环境微生物学实验报告实验一到三
环境工程微生物学操作实验报告 范例
培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：***学号：************ 课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。
2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。
3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。
4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、平板菌落计数。
7、抗Cu菌的筛选。
8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。
9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。
二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。
调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。
2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。
加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。
培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。
接种时对接种针等采用灼烧灭菌。
3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。
此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。
平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。
4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。
本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。
微生物教学实践报告(3篇)
第1篇一、引言微生物学是研究微生物的结构、功能、分类、分布、生态及与人类的关系的科学。
随着生物技术的飞速发展，微生物学在食品、医药、环保等领域发挥着越来越重要的作用。
为了提高学生的微生物学实践能力，我们开展了一次微生物教学实践活动。
本文将详细阐述此次实践活动的背景、过程、结果及心得体会。
二、实践背景近年来，我国微生物学教育取得了显著成果，但学生在实践环节仍存在一定的问题。
一方面，理论教学与实验教学脱节，导致学生实践能力不足；另一方面，实验教学内容单一，难以激发学生的学习兴趣。
为了解决这些问题，我们开展了此次微生物教学实践活动。
三、实践过程1. 实践准备（1）制定实践计划：根据教学大纲，我们制定了详细的实践计划，包括实验项目、实验时间、实验步骤等。
（2）准备实验材料：我们准备了实验所需的试剂、仪器、设备等，确保实验顺利进行。
（3）分组：将学生分成若干小组，每组6-8人，每组配备一名指导老师。
2. 实践内容（1）微生物分离与纯化：通过平板划线法、稀释涂布平板法等方法，从土壤、水体、食品等样品中分离纯化微生物。
（2）微生物形态观察：利用光学显微镜观察微生物的形态、大小、颜色等特征。
（3）微生物生理生化实验：通过测定微生物的生长曲线、发酵实验、溶氧实验等，了解微生物的生长规律和代谢特点。
（4）微生物鉴定：通过形态观察、生理生化实验、分子生物学方法等，对分离纯化的微生物进行鉴定。
3. 实践过程（1）实验指导：指导老师详细讲解实验原理、步骤和注意事项，确保学生掌握实验技能。
（2）学生操作：学生在指导老师的指导下，独立完成实验操作，记录实验数据。
（3）实验报告：实验结束后，学生撰写实验报告，总结实验结果。
四、实践结果1. 学生实践能力得到提高：通过本次实践活动，学生掌握了微生物分离、纯化、观察、鉴定等基本技能，提高了实践操作能力。
2. 学生学习兴趣得到激发：实践活动形式多样，内容丰富，激发了学生的学习兴趣。
3. 教学效果得到提升：实践活动中，教师能够及时发现学生的问题，针对性地进行指导，提高了教学效果。
环境微生物学实验报告
环境微生物学实验报告实验名称：环境微生物学实验一、实验目的1.了解环境中的微生物的种类和数量分布；2.掌握微生物的常规培养和计数方法；3.了解微生物的形态特征。
二、实验原理微生物在自然界广泛分布，其数量和种类取决于环境条件的不同。
环境微生物学研究环境中微生物的种类及数量分布情况，通过微生物培养和计数的方法获取相关数据。
常规培养法是将环境样品通过适当的培养基、培养条件进行培养，利用生物学方法检测微生物生长情况。
然后通过显微镜观察菌落的大小、形状、颜色等形态特征，结合计数结果判断微生物种类。
计数法主要有直接计数法和间接计数法。
直接计数法通过显微镜直接观察菌液中的微生物数量，通常使用带标度的计数室进行计数；间接计数法是通过培养方法将微生物增殖得到可计数范围。
三、实验步骤1.取得环境样品，如泥土、水样等；2.将样品分别取适量于含有富营养物的琼脂平板上进行接种；3.在适宜的温度下，培养所接种的细菌液，一定时间后进行观察；4.观察菌落的大小、形状、颜色等形态特征，并计数样品中的细菌数量；5.将菌落分离培养，制备单菌种；6.通过显微镜观察单菌种的形态特征。
四、实验结果1.根据培养基和培养条件的不同，样品中培养的细菌数量和种类可能不同；2.样品中可能存在不同形态和颜色的菌落，通过计数结果可以初步判断主要菌属；3.单菌种观察结果可以进一步判断细菌种类。
五、实验讨论通过本次实验，我了解了环境微生物学的基本原理和实验方法。
同时也发现了环境样品中的微生物种类和数量的多样性。
由于实验时间较短，只观察了一部分微生物的形态特征，需要进一步研究和分析才能确定微生物的种类。
此外，不同培养条件下微生物的生长情况也会有所差异，需要进一步优化培养条件。
六、实验总结通过本次环境微生物学实验，我对环境中微生物的种类和数量分布有了初步了解。
实验中掌握了微生物的常规培养和计数方法，并通过观察微生物的形态特征进行初步鉴定。
但由于实验时间有限，只观察到了部分菌落的形态特征，需要进一步深入研究和分析。
环境生物学实验报告
环境生物学实验报告摘要：本实验旨在通过对环境中的生物群落进行调查和研究，了解生物群落间的相互关系及其对环境的影响。
通过采集实地样本并进行数据分析，我们能够得出关于生物多样性、生态位和生态系统稳定性等方面的重要信息。
引言：环境生物学是生物学的一个重要分支，研究生物与其所处环境之间的相互关系。
生物群落是指同一环境中不同物种的集合，它们之间相互依存，相互作用。
了解生物群落的结构和功能对于保护环境、维护生物多样性具有重要意义。
因此，本实验选择一定范围内的生物群落进行调查，并对所得数据进行分析，以全面了解生物群落的特点。
材料与方法：1. 实地调查：选择一个生物多样性较为丰富的自然环境，如森林、湿地等，进行实地调查。
在调查过程中，应遵循采样原则，包括随机采样、割取样本等操作。
2. 数据记录：对于每个采样点，应准确记录物种数量、物种多样性指数、生态位的分布等相关数据。
3. 数据统计与分析：通过计算各个指标的平均值、标准差和相关系数等，得出关于生物群落的统计结果，并进行数据分析。
结果与讨论：我们选取的生物群落调查区域为一片森林，共设立了10个样方。
通过对各个样方的调查和数据记录，我们得到了以下结果：1. 物种数量：在10个样方中，我们共发现了50种不同的物种。
其中包括10种鸟类、20种昆虫、15种植物和5种哺乳动物。
2. 物种多样性指数：根据Shannon-Wiener指数计算结果，我们发现物种多样性指数的平均值为3.5。
这说明了该生物群落的物种多样性较为丰富。
3. 生态位分布：通过对各物种的生态位宽度进行测定，我们发现不同物种之间在资源利用上存在较大的差异。
这表明了各个物种对于环境资源的利用具有一定的特异性。
4. 相关性分析：通过计算不同物种之间的相关系数，我们得出了一些物种之间的相互关系。
例如，鸟类和昆虫之间呈现正相关关系，而昆虫和植物之间呈现负相关关系。
综上所述，通过本次实验，我们对于所调查生物群落的结构和功能有了初步的了解。
微生物学实验报告
微生物学实验报告实验标题：微生物学实验报告实验目的：本实验旨在研究不同环境条件对微生物生长的影响，了解微生物的不同生长方式以及适应不同环境的能力。
实验原理：微生物在适宜的环境条件下能够进行繁殖和生长，而环境条件的变化则会对微生物的生长产生影响。
微生物学实验中常用的环境因素包括温度、酸碱度以及营养物质的供给等。
本次实验将针对不同环境因素的变化，观察微生物生长的情况。
实验材料：1. 不同温度下的培养基2. 酸性、中性和碱性培养基3. 含有不同营养物质浓度的培养基4. 无菌培养皿5. 微生物菌落样本实验步骤：1. 准备不同温度下的培养基。
分别将培养基装入无菌培养皿中。
2. 用不同pH值的酸性、中性和碱性培养基分别装满无菌培养皿。
3. 杆菌样本接种在不同温度下的培养基中，利用无菌棉签在培养皿中划线。
4. 酵母菌样本接种在不同pH值的培养基中，同样利用无菌棉签在培养皿中划线。
5. 将不同浓度的营养物质添加到培养基中，用无菌棉签进行划线后接种微生物菌落样本。
6. 使用显微镜观察培养皿内微生物的生长情况，记录相关观察结果。
实验结果：1. 温度对微生物生长的影响：- 在较低温度下，微生物生长速度较慢，菌落数量较少。
- 在适宜温度下，微生物生长迅速，菌落数量明显增加。
- 在较高温度下，微生物生长受限，菌落数量明显减少。
2. 酸碱度对微生物生长的影响：- 在酸性环境中，微生物生长明显受到抑制，菌落数量较少。
- 在中性环境中，微生物生长适中，菌落数量较多。
- 在碱性环境中，微生物生长受到一定程度的限制，菌落数量减少。
3. 营养物质浓度对微生物生长的影响：- 营养物质浓度较低时，微生物生长受到限制，菌落数量较少。
- 适宜的营养物质浓度下，微生物生长迅速，菌落数量明显增加。
- 高浓度的营养物质对微生物生长不利，菌落数量减少。
实验讨论与分析：通过本次实验，我们观察到不同环境条件对微生物生长的影响。
温度是微生物生长的一个关键因素，过高或过低的温度都会抑制微生物的生长。
环境工程微生物学大实验实验报告
环境工程微生物学大实验实验报告实验十二环境中四环素抗性细菌的分离鉴定组员：吴富华，张真，，金炯震环5205一、实验目的1、自行设计实验方案从环境中分离四环素抗性菌的实验方法。
2、分离获得四环素抗行菌。
3、检测并分析获得的菌株的四环素抗性强弱。
4、学会通过16SrDNA鉴定实验获得的菌株的种属。
二、实验要求1、自行设计实验证明富集培养是否成功。
2、观察并记录实验现象，作适当的分析或解释。
3、获得至少一株四环素抗性菌（不要多于三株），并进行短期保存。
4、根据实验视频指导和说明，完成菌株基因组DNA纯化，16SrDNA的PCR扩增。
5、比较各组筛选出的抗性菌抗性强弱。
6、各组间交流实验过程和实验结果，分析抗性菌抗性的影响因素。
7、养成良好的实验习惯和团队合作的作风，并给出评价。
三、实验器材1、培养基（营养琼脂，琼脂粉，酵母膏，胰蛋白胨，氯化钠），提供四环素，琼脂糖，灭菌条件。
2、室温和37℃恒温培养箱和摇床。
3、离心机，漩涡震荡仪，PCR仪，电泳仪，紫外成像分析仪。
四、实验步骤（略）1、配置富集培养基和四环素梯度培养基2、四环素抗性菌富集培养3、单菌株筛选4、四环素抗性强弱比较5、单菌株基因组DNA的提取6、16SrDNA的PCR扩增7、PCR产物电泳实验内容、具体操作单菌株基因组DNA提取（5.17进行步骤1-4；5.18进行步骤5-10；5.20进行步骤11）（1）选择5.8号挑选的菌株进行DNA提取实验；（2）取200μL菌液转移到1.5mL灭过菌的EP管中，10000rpm常温离心1min，去掉上清（得到菌细胞）。
菌细胞可在-20℃冻存。
（3）如果是革兰氏阳性菌，取100μL，1mg/mL的溶菌酶/TE加到菌液中，漩涡震荡混匀，37℃温浴1h（溶菌步骤）。
（4）用取液器（移液枪）缓慢吸加500μL（革兰氏阳性）或600μL（革兰氏阴性）裂解缓冲液和20μL，20mg/mL蛋白酶K（proteinase K），充分混匀，50℃过夜（完全裂解细菌并降解所有蛋白质）。
土壤中微生物实验报告
一、实验目的1. 了解土壤中微生物的种类和数量；2. 掌握土壤微生物的分离和纯化方法；3. 熟悉微生物的形态和生理生化特性；4. 培养无菌操作和实验记录能力。
二、实验原理土壤是微生物生活的良好环境，其中含有大量微生物，包括细菌、放线菌、真菌、藻类、原生动物、噬菌体、病毒和线虫等。
微生物在土壤中发挥着重要作用，如土壤肥力的维持、植物生长的促进、有机物的分解等。
本实验通过分离和纯化土壤微生物，观察其形态和生理生化特性，进一步了解土壤微生物的种类和功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖、酵母提取物、琼脂、无菌水、无菌平板、无菌移液器、显微镜、培养箱等。
2. 实验仪器：天平、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、无菌操作台等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集：选取有代表性的土壤样品，注意样品的均匀性和代表性。
2. 土壤微生物的分离和纯化：a. 制备牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌后备用；b. 将土壤样品与无菌水按1:10的比例混合，充分搅拌；c. 将混合液进行系列稀释，取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨平板上；d. 将平板倒置放入恒温培养箱中培养，观察菌落生长情况；e. 挑取单个菌落进行纯化，重复以上步骤，直至获得纯菌株。
3. 微生物的形态观察：a. 将纯菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养后进行显微镜观察；b. 观察菌体的形态、大小、排列方式等特征。
4. 微生物的生理生化特性测定：a. 对纯菌株进行革兰氏染色，观察菌体的染色特性；b. 进行糖发酵试验，观察菌株对葡萄糖、乳糖、麦芽糖等糖类的分解能力；c. 进行氧化酶试验，观察菌株的氧化酶活性。
五、实验结果与分析1. 土壤样品的微生物数量：通过平板计数法，估算土壤样品中的微生物数量。
2. 微生物的分离和纯化：成功分离和纯化出多种微生物，如细菌、放线菌、真菌等。
3. 微生物的形态观察：观察到的菌体形态、大小、排列方式等特征与文献报道相符。
环境工程微生物学实验
实验器材
（1）活材料：培养18h的大肠杆菌（E. coli）培养液。 （2）培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支 (每支10ml)，浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养基。无菌 酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 （3）器材：1ml无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、 标签等。
实验方法
1、接种：按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 ml 的大肠杆菌培养液。 2、培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1.5、3、5、 7、9、12、24和36h后取出，放冰箱中贮存，待测定。 3、比浊：以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零 点，在光电比色计上，选用520～560nm波长进行比浊， 从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
实验步骤
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无 菌培养皿内(每皿约10～
15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥 各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培 养24～48h。
3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液， 观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈， 说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝 色，说明该细菌不产生淀粉酶。
实验器材
1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大 镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌 培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。
实验步骤
1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无
3．高倍镜观察
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实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察一、实验目的1、了解显微镜的基本构造和使用方法2、掌握油镜的原理和使用方法3、了解细菌的三种基本形态二、显微镜的基本构造三、油镜使用的原理油镜，即油浸物镜。
当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量和显微镜的分辨率从而使物象更加清晰。
四、实验器材1、细菌三态装片2、显微镜3、香柏油4、擦镜纸等五、操作步骤1. 放置好显微镜2. 调节光源3. 低倍镜观察4. 高倍镜观察5. 油镜观察6. 清洁和还原显微镜显微镜观察细菌涂片（细菌三型涂片、枯草杆菌涂片）使用油镜：低倍镜（10×）高倍镜（40×）油镜（100×）1. 放置好显微镜置显微镜于平稳的实验台上。
镜检者姿势要端正。
（不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或记录2. 调节好光源接通电源，打开光源。
3. 低倍镜的观察观察任何标本都必须先用低倍镜观察，因为低倍镜视野范围大，容易发现观察目标，确定观察部位。
将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本移动螺旋，使观察的目的物处于物镜的正下方。
调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。
张开双眼向目镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋调节，至目的物清晰为止。
通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。
4.高倍镜的观察（1）用低倍镜找到标本并调节清晰后，将欲放大的观察部位用推进器调到视野中央。
（2）.旋动转换器换高倍镜。
如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野清晰。
调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。
5.油镜的观察（1）如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。
先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。
下降载物台，在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺（2）旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。
然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌用粗准焦螺旋）即可。
（应特别注意不要在升降载物台时用力过猛，或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）6. 清洁显微镜和还原显微镜. 观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。
调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片。
. 把油镜转离光轴，擦镜纸擦1～2次，去油，用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，再用擦镜纸擦1～2次，顺镜头直径方向擦，不要圆周擦和来回擦。
擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。
. 用擦油镜头的方法擦玻片。
六、显微结构图的绘制⏹严格按光学显微镜的操作方法，依低倍、高倍及油镜的次序观察细菌装片，并绘出其形态图。
⏹生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点，绘图注意事项如下：(1) 绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用2H 铅笔为宜。
(2) 图的大小及在纸上分布的位置要适当。
(3) 画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。
线条要清晰，比例要准确。
(4) 绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚，不要把这些现象绘上。
(5) 图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。
点细点时，要点成圆点，不要点成小撇。
(6) 整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。
七、思考题1、使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？2、油镜使用原理是什么？3、绘出细菌三型图。
实验二细菌的简单染色虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜。
由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。
当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。
而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，亦即菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比，这样便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状和结构，因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。
本实验通过对细菌的染色观察，使同学们在掌握细菌染色技术的基础上，了解各种其他的染色制片技术；观察微生物的各种形态结构，以巩固课堂知识，增强感性认识。
一、目的要求1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
2．巩固显微镜的使用方法。
二、基本原理1.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。
在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。
例如，美蓝（亚甲蓝）实际上是氯化亚甲蓝盐，它可被电离成正、负离子：带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
常用的碱性染料除美蓝外，还有结晶紫（crystal violet）、碱性复红（basicfu-chsin）、番红（又称沙黄，safranine）等。
细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。
三、器材1、活材料：培养24小时的大肠杆菌、葡萄球菌。
2、染色液和试剂：草酸铵结晶紫、番红、蒸馏水、无菌水、二甲苯、香柏油等。
3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。
四、操作步骤（1）涂片：取干净载玻片一块，左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上灼烧灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂直径约0.5-1cm的均匀薄膜。
如果从斜面或平板上取菌，用无菌环挑取少量菌体，涂在预先滴有一小滴无菌水的载玻片上，使其薄而均匀。
（2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜），使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。
但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
（4）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加一滴草酸铵结晶紫染色1-2min （5）水洗：用洗瓶或滴管缓慢冲洗涂片上的染色液，直至冲下之水无色时为止。
（6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
（7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
（8）改用番红染色，重复以上过程。
实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次。
c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。
注意擦镜头时向一个方向擦拭。
②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。
五、注意事项（1）要有对数生长期的菌种菌龄过小或过大均影响细菌的正常形态，菌龄太小还没有分化完整，而菌龄过大，往往会发生自溶。
（2）涂片不宜过厚，以免造成菌体重叠，不利于观察形态。
（3）火焰固定不宜过热，否则会使细菌变形。
六、实验报告1．结果绘出葡萄球菌和大肠杆菌的形态图。
2．思考题简单染色应注意哪些，为什么？实验三细菌的革兰氏染色一.目的要求1.初步掌握细菌涂片方法2.学习并掌握革兰氏染色法步骤二.革兰氏染色的基本原理革兰氏染色是丹麦医生 C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。
根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G+和G-.三.实验材料（一）菌种：1.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)斜面培养物2.大肠杆菌(E.coli)培养物（二）仪器与其他用品显微镜、酒精灯、火机（火柴）、接种环、载玻片、擦镜纸、香柏油、二甲苯，无菌牙签等。
（三）革兰氏染色液①草酸铵结晶紫染色液②革氏碘液③95%乙醇④0.5%番红染液四.革兰氏染色的过程–制片1、取干净的载玻片，左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约0.5-1cm的均匀薄膜。
若从斜面或平板上取菌，用无菌接种环取少量菌体，涂在预先滴有一小滴无菌水的载玻片上，使其薄而均匀。
革兰氏染色的过程–染色2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约20－30秒，使流出的酒精不再有紫色为止，后立即用流水冲洗。
5. 复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。
6. 镜检：观察染色结果。
注意事项（1）革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，（以玻片背面不烫手为宜），否则会改变甚至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。
（2）革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌。
（3）菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
五、实验报告1、你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？2、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色出现什么问题？3、乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？。