《微生物学免疫学进展》稿约
《微生物学免疫学进展》稿约
２ ． ２ 作者及单位
作者应是对文章全部或部分内容做 出主要贡献并能对内容负责的人 ， 应征得每位作者的
同意。作者姓名在文题下按序排列 ， 排序应在投稿 时确定并 附单位推荐信 ， 在编排过程中不应再作更改。作
者 单位 应 注 明其 单位 全称 及所 在部 门 、 所 在 省市名 和 邮政 编码 。请 提 供 作者 简 介 （ 姓名 、 性别 、 出生 年份 、 职
微生物学免疫学进展 ２ ０ １ ３ 年第 ４ ｌ 卷第 １ 期 Ｐ ｒ ｏ ｇ ｉ ｎ Ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ Ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｌ Ｆ ｅ ｂ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ４ １ ， Ｎ ｏ ． １
・ ９ １－
《 微生物学免疫学进展》 稿约
《 微 生物 学免 疫学 进展 》 １ ９ ７ ３年 创 刊 ， 由中华 人 民共 和 国卫 生 部 主 管 、 兰 州生 物 制 品研 究 所 有 限 责任 公
品名时应先注 明其通用名称 。 ２ ． １ ０ 计量单位 应严格执行 Ｇ Ｂ ３ １ ０ ０～ ３ １ ０ ２ ． １ ～ １ ３ － １ ９ ９ ３ （ 量和单位》 中有关量 、 单位和符号的规定及其书 写规则 。组合单位符号中， 斜线多于 １ 条时应加括号 以避免混淆或采用负数幂的形式表示 ， 如： ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ／ ｄ 应 写为 ｍ ｇ ／ （ ｋ ｇ． ｄ ） 。“ 升” 单位符号用大写“ Ｌ ， ＇ ， 例如 ： ｍ ｇ ／ Ｌ 、 ｍ Ｌ ， 其余单位符号大都为小写。表示离心加速作
“ ３ ． １ ． １ ” 。各层次的序号均须左顶格 ， 末位数字后不加标点 ， 后空一字距再接排标题 ， 各级标题后不加标点。 ２ ． ８ 图表 文稿中图、 表应少而精 ， 且不与正文重复 。照片或 图要求轮廓清晰 ， 层次分明， 反差适中 ； 病理照
中华微生物学和免疫学杂志 投稿模板
尊敬的编辑：我很荣幸能有机会向《中华微生物学和免疫学杂志》投稿，我希望能够与您共享我对免疫学和微生物学领域的研究成果和见解。
我希望通过我的文章，能够为该领域的学术研究做出一些贡献。
在我提交的文章中，我将主要围绕免疫学和微生物学的交叉领域展开讨论。
这两个领域对于人类健康和疾病的发生起着至关重要的作用，因此我认为这是一个具有重要意义的主题。
我将从免疫系统的基本原理和微生物对免疫系统的影响入手，探讨它们之间的相互作用以及可能的应用价值。
在文章的深度方面，我计划从免疫系统的基本功能开始阐述，然后逐步深入探讨不同类型的微生物对免疫系统的影响。
我将结合具体的研究案例和最新的科研进展，对免疫系统与微生物之间的相互作用进行全面、深入的分析，以期为读者呈现一个清晰、丰富的知识体系。
在广度方面，我打算涵盖免疫学和微生物学领域的多个方面，包括免疫系统的免疫细胞、炎症反应、抗原递呈和微生物的致病机制等。
我将引用多篇经典文献和研究成果，以确保文章的全面性和可信度。
在文章中，我将多次提及免疫学和微生物学的相关内容，并尝试引入一些其他学术领域的研究成果，以展现它们之间的通联和交叉性。
我希望通过这种方式，为读者呈现一个丰富、多元的学术世界。
我还会在文章的结尾部分，对整篇文章进行总结和回顾，概括出文章的重点和亮点，并展望未来的研究方向。
我将共享我的个人观点和理解，以及对该领域的未来发展的期许。
我将会按照你所提供的非Markdown格式的普通文本撰写，遵循知识文章格式。
我会按照文章内容使用序号标注，并在内容中多次提及免疫学和微生物学相关内容。
我保证文章的总字数将会超过3000字，希望您能喜欢我的投稿。
感谢您的时间和耐心阅读。
谨启[您的尊称]尊敬的编辑：非常感谢您阅读我上次的投稿，并给予我宝贵的意见和建议。
我现在继续向您共享我在免疫学和微生物学领域的研究成果和见解。
在我上次提交的文章中，我主要围绕免疫学和微生物学的交叉领域展开讨论，从免疫系统的基本原理和微生物对免疫系统的影响入手，探讨它们之间的相互作用以及可能的应用价值。
北师大版七年级生物下册13.3人体免疫说课稿
-能够区分细胞免疫和体液免疫，理解它们的作用过程。
-能够了解免疫失调引起的疾病类型及其危害。
2.过程与方法目标：
学生通过探究活动，培养观察、分析、概括的能力，提高解决问题的能力。具体包括：
-能够通过观察图片、模型等，识别和理解人体免疫系统的主要组成部分。
3.运用多媒体资源，如视频、动画和模型，直观展示免疫反应过程，帮助学生更好地理解抽象概念。
4.安排小组活动，让学生通过合作探究免疫失调疾病的案例，培养他们的合作能力和问题解决能力。
5.设定情境任务，如模拟疫苗接种计划，让学生在实践中应用所学知识，提高他们的学习动机和实际应用能力。
三、教学方法与手段
（一）教学策略
作业的目的是巩固课堂所学知识，培养学生的自主学习能力和研究精神，同时为下一节课的学习打下坚实的基础。
五、板书设计与教学反思
（一）板书设计
我的板书设计注重清晰性、简洁性和结构性。板书布局分为三个部分：标题区、知识点区和总结区。标题区位于黑板顶部，标注本节课的主题“人体免疫”；知识点区按照教学内容顺序，依次列出“免疫的概念”、“免疫系统的组成”、“免疫反应的类型”和“免疫失调疾病”等关键知识点；总结区位于黑板底部，用于总结本节课的重点和难点。
3.对免疫失调引起的疾病了解有限，可能难以将理论知识与实际健康问题联系起来。
（三）学习动机
为了激发学生的学习兴趣和动机，我将采取以下策略或活动：
1.利用生活中的实例，如感冒、疫苗接种等，引入免疫系统的概念，使学习内容与学生生活紧密相连。
2.设计互动式讨论，鼓励学生分享他们对免疫系统的已知信息，增强他们的参与感和成就感。
3.网络资源：利Biblioteka 互联网查询最新的免疫学研究进展，提供给学生丰富的学习材料。
cxcr2基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定
基金项目:国家自然科学基金项目(８１８７１６９７)作者简介:张莉(１９９１－)ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎬ主要研究重症机制及防治研究ꎮ通信作者:雷迎峰ꎬ副教授ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｙｆｌｅｉ＠ｆｍｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻ侯立朝ꎬ博士生导师ꎬ教授ꎬＥ￣ｍａｉｌ:４５２７８４３６＠ｑｑ.ｃｏｍ 论㊀著ｃｘｃｒ２基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定张莉１ꎬ刘永飞２ꎬ叶传涛３ꎬ边培育３ꎬ雷迎峰４ꎬ侯立朝１１.空军军医大学西京医院麻醉与围术期医学科ꎬ陕西西安７１００３２２.空军军医大学唐都医院麻醉科ꎬ陕西西安７１００３８３.空军军医大学唐都医院传染科ꎬ陕西西安７１００３８４.空军军医大学微生物学教研室ꎬ陕西西安７１００３２摘要:目的㊀构建小鼠ＣＸＣ型趋化因子受体２(ＣＸＣＲ２)基因ｃｘｃｒ２过表达的骨髓间充质干细胞(Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓ￣ｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌꎬＢＭＳＣ)并进行鉴定ꎮ方法㊀全骨髓贴壁法分离培养小鼠ＢＭＳＣꎬ采用流式细胞术检测干细胞抗原１(ｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｔｉｇｅｎ￣１ꎬＳＣＡ￣１)㊁ＣＤ４４㊁ＣＤ４３㊁ＣＤ４５㊁ＩＡ/ＩＥ表达率ꎬ并诱导成骨分化ꎮ以含有小鼠ｃｘｃｒ２的质粒为模版进行ＰＣＲ扩增ꎬ将获得的ｃｘｃｒ２克隆到慢病毒载体ꎬ命名为ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺꎻ将其与慢病毒包装质粒共转染ＨＥＫ￣２９３Ｔ细胞ꎬ收获慢病毒后ꎬ通过离心法感染ＢＭＳＣꎬ经过１μｇ/ｍＬｚｅｏｃｉｎ压力选择建立了稳定表达ＣＸＣＲ２的小鼠ＢＭＳＣ(ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ)ꎮ采用流式细胞术和ＲＴ￣ＰＣＲ分别检测其ＣＸＣＲ２蛋白和ｍＲＮＡ表达水平ꎬＴｒａｎｓｗｅｌｌ趋化实验检测其迁移能力ꎮ结果㊀９０％以上的第３代ＢＭＳＣ表达ＣＤ４４㊁ＳＣＡ￣１ꎬ几乎不表达ＩＡ/ＩＥ㊁ＣＤ３４㊁ＣＤ４５ꎬ且成功诱导成骨分化ꎮ菌液ＰＣＲ㊁质粒双酶切后ꎬ琼脂糖凝胶电泳鉴定结果得到特异㊁大小正确的条带及测序鉴定正确ꎬ表明成功构建了ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ表达质粒ꎮ流式细胞术和ＲＴ￣ＰＣＲ结果显示ꎬＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ的ＣＸＣＲ２蛋白和ｍＲＮＡ表达水平均明显高于对照组ＢＭＳＣꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.００１)ꎮＴｒａｎｓｗｅｌｌ结果显示ꎬＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ迁移能力高于对照组ＢＭＳＣꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０１)ꎮ结论㊀利用慢病毒系统成功构建了稳定表达ＣＸＣＲ２的ＢＭ￣ＳＣꎬｃｘｃｒ２基因修饰ＢＭＳＣ后可明显增加ＢＭＳＣ的迁移能力ꎮ关键字:ＣＸＣ型趋化因子受体２ꎻ小鼠ꎻ骨髓间充质干细胞ꎻ细胞迁移中图分类号:Ｒ７８文献标志码:Ａ文章编号:１００５￣５６７３(２０１９)０１￣００１９￣０７ＤＯＩ:１０.１３３０９/ｊ.ｃｎｋｉ.ｐｍｉ.２０１９.０１.００４Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｘｃｒ２ｇｅｎｅｉｎｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＺＨＡＮＧＬｉ∗ꎬＬＩＵＹｏｎｇ￣ｆｅｉꎬＹＥＣｈｕａｎ￣ｔａｏꎬＢｉａｎＰｅｉ￣ｙｕꎬＬＥＩＹｉｎｇ￣ｆｅｎｇꎬＨＯＵＬｉ￣ｃｈａｏ∗ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙꎬＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌꎬＡｉｒＦｏｒｃｅＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＸｉ'ａｎ７１００３２ꎬＳｈａａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ:ＬＥＩＹｉｎｇ￣ｆｅｎｇꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｙｆｌｅｉ＠ｆｍｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻＨＯＵＬｉ￣ｃｈａｏꎬＥ￣ｍａｉｌ:４５２７８４３６＠ｑｑ.ｃｏｍＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ(ＢＭＳＣ)ｗｉｔｈｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｃｘｃｒ２ｇｅｎｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＢＭＳＣｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｗｈｏｌｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｄｈｅｒｅｎｔｍｅｔｈ￣ｏｄꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｔｉｇｅｎ１(ＳＣＡ￣１)ꎬＣＤ４４ꎬＣＤ４３ꎬＣＤ４５ꎬＩＡ/ＩＥｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅ￣ｔｒｙꎬａｎｄｔｈｅｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄ.Ｔｈｅｃｘｃｒ２ｃＤＮＡｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｏｆｔｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｍｏｕｓｅｃｘｃｒ２ｇｅｎｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄꎬａｎｄｎａｍｅｄａｓｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ.ＨＥＫ￣２９３Ｔｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏ￣ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｐａｃｋａｇｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｓａｎｄｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ.ＴｈｅＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｗｉｔｈｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺｖｉｒｕｓ.ＣＸＣＲ２ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＲＴ￣ＰＣＲ.Ｔｈｅｍｉ￣ｇｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙＴｒａｎｓｗｅｌｌｅｘｐｅｒｉ￣ｍｅｎｔ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＣＤ４４ａｎｄＳＣＡ￣１ｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙｏｖｅｒ９０％ｏｆｔｈｅｔｈｉｒｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＢＭＳＣｃｅｌｌｓꎬｂｕｔＩＡ/ＩＥꎬＣＤ３４ａｎｄＣＤ４５ｈａｒｄｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄꎬａｎｄｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｉｎｄｕｃｅｄ.ＡｆｔｅｒＰＣＲａｎｄｄｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬｔｈｅａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｂａｎｄｓｗｅｒｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｃｏｒｒｅｃｔ.ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｗａｓｉｄｅｎｔｉｃａｌꎬｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｔｈｅｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺｐｌａｓｍｉｄｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃ￣ｔｅｄ.ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＲＴ￣ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣＸＣＲ２ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌＢＭＳＣ.ＴｈｅｔｒａｎｓｗｅｌｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣｗａｓａｐｐａｒｅｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌＢＭＳＣ(Ｐ<０.００１).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅＢＭＳＣｓｓｔａｂｌｙｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＣＸＣＲ２ｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｓｙｓｔｅｍ.Ｔｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｘｃｒ２ｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉ￣ｔｙｏｆＢＭＳＣ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣＸＣｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２(ＣＸＣＲ２)ꎻＭｏｕｓｅꎻＢｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ(ＢＭＳＣ)ꎻＣｅｌｌｍｉｇｒａ￣ｔｉｏｎ㊀㊀间充质干细胞(ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌꎬＭＳＣ)是一类具有自我增殖㊁多向分化潜能的成体干细胞[１]ꎮＭＳＣ具有很强的免疫调节功能ꎬ在免疫和炎症性疾病的治疗中具有良好的潜力[２－４]ꎮ鉴于ＭＳＣ移植后归巢靶组织的数量有限㊁产生的治疗性和抗炎分子效力不够强ꎬ最近多项研究对ＭＳＣ进行基因修饰ꎬ从而增加了ＭＳＣ的治疗效能[５－７]ꎮＣＸＣ型趋化因子受体２(ＣＸＣｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２ꎬＣＸＣＲ２)属于Ｇ蛋白是偶联受体家族ꎬ是趋化因子ＣＸＣＬ１㊁ＣＸＣＬ２㊁ＣＸＣＬ３㊁ＣＸＣＬ５㊁ＣＸＣＬ６㊁ＣＸＣＬ７和ＣＸＣＬ８的配体[８]ꎮ趋化因子在炎症性疾病中广泛表达ꎬ趋化因子与趋化因子受体结合能调节中性粒细胞㊁单核细胞的迁移ꎬ将它们募集到炎症部位发挥相应的作用ꎮ研究通过构建ｃｘｃｒ２基因修饰的ＢＭＳＣꎬ并观察修饰后ＢＭＳＣ到达炎症部位的迁徙能力ꎬ为后续炎症性疾病的ＢＭＳＣ治疗策略奠定基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀细胞与质粒㊀ＨＥＫ￣２９３Ｔ细胞株㊁Ｓｔｂｌ３感受态细胞㊁ｐＣＩ￣ｎｅｏ￣ＣＤ４０Ｌ￣ＧＺ㊁ｐＬｅｎｔｉ￣ＣＤ４０Ｌ￣ＧＺ㊁ｐＣＭＶ３￣ＧＦＰＳｐａｒｋ￣ＣＸＣＲ２载体质粒㊁辅助包装质粒ｐｓＰＡＸ２和ｐＭＤ２.Ｇ均由空军军医大学微生物实验室保存并提供ꎮ１.２㊀实验动物㊀ＳＰＦ级４~６周Ｃ５７ＢＬ/６小鼠４只ꎬ１６~１８ｇꎬ均购自空军军医大学动物实验中心ꎮ１.３㊀主要试剂及仪器㊀ＤＭＥＭ培养基㊁青霉素㊁链霉素均购自ｈｙｃｌｏｎｅ公司ꎻ胎牛血清购自Ｓｉｇｍａ公司ꎻ成骨诱导分化培养基试剂盒购自广州赛业公司ꎻＰＥ标记抗小鼠ＣＤ４４㊁ＳＣＡ￣１㊁ＩＡ/Ｅ㊁ＣＤ３４㊁ＣＤ４５抗体均购自ＢＤ公司ꎻＰＥ标记ＣＸＣＲ２抗体购自Ｂｉｏ￣ｌｅｇｅｎｄ公司ꎻ质粒大量提取ＤＮＡ试剂盒购自Ｏｍｅｇａ公司ꎻ先锋ＲＮＡ快速提取试剂盒㊁ＤＮＡ凝胶回收试剂盒㊁质粒小量提取ＤＮＡ试剂盒均购自Ａｘｙｇｅｎ公司ꎻＰｒｉｍｅＳＴＡＲＤＮＡ聚合酶㊁限制性内切酶ＮｈｅＩ㊁ＭｌｕＩ㊁ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ㊁Ｔ４ＤＮＡ连接酶㊁逆转录试剂盒㊁ＴａｋａｒａＳＹＢＲｇｒｅｅｎ试剂盒均购自Ｔａｋａｒａ公司ꎻ转染试剂ＭＡＸ由本室配制ꎻｍＣＸＣＬ２蛋白购自亿翘神州公司ꎮＣＯ２培养箱㊁Ｔ２５细胞培养瓶均购自Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司ꎻＩＸ７１倒置荧光显微镜购自Ｏｌｙｍｐｕｓ公司ꎻ流式细胞仪购自于美国ＢＤ公司ꎻ４ħ离心机购自德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司ꎻ超速离心机购自Ｂｅｃｋｍａｎ公司ꎻＬｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ４８０ＰＣＲ仪购自罗氏公司ꎮ１.４㊀ＢＭＳＣ的分离、鉴定㊀采用全骨髓贴壁法培养小鼠ＢＭＳＣ[９]ꎮ将小鼠颈椎脱臼法处死ꎬ置于７５％乙醇中浸泡消毒５ｍｉｎꎻ于超净台中剪开皮肤ꎬ剥开肌肉ꎬ分离小鼠双侧股骨ꎬ剪去两端软骨ꎻ用１ｍＬ注射器吸取含１０％血清㊁１％双抗的ＤＭＥＭ培养基反复冲洗骨髓腔ꎬ直至骨髓腔发白ꎻ收集细胞悬液于Ｔ２５培养瓶中ꎮ将其放入３７ħ５％ＣＯ２培养箱中培养ꎬ首次４８ｈ后换液ꎬ以后视细胞状态而定ꎬ约２ｄ换液１次ꎮ传至第３代ꎬ常规消化细胞ꎻ按流式抗体说明书通过流式细胞术检测干细胞表面标志分子ＣＤ４５㊁ＣＤ３４㊁ＣＤ４４㊁ＳＣＡ￣１㊁ＩＡ/ＩＥꎬ并按诱导分化培养基试剂盒说明书诱导ＢＭＳＣ成骨分化ꎬ茜素红染色鉴定ꎮ１.５㊀ｃｘｃｒ２过表达的慢病毒载体构建及慢病毒包装１.５.１㊀ｃｘｃｒ２基因片段的制备㊀根据Ｇｅｎｂａｎｋ中的ｃｘｃｒ２设计引物ꎬ以质粒(ｐＣＭＶ３￣ＧＦＰＳｐａｒｋ￣ＣＸＣＲ２)为模板进行ＰＣＲ扩增ꎮ引物序列如下:Ｆ:ＧＡＣＧＴＣＧＣＴＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＡＡＴＴＣＡＡＧＧＴＧＧＡ(含ＮｈｅＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点)ꎻＲ:ＧＡＣＧＴＣＡＣＧＣＧＴＧＡＧＧＧＴＡＧＴＡＧＡＧＧＴＧＴＴＴＧ(含ＭｌｕＩ酶切位点)ꎮ引物由擎科泽西生物技术公司合成ꎮＰＣＲ反应体系为模板ＤＮＡ２μＬꎬ上㊁下游引物各１.５μＬꎬ５ˑＰｒｉｍｅＳＴＡＲＢｕｆｆｅｒ１０μＬꎬｄＮＴＰＭｉｘｔｕｒｅ４μＬꎬＰｒｉｍｅＳＴＡＲＤＮＡ聚合酶０.５μＬꎬ加超纯水至５０μＬꎮＰＣＲ反应条件为:９８ħ变性１０ｓꎬ５５ħ退火５ｓꎬ７２ħ延伸７５ｓꎬ３０个循环ꎮＰＣＲ产物进行１.０％琼脂糖凝胶电泳鉴定后ꎬ按照ＤＮＡ凝胶回收试剂盒说明书回收ＤＮＡ片段ꎮ１.５.２㊀重组质粒ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ的构建及鉴定㊀用ＮｈｅＩ和ＭｌｕＩ分别对ｃｘｃｒ２ＰＣＲ产物和ｐＣＩ￣ｎｅｏ￣ＣＤ４０Ｌ￣ＧＺ进行双酶切ꎬ并分别进行胶回收ｃｘｃｒ２基因片段和ｐＣＩ￣ｎｅｏ￣ＧＺꎬ用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接后ꎬ用Ｓｔｂｌ３感受态细菌转化ꎬ涂布含有氨苄抗性的琼脂培养基ꎬ过夜培养后挑出单克隆并接种ꎬ３７ħ培养１２~１６ｈ后ꎬＰＣＲ鉴定得到阳性克隆保存甘油菌ꎬ并收集菌体沉淀ꎬ按质粒小量提取ＤＮＡ试剂盒说明书提取质粒ꎬ命名为ｐＣＩ￣ｎｅｏ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺꎮ之后ꎬ将其与ｐＬｅｎｔｉ￣ＣＤ４０Ｌ￣ＧＺ用ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ酶切ꎬ分别获得目的片段ｃｘｃｒ２￣ＧＺ和ｐＬｅｎｔｉ载体ꎬ连接后将连接产物转化Ｓｔｂｌ３感受态细菌ꎬ操作同前法ꎬ菌液ＰＣＲ鉴定单克隆菌落ꎬ鉴定正确菌落委托擎科泽西生物技术公司进行双向测序ꎬ测序结果于ＮＣＢＩ￣ＢＬＡＳＴ网站(ｈｔｔｐｓ://ｂｌａｓｔ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/)进行比对ꎬ序列正确菌落命名为ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺꎮ１.５.３㊀ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ慢病毒的包装㊀将重组质粒ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ１２μｇ与ｐｓＰＡＸ２９μｇ㊁ｐＭＤ２.Ｇ６μｇ混合后ꎬ加入转染试剂(ＭＡＸ溶液)８１μＬꎬ轻柔混匀ꎬ待其形成ＤＮＡ￣脂质体复合物后ꎬ转染ＨＥＫ￣２９３Ｔ细胞ꎮ将细胞放置于３７ħ５％ＣＯ２培养箱孵育４８ｈꎬ收集上清后加入ＤＭＥＭ培养液ꎬ７２ｈ后再次收集上清液ꎬ使用０.４５μｍ滤器过滤细胞碎片ꎬ收集病毒上清液ꎬ２０％蔗糖作为垫子ꎬ以１０００００ˑｇ离心４ｈꎬ超速离心法沉淀浓缩和纯化慢病毒ꎬ收集并分装ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ病毒液ꎬ于－８０ħ保存ꎮ１.６㊀ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ稳定转染ＢＭＳＣ的构建及筛选㊀将第３代的小鼠ＢＭＳＣ铺于６孔板中ꎬ培养至细胞汇合度达到６０％~７０％时ꎬ每孔加入２ｍＬｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ病毒液和ＤＭＥＭ培养基的混合液(按１ʒ１比例)３７ħꎬ１０００ˑｇ离心感染２ｈꎬ弃去病毒液ꎬ加入含有１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基于３７ħ５％ＣＯ２培养箱中继续培养ꎬ４８ｈ后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎꎬＧＦＰ)的表达ꎮ然后加入含有１μｇ/ｍＬｚｅｏｃｉｎ的培养液２ｍＬ进行筛选ꎬ每３~４ｄ更换该培养液ꎬ直至不表达绿色荧光的细胞全部死亡ꎮ经过１４~２１ｄ的筛选后ꎬ获得了稳定表达ＣＸ￣ＣＲ２的小鼠ＢＭＳＣ(ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ)ꎬ同时设置未处理的ＢＭＳＣ作为对照组ꎮ１.７㊀稳定转染细胞系鉴定１.７.１㊀流式细胞术检测ＣＸＣＲ２蛋白表达㊀常规消化ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣꎬ加入预冷的缓冲液(ＰＢＳ加入１％胎牛血清)洗涤２次后ꎬ调整细胞浓度为１ˑ１０５个/孔后加入１μＬＰＥ标记ＣＸＣＲ２抗体ꎬ避光冰浴３０ｍｉｎꎻ洗涤２次后ꎬ用２００μＬＰＢＳ重悬ꎬ用流式细胞仪检测ＣＸＣＲ２蛋白的表达ꎮ１.７.２㊀Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅＰＣＲ检测ｃｘｃｒ２ｍＲＮＡ的表达㊀按照先锋ＲＮＡ快速提取试剂盒说明书分别提取未感染正常ＢＭＳＣ和ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ的总ＲＮＡꎬ并用微黑子核酸测定仪定量ꎮ取５００ｎｇ总ＲＮＡ用逆转录试剂盒制备ｃＤＮＡꎬ然后按照ＴａｋａｒａＳＹＢＲｇｒｅｅｎ试剂盒说明书用Ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ４８０ＰＣＲ仪进行荧光定量ＰＣＲꎮ根据目的基因设计Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅＰＣＲ引物ꎬ序列如下:ｃｘｃｒ２:Ｆ:ＡＴＧＣＣＣＴＣＣＴＡＴＴＣＴＧＣＣＡＧＡＴꎻＲ:ＧＴＧＣＴＣＣＧＧＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＴＧＡＣ￣３ꎻβ￣ａｃｔｉｎ:Ｆ:ＴＧＡＣＧＧＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＴＧꎻＲ:ＡＡＧＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＧＣＴＣＧＧＴꎮ以β￣ａｃｔｉｎ为内参基因ꎬ检测试验组(ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ)及对照组(ＢＭＳＣ)细胞中上述目的基因ｍＲ￣ＮＡ的相对表达量ꎮＰＣＲ引物由擎科泽西生物技术公司合成ꎮ１.８㊀Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ趋化试验㊀在２４孔Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ的上室中接种ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ或ＢＭＳＣꎬ接种密度为１ˑ１０５个/孔ꎬ下室加入６００μＬ趋化缓冲液或正常缓冲液ꎮ实验分为４组:①小室上室加入培养的ＣＸＣＲ２￣ＢＭ￣ＳＣꎬ下室加入含１００ｎｇ/ｍＬｍＣＸＣＬ２正常培养液ꎬ命名为ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组ꎻ②小室上室加入培养的ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣꎬ下室不加任何刺激物ꎬ命名为ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ￣正常组ꎻ③小室上室加入培养的ＢＭ￣ＳＣꎬ下室加入含１００ｎｇ/ｍＬｍＣＸＣＬ２正常培养液ꎬ命名为ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组ꎻ④小室上室加入培养的ＢＭＳＣꎬ下室不加任何刺激物ꎬ命名为ＢＭＳＣ￣正常组ꎮ每组均放置于３７ħ㊁５％ＣＯ２培养箱孵育１２ｈ后用棉签擦去上室内细胞ꎬ用４％多聚甲醛固定１５ｍｉｎꎬ倒置风干后用０.１％的结晶紫染色２０ｍｉｎꎬ在显微镜下对上室底部反面的细胞进行计数ꎬ每组设３个复孔ꎬ每孔随机计数５个视野(２００ˑ)下迁移至膜背面的细胞数ꎮ１.９㊀统计学方法㊀应用ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ５和ＳＰＳＳ１７软件进行统计分析ꎮ基因ｍＲＮＡ的相对表达量采用ｔ检验进行比较ꎻ各组迁移的细胞数采用单因素方差分析进行比较ꎬ两两比较采用ＳＮＫ检验ꎬＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结㊀果２.１㊀ＢＭＳＣ分离及鉴定２.１.１㊀小鼠ＢＭＳＣ形态㊀在显微镜下可以看到ꎬ刚分离的骨髓细胞大多悬浮并呈圆形ꎬ２４ｈ后见大量贴壁细胞ꎬ７２ｈ后贴壁细胞大多呈纺锤型㊁梭形和圆形ꎬ大约１２ｄ细胞长满ꎮ随着培养时间和传代次数的增加ꎬ细胞形态逐渐形似呈梭形ꎬ见图１ꎮ㊀注:Ａ.培养３ｄ的细胞形态ꎻＢ.培养１２ｄ的细胞形态ꎮ图１㊀小鼠ＢＭＳＣ形态(２００ˑ)Ｆｉｇ.１㊀Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ(２００ˑ)２.１.２㊀ＢＭＳＣ表面标志分子流式鉴定㊀流式结果显示ꎬ超过９０％的细胞表达ＣＤ４４㊁ＳＣＡ￣１ꎬ但几乎不表达ＩＡ/ＩＥ㊁ＣＤ３４㊁ＣＤ４５ꎬＢＭＳＣ表面标志分子鉴定ꎬ见图２ꎮ㊀注:Ａ.ＣＤ４４ꎻＢ.ＳＣＡ￣１ꎻＣ.ＣＤ４５ꎻＤ.ＣＤ３４ꎻＥ.ＩＡ/ＩＥꎮ图２㊀ＢＭＳＣ表面标志分子鉴定Ｆｉｇ.２㊀Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｕｒｆａｃｅｍａｒｋｅｒｆｏｒｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ２.１.３㊀诱导ＢＭＳＣ成骨分化㊀成骨诱导２１ｄ后ꎬ细胞呈结节状ꎬ茜素红染色呈红色ꎬ见图３ꎮ表明成骨分化诱导成功ꎮ提示分离获得的小鼠ＢＭＳＣ符合国际细胞治疗协会制定的间充质干细胞标准ꎮ图３㊀ＢＭＳＣ成骨诱导分化(２００ˑ)Ｆｉｇ.３㊀Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｆｏｒｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ(２００ˑ)２.２㊀ｃｘｃｒ２慢病毒载体的构建㊀琼脂糖电泳结果显示ꎬ扩增的目的条带单一㊁特异ꎬ之后菌液ＰＣＲ鉴定㊁酶切鉴定㊁测序分析结果均表明成功构建了慢病毒载体ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺꎬ见图４ꎮ２.３㊀ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ稳定转染ＢＭＳＣ的构建及筛选㊀将ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ质粒与慢病毒包装质粒共同转染ＨＥＫ￣２９３Ｔ细胞ꎬ获得慢病毒后浓缩感染ＢＭ￣ＳＣꎬＢＭＳＣ经过Ｚｅｏｃｉｎ压力选择３周后ꎬ可在倒置荧光显微镜下观察到绿色荧光ꎬ对照组未见绿色荧光ꎬ见图５ꎮ２.４㊀稳定转染细胞系鉴定㊀流式鉴定大约７８.５％的细胞表达ＧＦＰꎬ７５.７％的细胞表达ＣＸＣＲ２ꎮＲｅａｌ￣ｔｉｍｅＰＣＲ结果显示ꎬ试验组的ｃｘｃｒ２ｍＲＮＡ表达水平明显高于对照组ꎬ差异具有统计学意义(Ｐ<０.００１)ꎮ提示ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ构建成功ꎬ见图６ꎮ㊀注:Ａ.ｃｘｃｒ２基因片段的制备ꎻＢ.ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ菌液ＰＣＲ鉴定ꎻＣ.ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ质粒双酶切鉴定ꎻＤ.测序结果在ＮＣＢＩＢＬＡＳＴ比对ꎮ图４㊀ｃｘｃｒ２真核表达载体的构建Ｆｉｇ.４㊀Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｃｘｃｒ２ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ㊀注:Ａ.过表达ＣＸＣＲ２的ＢＭＳＣ的荧光图片ꎻＢ.未感染正常对照ＢＭＳＣ的荧光图片ꎮ图５㊀ｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ稳定转染ＢＭＳＣ荧光表达(４００ˑ)Ｆｉｇ.５㊀ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＭＳＣｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｂｙｐＬｅｎｔｉ￣ｃｘｃｒ２￣ＧＺ(４００ˑ)㊀注:Ａ.流式细胞仪检测ＧＦＰ表达ꎻＢ.流式细胞仪检测ＣＸＣＲ２表达ꎻＣ.Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅＰＣＲ检测过表达ＣＸＣＲ２的小鼠ＢＭＳＣ中ｃｘｃｒ２ｍＲＮＡ表达ꎮ∗∗∗.Ｐ<０.００１ꎮ图６㊀ＣＸＣＲ２修饰的ＢＭＳＣ的鉴定结果Ｆｉｇ.６㊀ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣＸＣＲ２ｍｏｄｉｆｉｅｄＢＭＳＣ２.５㊀ｃｘｃｒ２基因修饰的ＢＭＳＣ迁移能力增强㊀Ｔｒａｎ￣ｓｗｅｌｌ结果显示ꎬＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组在含有１００ｎｇ/ｍＬ的ｍＣＸＣＬ２的趋化液中穿过小室的数目明显高于ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组ꎬＴｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测细胞迁移ꎬ见图７ꎮ表明ｃｘｃｒ２基因修饰ＢＭＳＣ可增强其趋化潜能ꎮ㊀注:Ａ.ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组ꎻＢ.ＣＸＣＲ２￣ＢＭＳＣ￣正常组ꎻＣ.ＢＭＳＣ￣ｍＣＸＣＬ２组ꎻＤ.ＢＭＳＣ￣正常组ꎻＥ.２４ｈ后不同组别穿过膜下的细胞数ꎮ∗∗.Ｐ<０.０１ꎮ图７㊀Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测细胞迁移(２００ˑ)Ｆｉｇ.７㊀Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｂｙｔｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙ(２００ˑ)３㊀讨㊀论２０世纪７０年代ꎬＦＲＩＥＤＥＮＳＴＥＩＮ等[１０]首次利用贴壁法从骨髓分离得到ＢＭＳＣꎮ由于其来源方便ꎬ易于分离培养ꎬ且具有多向分化㊁免疫调节㊁输送治疗剂的能力ꎬ是较好的组织工程细胞和基因载体细胞ꎬ常被用于免疫与炎症性疾病的基础和临床研究[１１－１２]ꎮ通过静脉或腹腔移植的ＭＳＣ会沿着趋化梯度向受损组织迁移ꎬ在靶组织中检出率有限(只有不到１％)ꎬ大大降低了其治疗效应ꎮ可能的原因是ＭＳＣ表面趋化因子受体的表达较低ꎮ研究发现ꎬ趋化因子及其受体在ＢＭＳＣ的归巢中起着重要作用ꎬＢＭＳＣ表面的趋化因子受体通常支配着血管内循环细胞的黏附和滚动[１３－１４]ꎮＣＨＥＮ等[１５]研究发现ꎬｃｘｃｒ４过表达的ＢＭＳＣ在小鼠结肠炎模型中可增强ＢＭＳＣ向受损肠黏膜的归巢ꎬ对治疗结肠炎有较好的疗效ꎮＨＯＥＧＬ等[１６]研究发现ꎬ在内毒素所致的肺损伤中趋化因子ＣＸＣＬ１㊁ＣＸＣＬ２高表达ꎬＮＫ细胞通过ＣＸＣＲ２介导参与中性粒细胞向肺部炎症部位的募集ꎮ因此ꎬ对ＢＭＳＣ基因修饰趋化因子受体成为提高归巢能力的新策略[１７－１８]ꎮ研究通过全骨髓贴壁法分离培养ＢＭＳＣꎬ使用ＤＭＥＭ培养基进行培养ꎬ经过换液㊁传代去除了杂细胞ꎬ从而获得了纯度较高的ＢＭＳＣꎮ为了检测其是否符合干细胞标准ꎬ通过流式检测干细胞表面标志ＳＣＡ￣１㊁ＣＤ４４㊁ＣＤ４３㊁ＣＤ４５㊁ＩＡ/ＩＥꎬ结果显示ꎬ其高表达ＣＤ４４㊁ＳＣＡ￣１ꎬ几乎不表达ＩＡ/ＩＥ㊁ＣＤ３４㊁ＣＤ４５ꎬ通过诱导成骨分化观察到茜素红染色阳性的钙结节沉积ꎮ上述结果表明通过全骨髓贴壁法培养出符合细胞表型㊁具有分化潜能的ＢＭＳＣꎮ由于小鼠的ＢＭＳＣ具有感染率低的特点ꎬ研究通过慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染至ＨＥＫ￣２９３Ｔ细胞获得慢病毒ꎬ经超速离心沉淀法浓缩纯化ꎬ获得ｃｘｃｒ２过表达的慢病毒ꎮ通过离心法进行感染ꎬ利用抗性筛选提高阳性细胞的比例ꎬ从而使得ＣＸＣＲ２能稳定表达ꎮ荧光显微镜可以观察到稳定表达ＣＸＣＲ２的ＢＭＳＣ具有绿色荧光ꎻ流式细胞和ＲＴ￣ＰＣＲ结果显示ꎬＣＸＣＲ２蛋白和ｍＲＮＡ表达水平均明显高于正常ＢＭＳＣꎬ证实成功构建稳定表达ＣＸ￣ＣＲ２的ＢＭＳＣꎮ通过Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ趋化试验比较了ｃｘｃｒ２修饰的ＢＭＳＣ与普通ＢＭＳＣ的迁移和归巢ꎮ结果表明ꎬｃｘ￣ｃｒ２修饰的ＢＭＳＣ更容易迁移ꎬ提示ＣＸＣＲ２参与了ＢＭＳＣ的迁移与归巢ꎮ综上所述ꎬ研究成功构建了ｃｘｃｒ２修饰的ＢＭ￣ＳＣꎬ为进一步研究其直接移植治疗临床疾病及其作用机制奠定了基础ꎮ参考文献[１]㊀ＵＬＬＡＨＩꎬＳＵＢＢＡＲＡＯＲＢꎬＲＨＯＧＪ.Ｈｕｍａｎｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ￣ｃｕｒｒｅｎｔｔｒｅｎｄｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ[Ｊ].ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＲｅｐꎬ２０１５ꎬ３５(２):１￣１８.[２]㊀ＲＯＳＴＡＭＩＭꎬＨＡＩＤＡＲＩＫꎬＳＨＡＨＢＡＺＩＭ.Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉ￣ｎｅｅｒｅｄａｄｉｐｏｓｅｍｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇＨＩＶ￣ｂａｓｅｄｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓａｓｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＣｅｌｌＲｅｐｒｏ￣ｇｒａｍꎬ２０１８.ＤＯＩ:１０.１０８９/ｃｅｌｌ.２０１８.０００６.[３]㊀ＳＨＡＨＫꎬＺＨＡＯＡＧꎬＳＵＭＥＲＨ.Ｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｅｓｔｏｔｒｅａｔｏｓｔｅｏ￣ａｒｔｈｒｉｔｉｓｗｉｔｈｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＩｎｔꎬ２０１８ꎬ２０１８:５３７３２９４.[４]㊀ＬＥＢＬＡＮＣＫꎬＭＯＵＧＩＡＫＡＫＯＳＤ.Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｉｎｎａｔｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕ￣ｎｏｌꎬ２０１２ꎬ１２(５):３８３￣３９６.[５]㊀ＣＨＥＮＸꎬＺＨＡＮＧＹꎬＷＡＮＧＷꎬｅｔａｌ.Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｍｏｄｉｆｉｅｄｗｉｔｈｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅ￣１ｈａｖｅｅｎｈａｎｃｅｄｐａｒａｃｒｉｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄａｔｔｅｎｕａｔｅｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄｏｘｉｄａ￣ｔｉｖｅｄａｍａｇｅｉｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０１８ꎬ４９(１):１０１￣１２２.[６]㊀ＸＵＸＰꎬＨＵＡＮＧＬＬꎬＨＵＳＬꎬｅｔａｌ.ＧｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩｔｙｐｅ２ｒｅｃｅｐ￣ｔｏｒｉｎｃｒｅａｓｅｓｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｔｏｉｎｊｕｒｅｄｌｕｎｇｉｎＬＰＳ￣ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｍｉｃｅ[Ｊ].ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＴｒａｎｓｌＭｅｄꎬ２０１８ꎬ７(１０):７２１￣７３０.[７]㊀ＳＴＥＷＡＲＴＡＮꎬＭＡＴＹＡＳＪＪꎬＷＥＬＣＨＫＯＲＭꎬｅｔａｌ.ＳＤＦ￣１ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｅｎｈａｎｃｅｓＧＡＰ￣４３￣ｐｏｓｉ￣ｔｉｖｅａｘｏｎａｌｇｒｏｗｔｈｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＲｅｓｔｏｒＮｅｕｒｏｌＮｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１７ꎬ３５(４):３９５￣４１１.[８]㊀ＨＥＲＴＺＥＲＫＭꎬＤＯＮＡＬＤＧＷꎬＨＩＮＥＳＯＪ.ＣＸＣＲ２:ａｔａｒｇｅｔｆｏｒｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ?[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＴｈｅｒＴａｒｇｅｔｓꎬ２０１３ꎬ１７(６):６６７￣６８０.[９]㊀ＳＯＬＥＩＭＡＮＩＭꎬＮＡＤＲＩＳ.Ａｐｒｏｔｏｃｏｌｆｏｒｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｆｒｏｍｍｏｕｓｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｔｏｃꎬ２００９ꎬ４(１):１０２￣１０６.[１０]㊀ＦＲＩＥＤＥＮＳＴＥＩＮＡＪꎬＣＨＡＩＬＡＫＨＪＡＮＲＫꎬＬＡＬＹＫＩＮＡＫＳ.Ｔｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｆｂｒｏｂｌａｓｔｃｏｌｏｎｉｅｓｉｎｍｏｎｏｌａｙｅｒｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｇｕｉｎｅａ￣ｐｉｇｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｎｄｓｐｌｅｅｎｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＣｅｌｌａｎｄＴｉｓｓｕｅＫｉ￣ｎｅｔｉｃｓꎬ１９７０ꎬ３:３９５￣４０３.[１１]㊀ＦＲＥＮＥＴＴＥＰＳꎬＰＩＮＨＯＳꎬＬＵＣＡＳＤꎬｅｔａｌ.Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ:ｋｅｙｓｔｏｎｅｏｆｔｈｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｎｉｃｈｅａｎｄａｓｔｅｐ￣ｐｉｎｇ￣ｓｔｏｎｅｆｏｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｍｅｄｉｃｉｎｅ[Ｊ].ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１３ꎬ３１:２８５￣３１６.[１２]㊀ＬＩＸꎬＷＡＮＧＭꎬＪＩＮＧＸꎬｅｔａｌ.Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗａｎｄａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ￣ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ:ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ￣ｔｉｏｎꎬａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｃａｒｔｉｌａｇｅｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ[Ｊ].ＣｒｉｔＲｅｖＥｕｋａｒｙｏｔＧｅｎｅＥｘｐｒꎬ２０１８ꎬ２８(４):２８５￣３１０.[１３]㊀ＩＤＯＲＮＭꎬＴＨＯＲＳＰ.Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｎｄｅｘｅｒｃｉｓｅｔｏｔａｃｋ￣ｌｅｔｈｅｉｎａｄｅｑｕａｃｙｏｆＴｃｅｌｌｈｏｍｉｎｇｔｏｔｈｅｔｕｍｏｒｓｉｔｅ[Ｊ].Ｃｅｌｌｓꎬ２０１８ꎬ７(８):Ｅ１０８.[１４]㊀ＺＨＡＮＧＸꎬＨＵＡＮＧＷꎬＣＨＥＮＸꎬｅｔａｌ.ＣＸＣＲ５￣ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｅｘｈｉｂｉｔｅｎｈａｎｃｅｄｈｏｍｉｎｇａｎｄｃａｎｄｅ￣ｃｒｅａｓｅｃｏｎｔａｃｔｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＭｏｌＴｈｅｒꎬ２０１７ꎬ２５(６):１４３４￣１４４７.[１５]㊀ＣＨＥＮＺꎬＣＨＥＮＱꎬＤＵＨꎬｅｔａｌ.ＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄＣＸＣｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕ￣ｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｃｏｌｉｔｉｓｖｉａｍｕｃｏｓａｒｅｐａｉｒ[Ｊ].ＥｘｐＴｈｅｒＭｅｄꎬ２０１８ꎬ１６(２):８２１￣８２９.[１６]㊀ＨＯＥＧＬＳꎬＥＨＲＥＮＴＲＡＵＴＨꎬＢＲＯＤＳＫＹＫＳꎬｅｔａｌ.ＮＫｃｅｌｌｓｒｅｇｕｌａｔｅＣＸＣＲ２＋ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔｄｕｒｉｎｇａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＪＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌꎬ２０１７ꎬ１０１(２):４７１￣４８０.[１７]㊀ＧＯＬＣＨＩＮＡꎬＲＥＫＡＢＧＡＲＤＡＮＭꎬＴＡＨＥＲＩＲＡꎬｅｔａｌ.Ｐｒｏ￣ｍｏｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌ￣ｂａｓｅｄｔｈｅｒａｐｙ:ｓｐｅｃｉａｌｆｏｃｕｓｏｎｔｈｅｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙａｎｄｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓｔｕｄｉｅｓ[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌꎬ２０１８.ＤＯＩ:１０.１００７/５５８４＿２０１８＿２５６.[１８]㊀ＫＡＲＰＪＭꎬＬＥＮＧＴＧ.Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｈｏｍｉｎｇ:ｔｈｅｄｅｖｉｌｉｓｉｎｔｈｅｄｅｔａｉｌｓ[Ｊ].ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌꎬ２００９ꎬ４(３):２０６￣２１６.收稿日期:２０１８￣１０￣１６㊀修回日期:２０１８￣１２￣１２编辑:陈凌云。
《伤寒疫苗的研究进展》一文读后感
收 稿 日期 ：２０１０—０８—０５ 作者简介：陈廷柞 （１９１７一），男 ，国家一级研究员 。
Ｅ—ｍａｉｌ：ｔｚ１９１７＠ ｓｉｎａ．ｅｏｍ
样 ，都 能显示 出安居乐业 的太平 盛世 ！ 话 扯远 了，还是 回过 头 来谈 一谈 碰 壁 记这 则 轶
事吧 １ ２ 碰壁记 ：黄粱 美梦一场 空 ！
在 我 的 医学 生涯 中 ，有一 件使 我 终身 难 以忘怀 的往事 ：１９８１年冬 ，我赴 Ｅｔ内瓦 ＷＨＯ总部参加 疫苗 质量 控制会议 后 ，顺 道 去 了一 趟伯 尔 尼 的经 历 。这 是我 第二 次 ‘光 临 ’瑞 士 了。上 一 次 是在 １９４７年 ， 其 问相 隔 ３４年 。不论 是 日内瓦 ，或是 伯 尔尼 ，都 是 旧地 重游 ，各有一 番特有 的风韵 ，一种怀 旧之情 油然 而 生 。我很 喜欢 伯 尔尼 这 个小 不 点儿 国都 ，古 朴 典 雅 的建筑 、恬淡 宁静 的环境 ，以及语言不 同的三 个 民 族 可 以和睦相 处 ，共 存 共 荣 ，这在 人世 问实属 罕 见 。 以我在 近郊所住 的使馆 招 待所 来 说 ，邻舍 住 家或 周 围商店 ，不但美观雅致 ，而且气派轩昂，令人陶醉、赞 口不绝 。那里 家家 户户 窗 子 没有 护栏 ，也没 有 围墙 公园或 深宅大 院 。 当你 停 在 路边 要 过 马路 时 ，车手 会把车 子停住 ，挥 手让 你 先 过 马路 ！这 些表 象使 我 记起 当年住 在 哥 本 哈根 郊 区时 的 感 受 几乎 一 模 一
《微生物学与免疫学》课件
微生物的生态与分布
生态环境
微生物在土壤、水域、空气、动植物 体内等多种生态环境中生存和繁殖。
分布范围
微生物分布范围广泛，几乎无处不在 ，对自然界的物质循环和生命维持起 着重要作用。
02
CATALOGUE
免疫学基础
免疫系统的组成与功能
免疫系统的组成
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫活性分子组成，它们共同作用，维护机体的健康。
制备方法
选择合适的微生物、进行培养、纯化 、灭活或减毒处理，以及加入佐剂等 。
疫苗接种的程序与注意事项
程序
按照国家免疫规划或卫生部门的建议， 按照规定的年龄和时间进行接种。
VS
注意事项
确保疫苗的储存和运输符合规定，避免疫 苗失效；接种前应了解宝宝的身体状况， 避免在疾病状态下接种；接种后应留观 30分钟，确保无异常反应。
微生物学与免疫学是生命科学领域中的重要分支，与其他学科有着密切的 联系。
例如，与药理学、分子生物学、生物信息学等学科的交叉研究，有助于深 入探索微生物和免疫系统的奥秘，发现新的药物靶点和治疗策略。
未来，随着多学科交叉研究的不断深入，将进一步推动微生物学与免疫学 的发展，为人类健康事业做出更大的贡献。
肿瘤免疫疗法
利用免疫系统来攻击肿瘤细胞的方法 ，包括免疫检查点抑制剂、肿瘤疫苗 和细胞疗法等。
免疫检查点抑制剂
通过阻断免疫检查点分子，如CTLA4和PD-1，来增强T细胞对肿瘤的免 疫反应。
肿瘤疫苗
利用肿瘤抗原制备的疫苗，旨在激发 机体对肿瘤细胞的免疫反应。
细胞疗法
利用自体或异体的免疫细胞来攻击肿 瘤细胞，如CAR-T细胞疗法。
自身免疫性疾病
利用免疫疗法来调节机体对自身抗原的反应，以达 到治疗自身免疫性疾病的目的。
幽门螺杆菌动物感染模型的建立及较适感染剂量的确定_秦敏
幽门螺杆菌动物感染模型的建立及较适感染剂量的确定秦 敏,杨宗新,雒小玲,涂小平,周富昌,吴 皓(成都生物制品研究所,成都 610063)摘 要:尝试在SPF级K M鼠胃内定植HP,并确定其定植的较适感染菌量。
采用幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,HP)Sy dney Strain1株(简称SS1)攻击,连续5次,分别于最后一次感染后第2、4、8、12、16、26周处死小鼠,取胃粘膜组织分别进行病理切片,尿酶试验、涂片镜检和HP分离培养。
结果 试验组动物HP定植率可达100%,对照组未有定植,感染量越大越易定植,定植菌量随时间的延长有增加的趋势,定植时间可达26周,12周龄小鼠感染的较适菌量5×108。
病理组织学检查显示,小鼠有轻至中度浅表性胃炎改变,随时间延长有加重趋势,对照组未见炎症反应。
HPSS1株能在SP F级K M鼠胃内较长期定植,并能引起胃部炎性病变。
关键词:幽门螺杆菌;动物感染模型;感染菌量中图分类号:R378.99 文献标识码:A 文章编号:1005-5673(2002)-01-0018-05Establishment of Helicobacter pylori infection mouse model and determinating of the optimun infection dosage QI N Min,Y AN G Zong-xin,LUO X iao-lin,et al(Chengdu I nstitute of Biological Products,Chengdu610063)A bstract:In order to infect the SPF KM mice w ith HP and determine the optimum infection dosage.T he SP F KM mice w ere continuously challenged with HP Sydney Strain1for5times,then the animals were sacrificed a t the2nd,4th,8th, 12th,16th and26th w eek after the challenge,the stomach w as removed from each mouse for urease test,histolo gical as-sessment,mucosal smear and quantitative culture.T he coloniza tio n rate could reach100%in some of the test g roups w hile there w as no HP infectio n in the co ntrol.T he larger the infection dosage used,the earlier the co lonization happened and the mo re the colonies presented.T he quantity of co lony show ed that the tendency of bacterial of g rowing associated with the increasing of the infection time,and the pro cess of colonization could last for more than26weeks.T he histo logical assess-ment showed g astric inflammation with the inclination of aggravating in the test g roup but no inflammation present in the control.Group HP SS1can colonize in the stomach of SP F KM mice fo r a long time and cause g astric inflammato ry disease as w ell.T he optimum dosage to infect the12w eek old mice is5×108of HP.Key words:HP;Animal model of infection;Infection dosage 幽门螺杆菌(Helicobacter Py lori,HP)感染为胃、十二指肠疾病的重要病因,并被WHO确认为是胃癌的第一致病因素,为探索HP感染敏感的动物模型,由于其感染的广泛性和药物疗效的局限性,免疫接种可能是预防和有效控制感染的最好途径,HP 动物模型的建立是幽门螺杆菌疫苗开发的关键,国内外学者用各种动物进行试验〔1-3〕,通过近10年的研究,已为HP感染啮齿类动物积累了经验,但所感染成功的鼠类多难以成为常规试验所用,实验中尝试以国内常用的SPF级KM鼠胃内定植HP,并确定感染定植的较适菌量。
《微生物学免疫学进展》关于稿件优先数字出版的启事
是 它作 为一 种 运输 载 体 蛋 白 ， 血 液 中 的大 量 蛋 白或
ｎ ｅ ｗ ｉ ｎ ｔ ｒ ａ ｖ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｇ ｌ ｏ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ（ Ｉ Ｇ Ｉ Ｖ — Ｃ， １ ０ ％ ）ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｖ ｉ —
非蛋 白类物质 ， 包括脂肪酸 、 胆红素 、 胆酸 、 类固醇
激素 、 金 属 离 子 等 ，均 可 以作 为 配 体 与 白蛋 白结 合＿ ６ Ｊ 。因此 白蛋 白在 Ｉ Ｖ Ｉ Ｇ 中 的残 留含 量 可作 为衡
研究 。Ｇ ａ ｍ ｕ ｎ ｅ ｘ — Ｃ是 一种 国际上广 泛使用 的 Ｉ Ｖ Ｉ Ｇ
产 品， 其起 始 工 艺 为低 温 乙醇 法 制 备 组 分 Ｉ Ｉ 和Ｉ Ｉ Ｉ ，
本研 究 的起 始工 艺则 是亲 和层 析 。成 品杂质 分析 结
果显示： 工艺获得的 Ｉ Ｖ Ｉ Ｇ 中杂 质 Ｉ ｇ Ａ 含 量 仅 为
ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ．Ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｈ ｅ ｍａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ２ ０ ０ ４， ２ ０ （ ４） ： ２ ２ ６ － ２ ３ ３ ． ［ ５ ］ Ｌ ｅ ｂ ｉ ｎ ｇ Ｗ，Ｒ ｅ ｍｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｎ Ｋ Ｍ，Ｓ ｃ ｈ ｒ ｅ ｉ ｎ ｅ ｒ Ｃ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｐ ｒ ｏ ｐ ｅ ｔ ｒ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ａ
微生物学免疫学进 展
２ ０ １ ３年 １ Ｏ月第 ４ １卷第 ５期
微生物学免疫学进展2010年38卷1—4期分类索引
： ｌ ： 猪链 球 菌 ２型感染 实验 动物模 型的研究进展
……… ………… ………… … 宋 洁 ， 庶 ２ １ （ ）５ ６ 黎 ００ ３ ：７— ０
变异链球 菌和血链 球 菌全代谢 途径 比对 分析 …… ………… …………… ……… … 李呜宇 ２ １ ３ ： —８ ０ ０（ ） １ 炭 疽灭 活和裂解 芽胞抗 原免疫 家兔后 血清 中的 ＩＧ抗 体应答 ｇ
９ ２
微生物学免疫学进展 ２ １ ０ ０年第 ３ ８卷第 ４期
Ｐｏ ｃｏｉ ｕ０ Ｎ ｖ ２ １ ， ｏ．８Ｎ ． ｒ ｉ Ｍｉ ｂ ｌｍｍ ｎｌ ０． ００ Ｖ １３ ｏ４ ｍｎ ｒ ｏＩ
微 生物 学免疫 学进 展 ２ １ ０ ０年 ３ ８卷 １ —４期分 类索 引
说 明 ： 目前有 ：为综 述 ， 题 ｝ ： ☆为简报 ， △为论坛 ， ※为史记 ， 著 的题 目不标 符号 论
病 毒 与病 毒性 疫 苗
人免 疫球蛋 白中肠 道病毒 ７ 型 中和抗体效价 的测定 １ ……… 毛群颖 ， 郝春 生 ， 霞 ， ２ １（ ）１ ２ 张 等 ００ １ ：８— １
冻干麻疹减毒活疫苗残余水分影响因素的探讨 ……………… 徐 斌， 瞍 ， 园， ２ １（ ）２ — ５ 王 周 等 ００ １ ：２ ２ 牛肾组织 及其培 养物 的不 同消 化法效果评 价 … ………… … 刘学 平 ， 至栋 ， 劲草 ， ２ １（ ）２ ３ 魏 沈 等 ００ １ ：６— １ ： 乳头瘤 病毒 １ ｌ ： 人 ６型 Ｅ ５蛋 白功 能研究进 展 ……… …………… ……… …… 李 薇 ， 万艳平 ２ １ （ ） ５ ６ ０ ０ １ ：３— ５
核心期刊《中华微生物学和免疫学杂志》
核心期刊:《中华微生物学与免疫学杂志》一、期刊简介:中华微生物学与免疫学杂志1981年创刊,就是中国科协所属的科技期刊,为中华医学会主办的系列杂志之一,由北京生物制品研究所编辑出版。
旨在反映我国微生物学与免疫学科研工作的重大进展,为本专业科研工作者提供信息服务,促进国内外学术交流,促进本学科的发展。
二、报道内容:中华微生物学与免疫学杂志[1] 主要刊登医学微生物学与免疫学方面的研究论文、简报及评论,报道国内外学术动态等。
三、主要栏目:辟有:细菌学、病毒学、分子微生物学、基础免疫学、临床微生物学、临床免疫学、免疫遗传、肿瘤免疫。
中药与免疫、免疫学技术、检测技术等栏目。
四、获奖情况:杂志曾多次获得中华医学会优秀期刊奖;两次获中国科协优秀科技期刊二等奖。
获得第二届全国优秀科技期刊三等奖,2001年进入国家新闻出版署建设的“中国期刊方阵”。
象。
五、该刊被以下数据库收录:CA 化学文摘(美)(2014)JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)(2013)CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(2015-2016年度)(含扩展版)北京大学《中文核心期刊要目总览》来源期刊:1992年(第一版), 1996年(第二版), 2000年版, 2004年版, 2008年版, 2011年版, 2014年版期刊荣誉:中科双效期刊六、基本信息:外文名称:Chinese Journal of Microbiology and Immunology主办单位:中华医学会出版周期:月刊ISSN:0254-5101CN:11-2309/R出版地:北京市语种:中文开本:大16开邮发代号:2-55创刊时间:1981七、出版信息:出版文献量:3503篇总下载量:260524总被引量:22211专辑名称:基础科学;医药卫生科技专题名称:基础医学;生物学八、评价信息:(2016版)复合影响因子:0、622(2016版)综合影响因子:0、554九、封面信息:十、发表本期刊文章注意事项:A、了解期刊的概况,了解期刊就是综合期刊(例如Nature、Science等)还就是专业期刊(例如PRL、Blood等),专业期刊相对更容易接受本领域的文章。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
３ 原稿 的各组 成部 分请 另行开 始 ， 顺序是 ： 题 （ 其 文 包括 作者 、 单位 、 地址 和 邮编 ） 中 文摘要 和 关键 词 、 、 英 文摘要 （ 括 文题 、 者 、 位 、 包 作 单 地址 与邮编 ）英 文关 键词 、 、 正文 、 致谢 、 参考 文 献 、 （ 图 占一 页 ， 括 图 图 每 包
题 和说 睨 ） 和表 （ 每表 占一 页 ， 包括 表题 和表 注 ） 。 ４ 文题 ： 求简 睨醒 目， 要 不超 过 ２ ０字为 宜 。一 般不设 副标 题 。可采用 通用 的缩 略语 。
５ 摘要 ： 般要求 ３０字 左右 ， 一 ０ 结构 性摘要 以不超 过 ５ ０字 为宜 。综 述 亦要求 写 中文摘 要 。 ０ 关 键 词 ： ～５个 。词 间加 标点 符号 “ ” ３ ；。 ６ 正 文 ： 文 内标 题层 次请 用 阿拉 伯数 字标 示 ， 正 左顶 格 。二级 以下标 题后 空一格 可 连排 。例 如 ：
１ ７ ４ ７－ ７ ９ ４， ５ ４ ２．
注 ：１ 凡 录人 文献 ， 刊 文章须 写 出文题 ； （） 期 专著 （ ） 书 中的分题 不必 写 出 ， 睨引用 部分 所在 页码 即可 。 注 （ ） 文参 考 文献 用 原文 录人 。作者 姓在前 名在后 ， 用缩写 ， ２外 名 其后 不加 缩写 号 “ ”。 “ｔ ｌ 前带 “ ” ． ｅ ａ” ，， 后 加 “ ”。书 刊实词 的第 一个 字母应 大写 ， ． 其余 小写 。版次用 序数 词缩写 形式 表示 ， ５ｈｅ． 如 ｔ ｄ
出版 社 ，９ ５，５ － １ １９ ３ ８３ ． ７
［ ］ ａｓｎＪ Ｍｅｔ ｓ Ｃ ＷａｓｎＥ ， ｔ １ Ｒ ｐｄｅｓ ｎ ｃｎ ｍ ｃｌ ｃｅｎｎ ｓｆｒ ｔ ｏ ｉ ｕ ３ Ｃ ｒ Ｒ， ｒ ｎ ， ｔ Ｊ ｅ ａ． ａ ｉ ａｙ ｄｅｏ ｏ ｉａ ｓｒ ｉｇｔ ｔｏ ｉ ｄｅ ｔ ｈ — ｏ ｅ Ｓ ｏ ａ ｅ ｅ ａ ｂ ｓｏ ｎ
［ 序号 ］ 著者．书名版次（ 第一版可不标注） 出版地 ： ， 出版者 ， 出版年 ： 所在页。 举 例 如下 ： ［］ １ 俞纯山， 徐新华 ， 王爱霞 ， 艾滋病在中国及其预防［ ］ 中华 医学杂志 １８ ，８ １ ：－． 等． Ｊ． ９８６ （ ）２５ ［］ ２ 刘德铮． 日咳疫苗［ ． ： 百 Ｍ］见 卢锦汉 ， 以浩 ， 章 赵铠主编． 医学生物制 品学． １ 北京 ： 民卫生 第 版． 人
１ 菌 种 １ １ 分 离菌株 ．
１２ 临床标本 ．
２ Ｐ Ｒ检测 Ｃ ２ １ 引物设 计 ． ２ ２ Ｄ Ａ模 板制 备 ． Ｎ
７ 参考 文献 ： 以文 中 出现的先 后 ， 主要 的 、 年发表 的 、 者亲 自阅读过 的依次 列 人 。未 公开 发 表 或 择 近 作 内部 资料请 勿 引用 。本刊拟 定格 式 与标点符 号 为 ： ［ 序号 ］ 者．文题 ．刊 名 作 年 ， ： 止页。 卷 起
维普资讯
２０ ０７年第 ３ ５卷第 １ 期
ｏ ．３ ． Ｐｏ ｉ ｏ ｉ ｕ ｏ Ｆ ｂ ０ ７，Ｖ １ ５Ｎｏ １ ｒｇ ｎＭ ｅ ｂ— Ｉ ｎｌ ｅ ．２ ０ ｉ ｒ ｏ ｍｍ ｌ
维普资讯
２０ ０７年第 ３ ５卷第 １ 期
Ｐｏ ｃｏｉ ｍ ｕ ｏ ｒｇｉ Ｍｉ ｂ ｌ ｍ ｎ ｌ ｎ ｒ ｏＩ
！ Ｑ７ ｏ
： 箜 ：
８ ３
《 生 物学 免疫 学 进 展》 约 微 稿
’微 生物 学免 疫学 进展 》 《 由中华 人 民共 和国卫生 部 主管 、 兰州 生 物制 品研 究 所 主办 的国家 级 医学 卫 生科 技期 刊 ， 刊 ， 季 国内外公 开 发行 。本 刊 以反 映 国内外 微 生物 学 、 疫 学及 相关 学 科 的新 理 论 、 进 展 ， 道 生 免 新 报 物 技术 开发 与应 用 的新 方法 、 新成 果 为宗 旨， 为广 大 医药 、 检验 、 生防疫 工作 者 ， 卫 大专 院校 医学 、 生物 学专 业 的师生 ， 以及人 、 医生物 制 品界 的同仁服 务 。 兽 本 刊 主要刊 登有 一定 水平 、 有所创 新 的论 文 、 验报 告 ； 映 国内外 新 水 平 、 成 就 的综 述 ； 论 、 报 实 反 新 评 简 等 。欢 迎 材料准 确翔 实 、 立论新 颖独 创 ， 证缜 密精 当 ， 论 具有 较高学 术价 值 的文章 。 来 稿 择优 录用 ， 不退稿 ， 自留底稿 。半 年 内未 刊用者 可改 投他刊 。本 刊编辑 对稿 件 有删改 权 。 请 １ 来稿 请用 规范 简 化字 ，４纸 打 印或 ｌ Ａ ６开方 格稿 纸誊 清 。文 中外 文 字母 、 号请 打 字或 以 印刷 体 书 符 写， 大写 、 小写 、 体 、 体要 分清 。上 、 正 斜 下角 的标号及 数码 须大小 分 睨 ， 高低适 宜 。 ２ 论 著要 求不超 过 ５０ ００字 ， 综述 不超过 ６Ｏ ＯＯ字 （ 包括 图表所 占版面 ） 其 它文 章不 超 过 ２０ ， ００字 ， 简报
ｌａ ｍｕｏ ｅ ｎｙｖｕ［ ］Ｌｎｅ １８ ，（ ）３ １３２ ｎｌｉ ｎｆｉ ｅ ｉ ｓＪ ． ａｃｔ ９７ １ ３ ：６ —６ ． ｌｍ ｉｅ ｒ ［ ］ ｉｓｎＩ Ｓ ａｔＭＮ． ａ ｏｏｉｐｙｉｏｙ Ｍｅｈ ｉ ｆ ｉ ａｅ Ｍ］ ８ｈ Ｐ ｉｄｌｈａ Ｓｕｄｒ， ４ Ｗｅｎｔ ， ｗ ｒ ｉ ｚ Ｐｔ ｌｇ ｈｓ ｌｇ： ｃａ ｓ ｏ ｓｓ ［ ． ｔ． ｈｌ ｅｐｉ： ａｎｅｓ ｈ ｃ ｏ ｎ ｍｓ ｄ ｅ ａ