仪器分析法导论优秀课件

习惯上，t’R2＞ t’R1，故α ＞1，标志两峰在色谱图中的相对位置。相对 保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了 固定相对这两种组分的选择性。
色谱分离是基于试样中各组分在两相间平衡分配的差异。平衡分配 可用分配系数和容量因子表征。
14-2-4 分配系数和容量因子
1. 分配系数（partion factor） K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过
以三聚氰胺为例，其分子式由3个碳原子、6 个氢原子和6个氮原子组成，氮含量高达66.7％。 而牛乳蛋白氮含量只有15.7％，大豆蛋白氮含量 也仅有16％。毋庸置疑，在氮含量比较上，三聚 氰胺胜出。难怪，有人把三聚氰胺称做“蛋白 精”。
三聚氰胺具有轻微的生物学毒性。早在1945年，美国 纽约里德勒实验室两位毒理学专家便发表论文指出，长期 给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成其生殖、 泌尿系统的损害，以及膀胱、肾部结石，并可以进一步诱 发膀胱癌。
（2）保留时间（tR）
tM
L u
从进样开始到色谱峰出现极大值时所需的时间；组分的保留时间就是它通过 色谱柱所需的时间，也就是组分在柱内运行的时间。
3. 相对保留值（选择性因子，ri,s 或α）
组分2与组分1调整保留值之比：
tR2 tM t'R2
tR1 tM t'R1
1. 基准组分，可以是被测物中某一指定组分，也可人为配制； 2. 组分
3.色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-12)级的物
质量 （3） 分析速度快
一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分 析 （4） 样品用量少
(5)可用于定性和定量
蛋白质中含有碳、氢、氧、氮、硫等元素。其中，氮元素极为特别：氮在绝 大多数蛋白质中含量相当接近，一般为15％～17％，平均值为16％左右。因此， 丹麦化学家约翰·凯达尔很巧妙地想到，既然氮元素含量稳定，只要准确测量出氮 的含量，便能推算出其蛋白质含量。发表于188法亦有不足之处。最大的问题在于这种方法只能 检测氮含量，并不能鉴定蛋白质真伪。不难想象，只要加入含氮量高的物质，就 可以骗过凯氏定氮法，轻松获得“高蛋白含量”的称号。
程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓 度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用 K 表示，即：
K 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的浓 浓度 度 ccms
K除了与温度、压力有关外，还和组分的性质、固定相和流动相的性质有关。 分配系数是色谱分离的依据。不同组分的分配系数的差异，是实现色谱分离的 先决条件，分配系数相差越大，越容易实现分离。 例：组分A、B在某气液色谱柱上K分别为495，467，哪个先出峰？
2.容量因子(capacity factor) k’ 在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。分配比是
指，在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比：
k' 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的质 质量 量mmqpsm
容量因子也称： 容量比（capacity factor）、分配比 （partion radio）
1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分 离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大， 该组分的保留时间越长。
3. 分配比可以由实验测得。
从色谱流出曲线上，得到信息是：
（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组份的最少个数． （2）根据色谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析． （3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析． （4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依
仪器分析法导论优秀课件
色谱法是一种分离技术； ➢ 装CaCO3的玻璃柱叫色谱柱； ➢ 其中的一相固定不动，称为固定相； ➢ 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称 为流动相。 ➢ 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱中的两相间不 断进行着的分配过程。
色谱法的实质是分离，它是根据混合物各组分在互不相溶的两相— 固定相与流动相中吸附能力、分配系数或其它亲和作用性能的差异作为 分离依据的。当混合物各组分随流动相通过固定相时，在流动相与固定 相之间进行反复多次分配，使吸附性能或分配系数有微小差别的物质， 在移动速度上产生较大差别，从而得到分离。与适当的柱后检测方法结 合，实现混合物中各组分的分离与检测。
Wb=4 ，W1/2 =2.354
4. 峰面积 A
峰与基线延长线所包面积，A=1.065hW1/2
14-2-3 保留值
1. 用时间表示的保留值
（1）死时间（tM）
不被固定相保留的组分，从进样 到出现峰极大值所需要的时间。实际 是流动相流经色谱柱所需时间，或组 分在流动相中消耗的时间。
对气相色谱，tM指从进样到空气 峰（对热导检测器）或甲烷峰（对氢 火焰检测器）最高点所经过的时间。
国家标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联 用法、液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检 测方法，检测定量限分别为2毫克/千克、0.05毫克/千克 和0.01毫克/千克。标准适用于原料乳、乳制品以及含乳 制品中三聚氰胺的定量测定。
3. 区域宽度
用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种 表示方法： （1）峰底宽(Wb)：色谱峰两边转折点所 画切线与基线相交截距；拐点位于0.607h 处。 （2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的 宽度 ； （3）标准偏差()：拐点间距离的一半， 即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。
2. 按固定相的固定方式分类
柱色谱 固定相装于柱内的色谱法 平板色谱 固定相呈平板状的色谱法
纸色谱 薄层色谱
3. 按分离过程的机制分类
吸附色谱：利用吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异 分配色谱：利用不同组分在两相分配系数不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用