环境微生物学实验指导书
微生物实验指导书-教材
微⽣物实验指导书-教材微⽣物学实验指导书⽬录实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术 (3)实验⼆培养基的配制 (8)实验三从⼟壤中分离微⽣物及纯化 (11)实验四微⽣物的接种技术 (14)试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 (17)实验六细菌的简单染⾊和⾰兰⽒染⾊ (20)实验七⼤肠杆菌⽣长曲线的测定 (23)实验⼋实验室环境和⼈体表⾯微⽣物的检查 (25)实验九乳酸菌的检测 (28)实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术【⽬的要求】1. 学习并掌握棉塞制作的⽬的、原理及⽅法；2. 学习并掌握玻璃器⽫清洗及包扎⽅法；3.掌握⾼压蒸汽灭菌的基本原理及操作⽅法。
4.了解其它常⽤消毒灭菌技术原理及技术【基本原理】棉塞的作⽤有⼆：⼀是防⽌杂菌污染，⼆是保证通⽓良好。
因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较⼤的影响。
微⽣物学实验所⽤的器⽫，⼤多数要进⾏清洗、消毒、灭菌，才能⽤来培养微⽣物。
玻璃器⽫的包扎⽅法正确合理，在使⽤过程中才能有效防⽌杂菌的污染。
玻璃器⽫包扎好后，⼀般⽤⾼压蒸⽓灭菌法进⾏灭菌。
⾼压蒸⽓灭菌是将待灭菌的物品放在⼀个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的⽔沸腾⽽产⽣蒸⽓。
待⽔蒸⽓急剧地将锅内的冷空⽓从排⽓阀中驱尽，然后关闭排⽓阀，继续加热，此时由于蒸⽓不能溢出，⽽增加了灭菌锅内的压⼒，从⽽使沸点增⾼，得到100℃以上的⾼温，导致菌体蛋⽩质凝固变性⽽达到灭菌的⽬的。
此外，常见灭菌⽅法还有⼲热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。
对空间灭菌常使⽤甲醛加⾼锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌⽅法。
【实验⽤品】棉花，试管，培养⽫，纱布，三⾓瓶，棉线，量筒，⽜⽪纸（或旧报纸），LDZX-50KBS ⽴式⾼压蒸⽓灭菌锅，常⽤灭菌⽤具、药剂等等。
【⽅法步骤】⼀、棉塞的制作正确的棉塞要求形状，⼤⼩，松紧与试管⼝（或三⾓瓶⼝）完全适合，过紧妨碍空⽓流通，操作不便；过松则达不到滤菌的⽬的。
制作过程见图1，包括取棉花、整理、折⾓、卷紧、成形、塞试管等步骤。
环境生物学实验指导书
实验一一般光学显微镜的利用及其对微生物一样形态的观看一、实验目的1．了解一般光学显微镜的构造及其各部份的作用。
2．把握一般光学显微镜的正确利用和保护方式。
3．通太低倍镜、高倍镜观看藻类、酵母培育液和新鲜活性污泥中微生物的一样形态。
二、实验原理一般光学显微镜由机械部份和光学部份组成。
图1-1 双目生物显微镜1．机械部份：（1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。
镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。
（2）转换器：位于镜筒下端，是一个能够旋转的圆盘。
有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。
（3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。
（4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下起落，调剂物镜和标本之间的距离。
2．光学部份：（1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。
（2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是N ）及所要求盖玻片显微镜中最要紧的部份。
各类镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（A厚度等要紧参数。
物镜的性能由数值孔径决定，而且还依托于物镜的分辨率。
（3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。
聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。
孔径光阑是用来调剂对照度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。
当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时，就能够够取得足够对照度的良好图象。
若是开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；若是开得过小，那么分辨率下降，降低物像的清楚度。
（4）电光源：在显微镜的下部，提供观看标本时所用光源。
三、实验器材1．一般光学显微镜（双目生物显微镜）2．载玻片、盖玻片假设干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培育液，新鲜活性污泥四、实验方式１．低倍镜的操作（１）第一把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。
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微生物实验须知
微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作 技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学 理论。同时,通过实验,培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的 能力；实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良 好作风。为了上好微生物学实验课,并保证安全,特提出如下注意事项：
5．实验过程中,切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇 火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。
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7．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦 净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用 3%来苏尔液或 5%石炭 酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡 带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进 行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不 得携出室外。 9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简 明准确,并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
《环境微生物学实验》教学大纲
《环境微生物学实验》教学大纲Environmental microbiology experiment一、基本信息二、教学目的（一）知识目标：通过本课程的学习，要求学生进一步加深理解理论课程教学的相关内容。
（二）能力目标：要求能熟练对微生物进行制片及染色观察，掌握显微镜的使用方法；掌握培养基的配制与灭菌方法，掌握特定功能微生物的纯种分离与接种技术等。
— 1 —（三）素质目标：通过本课程的学习，要求学生能熟练掌握环境微生物学实验的基本操作技能及有关利用微生物降解环境中的污染物和环境监测中微生物学的相关方法，具有在相关行业中顺利开展工作的业务能力。
三、基本要求（一）了解环境微生物学的常用实验操作技术及特定功能微生物的分离培养技术。
（二）理解微生物制片及染色技术，观察培养微生物的方法，培养基的配制与灭菌，纯种分离与接种技术等基本实验操作所利用的原理。
（三）掌握环境微生物学实验的基本操作技能及有关利用微生物降解环境中的污染物和环境监测中微生物学的相关方法。
四、实验项目设置情况五、各实验项目教学内容实验项目一：显微镜的使用及典型细菌形态的观察4学时（一）实验目的要求1.掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
2.掌握革兰氏染色方法，熟悉常见细菌、放线菌的个体形态，学会生物图的绘制。
（二）实验材料和仪器设备仪器：普通光学显微镜（CX21）、超净工作台耗材：载（盖）玻片、擦镜纸试剂：香柏油、30%乙醚酒精、草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、蕃— 2 —红染液、乳酸石炭酸棉蓝染液等实验材料：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌培养平板等。
（三）实验内容显微镜的结构及其使用方法介绍——革兰氏染色（涂片→初染→媒染→乙醇脱色→复染→干燥并镜检）——显微镜的清洁护理（四）思考题：（1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？（2）使用显微镜油镜观察为什么能提高分辨力？（3）要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？哪一步是关键步骤？（4）画出你所看到的细菌基本形态。
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03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
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2．认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的 实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。
3．实验室内应保持整洁,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。
4．实验时小心仔细,全部操作应严格按操作规程进行,万一遇有盛菌试 管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时,应立即 报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒。
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3． 放大率和有效放大率 由于经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率应该是物镜放大率和目
镜放大率的乘积。显然，和放大镜相比，显微镜可以具有高得多的放大率，并且通过 调换不同放大率的物镜和目镜，能够方便地改变显微镜的放大率。放大率也是显微镜 的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好。显微镜放大倍率的极限即有效放大 倍率。
5．实验过程中,切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇 火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。
6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。
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7．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦 净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用 3%来苏尔液或 5%石炭 酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡 带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进 行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不 得携出室外。 9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简 明准确,并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
环境微生物检测标准操作规程作业指导书
环境微生物检测标准操作规程作业指导书持有部门：院感办文件编号：
制定者：审核者：版次：1 制定日期：审核日期：执行日期：
一、监测目的
1.感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。
2.监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被清除。
3.当某项感染控制措施改变时，评估其效果。
4.目标性监测的需要。
5.询证医学证据支持。
二、空气培养（沉降法）
1.采样时间：Ⅰ类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。
2.采样高度：距地面垂直高度
80-150cm。
3.采样点设定：
（1）Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境：室内面
积≤30m2，在对角线上设里、中、外3点，里、外两点位置各距。
环境微生物实验指导书
试验一培养基的配制及灭菌【目的要求】1．了解培养基的概念、种类及用途2．了解培养基的配制原理及其常规配制程序3．学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。
【基本原理】培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。
不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。
高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。
马丁氏培养基和豆芽汁葡萄糖培养基分别用于霉菌和酵母菌的分离培养。
【材料与用品】1．材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。
【仪器与用品】天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。
一、肉膏蛋白胨培养基的配制1．培养基成分牛肉膏0. 3g蛋白陈1gNaCl 0.5g琼脂 1.5g水100mlpH 7.2~7.4 2．配制方法（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于唐瓷缸中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。
然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述唐瓷缸中。
将唐瓷缸加热，用玻璃棒搅拌，使药品全部溶化。
（2）加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化。
（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/l NaOH溶液调pH至7.2~7.4。
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6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。
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7．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦 净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用 3%来苏尔液或 5%石炭 酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡 带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进 行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不 得携出室外。 9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简 明准确,并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。
霉菌菌丝一般可从培养体上直接调取，作成水浸片。具体方法：在清洁载玻片中 央，加蒸馏水一滴，用解针挑取少量菌丝放入水滴中，这时两手各持针一支，将菌丝 分开，不使缠结成团。挑开菌丝后，轻轻加上盖玻片，注意不要产生气泡，先用低倍 镜后用高倍镜观察。 三、作业 1．绘图、记录南昌链霉菌、青霉、木霉、曲霉和根霉的形态。 2．绘图、记录梨头霉的接合孢子形态。 3．用水浸片法观察丝状真菌应注意哪些事项？
1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习,以了解实验的目的、原 理和方法,做到心中有数,思路清楚。
2．认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的 实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。
3．实验室内应保持整洁,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。
4．实验时小心仔细,全部操作应严格按操作规程进行,万一遇有盛菌试 管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时,应立即 报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒。
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实验四 微生物的大小测定与数量的测定
一、实验目的 1．学习了解测微尺的结构，掌握测定微生物大小的方法。 2．观察酵母菌的形态，掌握鉴别死活酵母菌的方法。 3．学习了解血球计数板的结构，掌握微生物数量测定的方法。 二、实验内容 1．在低倍镜和高倍镜下求出目镜测微尺的校正值。 （1） 目镜测微尺和镜台测微尺
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实验三 污水环境细菌运动性与原生动物、藻类的形态观察
一、实验目的 1．学习掌握用悬滴法观察细菌运动性的方法和技术。 2．学习掌握用水浸片法观察原生动物和藻类的形态。 二、实验内容 1．用悬滴法观察污水中细菌的运动性，注意运动方向。 2．用水浸片法观察原生动物的形态、运动性并注意分类。 （1） 鞭毛虫类（Flagellata）：绿眼虫、波豆虫 （2） 肉足虫类（Sarcoclina）：变形虫、太阳虫 （3） 纤毛虫（Ciliata）：草虫、肾形虫、钟虫、豆形虫、漫游虫等 3．用水浸片法观察藻类的形态、种类并注意分类。 （1） 绿藻：空球藻属（Fudoria）
目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在 5 毫米内作 50 等分刻制的，每一等份为 0.1 毫米。另一规格是 5 毫米作 100 等分，每等分为 0.05 毫米。
镜台测微尺是刻在载玻片中央的小尺，它是在 1 毫米内作 100 等分刻成的，每等 分 10 微米。 （2） 目镜测微尺校正的方法
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实验二 放线菌与霉菌形态观察
一、实验目的 1．学习掌握插片法和水浸片法观察放线菌和霉菌的方法。 2．学习掌握低倍镜和高倍镜观察丝状菌体的技能。 二、实验内容 1．用插片法观察绘图放线菌的形态并注意“三丝”分化。
将灭菌的盖玻片斜插在涂布放线菌孢子的培养基的平板上，一半露在外面，恒温 培养后在培养基表面和盖玻片上部都有放线菌生长，小心取出盖玻片，放在干净的载 玻片上，在显微镜下直接观察。 2．用水浸片法观察：青霉（Penicillium.sp）、曲霉（Aspergillus.sp）的形态和分生孢 子。 根霉（Rhigopus.sp）的假根和孢囊孢子。 梨头霉（Absidia.sp）的接合孢子， 木霉（Trichederma.sp）的形态，注意分枝形态。
盖差、工作距离等等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约 的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨 率为准。
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1． 数值孔径 数值孔径（又称开口率 numerical aperture 简写 NA）是物镜和聚光镜的主要技术
参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标 刻在物镜和聚光镜的外壳上。 数值孔径是光线投射到物镜上的最大开口角度一半的 正弦，乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。用公式表示如下：NA=nsinu/2 成正 比，与焦点的距离成反比。显微镜观察时，若想增大 NA 值，孔径角是无法增大的， 唯一的办法是增大介质的折射率 n 值。基于这一原理，就产生了水浸物镜和油浸物镜， 因介质的折射率 n 值大于 1，NA 值就能大于 1。
环境微生物学实验指导书
王 华 主编
江西农业大学 国土资源与环境学院
2007 年 10 月
目录
微生物实验须知……………………………………………………………3 实验一 显微镜使用与细菌染色法………………………………………5 实验二 放线菌与霉菌形态观察…………………………………………10 实验三 污水环境细菌运动性与原生动物、藻类的形态观察…………11 实验四 微生物的大小测定与数量的测定………………………………12 实验五 培养基的制备与灭菌……………………………………………16 实验六 环境微生物的分离与生理鉴定实验……………………………18 实验七 环境微生物分离与生理鉴定结果检查…………………………22 实验八 水中总大肠菌群的测定－多管发酵法…………………………24
低倍、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接读它上面刻的倍数，简便方法是低 倍镜较短，高倍镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要识别清楚，不可认 错，否则在转换物镜时会碰压镜头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的焦 距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头和玻片极为接近，使用时应该注意。
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分辨率和放大倍率是两个不同的但又互有联系的概念。当选用的物镜数值孔径不 够大，即分辨率不够高时，显微镜不能分清物体的微细结构，此时即使过度地增大放 大倍率，得到的也只能是一个轮廓虽大但细节不清的图像，称为无效放大倍率。反之 如果分辨率已满足要求而放大倍率不足，则显微镜虽已具备分辨的能力，但因图像太 小而仍然不能被人眼清晰视见。所以为了充分发挥显微镜的分辨能力，应使数值孔径 与显微镜总放大倍率合理匹配。 4．镜头的识别
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3． 放大率和有效放大率 由于经过物镜和目镜的两次放大，所以显微镜总的放大率应该是物镜放大率和目
镜放大率的乘积。显然，和放大镜相比，显微镜可以具有高得多的放大率，并且通过 调换不同放大率的物镜和目镜，能够方便地改变显微镜的放大率。放大率也是显微镜 的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好。显微镜放大倍率的极限即有效放大 倍率。
三、实验方法 1．用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）作简单染色：
涂片→干燥→固定→染色→镜检 （1）涂片：在玻片中央滴一滴蒸馏水，然后取菌少许，洗入蒸馏水滴中，做成薄 薄一层。 （2）干燥：细菌涂片一般应让他自然风干。有时为使它干得快些，可以把涂片小 心在酒精灯火焰上微微加热烘干。 （3）固定：细菌涂片常用火焰固定法。即将涂片不快不慢地在火焰上通过 2-3 次，菌体受热固着于玻片上。 （4）染色：细菌简单染色常用石炭酸复红或草酸铵结晶紫为染色剂。在已固定的 涂片上加一大滴石炭酸复红染色液，使盖住整个涂抹面，静置染色 1 分钟。 （5）水洗：染色完毕用自来水把玻片上的染色液冲洗干净。 （6）镜检：将染色片晾干，或用吸水纸把多余的水吸去晾干，再用显微镜观察。 2．用大肠杆菌(E.coli)和金色葡萄球菌(staphylococcua aureus)作革兰氏染色: 染色方法的要点及原理：先用结晶紫染色，再加碘液固定，酒精处理后用番红复 染。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 染色的具体步骤：涂片→固定→初染→媒染→脱色→复染→镜检 （1）取菌按常法涂片、干燥、固定。 （2）草酸铵结晶紫染色 1 分钟。 （3）充分水洗后加碘液处理 1 分钟。 （4）水洗后酒精脱色 15-20 秒。（用酒精连续滴洗，至不溶出颜色为止）。 （5）水洗后加番红染色 1 分钟。 （6）充分水洗，吸去余水后晾干，镜检。 四、作业 1．画出你在油镜下观察到的细菌形态并注明放大倍数？ 2．在染色中，固定一步起何作用？酒精脱色一步为何是关键？ 3．用油镜观察应注意哪些问题？滴加香柏油起什么作用？ 4．油镜使用完后应如何处理？
珊藻属（Scendesmus） 鼓藻属（Cosmarium） 小球藻属（Chlorella） 盘星藻属（Pediastrum） （2） 裸藻：眼虫藻属（Euglena） （3） 硅藻：舟形藻属（Navicula） 直链藻属（Melosira） 平板藻属（Tabellaria） 三、作业 1．绘图记录细菌的运动方向，悬滴法观察应注意哪些事项？ 2．绘图记录原生动物、藻类的形态、种类和名称。
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微生物实验须知
微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作 技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学 理论。同时,通过实验,培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的 能力；实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良 好作风。为了上好微生物学实验课,并保证安全,特提出如下注意事项：
2． 分辨率 显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，。其计算公式
是 σ = λ/NA 式中 σ 为最小分辨距离；λ 为光线的波长；NA 为物镜的数值孔径。可见 物镜的分辨率是由物镜的 NA 值与照明光源的波长两个因素决定。NA 值越大，照明 光线波长越短，则 σ 值越小，分辨率就越高。 要提高分辨率，即减小 σ 值，可采取以下措施 （1）降低波长 λ 值，使用短波长光源。（2）增大介质 n 值以提高 NA 值（NA=nsinu/2）。 （3） 增大孔径角 u 值以提高 NA 值。（4） 增加明暗反差。