要：恒温扩增技术是继PCR技术后成长起来的一门新型的体外核酸扩增技术。
目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增、环介导等温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列扩增和解链酶扩增。
它们都具有共同的特点：恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。
本文就现阶段恒温扩增技术的特点及其在植物疫病检测中的应用情况和前景做一综述。
关键词：恒温扩增；PCR引言：近年来，随着分子生物学技术的迅速成长，基于核酸检测的诊断法子已年夜量建立并广泛应用于植物疾病的实验室检测中，恒温扩增技术就是在此布景下呈现的。
与其它的核酸扩增技术相比，恒温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用设备。
所以它一经呈现就被许多学者认为是一种有可能与PCR 媲美的检测法子，目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增（rolling circle amolification，RCA）、环介导等温扩增（loopmediated isothermal amplification，LAMP）、链替代扩增（strand displacement amplification，SDA）、依赖核酸序列扩增（nucleicacid sequence based amplification，NASBA）和解链酶扩增（helix dependent amplification，HAD），这些技术各有特点，这也决定了它们在植物疾病检测中的应用情况，下面就它们的原理、特点及其在植物疫病检测中的应用情况进行综述。
1滚环核酸扩增1. 1 滚环核酸扩增的原理滚环核酸扩增（rolling circleamolification, RCA）是通过借鉴病原生物体滚环复制DNA 的方法而提出的[1]，可分为线性扩增与指数扩增两种形式。
线性RCA 是引物结合到环状DNA 上后，在DNA 聚合酶作用下被延伸，产品是具有年夜量重复序列（与环状DNA 完全互补）的线状单链。
线性RCA 用于靶核酸扩增仅限于一些具有环状核酸的病毒、质粒和环状染色体，线性扩增倍数为105。
rna恒温扩增法
rna恒温扩增法
RNA恒温扩增法是一种用于扩增RNA的恒温核酸扩增技术。
相较于传统的PCR扩增技术，RNA恒温扩增无需进行多步温度循环，避免了非特异性产物的产生，提高了扩增的特异性和效率。
RNA恒温扩增法的原理是在恒温条件下，利用特定引物对RNA 进行快速、特异的扩增。
这个过程可以在42℃左右的恒温条件下进行，大大简化了实验设备的需求。
同时，该技术利用M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7RNA
多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100~1000个）RNA拷贝。
每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环。
此外，RNA恒温扩增技术具有灵敏度高、检测时间短、产物不易发生污染等优点，在临床上已经得到广泛应用。
例如，该技术可用于建立7种常见致病NTM的RNA恒温扩增实时快速检测方法（SAT），通过对临床分离株和痰标本的检测，评估其临床应用价值。
酶促恒温扩增技术(ERA)在食品安全检测领域的应用
酶促恒温扩增技术（ERA）在食品安全检测领域的应用随着全球经济的发展，进口贸易的增多，食品安全检测也日趋严格。
常用于食品安全检测的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术，是目前大部分检测机构及医学实验室都在使用的常规技术。
然而该技术需要昂贵且精密的控温设备，耗费较长时间，在现场检测中不具备优势，因此，我们需要更加简便的技术来提高检测效率。
等温核酸扩增技术的问世为现场快速检测带来新的曙光。
今天给大家介绍我们先达基因的酶促恒温扩增技术(ERA)。
本文对酶促恒温核酸扩增技术及其应用进行综述。
ERA 技术全称酶促恒温核酸扩增技术，是聚合酶链式反应(PCR)的一种替代品，也是一种全新的升级，可准确、快速、便携地进行核酸检测分析。
ERA 与PCR 扩增一样具有特异性，但速度快得多，结果通常在5～10 min 生成。
而且与PCR 不同的是，ERA 反应不需要热变性，因此不需要昂贵的热循环设备。
ERA对操作温度要求并不严格，反应在37～42℃的温度下工作最优，比其他等温扩增技术需要的温度要低，能在广泛的环境温度下工作。
ERA可以在多种应用中取代PCR，如传染病诊断、食品安全检测、水产畜牧疫病检测等等，它非常适合于现场、护理点和其他设备缺乏的环境，特别是对于检测速度需求较高的情况下。
一ERA 技术介绍1、反应原理酶促恒温扩增技术（ERA技术）是先达基因公司团队研发的具有全球自主知识产权等温核酸扩增技术，将来源于细菌，病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能，通过不同的核酸扩增反应体系进行优化组合，从而获得核心的酶促恒温扩增体系。
模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理，通过蛋白定向进化、DNA与核酶亲和力成熟等技术对重组酶、核酸内切酶、DNA聚合酶等多酶体系进行改造，建立ERA扩增反应体系，使之将单分子DNA/RNA的特异性区段在5-10分钟内扩增10^9倍。
2、引物设计ERA 引物设计原则：(1) 引物长度最长是35 bp，最好为29～32bp，过短会影响重组酶活性。
era等温扩增技术原理
era等温扩增技术原理ERA（等温扩增反应）技术是一种新型的核酸扩增技术，它与传统的PCR（聚合酶链式反应）技术相比具有更高的特异性、更简单的操作流程以及更广泛的应用前景。
ERA技术的原理基于聚合酶的内切酶活性，利用酶的特性实现核酸的扩增。
ERA技术的核心是等温聚合酶反应，通过选择性的引物和酶的相互作用，实现核酸的扩增。
具体而言，ERA技术主要包括以下步骤：反应开始时，将待扩增的DNA模板与引物和聚合酶一起加入反应体系中，同时加入内切酶。
在ERA反应中，引物的设计十分关键。
引物需要具有特异性，能够特异性地与目标DNA序列结合。
一般情况下，ERA反应需要设计两对引物，一对引物用于引发反应的启动，另一对引物用于扩增目标序列。
引物的选择需要基于目标序列的特点，如GC含量、序列长度等。
在ERA反应的开始阶段，聚合酶结合到引物的末端，并开始向反向扩增。
此时，内切酶开始发挥作用。
内切酶具有切割DNA链的能力，当聚合酶合成的DNA链长度达到一定程度时，内切酶将切割DNA链，从而释放出DNA链的一部分。
被切割的DNA链片段将被聚合酶利用为新的DNA模板，进一步进行扩增。
这个过程将不断重复，直到达到所需的扩增倍增数。
与PCR技术相比，ERA技术的最大优势在于无需外加热循环装置。
ERA反应在恒温下进行，大大简化了实验的操作流程。
同时，ERA技术的特异性也更高，引物的设计更加灵活。
这使得ERA技术在临床医学、食品安全检测等领域有着广泛的应用前景。
ERA技术的应用领域十分广泛。
在临床医学中，ERA技术可以用于病原体的检测和分析，如病毒、细菌等。
在食品安全领域，ERA技术可以用于食品中致病菌的检测，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
此外，ERA技术还可以用于环境监测、基因工程等领域。
总之，ERA技术是一种新型的核酸扩增技术，其原理基于等温聚合酶反应。
相比传统的PCR技术，ERA技术具有更高的特异性、更简单的操作流程以及更广泛的应用前景。
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摘要：恒温扩增技术是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。
目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增、环介导等温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列扩增和解链酶扩增。
它们都具有共同的特点：恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。
本文就现阶段恒温扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景做一综述。
关键词：恒温扩增；PCR引言：近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，基于核酸检测的诊断方法已大量建立并广泛应用于动物疾病的实验室检测中，恒温扩增技术就是在此背景下出现的。
与其它的核酸扩增技术相比，恒温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用设备。
所以它一经出现就被许多学者认为是一种有可能与PCR 媲美的检测方法，目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增（rolling circle amolification，RCA）、环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）、链替代扩增（strand displacement amplification，SDA）、依赖核酸序列扩增（nucleicacid sequence based amplification，NASBA）和解链酶扩增（helix dependent amplification，HAD），这些技术各有特点，这也决定了它们在动物疾病检测中的应用情况，下面就它们的原理、特点及其在动物疫病检测中的应用情况进行综述。
1滚环核酸扩增1. 1 滚环核酸扩增的原理滚环核酸扩增（rolling circleamolification, RCA）是通过借鉴病原生物体滚环复制DNA 的方式而提出的[1]，可分为线性扩增与指数扩增两种形式。
线性RCA 是引物结合到环状DNA 上后，在DNA 聚合酶作用下被延伸，产物是具有大量重复序列（与环状DNA 完全互补）的线状单链。
线性RCA 用于靶核酸扩增仅限于一些具有环状核酸的病毒、质粒和环状染色体，线性扩增倍数为105。
指数RCA 原理与线性RCA 相同，采用与环状DNA 序列完全一致的第二种引物，该引物与第一次线性RCA 产物结合并酶促延伸，其产物又作为第一种探针的模板，这样一来在很短的时间内（1h），产物呈指数递增。
指数RCA 可用于非环状DNA 的扩增，增倍数能达107[2]。
1. 2 滚环核酸扩增的优势与不足RCA 的优势：(1) 高灵敏度。
RCA有很强的扩增能力，线性RCA 的效率可达到l05 倍，而指数RCA 的效率可达到109 倍，这一高灵敏度特性使其能够检测到单拷贝水平[3]；(2)高序列特异性。
可以区分单一位点的不同模式；(3) 扩增产物经过磷酸化处理后可以直接用来测序。
(4)高通量。
RCA 可以在靶目标上形成闭合的环状序列，确保RCA 产生的信号集中在一点，从而实现原位扩增和载片扩增； RCA 只要保证探针的识别段序列与靶序列互补，不需要考虑靶序列的性质，因此检测RNA 时不再需要预先进行RNA 的逆转录。
RCA 的不足：（1）锁式探针常接近100bp，合成费用较高。
2000 年，Antson DO 等采用PCR 方法在实验室合成探针，可以在很大程度上降低成本；（2）信号检测时的背景问题。
在RCA 反应过程中未成环的锁式探针和未结合探针的模板DNA 或者RNA 可能产生一些背景信号。
1. 3 滚环核酸扩增在畜牧生产中的应用虽然可以通过一些方法部分克服RCA 的不足，但也进一步增加了反应成本，使得RCA 在动物疾病的临床检测中不适合被采用。
2 环介导等温扩增2. 1 环介导等温扩增的原理环介导等温扩增其扩增原理是基于DNA 在65℃左右处于动态平衡状态，任何一个引物向双链DNA 的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链，在此前提下利用4 种不同的特异性引物识别靶基因的6 个特定区域，在链置换型DNA 聚合酶的作用下，以外侧引物区段的3’末端为起点，与模板DNA 互补序列配对，启动链置换DNA合成[4]。
2. 2 环介导等温扩增的优势与不足LAMP 的优势：（1）扩增效率高，能够在1h 内有效的扩增1-10 个拷贝的目的基因，扩增效率为普通PCR的10 倍-100 倍；（2）反应时间短，特异性强，不需要特殊的设备。
LAMP 的不足：（1）对引物的要求特别高；（2）扩增产物不能用于克隆测序，只能用于判断；（3）由于其敏感性强，特别容易形成气溶胶，造成假阳性影响检测结果。
2. 3 环介导等温扩增技术在动物疾病检测中的应用LAMP 技术从诞生之日起就被认为是最有可能代替PCR 进行实验室检测的方法。
2008 年Anne-Lie B 等应用RT-LAMP建立了猪水疱病病毒(SVDV)的诊断方法[5]，该方法对血清样本的敏感性相当于实时PCR，对粪便样品的敏感性优于实时PCR。
3链置换扩增3. 1 链置换扩增的原理链置换扩增其原理是基于在靶DNA 两端带有被化学修饰的限制性核酸内切酶识别序列，核酸内切酶在其识别位点将链DNA 打开缺口，DNA 聚合酶延伸缺口3’端并替换下一条DNA 链[6]。
被替换下来的DNA 单链可与引物结合并被DNA聚合酶延伸成双链。
该过程不断反复进行，使靶序列被高效扩增。
SDA 的基本系统包括一种限制性核酸内切酶、一种具有链置换活性的DNA 聚合酶、两对引物、dNTP 以及钙、镁离子和缓冲系统。
3. 2 链置换扩增技术的优势与不足SDA 的优点：（1）扩增效率高，据Walker 等人的报道，采用SDA 扩增结核分枝杆菌总DNA 中的一段序列时，37℃反应2 小时后，可将靶序列扩增106 倍[7]；（2）反应时间短，特异性强，不需要特殊的设备。
SDA 的不足：（1）SDA 产物不均一。
在SDA 循环中总要产生一些单、双链产物，用电泳法检测时必然要出现拖尾现象。
（2）SDA 产物不可能直接用于克隆，测序和表达。
使得SDA 在基因工程方面没有优势；（3）SDA 产物的检测手段有待提高。
目前SDA 产物检测的主导方法是荧光偏振检测，但该检测方法需要特殊的检测仪器---- 荧光分光光度计，这限制了SDA 在临床的广泛应用。
3. 2 链置换扩增在动物疫病检测中的应用当前SDA 方法主要应用于分枝杆菌核酸定性检测、病毒体外进化研究[23]和芯片杂交等方面，还没有运用于动物疫病的检测。
4 依赖核酸序列扩增4. 1 依赖核酸序列扩增的原理依赖核酸序列扩增(NASBA)是在PCR 基础上发展起来的一种新技术。
是由1 对带有T7 启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术，反应在41℃进行，可在2 h 内将模板RNA 扩增109 倍[8]，比常规PCR 法高1000 倍。
4. 2 依赖核酸序列扩增的优势与不足NASBA 技术的优势在于对RNA 病毒的检测，因为：（1）它的引物上带有T7 启动子序列，而外来双链DNA 无T7 启动子序列，不可能被扩增，因此在有DNA 污染的条件下，NASBA 技术同样具有较高的特异性和灵敏度[9]；（2）NASBA 将反转录过程直接合并到扩增反应中，缩短了反应时间。
NASBA 也存在许多缺陷：（1）反应成分比较复杂；（2）需要3 种酶使得反应成本较高；（3）对DNA 病毒的检测上NASBA 就显得不是那么适合。
4. 3 依赖核酸序列扩增在动物疫病检测中的应用NASBA 与LAMP 一样在恒温扩增技术中是相对成熟技术，现在已应用于动物疫病检测中。
我国2004 年发布的8 项禽流感系列标准中，有两项应用了NASBA 检测方法，即GB／T19439-2004~H5 亚型禽流感病毒NASBA 检测方法》和GB／Tl9440-2004《禽流感病毒NASBA 检测方法》[10]。
6 小结动物疫病的检测是一项特殊的检测工作，它一方面需要快速、准确的检测结果，另一方面对检测的成本也有着苛刻的要求。
而恒温扩增技术在很大程度上符合了它的需要，虽然说当前把恒温扩增技术运用于动物疫病的检测还有着不少的缺陷，但它的优越性也是有目共睹的，特别是其中的LAMP 和NASBA 已经逐渐开始运用到动物疫病的检测中。
我们相信通过对恒温扩增技术的不断完善，它必然会和PCR 技术一样成为动物疫病检测中不可缺少的检测手段。
【参考文献】[1] Hobbie J E，Daley R J, and JasperS. Use of nuclepore filters forcountingbacteria by fluorescence microscopy[J].Appl Envir Microbiol，1977，33 (5)：1225-1228[2] 李影，王伟利，钱爱东. 畜产中相关食源性致病菌“活的非可培养状态”的检测策略[J].中国动物检疫，2009，26(1)：46-47[3] Wu HC, Shieh J , W righ t DJ , etal. DNA sequencing using rollingcircleamplification and precision glass syringesin a high-through put liquidhandlingsystem[J ]. Bio techniques, 2003,34 (1) : 2042207 [4]孙晓媛，钱爱东，李影. 三株沙门氏菌VBNC 状态诱导条件的筛选[J]. 中国预防兽医学报，2009，31(1)：193-197[5] Demidov VV. Rolling-circle amplificationin DNA diagnostics: thepowerof simplicity [J]. Expert RevMol Diagn, 2002, 2(6): 542-548[6] Antson DO, lsaksson A, LandegrenU, et a1.PCR-generatedpadlockprobes detect single nucleotide variationin genomic DNA [J].Nucl AcidRes. 2000, 28(12): 58[7]王明俊等.兽医生物制品学［M］. 北京：中国农业出版社，1995[8]孙濯华.中国高新技术产业导报［J］，1997,6[9]姜源等.医学生物技术［M］.北京：人民卫生出版社，1996[10]刘建忠，李宁，熊远等.生物技术通报，1997。