实验五 培养基的配制
培养基配制安排
实验6-9所需材料实验6 （6人一组），材料在上实验五时配制每个组所需材料：6个平板；1瓶90ml无菌水，用三角瓶盛放，内放8-10个玻璃珠；5支9ml的无菌水试管；1包培养皿（6套）1ml的移液管6支。
实验七所需材料在上实验五时配制每个组所需材料牛肉膏蛋白胨培养基斜面：6支（用于大肠杆菌和枯草杆菌，每个菌种为3支，1支直线、2支波浪线接种）；牛肉膏蛋白胨液体培养基：试管装，4支；牛肉膏蛋白胨液体培养基：试管装，4支。
注：免去了马丁氏培养基和高氏1号培养基斜面。
实验八所需材料在上实验七时配制每组所需材料淀粉培养皿：3个；明胶试管：6个；菌种：枯草杆菌和大肠杆菌实验九所需材料在上实验七时配制每组所需材料2个三角瓶：内放培养基10个试管：内放培养基6个平皿实验五培养基的制备（40人以上）1组：牛肉膏培养基300ml，固体，装20个试管，剩下的装入1个三角瓶；2组：牛肉膏培养基300ml，固体，装20个试管，剩下的装入1个三角瓶；3组：牛肉膏培养基400ml，固体，分装30个试管，剩下的状1个三角瓶；4组：高氏1号固体培养基，300ml，分装到2个三角瓶中，每个150ml（4，6组备用）5组：马丁氏固体培养基，300ml，分装到2个三角瓶中，每个150ml（5，7组备用）6组：牛肉膏液体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；7组：牛肉膏半固体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；注：所配制的牛肉膏试管斜面中，包括老师接菌种所用斜面。
每个组还需要：1瓶90ml无菌水，三角瓶盛放，玻璃珠8-10个；5支9ml的无菌水，试管盛放；1包培养皿（6套）6支1.0ml的移液管棉塞：2个大的，6个小的；实验五培养基的制备（30人左右）1组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；2组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；；3组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；4组：高氏1号固体培养基，150ml，分装到1个三角瓶中（4，6组备用）5组：马丁氏固体培养基，150ml，分装到1个三角瓶中（5，7组备用）6组：牛肉膏液体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；7组：牛肉膏半固体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；注：所配制的牛肉膏试管斜面中，包括老师接菌种所用斜面。
实验五 牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌
实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。
（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
纸上表明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。
实验五 高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离
实验五 高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验目的：掌握配制合成培养基的一般方法。
掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。
实验材料：药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂。
其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。
实验原理：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。
这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4•3H2O 、MgSO4•7H2O 作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。
放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。
由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。
分离放线菌常用稀释倒平板法。
根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。
如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。
再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。
实验内容：1.高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50~100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900~950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。
再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调pH至7.2~7.4，分装，0.1Mpa（15lb/in2）15~30min高压蒸汽灭菌。
2.土壤中放线菌的分离（1）取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。
实验五、培养基制备及灭菌乳酸发酵、酒精发酵
实验五、培养基制备及灭菌乳酸发酵、酒精发酵一、培养基的制备及灭菌（一） 、实验目的学习几类微生物常用培养基的配置及灭菌方法。
（二） 、实验材料 1．药品试剂： 2．器皿及材料：3．仪器设备：立式高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱。
（三） 、实验原理培养基是根据微生物生长繁殖的需要人工配制的营养基质， 其中含有微生物生长繁殖所 需的碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
配制培养基时，应根据微生物种类的不同，将其所 需的营养物质以合理的方法加以配制。
配制好的培养基还应具有适宜的 pH，经过灭菌，杀 死其中所有的微生物后才能使用。
（四） 、实验方法 1、培养基的配制①．根据实验和研究对象，选择培养基，本实验着重配制下列培养基（见下表）： 培养基牛肉膏蛋白胨 琼脂培养基 马铃薯 琼脂培养基高氏一号琼脂培养基牛肉膏 3 克 去皮马铃薯 200 克 可溶性淀粉 20 克 蛋白胨10 克 葡萄糖/蔗糖 20 克 K 2HPO 4·3H 2O 0.5 克 NaCl 5 克 琼脂 18 克 MgSO 4·7H 2O0.5 克 琼脂18 克FeSO 4·7H 2O 0.01 克 NaCl 0.5 克 KNO 3 1.0 克 琼脂18 克水 1000mL 1000mL 1000mL 组成成分pH7.2～7.46.5 7 适合于培养 的微生物一般腐生细菌一般真菌一般放线菌②．称量：根据配制培养基总量，准确称取各成份于烧杯中。
③．配制：a.先从总量水中，取少量水溶解药品，遇不易溶药品，加热溶解。
b. 对易发生沉淀的药品，如 K2HPO4 与 MgSO4 会产生絮状沉淀，应分开溶解，最后加入培养基。
对非溶性药品如 CaCO3 等亦需最后加入。
c. 马铃薯去皮后称重，切成 1cm 3 左右的小块，加水煮沸 20～30 分钟，用四层纱布过滤后，取其清液供配制用。
d. 可溶性淀粉先用少量水搅匀，然后徐徐倒入煮沸的溶液中溶解。
实验五培养基的配制和灭菌
实验五培养基的配制和灭菌实验五培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。
3.熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、实验器材1.药品及试剂马铃薯，葡萄糖，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，无菌水2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、旧报纸、麻绳、纱布、培养皿三、实验内容1.实验分组食科0901本 29人/班→7人/组，分4组2.培养基配方配方一：马铃薯培养基200ml→培养酵母菌用马铃薯水煮液 40g、葡萄糖 4 g、琼脂 4g、水 200ml、pH 自然马铃薯去皮装于烧杯中，进行煮沸，用四层纱布过滤于三角瓶中，再加糖和琼脂补水至200ml 121℃灭菌20min配方二：普通营养琼脂培养基150ml→培养大肠杆菌、枯草芽孢杆菌用蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g分装于10支试管中（试管1/5体积装液量）121℃灭菌20min四、实验方法、步骤（一）试管、锥形瓶及培养皿清洗 1人/组（二）棉塞制做 1人/组（三）培养基制作 1人/组1、马铃薯培养基削皮→切片→称量→装于烧杯中煮沸→纱布过滤于三角瓶→加糖、琼脂融化→补无菌水至200ml2、普通营养琼脂培养基称量→熔化均一→分装（试管1/5体积装液量）（四）加棉塞培养基配制完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
（五）试管与三角瓶包扎试管5个/扎用橡皮筋捆成一捆，三角瓶在棉塞外包扎旧报纸（学会活结打法），贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。
（六）培养皿包扎 8套/包.组（七）灭菌锅的使用将包扎好的培养皿，装有培养基且包扎好的试管与三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃,20min高压蒸汽灭菌。
（八）摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
实验五%20培养基的制备、包扎
实验五培养基的制备、包扎一、实验教学目的与要求目的：1、明确培养基的配制原理。
2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制。
2、SDAY培养基的配制。
二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖和代谢的营养基质。
培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子及水分等。
培养还应具有适宜的pH、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
在液体培养基中加入0.5%-1.0%的琼脂配置为半固体培养基，加入1%-2%的琼脂配置为固体培养基。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的多糖，是应用最广的凝固剂。
琼脂在96-100℃融化，46℃以下凝固。
培养基经灭菌后方可使用。
三、实验材料及用具1.试剂牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、琼脂、链霉素、1M NaOH、1M HCl、NaCl、蒸馏水。
2.仪器及用具试管、三角瓶、培养皿、烧杯、量筒、玻璃棒、分液漏斗、天平、药匙、pH试纸、称量纸、棉花、纱布、线绳、橡胶管、报纸、铁架台、标签纸。
四、操作步骤（一）培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1L、pH 7.0～7.2。
SDAY培养基：葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g、琼脂20g、蒸馏水1L。
（二）步骤：操作图示（1）称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。
对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。
（2）配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。
如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
待完全熔化后，补足所失水分。
如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。
（3）调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。
实验五 产淀粉酶细菌的分离(一)培养基的制备及常用器皿的准备
综合性实验
实验五 产淀粉酶细菌的分离（一） 培养基的制备及常用器皿的准备
河南工业大学微生物学实验室
一、实验目的及要求
1、学会培养基的制备和常用器皿的准 备方法 2、学会高压蒸汽灭菌及干热灭菌方法
二、实 验 原理
将样品制成菌悬液，80℃ 水
浴处理10分钟。
选择
将菌悬液适当稀释后，在淀粉 平板上进行涂布分离培养；加 入碘液显色后，挑取透明圈直 径较大的菌落。
鉴别
电热鼓风干燥箱（干热灭菌用）
五、 作 业 题
1、高压蒸汽灭菌和干热灭菌各适用于哪 些物品？ 2、两种灭菌技术应注意哪些关键操作？ 3、培养皿等干热灭菌前包扎的目的？
4、培养皿桶1个。
5、1-2ml刻度吸管2支。 6、洗耳球1个、玻璃棒1支。 7、搪瓷量杯1个。 8、量筒1个。
纱布、棉花、棉绳、培养基、天平等在最后一排实验台
四、实验方法和步骤
1、营养琼脂培养基的配制 称量1.2克可溶性淀粉。加少量水加热溶化， 然后加入6.8克营养琼脂，加水至150毫升，煮 沸后倒入250ml容量的三角瓶中，加棉塞灭菌。
四、实验方法和步骤
2、无菌水的制备（稀释用）
取 9ml 蒸馏水于试管（ 18×180mm）中，塞 棉塞，报纸包扎后湿热灭菌。 取 90ml 蒸馏水于 250ml 三角瓶中，塞棉塞， 报纸包扎后湿热灭菌。
手提小型高压蒸汽灭菌
立式高压蒸汽灭菌
实验五培养基的制作及灭菌
实验五培养基的制作及灭菌实验目的：1.学习培养基的制作方法。
2.掌握培养基的灭菌技术。
实验步骤：1.准备所需材料和设备，包括琼脂、蒸馏水、酵母粉、葡萄糖、盐以及烧杯、量筒、试管等。
2.称取所需的琼脂，按照所需制作的培养基的浓度要求，将琼脂加入一个烧杯中。
3.加入适量的蒸馏水，并用玻璃转子搅拌均匀，直到琼脂完全溶解。
4.将琼脂溶液转移到一个大容器中，继续搅拌一段时间，以使溶液均匀充分。
5.在此过程中，可以将所需添加的其他成分进行称量，如酵母粉、葡萄糖和盐。
根据配方要求逐一加入琼脂溶液中。
6.继续用玻璃转子搅拌溶液，直到所有成分完全溶解。
7.将培养基溶液倒入装有文化管的试管中，每个试管约装满一半。
8.置于培养基外表面有菌或细菌孢子的地方，将试管口用针灼烧，使培养基杀菌。
9.将装有培养基溶液的试管加入至高温高压灭菌锅中，进行高温高压灭菌。
10.灭菌完成后，将试管从高温高压灭菌锅中取出，放置在室温下冷却。
11.等试管冷却至室温后，将试管翻转，使培养基均匀附着在试管内壁。
实验结果：制作好的培养基溶液应呈均匀透明的状态，无沉淀物和杂质。
实验注意事项：1.在称取琼脂时要小心，避免粉尘飞扬和吸入。
2.加入蒸馏水时要慢慢倒入，避免烧伤。
3.加入其他成分时要保持适当的温度，避免成分无法溶解。
4.灭菌时应注意安全，避免受烫伤。
5.使用高温高压灭菌锅时要严格按照使用说明操作，避免安全事故发生。
实验讨论：在制作培养基的过程中，要严格控制各种成分的比例，以确保培养基的浓度和配比符合要求。
另外，灭菌步骤也是非常重要的，只有有效灭菌才能确保培养基无菌。
培养基的制作与灭菌是微生物学实验中常用的操作，它是为了提供细胞生长所必需的营养物质和环境，并排除外界的其他微生物干扰。
通过制作培养基，可以为后续的微生物培养提供基础设施，为微生物的生物学研究提供必要的条件。
总结：本实验主要介绍了培养基的制作方法和灭菌技术。
通过制作培养基和灭菌步骤，可以为后续的微生物培养提供必要的条件，确保培养基无菌和符合要求。
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. 实验五培养基的配制（基础实验，4学时）
一、实验目的和要求
学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤
二、实验原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。
琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。
配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～
2.0g，pH 7.2～7.6
三、实验用具
高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl
四、实验步骤
1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。
2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。
3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。
4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。
5、加塞用棉花制作塞
6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。
标明组别、培养基名称、日期。
7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。
8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。
9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置
10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。
六、注意事项
1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。
七、思考题
高压蒸汽灭菌器如何使用？。