Btk抑制剂Ibrutinib的相关研究
是药三分毒!抗血癌“明星药”依鲁替尼也有致命“心血管毒性”
是药三分毒！抗血癌“明星药”也有致命“心血管毒性”Ibrutinib（伊布替尼）最初问世时，被人们亲昵地称为“上帝的礼物”。
它是全球第一款布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）不可逆抑制剂，能够抑制肿瘤细胞复制和转移所需的BTK，彻底改变了血液癌症的治疗历史。
对于许多患者来说，它能带来接近90%的缓解率。
从2013年首次获批至今，伊布替尼已斩获了美国FDA的七项适应症批准，包括套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、华氏巨球蛋白血症、小淋巴细胞性淋巴瘤等。
2017年，伊布替尼获得中国国家食品药品监督管理总局批准上市，商品名亿珂®。
一年后，它成为了17款被纳入国家基本医疗保险的抗肿瘤药之一。
作为一种针对多种血癌的靶向疗法，伊布替尼提高了患者长期生存率，并被证明优于其他疗法。
然而，此前有研究发现患者在接受伊布替尼治疗期间或治疗后30天内，死亡率为7%，而接受化疗的患者的死亡率为1%。
该研究报告于2018年12月27日发表在《新英格兰医学杂志》上。
范德堡大学医学中心医学副教授、心脏病肿瘤学主任贾维德·莫斯利希(Javid Moslehi)博士，在研究报告的第八页指出了这一死亡率。
他是范德堡-英格拉姆癌症中心一个研究小组的成员，该小组专注于研究与靶向治疗、免疫治疗和其他新疗法相关的毒性。
莫斯利希博士说：“7%的人死于一线治疗可不是一件好事。
”他和同事对此进行了后续研究，他们利用世界卫生组织(World Health Organization)维护的全球药物并发症数据库VigiBase，分析了与伊布替尼有关的死亡，并于9月23日将研究结果发表在《美国心脏病学会杂志》(Journal of the American College of Cardiology)上。
该研究确定了几种与伊布替尼有关的心血管毒性，包括室上性心律失常、中枢神经系统出血事件、心力衰竭、室性心律失常、传导障碍、缺血性中风和与高血压相关的器官损害。
新药研发的故事——依鲁替尼（Ibrutinib）
新药研发的故事——依鲁替尼（Ibrutinib）2013年11⽉13⽇，FDA加速批准Pharmacyclics公司Ibrutinib⽤于套细胞淋巴瘤的治疗，是第⼀个被批准的BTK类药物。
BTK的故事回到1952年，美国的⼉科医⽣Dr Ogden Carr Bruton在⼉科杂志，⾸次报道⼀例8岁⼉童，患有严重且反复的呼吸道感染.后明确病因系体内缺乏Gamma球蛋⽩，疾病被命名为X连锁⽆丙种球蛋⽩⾎症（X-linkedAgammaglobulinemia，XLA）。
对XLA的分⼦学⽔平的解释直到上世纪90年代才有所进展。
1993年，英美科学家分别克隆出XLA的致病基因，⽽该基因编码⼀种全新的蛋⽩酪氨酸激酶。
为纪念Dr Bruton，该酪氨酸激酶并命名为Bruton Tyrosine Kinase（BTK）。
在此之后科学家在XLA患者中发现了数百种不同的BTK基因的突变，导致下游BTK异常，引起B细胞缺乏最终导致XLA。
BTK属于Tec家族成员，是⼀种细胞质酪氨酸激酶，表达在B细胞和髓细胞中，在浆细胞和T淋巴细胞中不能检出。
BTK的重要功能在于参与BCR信号的转导，参与下游的NF-KB通路。
下图为例，1. 抗原与BCR结合，SRC家族成员（LYN）磷酸化ITAM结构域，给SYK提供结合位点；2.LYN磷酸化BCR共受体CD19中的酪氨酸残基，活化下游PI3K；3. PI3K通过PIP3-PH作⽤将BTK聚集在细胞膜处，BTK被激活；4. 活化的BTK激活下游通路，通过四种重要通路的产⽣的调节因⼦，参与B细胞的⽣存，增殖和分化。
2010-2011年，BTK与B系肿瘤的相关性最先在ABC-DLBCL和CLL中报道，⼀部分患者恶性B细胞中存在持续性BCR信号的活化，导致下游NF-KB和PI3K通路活化。
⽽当Knockdown这些BCR相关因⼦如IgM，CD79A和CD79B，SYK，PI3K，BTK等，淋巴瘤细胞会发⽣死亡。
20210205-BTK抑制剂的金标准(1)
• 2017年发表的关于Acalabrutinib和伊布替尼选择性的文章，使用的KINOMEscan系统评估化合 物与激酶潜在的非共价结合能力。
• 该系统集成了395种人体激酶. Acalabrutinib和伊布替尼浓度为1 μmol/L。
激酶活性抑制≥65%的激 酶比例
1.5%
8.9%
患者血药浓度: 伊布替尼 420 mg: Cmax 132ng/ml=0.300μM;
7.6
3.5
3.7
1.7
1.0
0.3
0.5
0.4
伊布替尼8年随访结果表明伊布替尼耐受性好，AE以1-2级为主，发生率 在治疗的第一年最高，大多数AE随着治疗的持续逐渐下降
最常见的AE是头痛（35％）和腹泻（26％）， 主要为1/2级
Clin Cancer Res. 2020 Mar 24. pii: clincanres.2856.2019. doi: 10.1158/1078-0432. Furman. ASCO 2020. Abstr 8064.
临床关注的AE可能是BTKi类效应，并非伊布替尼独有
房颤
房颤与具有心脏保护调节作用的PI3K-Akt 通路相
关，BTK是调控PI3K-Akt 通路的分子之一
BTK抑制剂关注的不良事件
出血 感染
BTK在糖蛋白VI信号传导过程中具有关键作用，
BTK抑制剂可阻断胶原蛋白诱导的血小板聚集， 导致出血
感染与免疫系统的多方面缺陷相关，对BTK的抑
Acalabrutinib和伊布替尼均为共价 BTKi，非共价的生化评估技术
不能充分体现化合物的激酶选择性
பைடு நூலகம்
Acalabrutinib 100 mg BID: Cmax 563ng/ml=1.209μM
依鲁替尼的合成
依鲁替尼(Ibrutinib)是一种口服的名为BTK抑 制剂的首创新药, 该药通过与靶蛋白BTK活性位点 半胱氨酸残基（Cys-481）选择性地共价结合, 不 可逆性地抑制BTK, 从而有效地阻止肿瘤从B细胞 迁移到适应于肿瘤生长环境的淋巴组织。之前用 于治疗套细胞淋巴瘤的药物有硼替佐米和来那度 胺, 而依鲁替尼是获准用于治疗MCL的第三个药 品。
Mitsunobu反应是一个脱水缩合过程反应应在无水条 件下进行，另外用DEAD,DIAD做试剂时，前亲核试剂 NuH必须具有足够强的酸性(pKa<13)，若pKa大于13则反 应不容易进行，并且反应产物往往需要通过仔细的色谱分 离操作才能与未反应的试剂、副产物等杂质完全分离。
mitsunobu反应是一个脱水缩合过程反应应在无水条件下进行另外用deaddiad做试剂时前亲核试剂nuh必须具有足够强的酸性pka13若pka大于13则反应不容易进行并且反应产物往往需要通过仔细的色谱分离操作才能与未反应的试剂副产物等杂质完全分离
抗肿瘤新药依鲁替尼(Imbruvica,Ibrutinib)的合成
反应机理：
Ph3P CO2 Et N N EtO2C
+ Ph3 P CO2 Et N NEtO2C
H Nu
_ Nu
+ Ph3 P CO2 Et N N EtO2C H
R''
nucelophilic backside attack
R' H O
R'
Nu
R'
R''
R''
R''
R'
+
O PPh3
O Ph3P +
PCI-32765 (Ibrutinib)_Bruton's tyrosine kinase (BTK)抑制剂_936563-96-1_Apexbio
特别声明
产品仅用于研究， 不针对患者销售，望谅解。 每个产品具体的储存和使用信息显示在产品说明书中。ApexBio 产品在推荐的条件下是稳定 的。产品会根据不同的推荐温度进行运输。许多产品短期运输是稳定的，运输温度不同于长 期储存的温度。我们确保我们的产品是在保持试剂质量的条件下运输的。收到产品后，按照 产品说明书上的要求进行储存。
PCI-32765,Ibrutinib,CRA-0327 65
2-[(2R)-2-methylpyrrolidin-2-yl]-1H-benzimidazole-4-carboxamide
C=CC(=O)N1CCCC(C1)N2C3=C(C(=N2)C4=CC=C(C=C4)OC5=CC=CC=C 5)C(=NC=N3)N
引用文献
1. Schroeder JT, Bieneman AP. "Activation of Human Basophils by A549 Lung Epithelial Cells Reveals a Novel IgE-Dependent Response Independent of Allergen." J Immunol. 2017 Aug 1;199(3):855-865. PMID:28652400 2. Kosowicz JG, Lee J, et al. "Drug modulators of B cell signaling pathways and Epstein-Barr virus lytic activation." J Virol. 2017 May 31. pii: JVI.00747-17. PMID:28566383 3.Lee DD, Muskaj I, et al. "Platelet proteins cause basophil histamine release through an immunoglobulin-dependent mechanism. Transfusion." 2017 May 4. PMID:28470742
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂在治疗炎症免疫性疾病中的研究进展
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂在治疗炎症免疫性疾病中的研究进展任玮杰，岑丽芳，邹 毅*（中国药科大学药学院, 南京 211198）摘 要 布鲁顿酪氨酸激酶（Bruton’s tyrosine kinase, BTK ）是一种胞质酪氨酸激酶，参与B 细胞和粒细胞的活化，在B 细胞和Fcγ受体下游发挥作用。
临床前研究表明，抑制BTK 活性可能成为自身免疫性疾病和过敏等炎症免疫相关病症的潜在治疗方法。
本文总结了BTK 在免疫相关疾病中的作用机制，并对目前临床在研的BTK 抑制剂用于免疫相关疾病治疗的研究情况进行了综述，以期为BTK 抑制剂在非肿瘤适应证的研究提供新思路。
关键词 布鲁顿酪氨酸激酶；炎症免疫；自身免疫性疾病；过敏；临床研究中图分类号 R914；R593 文献标志码 A文章编号 1000−5048(2024)01−0063−10doi ：10.11665/j.issn.1000−5048.2023121103引用本文 任玮杰，岑丽芳，邹毅. 布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂在治疗炎症免疫性疾病中的研究进展[J]. 中国药科大学学报，2024，55（1）：63 − 72.Cite this article as: REN Weijie, CEN Lifang, ZOU Yi. Research progress of Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitors in the treatment of inflammatory and immune-mediated diseases[J]. J China Pharm Univ , 2024, 55(1): 63 − 72.Research progress of Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitors in the treatment of inflammatory and immune-mediated diseasesREN Weijie, CEN Lifang, ZOU Yi *School of Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, ChinaAbstract Bruton’s tyrosine kinase (BTK), a cytoplasmic tyrosine kinase, plays a central role in the activation of B cells and granulocytes, operating downstream of B cell and Fcγ receptors, and is considered an attractive target for treating autoimmune diseases. Preclinical investigations have demonstrated that inhibition of BTK activity holds promise as a potential therapeutic strategy for inflammatory immune responses such as autoimmune diseases and allergies. This review provides an overview of the mechanisms by which BTK contributes to immune-related diseases and summarizes current research on the development of BTK inhibitors for treating these conditions, aiming to offer novel insights into non-oncology applications for BTK inhibitors.Key words BTK; inflammatory immunity; autoimmune diseases; allergy; clinical research炎症免疫反应是机体一种重要的免疫防御机制。
Btk抑制剂的研究进展
Btk抑制剂的研究进展邓容;赵利枝【摘要】Btk在B细胞抗原受体信号通路中起到必不可少的作用，且在巨噬细胞中参与细胞因子介导的信号通路。
因此，抑制Btk成为治疗B细胞淋巴瘤和自身免疫疾病的靶向位点。
本文着重介绍Btk抑制剂的作用机理和已上市及临床研究中的小分子Btk抑制剂的研究进展。
%Btk is necessary in B-cell antigen receptor( BCR)signaling pathway and cytokine-induced signal pathway in the macrophages. Btk inhibition has emerged as an attractive target for therapeutic intervention in human B-cell malig-nancies and autoimmune disorders. This review summarized the mechanism of Btk inhibitors and recent developments of Btk inhibitors already launched or in clinical trial.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P359-361,372)【关键词】Btk;B细胞;淋巴瘤;类风湿性关节炎【作者】邓容;赵利枝【作者单位】鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276005;鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276005【正文语种】中文【中图分类】R979.1Btk(Bruton's tyrosine kinase)即布鲁顿酪氨酸蛋白激酶，是非受体酪氨酸激酶Tec家族的成员。
1952年美国医生Ogden Bruton发现性联无丙种球蛋白血症，并命名为Bruton综合症。
1993年de Weers等［1］发现并命名为Btk，在前B 淋巴细胞过渡为后期B细胞过程中，Btk为细胞分化和增值所必需基因，且在B 细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)和浆细胞瘤中均有表达。
单克隆抗体
单克隆抗体、小分子激酶抑制剂和细胞治疗诱发感染近年来，化疗、免疫调剂治疗、造血干细胞移植和固体器官移植的出现已彻底改变了恶性肿瘤、自身免疫性疾病和终末期器官衰竭患者的管理。
总的来说，这些干预措施可能导致这些人群发生感染风险的几率增加。
21 世纪初， BCR-ABL 酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼已经证实了治疗慢性髓细胞性白血病和胃肠间质瘤的有效性和安全性。
此后，治疗治疗恶性肿瘤和自身性免疫疾病的新的作用机制的药物（如单克隆抗体、小分子激酶抑制剂）逐渐在临床应用中呈指数样的增长。
此外，新型细胞疗法，如嵌合抗原受体（CAR）细胞在治疗难治性恶性肿瘤中也显示出良好的前景，应用也越来越广泛。
这些生物和细胞治疗因为对于建立保护性先天和适应性免疫反应有至关重要作用的免疫相关分子和途径有一定的抑制作用，与随之而来的感染相关。
在此，我们简要概述了某些生物和细胞疗法的背景下，有关感染敏感性指标升高的主要观察结果。
单克隆抗体相关的感染并发症单克隆抗体相关的感染并发症总结于表 1。
2001 年，在接受 TNF-α 抑制剂英夫利昔单抗的患者中，报告了结核病，这个报告首次揭示了单克隆抗体和感染易感性之间的联系——通常是肺外（包括播散性结核病）。
TNF-α 抑制剂现在已被公认易感分枝杆菌，较少情况下感染特定的真菌（组织胞浆菌病），这与 TNF-α 在启动巨噬细胞内病原体清除中的关键作用一致。
与全人可溶性受体融合蛋白 TNF-α 受体依那西普相比，单克隆抗体英夫利昔单抗和阿达木单抗的感染风险更大，建议在开始抗TNF-α 治疗前筛查潜在结核。
自从 TNF-α 抑制剂抑制剂临床应用之后，其他细胞因子靶向单克隆抗体也逐渐进入临床使用，不同的单克隆抗体特异性感染风险有所不同。
例如，IL-1 相关信号通路的抑制剂如 IL-1b 靶点抑制剂 canakinumab 和 IL-1 靶点抑制剂 anakinra，总体耐受良好。
在没有其他危险因素的情况下。
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一、Ibrutinib生理活性
产品描述：Ibrutinib (PCI-32765)是一种有效的，高选择性的Btk抑制剂，IC50为0.5 nM，作用于Bmx， CSK， FGR， BRK及HCK，适度有效，对EGFR， Yes，
ErbB2， JAK3等作用效果稍弱。
靶点： BTK BLK Bmx CSK FGR
IC50： 0.5 nM 0.5 nM 0.8 nM 2.3 nM 2.3 nM
体外研究：Ibrutinib有效可逆且选择性抑制Btk酶活性。
Ibrutinib作用于 BCR 通
路激活的 DOHH2细胞系, 抑制Btk自磷酸化, Btk's 生理底物 PLCγ磷酸化, 和更远一点的下游激酶ERK的磷酸化，IC50分别为11 nM, 29 nM 和 13 nM。
Ibrutinib作用于慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞，诱导细胞毒性，这种作用存在剂量和时间依赖性。
此外, Ibrutinib诱导 caspase依赖性细胞死亡通路激活，且在TLR信号后，抑制CLL细
胞增殖能力。
最新研究显示Ibrutinib抑制BCR激活的原代B细胞增殖,IC50 为8 nM，且抑制原代单核细胞中TNFα, IL-1β和 IL-6产量， IC50 分别为2.6 nM, 0.5 nM, 和3.9 nM。
体内研究：Ibrutinib 作用于胶原诱导的关节炎模型，通过抑制B细胞活性，显著降低足肿胀和关节发炎等临床关节炎症状。
Ibrutinib 作用于 MRL-Fas(lpr) 狼疮模型 ,降
低肾疾病和自身抗体产量。
Ibrutinib 每天按25 mg/kg剂量作用于过继转移TCL1 的CLL小鼠模型, 产生短暂的早期淋巴细胞增多症，且延迟CLL 疾病进展。
激酶实验：激酶, 33P-ATP, Ibrutinib, 和底物 [0.2 mg/mL 聚(EY)(4:1)]温育1小时后，使用33P 过滤结合实验测量体外激酶IC50值。
二、细胞试验
细胞系：慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞
浓度： 0.01 μM到100 μM
处理时间：48小时
方法：进行MTT实验测定细胞毒性。
细胞(CLL B 细胞或健康志愿者T 细胞或 NK细胞) 和不同浓度 Ibrutinib温育48小时。
加入MTT试剂,实验板再温育20小时，然后
使用溶于PBS的硫酸鱼精蛋白冲洗。
加入DMSO，通过分光光度法使用Labsystems
酶标仪，在540 nm处测定吸光值。
使用膜联蛋白/PI 流式细胞仪在不同时间点测量细
胞活力。
使用 Expo-ADC32 软件包分析数据。
结果表示为总阳性细胞与对照组之比的百分数。
加入100μM Z-VAD检测caspase依赖性凋亡。