放射免疫技术概述
放射免疫技术
三、关键技术 抗原抗体反应 分离技术 放射性测定 数据处理
（一）抗原抗体反应
Ag
(待检Ag)
Ab
*
固相
牢固
抗原
的抗
抗体
原抗
复合
体复
物
Ab*
合物
（二）分离技术
固相吸附分离技术
一般采用物理吸附法：用碳酸盐缓冲液将预 包被抗体稀释到3μg/ml~10μg/ml，室温过夜， 弃包被缓冲液（含有未结合物质和过剩标记 物），并洗涤去掉结合不牢固抗体，从而达 到分离的目的；然后，再加入1%牛血清白 蛋白溶液，封闭、保存备用。
小结
放射免疫技术是应用放射性核素标记抗原或抗 体，通过免疫反应进行定量测定的一种技术。有 两种类型经典的放射免疫分析（RIA）和免疫放射 分析（IRMA）。
放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞 争性结合限量的抗体;免疫放射分析是将放射性物 质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。
放射性免疫技术灵敏度高、特异性强，常用于 微量物质的定量测定。但由于放射性核素的放射 性对人体和环境会产生一定的危害和污染，因此 操作时必须加以注意。
• 自身置换法测定标记化合物的比放射活性，只 适用于RIA的标记抗原。使用时应注意： ①标记物与未标记物对抗体（受体）的亲和力 应相同； ②非特异性结合应较小，且计算时应扣除； ③制备标准曲线与自身置换曲线时，操作步骤 应相同，特别是B与F分离的条件要一致。
第二节 放射免疫分析
• 放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记 的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争结 合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗原 进行定量测定的一种技术。
IRMA的缺点 抗体用量较多 抗体的纯化较难
RMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇 的肽类或蛋白质。抗体适用于大分子蛋白质和多 肽类激素的检测分析，如肿瘤标志物CA15-3，人 血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH、凝血因子、 降钙素、HBsAg等，某些难以标记的病毒抗原也 可通过IRMA进行检测。
《放射免疫技术》课件
放射免疫技术的应
06
用案例
肿瘤标志物的检测
肿瘤标志物
放射免疫技术用于检测与肿瘤相 关的生物活性物质，如癌胚抗原 （CEA）、甲胎蛋白（AFP）等 ，有助于肿瘤的早期发现和诊断 。
应用范围
放射免疫技术广泛应用于临床肿 瘤的筛查、诊断、病情监测以及 疗效评估，为肿瘤患者提供个性 化的治疗方案。
内分泌激素的检测
试剂的验证
对试剂进作流程的规范
制定详细、规范的操作流程，确保检测过程的准确性和可靠性。
操作人员的培训
对操作人员进行专业培训，提高其技能水平和责任心。
操作过程的监控
对操作过程进行实时监控，及时发现并纠正操作中的问题。
放射免疫技术的优
05
缺点
优点
高灵敏度
放射免疫技术具有很高的灵敏度，可 以检测出极低浓度的蛋白质、激素和 其他生物分子。
特异性
该技术利用抗体与抗原的特异性结合 ，能够准确地检测目标分子，减少了 背景干扰。
可定量
通过测量放射性计数，可以定量分析 样本中目标分子的浓度，提供更准确 的定量数据。
易于自动化
随着技术的发展，放射免疫分析已经 实现了自动化，提高了检测效率。
。
放射性标记物通常为放射性同位 素标记的抗原或抗体，与未标记 的抗原或抗体竞争性结合特异性
抗体或抗原。
通过测量放射性标记物的信号强 度，可以推算出待测抗原或抗体
的浓度。
放射免疫分析的类型
竞争性放射免疫分析
在待测抗原和标记抗原同时存在的条 件下，竞争性地与有限量的特异性抗 体结合。
非竞争性放射免疫分析
缺点
放射性危害
半衰期限制
使用放射性同位素作为标记物可能对实验 人员和环境造成潜在的危害，需要采取严 格的防护措施。
放射免疫法
放射免疫法放射免疫法是一种免疫学技术，它采用放射性核素抑制胞质蛋白的表达来抑制细胞的增殖。
它能够抑制或延迟细胞的分裂过程，从而使细胞形成软疣或小肿块，这是保护免疫系统的一种重要方法。
放射免疫法主要用于治疗恶性肿瘤，如肝癌、乳腺癌、胰腺癌，以及其他可能会侵犯人体重要器官的恶性肿瘤，如肺癌、胃癌等。
它的原理是，放射性核素会通过穿过表皮，在被治疗的组织和细胞内形成一个有放射性物质的小区域，从而使细胞蛋白合成减少，从而阻止细胞分裂。
它能够减少细胞生长，从而降低肿瘤的恶化程度，预防肿瘤转移和抑制肿瘤生长，减少肿瘤细胞数量，从而保护整个机体免疫功能。
放射免疫法也可以用于治疗免疫系统疾病，如慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、原发性结节性淋巴组织炎等。
它可以减轻病情，避免发病频率和严重程度的增加。
放射免疫法还可以用于治疗肝炎、肺炎、细菌感染等感染性疾病。
它能够有效抑制细菌繁殖，减轻恶性病变，减少炎症，从而改善病情。
放射免疫法也可以用于介入性治疗，如血液透析、植入支架和血管内腔支架等介入性手术。
这种技术可以有效阻止血栓形成，降低手术中出血和感染的可能性，并保护血管内壁的完整性，可以有效改善患者病情。
放射免疫法是一种高科技的技术，对肿瘤疾病的治疗具有重要的作用。
然而，这项技术的使用也会带来一定的副作用，如皮肤刺激、发热、出血、头痛等，因此在使用放射免疫法治疗恶性肿瘤时，应仔细评估患者情况，避免治疗过度。
总之，放射免疫法是一种用于治疗恶性肿瘤和免疫系统疾病的有效技术，属于免疫学的一种技术，它的使用可以帮助患者减轻恶性病变，改善患者的病情。
但是，也要注意把握治疗范围，避免采取过度的治疗措施，以免引起不良的副作用。
放射免疫技术
分离剂要求
• 快速而完全分离 • 操作简便、来源容易、价格便宜 • 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰 • 适用于任何容积的反应液 • 非特异结合率小
（三）数据处理
放射性核素
• 自然界的放射性现象
• 常见的标记用放射性核素
标记方法：
125I 标记方法： 直接法-氯胺T法 间接法
间接法（连接法）
OH NSHPP
氯胺T
OH 125I
+ Na125I
CH2
O
H-C-C-O-N-C-CH2
H O O=C-C-CH2
CH2
O
H-C-C-O-N-C-CH2
H O O=C-C-CH2
β液闪仪
γ计数器
第二节 放射免疫分析
一. 基本原理：
Ag★ + Ab + Ag
Ag - Ab
Ag★-Ab
二. 测定方法
三个步骤：
抗原、抗体反应 B、F的分离 放射性的测定,数据处理
（一）抗原、抗体反应
1. 反应的模式： Ag +Ag*+Ab
一步法, 两步法
2. 反应温度与时间
（二） B、F分离技术
• 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种 类型：RIA和IRMA。
第一节 概述
1.概念： 2. 分类：
经典的放射免疫测定 （Radioimmunoassay,RIA) 免疫放射测定 （immunoradiometric assay, IRMA)
一、放射性核素的标记
放射免疫技术的名词解释
放射免疫技术的名词解释放射免疫技术是一种广泛应用于医学和生物学领域的技术，它利用放射性同位素进行标记，通过测定同位素放射性衰变释放的放射性能量来检测和研究生物体内的抗原、抗体和其他分子的存在或相互作用。
本文将探讨放射免疫技术的基本原理、应用范围以及未来发展前景。
1. 基本原理放射免疫技术的基本原理是利用放射性同位素的放射性衰变特性进行检测。
首先，将一个抗原、抗体或其他生物分子与放射性同位素结合，形成放射性标记的复合物。
然后，将该放射性标记物与待检测样品接触，使其与目标抗原或抗体发生特异性反应。
最后，通过测量放射性标记物释放的放射能量来确定样品中目标分子的存在或数量。
2. 应用范围放射免疫技术在医学和生物学领域具有广泛的应用范围。
首先，在医学诊断方面，放射免疫技术可以帮助检测血清中特定抗体或抗原的存在，从而诊断某些疾病或监测病情进展。
例如，通过测定甲状腺功能相关的抗体水平可以诊断自身免疫性甲状腺疾病。
此外，放射免疫技术还可以用于肿瘤标记物的检测，辅助癌症的早期诊断和治疗监测。
其次，在生命科学研究中，放射免疫技术被广泛应用于分子生物学、细胞生物学和免疫学领域。
例如，利用放射免疫技术可以测定特定蛋白质、核酸或其他生物分子的合成速率、代谢路径或相互作用方式。
这些研究有助于我们理解细胞信号传导、基因调控以及免疫应答等生物过程的机制。
3. 发展前景尽管放射免疫技术在医学和生物学领域有着广泛应用，但由于潜在的放射性危险和仪器设备的复杂性，人们对其安全性和可行性提出了一些担忧。
因此，在未来的发展中，放射免疫技术需要与其他新兴的生物检测方法相结合，以实现更高的安全性和灵敏度。
一种可能的发展方向是与光学技术的结合。
近年来，光学生物成像技术得到了迅猛发展，如荧光成像和多光子显微镜。
这些技术可以通过标记荧光染料或量子点等光学探针，实现对生物分子的高分辨率成像。
将光学技术与放射免疫技术相结合，可以充分利用两种技术的优势，实现更准确、灵敏和便捷的检测手段。
放射免疫分析
放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。
由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。
0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。
关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。
核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。
转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。
液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。
放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。
放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。
测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。
放射免疫法原理
放射免疫法原理放射免疫法是一种常用的实验室技术，用于检测和测量特定抗原或抗体的存在。
它的原理是利用放射性同位素标记抗原或抗体，使其能够被检测到。
这种技术在医学、生物学和生化学等领域中广泛应用。
放射免疫法的原理是基于免疫学的基础。
当人体感染病原体时，免疫系统会产生抗体来对抗病原体。
这些抗体可以识别和结合特定的抗原，从而中和或清除病原体。
放射免疫法利用这种特性来检测和测量抗原或抗体的存在。
放射免疫法的步骤如下：1. 标记抗原或抗体：将放射性同位素标记与特定的抗原或抗体结合。
这种标记通常是放射性碘或放射性钴。
2. 混合样品：将标记的抗原或抗体与待测样品混合。
如果待测样品中存在特定的抗原或抗体，则它们将与标记的抗原或抗体结合。
3. 分离复合物：使用特定的技术，如沉淀或凝胶过滤，将复合物分离出来。
复合物是由标记的抗原或抗体与待测样品中的特定抗原或抗体结合形成的。
4. 测量放射性：使用放射计测量分离出的复合物中的放射性。
放射性的测量可以确定待测样品中特定抗原或抗体的存在量。
放射免疫法具有高灵敏度和高特异性的优点。
它可以检测到非常低浓度的抗原或抗体，并且可以区分不同种类的抗原或抗体。
因此，它被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
总之，放射免疫法是一种重要的实验室技术，它利用放射性同位素标记抗原或抗体来检测和测量它们的存在。
它的原理基于免疫学的基础，具有高灵敏度和高特异性的优点。
它在医学、生物学和生化学等领域中有广泛的应用。
放射免疫技术
复发监测：放射免疫技术可用于监 测肿瘤的复发情况及时发现肿瘤的 复发和转移。
放射免疫技术在心血管疾病诊断中的应用
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的应用原理
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的优势
放射免疫技术简介
放射免疫技术在心血管疾病 诊断中的局限性
放射免疫技术在内分泌疾病诊断中的应用
甲状腺功能亢进 症：通过放射免 疫技术检测甲状 腺激素水平有助 于诊断甲状腺功 能亢进症。
结论与展望
结论
放射免疫技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法在生物医学领域得到了广泛应用。
随着技术的发展和研究的深入放射免疫技术将继续发挥重要作用为生物医学研究提供更多有价值的 信息。
未来随着技术的进步和应用需求的增加放射免疫技术有望实现更快速、更准确、更便捷的检测为临 床诊断和治疗提供更好的支持。
放射免疫技术的 安全性与防护措 施
放射免疫技术的安全性
放射性物质的隔 离和处理
操作人员的安全 培训
防护设备和措施
安全监管和监测
放射免疫技术的防护措施
放射性标识：在放射性物质上贴上 明显的放射性标识以警示工作人员 和周围人群。
防护设备：提供适当的防护设备如 手套、口罩、眼镜等以减少工作人 员接触放射性物质的量。
添加项标题
内分泌疾病诊断：放射免疫技术可用于检测内分泌激素及相关抗 体如甲状腺激素、肾上腺皮质激素等。
添加项标题
自身免疫性疾病诊断：放射免疫技术可用于检测自身抗体如抗核 抗体、类风湿因子等辅助诊断自身免疫性疾病。
添加项标题
感染性疾病诊断：放射免疫技术可用于检测感染性疾病相关的抗 原或抗体如乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等。
放射免疫技术
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第一节 放射性核素和放射性标记物的制备 • 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物， 选择何种放射性核素以及如何制备放射标 记物（将放射性核素与抗原或抗体连接）， 是建立放射免疫技术的基础。
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一、放射性核素的基本知识
• 基本概念 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种
放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时
• 检测免疫复合物的放射性，从而得到待检样本的
浓度。
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二、方法与类型
（一）单位点 IRMA
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（二）双位点 IRMA
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三、关键技术 抗原抗体反应 分离技术 放射性测定 数据处理
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（一）抗原抗体反应
*
Ag
(待检Ag)
Ab
固相 抗原 抗体 复合 物
Ab*
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前 言
• 放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点 和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体 外测定超微量物质的新技术。 • 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体， 通过免疫反应进行定量测定。 • 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试 剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医 学检验中得到了广泛应用。 • 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两 种类型：RIA和IRMA。
结果欠准，计算简便
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比放射性－自身置换法
比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定 标记物的比放射性。
作一条常规的RIA标准曲线，反应体系包括定 量标记抗原、不同浓度的非标记标准品抗原、 限量抗体；同时另作一条不加非标记标准品、 只加抗体和不同剂量的标记抗原的自身置换曲 线。
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（三）数据处理
晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm)
参数 cpm
B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%)
注：T即是B与F的总和
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四、评价与应用
IRMA的优点 效率高、操作简便 灵敏度高 特异型强 稳定性好 IRMA的缺点 抗体用量较多 抗体的纯化较难
释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 • 基本类型 依据其衰变方式 α衰变、β衰变、γ衰变 最常用的放射性核素是125I
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125I的优点
• 化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得 高比活性的标记物； • 在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高； • 半衰期适中（60天左右），且废弃物较容易处理。
Ch-T、 LPO氧化
125I或125I+
取代反应
125I-标记物
（混合物）
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使用无还原剂的 高比放射性碘源 被标记物用量要 少 Ch-T用量要低 控制总反应体积 <200μl 反应时间1分钟 ~2分钟 弱碱性反应条件 人民卫生出版社
（二）间接标记法
预先将125I用Ch-T法标 记琥珀酰胺酯，制成的 125I 化脂功能基团可与 蛋白分子上的氨基酸残 基反应，从而使待标记 物被碘化。
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第三节 免疫放射分析
• 免疫放射分析（IRMA）是从放射免疫分析 （RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫 测定，其特点为用核素标记的抗体直接与 待检抗原反应，并用固相免疫吸附剂作为B 或F的分离手段。
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一、检测原理
• IRMA属于非竞争性免疫结合反应，其基本检测
原理是将放射性核素（125I）标记在抗体上，并 用过量的标记抗体与待测抗原进行非竞争性结合 反应，并采用固相免疫吸附方式对B和F进行分离。
免疫学检验
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第十九章 放射免疫技术
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本章要点
1. 2. 3. 4.
放射免疫技术的基本概念及类型 放射标记物的鉴定与纯化。 RIA和IRMA的测定原理及关键技术。 RIA和IRMA的临床应用与评价
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目
1 2 3
录
放射性核素和放射性标记物的制备 放射免疫分析性 免疫放射分析
分离彻底，迅速 分离试剂和过程不 影响反应平衡 效果不受反应介质 影响 操作应简单、重复 性好 经济
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（三）数据处理
晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm)
参数 cpm
B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%)
标准曲线
注：T即是B应用
RIA由于具有敏感度高、特异性强、精密度高、 重复性好、用血量少、可测定小分子量和大分子 量物质等优点，在医学检验中应用极为广泛，常 用于各种激素和药物等的测定。 但由于放射性核素的放射性对人体会产生一定 的危害性，且其废物的储存和销毁会对环境造成 污染，因此操作时必须加以注意。
RMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇 的肽类或蛋白质。抗体适用于大分子蛋白质和多 肽类激素的检测分析，如肿瘤标志物CA15-3，人 血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH、凝血因子、 降钙素、HBsAg等，某些难以标记的病毒抗原也 可通过IRMA进行检测。
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小
结
放射免疫技术是应用放射性核素标记抗原或抗 体，通过免疫反应进行定量测定的一种技术。有 两种类型经典的放射免疫分析（RIA）和免疫放射 分析（IRMA）。 放射免疫分析是待测抗原和定量的标记抗原竞 争性结合限量的抗体;免疫放射分析是将放射性物 质标记在抗体上，属于非竞争性免疫结合反应。 放射性免疫技术灵敏度高、特异性强，常用于 微量物质的定量测定。但由于放射性核素的放射 性对人体和环境会产生一定的危害和污染，因此 操作时必须加以注意。
牢固 的抗 原抗 体复 合物
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（二）分离技术
固相吸附分离技术 一般采用物理吸附法：用碳酸盐缓冲液将预 包被抗体稀释到3μg/ml~10μg/ml，室温过夜， 弃包被缓冲液（含有未结合物质和过剩标记 物），并洗涤去掉结合不牢固抗体，从而达 到分离的目的；然后，再加入1%牛血清白 蛋白溶液，封闭、保存备用。
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三、放射标记物的纯化与鉴定 （一）放射标记物的纯化
因游离的125I与 125I标记抗原（抗 体）分子的大小 相差悬殊，故采 用凝胶层析即可 进行分离纯化
标记蛋白
聚合、 损伤物
游离125I
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（二）放射标记物的鉴定
放射化学纯度 单位标记物 中结合于被标 记物上的放射 性占总放射性 的百分率 应大于95% 免疫活性 标记物与抗体 结合的能力 标记物与过量 抗体反应百分比 该值越大, 标 记物免疫活性好
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第二节 放射免疫分析
• 放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标 记的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争 结合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗 原进行定量测定的一种技术。
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一、检测原理
RIA属于竞争性分析， 其基本原理是由于Ag* 和Ag（待测物Ag)对特 异性抗体具有相同的结 合力，当三者同时存在 于同一反应体系时， Ag*和Ag相互竞争结合 特异性抗体。
Ag*和Ag具有等同的
与Ab结合能力
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Ab限量，Ag*定量, Ag*和Ag的量大于 Ab结合位点，二者 通过竞争方式与Ab 结合；随着Ag增加， Ag*与Ab结合形成 Ag*Ab复合物的放 射量降低,二者变化 成函数关系。
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二、方法与类型
平衡法，即标记抗原、标准品抗原（或 待检样本）、特异性抗体同时加入反应 体系中。 非平衡法，即标准品抗原（或待检样 本）和特异性抗体，优先使非标记抗 原与特异性抗体达到平衡，然后再加 入标记抗原竞争与抗体结合。
125I的缺点
• 用125I取代H，可能使原物质免疫活性受到影响； • 易因发生辐射损伤而使标记抗原变性； • 作为商品化试剂的产品货架期较短。
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放射性核素放射活性的检测
利用射线照射闪烁体（NaI晶体），导致晶体 分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长 的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换 成光电子并放大107倍；从光电倍增管输出的 电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处 理，并在定标器上显示。
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二、放射性核素标记抗原抗体方法
直接标记法（氯胺T法） 主要包括 间接标记法
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（一）直接标记法——氯胺T法（Ch-T）
氯胺T将125I的I－氧化
125I-
为I+，I+取代蛋白质 酪氨酸苯环的氢，形 成稳定的放射标记物 （二碘酪氨酸），最 后加入偏重亚硫酸钠 （还原剂）终止反应。
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两种类型
(标准Ag/样品Ag)
三、关键技术 抗原抗体反应 分离结合标记物（分离技术） 放射性测定 数据处理
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（一）抗原抗体反应
Ag*
反应条件 体积 温度 时间 pH
Ag
Ab
牢固 的抗 原抗 体复 合物
(标准Ag/样品Ag)
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（二）分离结合标记物
二抗体沉淀法 PEG 沉淀法 PR 试剂法 活性炭吸附法
自身置换曲线 标准曲线
反应平衡后，测定B/T%。 若从两条曲线上取一点相同的B/T%， 则（标记物+标准品）标准曲线= （标记物） 自身置换曲线。由此便可直接计算 标记抗原的含量，并进一步求得比 放射活性 。
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• 自身置换法测定标记化合物的比放射活性，只 适用于RIA的标记抗原。使用时应注意： ①标记物与未标记物对抗体（受体）的亲和力 应相同； ②非特异性结合应较小，且计算时应扣除； ③制备标准曲线与自身置换曲线时，操作步骤 应相同，特别是B与F分离的条件要一致。