短链挥发性脂肪酸的测定
短链脂肪酸代谢组学检测具体方法及步骤
短链脂肪酸代谢组学检测具体方法及步骤短链脂肪酸（SCFAs），主要包括乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸，是由微生物对未被消化的碳水化合物（少数情况下是蛋白）发酵产生，SCFAs逐渐作为调节饮食、肠道微生物和宿主的信号分子而被人熟知，在肠道中，SCFAs对人肠道健康十分有益，可以改善身体组成、葡萄糖稳态、血脂谱、降低体重和结肠癌风险。
SCFAs作为主要的能量底物也可以起到抗炎、抗癌作用。
SCFAs会通过各种机制影响慢性疾病，并在维持结肠上皮细胞代谢稳态方面起着重要作用，可以保护结肠免于外部伤害并对结肠疾病有着潜在的积极影响。
服务介绍技术优势采用严格的质量控制体系保证数据的可靠性；专业的数据预处理，差异化合物筛选和PCA模式识别。
技术路线技术参数样本要求生物学重复样本数量：植物和微生物n≥6，动物样本n≥10，临床样本n≥30，所有重复样本独立分析。
其他种类的样品在收集之前请联系公司销售工程师。
检测平台GC-MS （Agilent 7890B-5977B)常规项目周期实验检测：30个工作日（从收到客户预付款并收到样品之日起）数据分析：5个工作日应用方向1、药物或保健品的开发研究2、疾病的早期诊断标志物发现研究案例分析短链脂肪酸(SCFAs)，是细菌代谢产生的可以调节饮食、微生物群和宿主之间互作关系的一类物质。
本研究对SCFAs以及它们参与的生物学过程进行了定量分析。
将已知数量的13C标记的乙酸、丙酸和丁酸通过结肠释放胶囊引入到12名健康受试者结肠中，同时测量血浆中13C标记的SCFAs、Glucose、Cholesterol和Fatty Acids 含量，并定量肠道细菌丁酸的产出能力。
研究表明，结肠中乙酸、丙酸、丁酸的系统利用率分别是36%、9%和2%。
其中，少于1%的乙酸参与合成胆固醇，少于15%乙酸参与合成脂肪酸。
大约6%的丙酸参与合成葡萄糖。
不到0.05%的SCFAs通过尿液排出，余下的大部分被氧化成CO2后通过肺部释放出去。
短链脂肪酸检测方法
短链脂肪酸检测方法短链脂肪酸（Short-chain fatty acids，SCFAs）是指碳链长度为2至6的脂肪酸，包括乙酸（acetic acid）、丙酸（propionic acid）和丁酸（butyric acid）等。
它们是由肠道内益生菌（probiotics）发酵膳食纤维而产生的，具有重要的生理功能，如维持肠道健康、调节免疫系统和影响能量代谢等。
因此，准确、快速地检测短链脂肪酸的方法对于研究肠道菌群功能以及相关疾病的发生发展具有重要意义。
常用的短链脂肪酸检测方法主要包括气相色谱法（Gas chromatography，GC）、高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）、质谱法（Mass spectrometry，MS）和红外光谱法（Infrared spectroscopy，IR）等。
气相色谱法是一种常用的短链脂肪酸检测方法。
首先，将样品中的短链脂肪酸通过酸化、蒸馏等处理步骤提取出来，然后使用气相色谱仪进行分析。
气相色谱法的优点是操作简单、分离效果好，并且可以同时检测多种短链脂肪酸。
但是，该方法需要使用昂贵的气相色谱仪设备，且需要一定的技术经验，对操作人员的要求较高。
高效液相色谱法是另一种常用的短链脂肪酸检测方法。
与气相色谱法不同，该方法是在液相中进行分析。
首先，将样品中的短链脂肪酸通过酸化、蒸发浓缩等处理步骤提取出来，然后使用高效液相色谱仪进行分析。
高效液相色谱法的优点是分析速度快、准确性高，并且可以同时检测多种短链脂肪酸。
但是，该方法需要使用昂贵的高效液相色谱仪设备，且对样品的预处理步骤要求较高。
质谱法是一种常用的短链脂肪酸检测方法，其原理是通过将样品中的短链脂肪酸转化为对应的质谱图谱，然后通过质谱仪进行分析。
质谱法的优点是灵敏度高、分辨率好，可以准确地测定短链脂肪酸的种类和含量。
然而，质谱法需要较长的分析时间，且设备昂贵，对操作人员的技术要求也较高。
顶空进样-气相色谱-质谱法测定井矿盐中的短链脂肪酸
顶空进样-气相色谱-质谱法测定井矿盐中的短链脂肪酸作者：冯峰范广宇刘通张峰来源：《分析化学》2019年第02期摘;要;建立了测定井矿盐中未知异味成分的定性和定量分析方法。
将具有异味的井矿盐成品及其原料卤水采用顶空进样，HP-innoWax色谱柱（ 60 m × 0.25 mm × 0.25 μm）进行分离，电子轰击离子源进行电离，使用扫描离子模式（Scan）对未知异味成分进行定性分析，经过NIST谱库检索和标准品双柱确认，在原料卤水和异味井矿盐成品中分别准确鉴定了13种和5种短链脂肪酸。
采用选择离子模式（SIM），基质匹配外标法对井矿盐成品进行定量分析。
结果表明，5种短链脂肪酸在0.13～5.00 mg/kg范围内线性关系良好，相关系数均大于0.995，检出限为0.05～0.20 mg/kg。
在0.25、0.50和2.50 mg/kg添加水平時，回收率范围为82.0%～104.0 %，相对标准偏差为5.1%～9.8%（n=6）。
本方法简单、灵敏，可用于井矿盐中短链脂肪酸的准确定性定量分析。
关键词;顶空进样; 气相色谱-质谱; 井矿盐; 短链脂肪酸1;引言短链脂肪酸（Short-chain fatty acids， SCFAs）通常指具有1～6个碳原子碳链的有机酸，主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸等，它们都有强的挥发性，也被称为挥发性脂肪酸（Volatile fatty acid， VFA）[1]。
研究表明，生物体内的短链脂肪酸具有降低结肠内pH 值、抑制致病菌的繁殖、维持益生菌代谢、保持肠道菌群稳态、抑制促炎因子产生、减少炎症反应、促进癌细胞凋亡及控制原癌基因表达等作用[2，3]。
然而，由于某些短链脂肪酸含有特殊气味，如果食品中含有过量的短链脂肪酸，会影响消费者对食品的食欲，甚至对相关产品产生恐慌。
例如在2017年4月爆发的某公司生产的井矿盐“臭味盐”事件（食盐开袋即有浓烈的臭味），就是因为缺乏可靠、有效的异味成分分析鉴定方法，未能及时识别出其中残留的短链脂肪酸，导致消费者恐慌。
生物样品中短链脂肪酸的提取与测定
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生物样品中短链脂肪酸的提取与测定
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（ $ $ 南京大学生命分析化学教育部重点实验室，江苏 南京 !$""/3 ； ! $ 南京军区南京总医院普通外科研究所，江苏 南京 !$"""! ） 摘要： 综述了生物样品 （ 主要为粪便、 尿液、 血液和培养液） 中 短 链 脂 肪 酸 的 提 取 与 测 定 方 法， 讨论了各种样品提取 方法的优缺点， 并比较了气相色谱、 高效液相色谱和毛细管电泳分离检测的优点和局限性。引用文献 #3 篇。 关键词： 短链脂肪酸； 生物样品； 提取方法； 气相色谱； 高效液相色谱； 毛细管电泳； 综述 中图分类号： 7#2,0 0 文献标识码： 8 0 0 文章编号： $""" &,.$3 （ !""# ） "$ &"",$ &".0 0 栏目类别： 专论与综述
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异性不强， 准确度差。随着色谱技术的发展， 气相色 谱 （ !" ） 、 高效液相色谱 （ #$%" ） 以及毛细管电泳 已广泛用于 ’"() 的测定。但极性大、 挥发性 （ "& ） 强和水溶性大 的 特 点 使 ’"() 难 以 定 量， 生物基质 ’"() 的复杂性也更增加了定量工作的难度。同 时， 的测定首先需要对样品进行提取纯化， 因此， 提取纯 化方式的选择也一直是研究热点。
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柱前衍生化法检测短链脂肪酸
柱前衍生化法检测短链脂肪酸摘要：一、柱前衍生化法概述二、短链脂肪酸简介三、柱前衍生化法检测短链脂肪酸的原理四、实验操作步骤及注意事项五、柱前衍生化法在短链脂肪酸检测中的应用前景正文：一、柱前衍生化法概述柱前衍生化法是一种常用的分析化学方法，主要用于对样品中的有机化合物进行定性、定量分析。
通过将待测化合物与衍生化试剂反应，生成衍生物，然后通过色谱柱进行分离和检测，从而实现对原始化合物的分析。
二、短链脂肪酸简介短链脂肪酸（Short-chain fatty acids，SCFAs）是一类具有两个或三个碳的有机酸，常见于生物体内，对生物体的生长、代谢等方面具有重要调控作用。
短链脂肪酸的检测对于研究生物体内代谢途径、疾病诊断等方面具有重要意义。
三、柱前衍生化法检测短链脂肪酸的原理柱前衍生化法检测短链脂肪酸主要是通过将与短链脂肪酸反应的试剂与待测样品混合，使短链脂肪酸与衍生化试剂发生反应，生成具有荧光性质的衍生物。
然后将衍生物进入色谱柱进行分离，通过检测器检测柱上衍生物的信号，从而实现对短链脂肪酸的定量分析。
四、实验操作步骤及注意事项1.准备样品：收集生物组织或体液样品，进行短链脂肪酸的提取和净化。
2.衍生化反应：将提取的短链脂肪酸与衍生化试剂（如丹磺酰氯等）反应，生成衍生物。
3.色谱柱分离：将衍生物进入色谱柱进行分离，收集目标峰。
4.检测与定量：通过检测器（如荧光检测器）检测柱上衍生物的信号，根据标准曲线计算短链脂肪酸的浓度。
注意事项：1.衍生化反应过程中要严格控制反应条件，避免副反应的发生。
2.色谱柱的选择要根据短链脂肪酸的性质和检测要求进行，以保证良好的分离效果。
3.检测器的要求：荧光检测器对衍生物的检测灵敏度高，能有效检测低浓度的短链脂肪酸。
五、柱前衍生化法在短链脂肪酸检测中的应用前景柱前衍生化法具有较高的灵敏度和准确性，适用于多种生物样品中短链脂肪酸的检测。
随着生物科学研究的发展，柱前衍生化法在短链脂肪酸检测中的应用将更加广泛，为疾病诊断、生物代谢研究等领域提供重要依据。
气相色谱-质谱联用法检测粪便中短链脂肪酸
气相色谱-质谱联用法检测粪便中短链脂肪酸吴水芸;强叶涛;程璐;韩慕天;耿艳;俞宛君;邵启祥;许化溪;夏圣【摘要】目的建立气相色谱-质谱联用快速检测粪便中短链脂肪酸的方法,并探讨将其应用于肠道疾病辅助诊断的可能性.方法分别取健康C57BL/6小鼠、SD大鼠和成年人志愿者粪便,以及用硫酸葡聚糖溶液诱导的肠炎模型C57BL/6小鼠的粪便;用气相色谱-质谱联用法检测上述标本中短链脂肪酸的种类和相对丰度.结果所有标本均检测出多种短链脂肪酸,其种类主要有乙酸、丙酸、丁酸和戊酸.在生理条件下,人与鼠短链脂肪酸的种类和相对丰度比都十分相似.肠炎可使粪便中除乙酸外的其他短链脂肪酸的相对丰度下降,其中,尤以丁酸下降最为明显.结论气相色谱-质谱联用法可快速检测粪便中的短链脂肪酸,并有可能应用于肠炎等肠道疾病的辅助诊断.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2015(033)004【总页数】3页(P246-248)【关键词】短链脂肪酸;肠炎;气相色谱-质谱;粪便【作者】吴水芸;强叶涛;程璐;韩慕天;耿艳;俞宛君;邵启祥;许化溪;夏圣【作者单位】江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】R446短链脂肪酸又称挥发性有机酸，根据其分子式中碳原子的数量不同，可分为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸等。
人及动物肠道内正常微生物群可代谢产生多种短链脂肪酸，这些短链脂肪酸对于维持肠道正常生理功能和肠上皮细胞形态、功能等具有重要作用。
短链脂肪酸不仅可作为肠上皮细胞的能量供应，还可以维持肠上皮细胞的内外渗透压[1-3]；同时，某些短链脂肪酸对肠道黏膜和固有层的免疫细胞也有重要调控效应[4-5]。
短链挥发性脂肪酸的测定
短链挥发性脂肪酸的测定样品预处理：样品经高速离心（12000 g, 15 min）、过滤（微孔滤膜，0.45卩）处理后，收集污泥上清液以用于VFA的测定。
将1 mL滤液转入1.5 mL棕色气相色谱瓶中，并加入50〜100卩L 3%勺H3PO4调节样品pH值至近似4.0左右，样品保存于4 °C冰箱并于96 h内完成VFA测试。
（注意事项：1、SCOD特别高时，需对样品进行事先稀释；2、若上清液本身的pH 为4左右，则无需另外加H3PO4溶液进行调节。
）VFA组分的测试：VFA组分采用Shimadzu GC-2010型气相色谱仪（环境楼2楼）进行直接测定（无需萃取后再做测试分析）。
气相色谱测试条件为：氢火焰检测器，色谱柱为DB - FFAP: 30 m x 0.25 mm x 0.25 mm ;载气为氮气，其流速为25 mL min-1;进样量为1 uL进样口与检测器的温度分别为200 °C和250 °C;采用程序升温，起始炉温120 °C运行2 min，然后以13 °C min-1的速率升温至U 200 °C，并停留2 min。
一个样品的整个运行时间约10 min。
（注意事项：1、可直接对水溶液样品的VFA组分进行测试；2、升温速率的设置可适当调整，尽量使测试时各VFA组分的吸收峰能明显分开；3、必须有2次以上的重复测定，VFA组分浓度较高时，最好测试完样品后用纯水做次空白样的测试，以消除样品中某些有机组分对后续测试过程的干扰；4、VFA标样测试时按低浓度-高浓度做样品测试，以保证标线有较高的R2值。
）VFA组分的气相色谱图：保留时间1.5 min处的吸收峰为乙醇，除此之外，从左至右6个峰依次为乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸和正戊酸，其相应的保留时间为 3.2、4.0、4.3、5.1、5.6和6.4 min左右（针对上面的运行程序而言）。
一种测定肠道内容物或粪便中短链脂肪酸含量的方法与流程
一种测定肠道内容物或粪便中短链脂肪酸含量的方法与流程短链脂肪酸（SCFA）是一种被肠道微生物发酵产生的化合物，具有重要的生理功能，如维持肠道健康、调节免疫反应等。
因此，测量肠道内容物或粪便中的SCFA含量对于研究肠道微生物生态系统的功能至关重要，在临床营养和卫生方面也具有一定意义。
本文将介绍测定肠道或粪便中SCFA含量的方法与流程。
第一步：实验设计和样品处理实验设计应该考虑样品来源、采集时间、分组方案等要素。
肠道内容物或粪便样品应该快速采集和处理，避免SCFA的自然消耗和生物转化。
常用的样品预处理包括冻干、加入抑制剂、离心等方法。
第二步：SCFA的提取SCFA的提取需要使用有机溶剂（如甲酸、异丙醇）和酸性性去离子水进行萃取。
具体步骤包括样品加入内标、加入有机溶剂进行萃取、离心去除底泥和脂肪等干扰物、毛细管气相色谱法进行检测。
第三步：对SCFA的鉴定和定量对萃取的SCFA进行毛细管气相色谱仪（GC-MS）鉴定和定量。
该仪器可以对每个样品中的多个SCFAs进行快速和精确地定量。
同时，需要注意样品中SCFA的峰高和面积，这是确定SCFA数量的重要依据。
第四步：数据处理和统计分析在样品SCFA的检测后，需要进行数据处理和统计分析。
根据实验设计采用合适的统计学方法，如方差分析、t检验、Pearson相关性分析等。
总结：近年来，研究肠道微生物的功能已成为微生物学研究的热点之一。
测定肠道或粪便中SCFA含量的方法与流程，对于改善肠道健康和研究肠道微生物功能等具有重要意义。
经过以上步骤的处理，可以对SCFA含量进行准确、快速地检测，为未来研究肠道微生物提供了有力的支持。
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短链挥发性脂肪酸的测定
样品预处理：
样品经高速离心（12000 g，15 min）、过滤（微孔滤膜，0.45 μm）处理后，收集污泥上清液以用于VFA的测定。
将1 mL滤液转入1.5 mL棕色气相色谱瓶中，并加入50～100 μL 3%的H3PO4调节样品pH值至近似4.0左右，样品保存于4 o C冰箱并于96 h内完成VFA测试。
（注意事项：1、SCOD特别高时，需对样品进行事先稀释；2、若上清液本身的pH 为4左右，则无需另外加H3PO4溶液进行调节。
）
VFA组分的测试：
VFA组分采用Shimadzu GC－2010型气相色谱仪（环境楼2楼）进行直接测定（无需萃取后再做测试分析）。
气相色谱测试条件为：氢火焰检测器，色谱柱为DB－FFAP：30 m x 0.25 mm x 0.25 mm；载气为氮气，其流速为25 mL min-1；进样量为1 μL；进样口与检测器的温度分别为200 o C和250 o C；采用程序升温，起始炉温120 o C运行2 min，然后以13 o C min-1的速率升温到200 o C，并停留2 min。
一个样品的整个运行时间约10 min。
（注意事项：1、可直接对水溶液样品的VFA组分进行测试；2、升温速率的设置可适当调整，尽量使测试时各VFA组分的吸收峰能明显分开；3、必须有2次以上的重复测定，VFA组分浓度较高时，最好测试完样品后用纯水做次空白样的测试，以消除样品中某些有机组分对后续测试过程的干扰；4、VFA标样测试时按低浓度→高浓度做样品测试，以保证标线有较高的R2值。
）
VFA组分的气相色谱图：
保留时间1.5 min处的吸收峰为乙醇，除此之外，从左至右6个峰依次为乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸和正戊酸，其相应的保留时间为3.2、4.0、4.3、5.1、5.6和6.4 min左右（针对上面的运行程序而言）。
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Time (min)
VFA 组分的气相色谱图（（A ）VFA 标样；（B ）污泥样品）
（l —乙酸，2—丙酸，3—异丁酸，4—正丁酸，5—异戊酸，6—正戊酸，*—乙醇)
VFA 组分的定量：
通过标准曲线的峰面积与浓度的关系计算出测试样品中6种VFA 组分的含量（均以mg L -1 COD 计），并将该6种有机酸的COD 值相加得到总VFA 含量（即TVFA ）。
6种VFA 的COD 当量浓度以及VFA 组分的密度、含量及其在标准状态下的沸点如下表所示。
表六种VFA 组分的性质（标准状态下）
VFA constituents Density(g mL -1)
Boiling point (o C)
COD (Mw) (g COD/g)
Acetic acid 1.05 118.1 1.07 Propionic acid 0.991～0.995 137～141 1.51 iso-butyric acid 0.955～0.961 154.5 1.82 n-butyric acid 0.946～0.950 161～165 1.82 iso-valerie acid 0.936～0.942 173～176 2.04 n-valeric acid
0.929～0.937
184～187
2.04。