放射免疫检测技术
放射免疫技术
三、关键技术 抗原抗体反应 分离技术 放射性测定 数据处理
（一）抗原抗体反应
Ag
(待检Ag)
Ab
*
固相
牢固
抗原
的抗
抗体
原抗
复合
体复
物
Ab*
合物
（二）分离技术
固相吸附分离技术
一般采用物理吸附法：用碳酸盐缓冲液将预 包被抗体稀释到3μg/ml~10μg/ml，室温过夜， 弃包被缓冲液（含有未结合物质和过剩标记 物），并洗涤去掉结合不牢固抗体，从而达 到分离的目的；然后，再加入1%牛血清白 蛋白溶液，封闭、保存备用。
小结
放射免疫技术是应用放射性核素标记抗原或抗 体，通过免疫反应进行定量测定的一种技术。有 两种类型经典的放射免疫分析（RIA）和免疫放射 分析（IRMA）。
放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞 争性结合限量的抗体;免疫放射分析是将放射性物 质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。
放射性免疫技术灵敏度高、特异性强，常用于 微量物质的定量测定。但由于放射性核素的放射 性对人体和环境会产生一定的危害和污染，因此 操作时必须加以注意。
• 自身置换法测定标记化合物的比放射活性，只 适用于RIA的标记抗原。使用时应注意： ①标记物与未标记物对抗体（受体）的亲和力 应相同； ②非特异性结合应较小，且计算时应扣除； ③制备标准曲线与自身置换曲线时，操作步骤 应相同，特别是B与F分离的条件要一致。
第二节 放射免疫分析
• 放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记 的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争结 合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗原 进行定量测定的一种技术。
IRMA的缺点 抗体用量较多 抗体的纯化较难
RMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇 的肽类或蛋白质。抗体适用于大分子蛋白质和多 肽类激素的检测分析，如肿瘤标志物CA15-3，人 血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH、凝血因子、 降钙素、HBsAg等，某些难以标记的病毒抗原也 可通过IRMA进行检测。
放射免疫检定法
放射免疫检定法一、引言放射免疫检定法（radioimmunoassay，简称RIA）是一种利用放射性同位素标记物质和抗原抗体相互作用进行定量分析的方法。
它具有高度的灵敏度、特异性和准确性，在生物医学研究和诊断中得到广泛应用。
本文将详细介绍放射免疫检定法的原理、操作步骤及其在临床上的应用。
二、原理放射免疫检定法基于抗原与抗体相互结合的特异性，通过测量标记物质（通常是放射性同位素标记的抗原或抗体）与未标记物质（待测物质）竞争结合的程度，来定量测定待测物质的浓度。
该方法主要包括以下步骤：1.样品准备：待测物质需要提取和纯化，以获得精确的浓度。
2.标记物质制备：将待测物质标记上放射性同位素。
3.抗体制备：获得特异的抗体，可通过动物免疫、体外培养等方法获得。
4.标样制备：准备一系列已知浓度的标准样品。
5.标准曲线绘制：将标准样品与已知浓度相对应的竞争剂量进行测定，得到标准曲线。
6.待测样品测定：将待测样品与抗体、标记物质一起孵育，再与固相支持物接触，随后进行放射计数，得到计数值。
7.计算浓度：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
三、操作步骤放射免疫检定法的操作步骤如下：1.准备所需试剂和设备：包括抗体、放射性同位素、标准样品、试剂盒、储存条件等。
2.标记放射性同位素：将待测物质标记上放射性同位素，使其具有放射性活性。
3.样品准备：通过提取和纯化方法，获得待测物质的准确浓度。
4.孵育：将待测样品与抗体和标记物质搅拌混合，使其充分反应。
5.分离：通过固相支持物将未结合的标记物质与结合物质分离开来。
6.放射计数：将分离后的结合物质放入放射计数器中，进行计数。
7.数据处理：根据标准曲线上待测样品的计数值，计算待测物质的浓度。
四、应用放射免疫检定法在临床医学中有着广泛的应用，主要应用于以下方面：1.肿瘤标志物检测：放射免疫检定法能够对血清或尿液中的肿瘤标志物进行测定，用于肿瘤的早期诊断、疗效评价和复发监测。
放射免疫测定法
电泳法
分离单碘化、多碘化及已受损伤的蛋白质
亲和层析法
利用特异抗体或受体结合分离、纯化标记蛋白质
高效液相层析法 分离效果好、快速
ConA吸附法
分离标记糖蛋白
二、RIA操作程序
配制已知浓度系列标准抗原（Ag） 加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
一、基本概念
荧光免疫分析技术：是以荧光素标记抗体或抗原，使其
与相应抗原或抗体结合后，借助荧光检测仪察看荧光现 象或测量荧光强度，从而判断抗原或抗体的存在、定位 和分布情况或检测受检标本中抗原或抗体的含量。
荧光(fluorescence)：物质在吸收光子后，在极短时间
（10-8~10-9s）内激发分子放出波长比激发光波长为长 的可见光。
－
125I
60天 －
0．035
131I
8.05天
0.608，0.335，0.250
0.364，0.637， 0.722
125I的优点
29种同位素，125I最为常用。 半衰期适中（60天），易于商品化和储存，也利于废物处理； 发射低能35kV γ线易于测量，井型闪烁效率高 不发射β粒子，标记物自分解速度低 标记过程中，标记物免疫损伤小 化学性质活泼，标记Ag和Ab容易，可得到多种标记物而广泛应用
(一)、液相法
已知放射标记抗原
待检非标记抗原
分离
+
+
抗体
抗原
抗原抗体结合
沉淀物
上清液中
抗原抗体复合物 游离抗原
（二）、固相法
放射免疫技术的名词解释
放射免疫技术的名词解释放射免疫技术是一种广泛应用于医学和生物学领域的技术，它利用放射性同位素进行标记，通过测定同位素放射性衰变释放的放射性能量来检测和研究生物体内的抗原、抗体和其他分子的存在或相互作用。
本文将探讨放射免疫技术的基本原理、应用范围以及未来发展前景。
1. 基本原理放射免疫技术的基本原理是利用放射性同位素的放射性衰变特性进行检测。
首先，将一个抗原、抗体或其他生物分子与放射性同位素结合，形成放射性标记的复合物。
然后，将该放射性标记物与待检测样品接触，使其与目标抗原或抗体发生特异性反应。
最后，通过测量放射性标记物释放的放射能量来确定样品中目标分子的存在或数量。
2. 应用范围放射免疫技术在医学和生物学领域具有广泛的应用范围。
首先，在医学诊断方面，放射免疫技术可以帮助检测血清中特定抗体或抗原的存在，从而诊断某些疾病或监测病情进展。
例如，通过测定甲状腺功能相关的抗体水平可以诊断自身免疫性甲状腺疾病。
此外，放射免疫技术还可以用于肿瘤标记物的检测，辅助癌症的早期诊断和治疗监测。
其次，在生命科学研究中，放射免疫技术被广泛应用于分子生物学、细胞生物学和免疫学领域。
例如，利用放射免疫技术可以测定特定蛋白质、核酸或其他生物分子的合成速率、代谢路径或相互作用方式。
这些研究有助于我们理解细胞信号传导、基因调控以及免疫应答等生物过程的机制。
3. 发展前景尽管放射免疫技术在医学和生物学领域有着广泛应用，但由于潜在的放射性危险和仪器设备的复杂性，人们对其安全性和可行性提出了一些担忧。
因此，在未来的发展中，放射免疫技术需要与其他新兴的生物检测方法相结合，以实现更高的安全性和灵敏度。
一种可能的发展方向是与光学技术的结合。
近年来，光学生物成像技术得到了迅猛发展，如荧光成像和多光子显微镜。
这些技术可以通过标记荧光染料或量子点等光学探针，实现对生物分子的高分辨率成像。
将光学技术与放射免疫技术相结合，可以充分利用两种技术的优势，实现更准确、灵敏和便捷的检测手段。
放射免疫分析
放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。
由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。
0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。
关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。
核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。
转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。
液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。
放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。
放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。
测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。
简述放射免疫分析方法的基本流程图解
简述放射免疫分析方法的基本流程图解下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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放射免疫分析的原理
放射免疫分析的原理放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种利用放射性同位素标记抗原或抗体来检测物质浓度的技术。
该技术广泛应用于临床诊断、生物化学研究以及药物筛选等领域，具有高灵敏度和高特异性的特点。
放射免疫分析的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合。
抗原是一种能够诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体是一种能够特异性结合抗原的免疫蛋白。
在放射免疫分析中，通常选择特异性结合抗原的抗体，并利用放射性同位素标记抗原或抗体，以便测定样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的步骤一般包括抗原标记、抗体固定、分离和计数等几个关键步骤。
首先，将抗原标记上放射性同位素，通常使用的同位素有碘-125（125I）、碘-131（131I）、氘-3（3H）等。
标记后的放射性抗原具有相对稳定的放射性，可用于测定抗原的浓度。
然后，将已标记的抗原与待测样品中的抗原进行特异性结合，并通过添加抗体来固定放射标记的抗原。
接着，利用分离技术（如沉淀法、凝胶层析法等）将游离的抗体或抗原分离出来。
最后，通过放射计数器测定标记抗原或抗体的放射性强度，从而计算出待测样品中抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的原理基于放射性同位素的高灵敏度和稳定性，使得其具有极高的检测灵敏度和特异性。
相对于传统的免疫分析方法，如酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等，放射免疫分析能够在极低的抗原浓度下进行检测，且能够检测复杂样品中的微量物质。
因此，放射免疫分析广泛用于检测激素、生物分子、药物和疾病标志物等各种生物样品中的微量物质。
然而，放射免疫分析也存在一些局限性，主要是由于放射性同位素的使用带来的放射性污染和辐射风险。
为了克服这一局限性，人们提出了许多新的代替技术，如免疫荧光分析（immunofluorescence assay，IFA）、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。
免疫学检测技术及应用概述
免疫学检测技术及应用概述免疫学检测技术的原理是利用机体产生的特异性抗体与抗原之间的特异性结合反应。
当机体感染病原体或注射外源性抗原后，免疫系统将识别并生成相应的抗体。
免疫学检测技术通过将已知的抗原与待测物进行结合，利用特异性抗体识别和测定待测物的存在与含量。
常见的免疫学检测技术包括免疫荧光、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、免疫电泳、免疫印迹等。
其中，免疫荧光是一种通过将荧光标记的抗体与待检测物结合后，利用荧光显微镜观察来检测抗原或抗体的存在。
ELISA是一种通过将待检测物与酶标记的抗体结合，再利用底物与酶反应来产生颜色变化，通过光密度计读取颜色变化程度来测定待检测物的含量。
RIA则是通过将放射性同位素标记的抗体与待检测物结合，再通过放射性测定来确定待测物的含量。
免疫学检测技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，通过检测病毒或细菌感染所产生的特异性抗体，可以确定患者是否感染此病原体。
免疫学检测还广泛用于肿瘤标志物的检测，根据肿瘤细胞产生的特异性抗原来判断肿瘤的存在与发展程度。
此外，免疫学检测还可用于血型鉴定、妊娠检测、自身免疫性疾病等多个方面的诊断。
免疫学检测技术在生物学研究中也发挥着重要作用。
例如，在分子生物学研究中，通过检测特定的抗体可以确定蛋白质的表达和定位，从而理解其功能。
免疫学检测还可以用于研究免疫系统的功能和异常情况，为疾病的治疗和预防提供参考。
在药物研发中，免疫学检测技术可以用于药物的安全性和有效性评估。
例如，通过检测特定抗体的产生，可以评估疫苗的免疫效果。
免疫学检测技术还可以用于药物代谢和药物动力学研究，为药物的合理应用提供依据。
总之，免疫学检测技术是一项重要的分析和检测技术，广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物研发等领域。
随着技术的不断发展，免疫学检测技术将继续发挥其在疾病诊断、药物研发和生物学研究中的重要作用。
放射免疫技术
复发监测：放射免疫技术可用于监 测肿瘤的复发情况及时发现肿瘤的 复发和转移。
放射免疫技术在心血管疾病诊断中的应用
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的应用原理
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的优势
放射免疫技术简介
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的局限性
放射免疫技术在内分泌疾病诊断中的应用
甲状腺功能亢进 症：通过放射免 疫技术检测甲状 腺激素水平有助 于诊断甲状腺功 能亢进症。
结论与展望
结论
放射免疫技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法在生物医学领域得到了广泛应用。
随着技术的发展和研究的深入放射免疫技术将继续发挥重要作用为生物医学研究提供更多有价值的 信息。
未来随着技术的进步和应用需求的增加放射免疫技术有望实现更快速、更准确、更便捷的检测为临 床诊断和治疗提供更好的支持。
放射免疫技术的 安全性与防护措 施
放射免疫技术的安全性
放射性物质的隔 离和处理
操作人员的安全 培训
防护设备和措施
安全监管和监测
放射免疫技术的防护措施
放射性标识：在放射性物质上贴上 明显的放射性标识以警示工作人员 和周围人群。
防护设备：提供适当的防护设备如 手套、口罩、眼镜等以减少工作人 员接触放射性物质的量。
添加项标题
内分泌疾病诊断：放射免疫技术可用于检测内分泌激素及相关抗 体如甲状腺激素、肾上腺皮质激素等。
添加项标题
自身免疫性疾病诊断：放射免疫技术可用于检测自身抗体如抗核 抗体、类风湿因子等辅助诊断自身免疫性疾病。
添加项标题
感染性疾病诊断：放射免疫技术可用于检测感染性疾病相关的抗 原或抗体如乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等。
放射免疫技术
汇报人：
放射科技术在放射免疫测定中的应用
新型放射性同位素开发及应用前景
01 02
新型放射性同位素的研发
随着科技的进步，越来越多的新型放射性同位素被开发出来，如锕系元 素等，这些同位素具有更长的半衰期和更低的辐射危害，为放射免疫测 定提供了更多的选择。
放射性同位素标记技术的发展
放射性同位素标记技术是放射免疫测定的核心技术之一，未来将继续发 展更高效、更特异的标记方法，提高测定的准确性和灵敏度。
生物医学研究
放射免疫测定可用于研究生物活性物质的分布、代谢和排泄等过程， 揭示生命活动的本质和规律。
药物研发
放射免疫测定可用于药物研发过程中的药物筛选、药代动力学研究和 临床试验等环节，为新药研发提供有力支持。
环境科学
放射免疫测定可用于环境监测和污染治理等领域，如放射性污染物的 定量测定和环境样品中微量有害物质的检测等。
02
放射科技术基础
Chapter
放射性同位素及其衰变规律
01
02
03
放射性同位素
具有不稳定原子核并自发 地放射出射线的同位素， 如碳-14、氢-3等。
衰变规律
放射性同位素衰变遵循指 数衰变规律，其衰变速度 与剩余原子核数量成正比 。
半衰期
放射性同位素衰变至原有 数量一半所需的时间，具 有恒定的物理特性。
放射科技术在放射免疫测定中 优势与局限性
Chapter
优势分析
高灵敏度
高特异性
放射科技术能够检测到极低浓度的放射性 同位素，使得放射免疫测定具有高灵敏度 ，能够检测到极低浓度的生物标志物。
放射免疫测定利用抗原-抗体反应的特异性 ，结合放射性同位素的检测，确保测定的 准确性和特异性。
宽测量范围
自动化程度高
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六、核废物的处理
1、放射性废水的处理 放射性废水的处理方法主要有稀释排放法、放置衰变法、混 凝沉降法、离子变换法、蒸发法、沥青固化法、水泥固化法 、塑料固化法以及玻璃固化法等。 2、放射性废气的处理 (1)铀矿开采过程中所产生废气、粉尘，一般可通过改善操作 条件和通风系统得到解决。 (2)实验室废气，通常是进行预过滤，然后通过高效过滤后再 排出。 (3)燃料后处理过程的废气，大部分是放射性碘和一些惰性气 体。 3、放射性固体废物的处理和处置 放射性固体废物主要是被放射性物质污染而不能再用的各种 物体 (1)焚烧 (2)压缩 (3)去污 (4)包装
• 5．提取及层析分离过程中的丢失。，采用一般 的物理、化学及生物学的方法都不能将 其消灭或破坏，只有通过放射性核素的 自身衰变才能使放射性衰减到一定的水 平。而许多放射性元素的半衰期十分长 ，并且衰变的产物又是新的放射性元素 ，所以放射性废物与其它废物相比在处 理和处置上有许多不同之处。
一、放射免疫检测技术的基本原理
6、放射性标记物的纯化 可用葡聚糖凝胶过滤法或薄层层析法、 纸层析法、电泳法、高效液相层析法等。 理想的放射性标记物： 高放射化学纯度 适当的比放射性 高的免疫活性。
一、放射免疫检测技术的基本原理
7、理想的分离技术
①简便易行，适于大批量样品分析; ②分离效果完全、快速，非特异结合低; ③试剂来源容易、价格低廉、稳定性好、可长 期保存; ④不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对 标准品和待测抗原分离效果相同; ⑤适合自动化分析的要求。
缺点 • IRMA抗体用量偏多 • 抗体的特异性纯化较难 （如用单克隆抗体可克服这些缺点） 。
四、RIA与IRMA的比较
放射免疫分析（RIA） 是放射免疫技术最经典 的模式。它是以放射性 免疫放射分析（IRMA ）是用放射性核素标记
的过量抗体与待检测抗
原直接结合，采用固相 免疫吸附载体分离结合 与游离标记抗体的非竞 争性放射免疫分析。
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念 ⑶放射性比活度：是指固体样品的放射 性活度，即单位质量样品中所含放射性 活度，以Bq/g或Bq/mmol表示 。 ⑷放射性浓度：是指液体样品的放射性 活度，即单位体积溶液中所含放射性活 度，以Bq/ml表示。
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念 ⑸比活度：是单位质量标记物的放射强度， 单位为Bq/g。 标记抗原的比放射性越高，所需标记 抗原量越少，实验系统的敏感度越高。 但过高的比放射性可能会损伤抗原的 免疫活性。如碘标记化合物以单碘标记为 宜。
三、免疫放射分析（IRMA）
2、技术路线 抗体包被反应管—→待测抗原—→过量 的标记抗体—→抗原抗体反应（温育）—→
平衡—→分离Ag-※Ab+ ※Ab—→放射性强度
测定—→绘制标准曲线—→计算待测抗原量
三、免疫放射分析（IRMA）
3、方法学评价
优点
• • • • 敏感性高 特异性高 标记物稳定，标记容易。 结果稳定
一、放射免疫检测技术的基本原理
9、核射线探测仪器的探测原理 核射线探测器是个能量转化 器，其检测原理是当射线作用于 闪烁体，闪烁体吸收了射线的能 量而引起闪烁体中的原子或分子 激发，当受激的原子或分子退激 时，则发出光子进入光电倍增管 光阴极，转换为光电子，光电子 在光电倍增管电场作用下到达阳 极，形成电脉冲。 转换模式：放射能→光能→电 能→脉冲。
二、放射免疫分析（RIA）
二、放射免疫分析（RIA）
2、分类 根据加样顺序不同，RIA可分为2个类型： • ①平衡法 将Ag和※Ag同时与Ab反应，达到平衡后 分离※Ag-Ab和※Ag，方法稳定，但敏感度 稍差； • ②顺序饱和法 先将待测Ag与Ab充分反应，达平衡后再加 入※Ag，敏感度提高，稳定性不如平衡法。
二、放射免疫分析（RIA）
4、方法学评价
优点 ①敏感度高，能测到μ g/L，甚至可测到ng/L或 pg/水平； ②特异性强，与结构类似物质间的交叉反应少； ③准确性好，重复性好，批间批内误差低； ④用血量少。 缺点 ①有放射性核素对环境和实验室污染； ②放射性核素易衰变以及放射性标记物不稳定， 导致试剂有效期短。
或B或F的cpm（脉冲）值，常选用B/B0比值作为参数。横 坐标为已知测定物标准品的浓度，以算术数或对数表示。放 射免疫分析的标准曲线为双曲线。 ⑶根据待测抗原管的放射性强度计算相应反应参数值，再从标
准曲线图上查得待测抗原相应含量。
RIA标准曲线的类型
（1）以测定物标准品浓度为横坐标，B%或B/F、B/B0、计数（cpm） 为纵坐标，呈双曲函数； （2）以测定物标准品浓度的对数为横坐标，B%或B/F、B/B0、cpm为 纵坐标，曲线呈反S型； (3）以标准品浓度的算术数（或对数）为横坐标，F/B（或B0/B） 为纵坐标，呈双曲函数； （4）以标准品浓度的对数为横坐标， logitB/B0为纵坐标， 标准曲线为从左到右的渐降直线。
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念 ⑴放射性核素：是指原子核能自发地产生成分或 能级的变化，在变化时伴有射线的发射（放射 性），然后变成另一种元素的核素。
放射量单位有: ①放射性活度 ②放射性比活度 ③放射性浓度
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念 ⑵放射性活度：一定量的放射性核素在 单位时间内的核衰变数，即每秒核衰变 次数。 单位：贝可勒尔(Becquerel，Bq) 1Ci=3.7×1010Bq
一、放射免疫检测技术的基本原理
8、免疫复合物分离常用方法
⑴.吸附法 用吸附剂 (如活性炭)吸附小分子的游离。 ⑵.化学沉淀法 RIA反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇(PEG)等蛋白质沉淀 剂可破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离B与F。 ⑶.双抗体法 利用抗抗体和※Ag-Ab复合物中的抗体结合，形成更大免疫复合物， 离心沉淀即可分离B与F。 ⑷.PR试剂 将双抗体法和PEG结合起来的沉淀法，可弥补各自的不足，分离效果 好，适用范围广。 ⑸.固相分离法 将抗体或抗原结合在固相载体（如磁颗粒、聚苯烯管子或珠等）上， 利用固相抗体或抗原分离B和F，具有简便、快速、适合于自动化分析等 特点，已逐步取代传统的液相分离方法。
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念 ⑹放射化学纯度：是指结合于抗原上的放 射强度占总放射强度的百分率。 影响因素: ①被标记物不纯，杂质也被放射性核素标 记； ②标记后的分离纯化不完全； ③标记化合物贮存过程中的碘脱落。
一、放射免疫检测技术的基本原理
1、7个基本概念
⑺免疫活性：指标记抗原结合于抗体的 放射强度占总放射强度的百分率。 以检查标记后免疫活性损失情况。
核素标记抗原与反应系
统中未标记抗原竞争性 结合特异性抗体为基本 原理来测定待检样品中 抗原量的一种分析方法
。
二者的异同点如下： ①标记物 RIA 以放射性核素标记抗原；IRMA 则是标记 抗体。 ②反应速率 IRMA 反应速度比RIA 快。 ③反应原理 RIA 为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗 原量成反相关；IRMA为非竞争结合，反应参数与待 检抗原成正相关。 ④特异性 IRMA 特异性较RIA高。 ⑤灵敏度和检测范围 IRMA测定的灵敏度明显高于RIA ， IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1~2个数量级。 ⑥其他 RIA 所用抗体为多克隆抗体，对亲和力和特异性 要求较高，但用量很少；IRMA 为试剂过量的反应， 对抗体亲和力的要求不及 RIA，但用量大。此外， RIA 可以测量半抗原，但IRMA只能测定至少有两个 以上表位的抗原。
标记方法 对标记化合 物影响 测量方法
方法简便，易获得高 比放射性标记物 标记时以I代替H1改 变物质结构，可影响 抗原免疫学活性 方法简便、效率高 γ 计数器 60.2天 处理容易
方法较难，不易获得 高比放射性标记物 不改变抗原结构，一 般不影响抗原免疫活 性 方法复杂，效率低 液体闪烁计数器 约11年 较难
四、RIA与IRMA的比较
五、放射免疫分析中造成测量误差的因 素
误差包括系统误差和随机误差。系统误差发生在测量过程中由于仪器不准 、试剂不纯、标准品不稳定等原因，使测定结果呈倾向性偏大或偏小，这种误 差应力求避免。随机误差是测量过程中各种偶然因素造成的，没有固定的倾向 性，这类误差是不可避免的，必要时做统计学处理。 造成误差的可能来源有以下几个方面： • 1．各种仪器：设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差 。如：①由于放射性测量仪器的稳定性、效率、样品试管的材料和均匀性及被 测物的放射性强度等原因。②由于样品的自吸收，本底校正，测定时间，可能 的污染等原因。③在试验室中所有的移液管、微量取样器以及天平的刻度、校 准和使用方法等原因。④由于反应试管、移液管以及测定用试管等表面清洁度 和所引起的不同吸附等原因都可以对测定结果带来误差。 2．试剂的纯度、质量和稳定性的影响也是造成误差的重要因素。如标记抗 原的比度、纯度，辐射自分解，抗体的稳定性，分离剂、阻断剂及缓冲液等试 剂的纯度等。
三、免疫放射分析（IRMA）
1、原理
属于非竞争性免疫结合反应。是将放 射性同位素标记在抗体上，用过量的标记 抗体(Ab)与待测抗原反应，反应式为 Ag+※Ab=Ag-※Ab+ ※Ab。待充分反应后 ，除去游离的标记抗体，Ag-※Ab结合物的 放射性强度与待测抗原量呈正比关系，即 待测抗原含量越多，则复合物的计数率就 越高，反之则越低。
二、放射免疫分析（RIA）
3、数据处理
⑴根据放射性核素的类型分别选用液体闪烁计数仪（β型）和γ
计数仪（γ型），测定各待测标本和备抗原标准品的※Ag-Ab
放射性强度 (B)或游离※Ag放射性强度 (F)。 ⑵制作标准曲线时，纵坐标为放射性反应参数，有各种表示方
式，可选用B/F、B/（B＋F）、F/B、B/B0（零标准管）等比值
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五、放射免疫分析中造成测量误差的因 素