乙肝五项金标法原理
乙肝五项
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金xxSOP）一、预期用途乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）适用于检测血清或血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e 抗原、e抗体、核心抗体。
乙型肝炎一般临床主要表现为乏力、食欲减退、恶心、呕吐、肝肿大及肝功能异常，部分病人可有黄疸和发热。
有些患者出现荨麻疹、关节痛或上呼吸道症状，部分病人有皮肤黝黑，进行性脾肿大、蜘蛛痣、肝掌等表现。
但部分慢性乙肝无明显症状，但在病理上会出现肝小叶内炎症和肝细胞变性坏死，严重者会发生纤维化，甚至肝硬化。
二、检验原理乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg 反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。
分析乙肝的五项标准
分析乙肝的五项标准引言乙肝病毒感染是一种全球性公共卫生问题，其传播途径多样，感染的患者数量也相当庞大。
乙肝病毒感染可以导致急性和慢性乙型肝炎，严重时甚至可引起肝硬化和肝癌。
乙肝的早期诊断和治疗是预防其后续并发症的关键。
本文将分析乙肝的五项标准，旨在帮助医务人员更好地理解和判断患者乙肝感染的情况。
一、HBsAg（乙型肝炎表面抗原）检测HBsAg是乙肝病毒的表面抗原，是乙肝感染最主要的标志物。
其检测通过血清学方法进行，可使用酶免疫法或化学发光法等不同的技术。
阴性结果表示没有HBsAg存在，正常人群中少数人可能呈现假阴性结果。
阳性结果表示该患者感染了乙肝病毒，但不能判断感染的时间和病情。
HBsAg阳性的患者需要进一步进行其他标志物的检测。
二、HBeAg（乙型肝炎e抗原）检测HBeAg是乙肝病毒在感染者血液中的标志物，通常与HBsAg同时存在。
HBeAg阳性表示乙肝病毒处于高度复制和传染性的状态，患者可以通过血液和其他体液传播病毒。
HBeAg阴性则表示乙肝病毒复制较少，并且感染性较低。
HBeAg阳性的患者需要密切监测和采取相应的预防措施，以避免传播给其他人。
三、抗-HBc（乙型肝炎内核抗体）检测抗-HBc是抗体，用于检测乙肝病毒感染者体内抗-HBc的存在情况。
抗-HBc可以细分为IgM和IgG两种类型。
IgM抗-HBc阳性表示感染者对乙肝病毒的感染处于急性期，伴随着病毒的复制和肝细胞损伤。
IgG抗-HBc阳性则表示感染已经过去一段时间，但不能确定乙肝病毒感染的转归和复发情况。
同时，抗-HBc阳性还可以指示可能出现其他乙型肝炎相关的疾病。
四、抗-HBs（乙型肝炎表面抗体）检测抗-HBs是抗体，用于检测感染者体内是否产生了抗-HBs。
该抗体是对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的抵抗力，阳性结果表示感染者对乙肝病毒有免疫力，可能已经康复或者通过疫苗接种等手段获得免疫保护。
抗-HBs阳性的患者对乙肝病毒的再感染风险较低。
乙肝五项
李成静
乙肝五项（酶联免疫法ELISA)
两对半：
表面抗原HBsAg ① 表面抗体HBsAb ② e抗原HBeAg ③ e抗体HBeAb ④ 核心抗体HBcAb ⑤
检验原理
表面抗原HBsAg 表面抗体HBsAb e抗原HBeAg e抗体HBeAb 核心抗体HBcAb
夹心法
竞争法
双抗体夹心法
乙肝表面抗原检验原理
采用抗体包被反应板，加入待测样本， 经孵育后，加入酶标抗体，当样本中存 在抗原时，该抗原与包被抗体结合并与 酶标抗体结合形成抗体抗原酶标抗体复 合物，加入底物产生显色反应，反之则 无显色反应。
乙肝e抗体检验原理（竞争法）
采用抗原包被反应板，加入待测样本， 同时加入酶标抗体，与抗原形成竞争结 合，如待测样本中抗体含量高，则酶标 抗体与抗原结合少，加入底物时显色淡， 反之显色深。
检验方法
表面抗原（两步法）
1.配置洗液（25倍稀释）。 2.根据标本数排板，多加两孔作为阳性对照。 3.加75ul待测样本和阳性对照于反应孔中。 4.封板，置37℃加速仪温育40min。 5.取出反应板，不洗，每孔各加酶50ul（即一滴）。 6.封板置37℃加速仪温育20min。 7.取出反应板，洗液洗5次，清水冲洗，吸水纸上拍干。 8.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。 9.显色蓝色为阳性，无色为阴性。
谢谢Βιβλιοθήκη 后四项（一步法）1.根据标本数排板，加阳性对照一孔。 2.加入血清50ul和阳性对照于反应孔中，加酶一 滴。 3.封板，加速仪温育20min。 4.取出反应板，用洗液洗5次，清水冲洗，板拍 干。 5.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。
不同检测系统乙肝五项定量检测结果对比分析报告
不同检测系统乙肝五项定量检测结果对比分析报告乙型肝炎在我国广泛流行，相关调查结果显示，目前中国约有9300万人携带乙肝病毒，其中15-59岁人群HBsAg携带率已高达8.57%。
乙型肝炎病毒(HBV)感染已成为一个较严重的公共卫生问题之一，要完成将我国人群HBsAg携带率降到6.5%以下的目标任务。
基层实验室准确初筛出乙肝感染病例具有重要意义。
目前，实验室检测乙肝五项常用的方法有金标法、酶联免疫法、化学化光法，三种方法作为初筛试验方法，各有优缺点，金标法操作简单、快速，成本低廉，但灵敏度低，漏检率较高；酶联免疫法灵敏度比金标法高，适用于大批量检测，检测结果准确。
近年来，实验室普遍应用的化学发光法，因其可上机全自动检测，检测灵敏度高，可定量检测，检测结果可辅助临床诊断、治疗、预防及疗效的观察，临床应用的较多，前景较好，但国外检测系统成本相对较高，应用受限，国内检测系统成本相对较低，检测灵敏度有差异。
为了比较国、内外两种检测系统检测乙肝五项检测结果的相关性，我实验室用国外强生检测系统和国内新产业检测系统同时检测83份临床血清标本和部分室间、室内质控样本，现将检测结果报告如下：1 材料与方法1.1研究对象选取本院2016年6月 -2017年3月期间临床要求定量检测乙肝五项的样本83份，用于酶联免疫法检测的质控样本5份，云南省2016年度和2017年度感染性标志物检测室间质控样本30份。
临床样本中男性有50例，女性有33例；年龄在17-83岁之间。
临床83份样本全部检测乙肝五项的有72例，其余样本和室内、室间质控样本只检测了乙肝五项中的部分项目。
72例全检测乙肝五项的临床样本，以国外强生检测系统的检测结果为标准，检测结果类型如下：乙肝五项全无反应性： 22 例；单HBsAb有反应性：10 例；小三阳（HBsAg、HBeAb、HBcAb有反应性：2 例；HBsAb、HBeAb、HBcAb有反应性：8例；HBsAb、HBcAb有反应性：15 例；单HBcAb有反应性:7 例；HBeAb、HBcAb有反应性：4例；特殊类型有反应性有：4 例。
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙肝SOP
【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。
检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
乙肝五项检测
乙肝五项检测（ELISA法）一、检测目的：乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。
二、测定原理：分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法。
HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs(HbsAg)包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP(HBsAg-HRP),当标本中存在HBsAg（HBsAb）时，该HBsAg（HBsAb）与包被抗- HBsAg（HBsAb）结合并与抗- HBsAg-HRP （HbsAb-HRP）结合形成抗- HBsAg（HBsAb）-抗- HBsAg-HRP（HBsAb-HRP）复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
HBeAg原理：采用抗-HBe包被反应板，加入待测标本，同时加入抗—HBe-HRP，如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗—HBe-HRP结合形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗—HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBc含量高，则抗—HBc-HRP 与HBcAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
三、操作步骤：1、将试剂从冷藏室中取出，30分钟后平衡至室温方可开启使用。
2、用蒸馏水将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。
3、将微孔条固定于支架上，按序编号。
4、按具体使用试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显色。
9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值。
四、结果判断：样品OD值／阴性对照平均OD ≥2.1，判断为阳性，否则为阴性。
三种方法检测乙肝表面抗原结果的比较
三种方法检测乙肝表面抗原结果的比较发表时间：2012-02-02T14:50:30.183Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第12期供稿作者：金大伟富宏然高莉莉[导读] 中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查, 人群发生率较高, 表面抗原携带率约为15%金大伟富宏然高莉莉（黑龙江省牡丹江市红旗医院检验科黑龙江牡丹江157011）【摘要】目的：通过乙肝表面抗原，比较三种方法学的优缺点。
方法：采用化学发光法检测乙肝，然后对阳性标本分别用酶联免疫吸附试验和金标方法复检。
结果：总数为13207份标本，化学发光方法检测表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。
结论：灵敏度化学发光方法最高、ELISA方法居中、金标方法最差；操作金标方法最简单、ELISA居中、化学发光方法稍难；金标方法假阴性假阳性率最高。
因此，金标方法只能进行筛检，阳性或阴性都不能定诊。
【关键词】乙肝表面抗原；化学发光法；ELISA；金标法【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0156-01 中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查, 人群发生率较高, 表面抗原携带率约为15%［1］。
乙肝的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。
乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是由Dane颗粒的外壳和直径22 nm的球型颗粒和管型颗粒所组成［1］。
HBsAg是HBV感染后第一个出现的血清学标志物,也是诊断的重要指标之一。
HBsAg阳性见于急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者。
值得注意的是在急性感染的恢复期,存在核心窗口期现象,即该时期HBsAg消失,抗- HBs还未出现的,此期可短至数天或长达数月。
目前检测乙肝有三种比较常用的方法学，即酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标法、化学发光法。
中国大多数临床实验室都采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法来检测HBsAg。
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乙肝五项金标法原理
乙肝是一种由乙型肝炎病毒引起的传染病，对人体健康造成严重危害。
乙肝五项金标法是一种常见的乙肝检测方法，其原理主要基于血液中特定抗体和抗原的检测。
第一项：HBsAg检测
HBsAg是乙型肝炎病毒的表面抗原，是乙肝病毒感染早期出现的标志物。
HBsAg检测是乙肝五项金标法中的第一项，其原理基于酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，通过检测血液中是否存在HBsAg抗原来判断个体是否感染了乙肝病毒。
第二项：HBsAb检测
HBsAb是针对HBsAg抗原产生的特异性抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBsAb检测是乙肝五项金标法中的第二项，其原理同样基于ELISA 技术，通过检测血液中是否存在HBsAb抗体来判断个体是否曾经感染过乙肝病毒或接种过乙肝疫苗。
第三项：HBeAg检测
HBeAg是乙型肝炎病毒的核心抗原，是乙肝病毒感染中一种重要的指标。
HBeAg检测是乙肝五项金标法中的第三项，其原理同样基于
ELISA技术，通过检测血液中是否存在HBeAg抗原来判断个体是否处于乙肝病毒活动性感染期。
第四项：HBeAb检测
HBeAb是针对HBeAg抗原产生的特异性抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBeAb检测是乙肝五项金标法中的第四项，其原理同样基于ELISA 技术，通过检测血液中是否存在HBeAb抗体来判断个体是否处于乙肝病毒慢性感染期或已经康复。
第五项：HBcAb检测
HBcAb是乙型肝炎病毒的核心抗体，是乙肝病毒感染后免疫应答产生的免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。
HBcAb检测是乙肝五项金标法中的第五项，其原理同样基于ELISA技术，通过检测血液中是否存在HBcAb抗体来判断个体是否曾经感染过乙肝病毒或接种过乙肝疫苗。
乙肝五项金标法是一种包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测的乙肝检测方法，其原理基于ELISA技术，通过检测血液中特定抗体和抗原来判断个体是否感染了乙肝病毒、处于何种感染期或是否曾经感染过乙肝病毒。
该检测方法具有灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，是目前常用的乙肝检测方法之一。