分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量

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分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究

分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究
黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物 ,也是一些保健品和中药材的有效成分之一 。黄酮类化 合物的定量方法常用的有 HPLC 法和分光光度法[1~3] ,在实际生产和科研过程中 ,对于黄酮单体的定量 常采用 HPLC 法 ,而对总黄酮的测定 ,考虑到方法的简便 、快捷以及可行性 ,多采用在碱性介质中加铝盐 显色的分光光度法 。由于天然植物的组成非常复杂 ,分光光度法在实测过程中会产生各种干扰 ,影响结 果的准确性 。本文通过测定一些植物提取物中总黄酮的含量 ,对分光光度法各个实验环节进行了详细 研究 ,发现有几个引起较大测定误差的问题 ,由此总结出一种快速准确的定量分析实验步骤 ,取得满意 的实验结果 。
对差值 ,芦丁为 3219 % ,锦鸡儿为 3016 % ,沙棘为 6611 %。可见 ,乙醇浓度对该方法的最终显色影响很
大 ,所以在实际测定中 ,视样品的溶解性 ,在保证所用乙醇浓度前后严格一致的情况下 ,一般可选用
30 %~60 %的乙醇稀释定容 。
3. 2 显色试剂加入时间 、显色时间对吸光度的影 液后放置 5 min ,然后加入 NaOH 溶液 。
目前确定的用量基础上变化范围在 50 %~150 %之间 ,对吸光度基本无影响 。
4 结果与讨论
4. 1 优化后的总黄酮含量测定实验步骤 取一定量的样品置于 25 mL 容量瓶中 ,用 30 %乙醇稀释至 10 mL ;加入 017 mL 5 % NaNO2 溶液摇匀 ,立刻加入 017 mL10 % Al (NO3 ) 3 溶液摇匀 ,放置 5 min ;加入 5
01477 013082 10217
01553 014384 10916
01623 015582 11116
5 小结
(1) 用 NaNO2 - Al (NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光度法测定总黄酮含量时 ,必须严格保证稀释定容用乙 醇的浓度 、试剂加入时间 、显色时间等测试环节前后完全一致 ,否则会出现很大误差 。

总黄酮含量测定方案

总黄酮含量测定方案

总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液,料液比1﹕8 ,80度下回流2h。

取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。

使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。

二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg,加无水乙醇定容至10ml。

制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。

三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml,加无水乙醇定容至25ml,空白对照,全波扫描。

2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml,加5%亚硝酸钠溶液(1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml,摇匀,放置6min,加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中)10ml, 再加无水乙醇定容至25ml,摇匀,放置15min,空白对照,全波扫描bb 。

3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液(1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml,摇匀放置10min,空白对照,全波扫描。

4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml,加3ml10%氢氧化钾溶液(2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中),充分摇匀显色5min后,用无水乙醇定容至25ml, 摇匀,空白对照,全波扫描。

四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液,按所选的显色方法测定吸光度,绘制标准曲线。

六精密度实验按标准曲线绘制方法,分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份,按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。

次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD(%)七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液,按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。

分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量

分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量

分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量宋元清;王艳平;毛远菁【摘要】黄酮类化合物与铝盐形成配合物,该配合物在紫外可见光区有吸收,选择510 nm为测定波长,芦丁作为对照品,用分光光度法测定芦笋中的总黄酮,平均回收率为97.23%,测定结果的相对标准偏差为2.13%(n=5).【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2005(014)004【总页数】2页(P52-53)【关键词】分光光度法;总黄酮;芦笋【作者】宋元清;王艳平;毛远菁【作者单位】鸡西市人民医院,鸡西,158100;枣庄市市中区人民医院,枣庄,277100;日照市汽车运输总公司医院,日照,276800【正文语种】中文【中图分类】TS2芦笋,又名石刁柏,为百合科植物石刁柏的干燥地下嫩茎。

芦笋有温肺祛痰、活血化瘀作用,用于痰瘀互结、乳腺结块、肿胀疼痛及乳腺小叶增生等疾病的治疗。

芦笋的化学成分主要有黄酮类化合物、游离氨基酸、多种甾体皂苷、维生素、微量元素及其它活性物质 [1]。

其中的黄酮类化合物主要包括槲皮素、香橼素、山柰素和芦丁等,具有消炎、镇痛等多种药理作用。

黄酮类化合物的测定现多用高效液相色谱法[2,3],该法专属性强,准确度高,但样品处理复杂,仪器昂贵,实验成本较高。

芦笋现主要用作食品及保健品,分光光度法能较快速地测定其中的黄酮类成分,且实验成本较低,易于在食品行业中推广。

1 实验部分1.1 主要仪器与试剂紫外可见分光光度计:UV757CRT型,上海分析仪器总厂;电子精密天平:FA2004型,上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂;芦丁对照品:中国药品生物制品检定所;芦丁对照品溶液:0.28 mg/mL。

精密称取用五氧化二磷干燥至恒重的芦丁对照品7.00 mg,用30%乙醇溶解并定容至25 mL;芦笋样品:市售;芦笋样品溶液:取芦笋样品,研细,精密称取约0.3 g,用80%乙醇回流提取2次(每次用30 mL),过滤,滤液合并后蒸干,用30%乙醇溶解并定容至10 mL;实验所用试剂均为分析纯;实验用水为二次蒸馏水。

总黄酮含量测试试剂盒 分光光度计法

总黄酮含量测试试剂盒 分光光度计法

总黄酮含量测试试剂盒(C002-96T 分光光度计法)一、测定原理黄酮中处于相邻位的羰基、羟基可以共同络合金属而显色。

在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入碱溶液后显红橙色,在510nm处有最大吸收峰。

芦丁是公认的黄酮类化合物,常被用作标准品。

二、试剂组成试剂一:无色液体50mL ×1瓶试剂二:无色液体50mL ×1瓶试剂三:显色液 200mL ×1瓶试剂四:1.0mg/mL芦丁标准溶液 5mL×1瓶三、储存条件及有效期试剂一、试剂二4℃保存,试剂三-20℃保存,可保存3个月。

四、试剂的配制试剂四应用液:取2mL试剂四,加入18mL双蒸水,稀释至20mL,得到100μg/mL的芦丁标准液,分别采用移液管移取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL试剂四于空试管中,加入4.0,3.0,2.0,1.0,0mL双蒸水,得到20,40,60,80,100 μg/mL芦丁标准液。

五、操作步骤充分混匀,室温静置6min。

充分混匀,室温静置6min。

充分混匀,室温静置15min,以试剂空白调零,分光光度计510nm处测吸光值。

1必须做标准管,以绘制标准曲线;2一般样品建议做空白管,以消除误差;3试剂三有腐蚀性,请务必戴手套操作,如不慎接触皮肤,参照碱烧伤的方法用流水冲洗,如有条件可用硼酸处理。

六、计算方法1.绘制标准曲线以芦丁应用液浓度0,20,40,60,80,100μg/mL为横坐标,以分光光度计测得的吸光值为纵坐标,在坐标纸上或利用EXCEL绘制标准曲线。

2.计算样品浓度对于坐标纸上绘制的标准曲线,请直接根据坐标求得样品浓度。

对于采用EXCEL计算的,根据方程求得样品浓度。

样品浓度表示为μg/mL总黄酮,也可根据测试溶液浓度计算出样品粉末中含量,表示为mg/g。

七、注意事项1. 试剂可能会有沉淀,请放置至室温后摇匀使用;八、应用举例小明提取得到了一种中草药的粗提物,并将其冻干得到粉末,配制成5mg/mL的溶液,分析其总黄酮含量。

仪器分析:可见分光光度法测定芦丁含量

仪器分析:可见分光光度法测定芦丁含量

1.5
1.0
0.5
0.0
1
(ml)
亚硝酸钠 0.15 0.15
溶液(ml)
0.15
0.15
0.15
0.15
0.15
摇匀,放置6min
硝酸铝 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 溶液(ml)
摇匀,放置6min
氢氧化钠 2.0 2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
溶液实验原理
➢芦丁又名芸香甙,是维生素P的主要成分 之一,属黄酮类化合物,临床上主要用于治 疗脑溢血,高血压,视网膜出血等疾病。
➢芦丁的含量测定主要有高效液相色谱法、 紫外分光光度法和可见分光光度法。
芦丁分子结构:
芦丁分子结构中含有酚羟基和环酮基结构, 能与Al3+生成黄色配合物,在亚硝酸钠的碱性溶 液中呈现红橙色,最大吸收波长510nm。
➢定量原理: Lambert-Beer’s Law 当入射光波长一定时,溶液对光的吸收 程度只与溶液浓度和液层厚度有关。
A = k c l = -lgT = lgI0 / I
三、实验步骤
项目/编号 1
2
3
4
5
6 测定管
标准溶液 0.0 0.5
1.0
1.5
2.0
2.5 1.5(样品)
(ml)
60%乙醇 2.5 2.0
蒸馏水稀释至5ml,振荡,放置15min,510nm比色。第1管作空白
四、实验记录:见讲义 五、数据处理及结果: 1.以各标准溶液浓度(mg/ml)为横坐标,各
管吸光度值为纵坐标,作图既得标准曲线。 2.根据样品溶液的吸光度查标准曲线得样品

芦丁测定

芦丁测定

2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。

弄成碎末,加水两次煎熬后提取,浓缩,添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-,添加甲醇溶解,离心,取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克,精密称取,置于SOmI瓶中,加70%乙醇溶解并稀释到刻度,得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照品溶液。

2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中,均加水到6. OOmI,加5%的N aN 02溶液1. 00 ml,摇匀,放置6分钟,加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml,摇匀,放置6分钟,加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度,摇匀,放置15分钟。

以相应试剂为空自,在400一800 nm 范围内进行光谱扫描,得510 nm处为可见最人吸收峰。

以空自试剂为参照,将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度,得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。

2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中,均加甲醇到刻度,摇匀。

以甲醇作为空自试剂参照,在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描,得359nm处为紫外最人吸收峰。

以空自试剂为参照,将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度,得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。

芦丁测定总黄酮的原理

芦丁测定总黄酮的原理

芦丁测定总黄酮的原理
芦丁测定总黄酮的原理是基于芦丁与铝离子在酸性条件下形成稳定的络合物。

总黄酮中的芦丁与铝离子反应生成络合物,络合物的形成使其产生特征性的吸收峰。

通过对样品中络合物吸收峰的测定,可以间接测定样品中总黄酮的含量。

具体的操作步骤如下:
1. 首先,将待测样品进行提取,常用的提取溶剂为70%乙醇。

2. 提取溶液经适当稀释后,将其与一定浓度的铝试剂(如铝氯化物溶液)混合,使芦丁和铝离子发生络合反应。

3. 将生成的络合物经离心分离,废弃上清液。

4. 将沉淀物重新溶解,并使用紫外可见分光光度计测定其吸收峰的强度。

5. 使用空白对照组进行校正,确定络合物吸收峰的强度与样品中总黄酮的含量之间的关系。

总之,芦丁测定总黄酮的原理是利用芦丁与铝离子在酸性条件下形成络合物,通过测定络合物的吸收峰强度来间接测定样品中总黄酮的含量。

紫外分光光度法测定双山颗粒中总黄酮的含量

紫外分光光度法测定双山颗粒中总黄酮的含量
r t s9 . 0 ( D = 1 . % , u i wa 8 3 % RS = 8 6 n = n一 6 . i meh di smpe c u ae, ihc n b s d ) Ths t o S i l ,a c r t whc a eu e
f rqu l y c nto o ai o r lofShu ng h n G r nu e . t a s a a ls Ke r s: p c r p t m e r t t lfa o e , o e , h a s n gr nu e y wo d s e t o ho o t y,o a v n s c nt nt s u ng ha a ls l
( a g i a i o a i e e M e ia Un v r i Na n n Gu n x , 3 0 1 C i a Gu n x Tr d t n l i Ch n s d c l ie s y, n i g, a g i 5 0 0 , h n ) t
摘 要 : 用 紫 外 分 光 光 度 法 , 芦 丁 为 对 照 品 , 其 进 行 络 合 显 色 , 5 0 m 波 长 处 测 定 吸 光 度 , 定 双 山 颗 采 以 对 在 0n 测
胆 固醇 、 冠心 病 、 脑血 管 意外 所致 的偏 瘫 等症 均有 一 定 的疗 效 。 了能够更 好 的控 制 双 山颗粒 剂 的质量 , 为 本 文采 用紫 外分 光光 度 法对该 制 剂 中总黄 酮 的含 量
进行 测定 。
1 实 验 部 分
1 1 仪器 与试 药 . 85 4 3紫 外一 见 分 光 光 度 计 ( 国 安捷 伦 科 技 可 美
紫 外 分 光 光 度 法 测 定 双 山颗 粒 中 总黄 酮 的 含 量
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分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
《成都大学学报:自然科学版》2010年第1期 | 姚倩郭晓强张良蕾肖飞何钢黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一类天然产物,具有抗氧化及抗自由基作用,可用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等的治疗.槐米中含有大量的黄酮类物质,本研究采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁等黄酮类成分,制成芦丁颗粒剂,并采用分光光度法对所含总黄酮进行了测定.实验结果表明,该方法快速、准确、灵敏,适合于控制所制颗粒剂中有效部位的含量.
1 仪器与材料
1.1 仪器
实验所用仪器包括:2802PC型紫外扫描仪(尤尼柯上海仪器有限公司),UV一1800型紫外可见分光光度计(苏州莱顿科学仪器有限公司),CT15RT型台式高速离心机(上海天美科学仪器有限公司),AS5150A超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司).
1.2 材料
实验所用材料包括:实验用芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供;实验所用试剂均为分析纯,由成都科龙试剂厂生产.
2 方法与结果
2.I 测定方法
2.1.1 对照品溶液的制备.
精密称取芦丁对照品约1O ITlg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制得对照品溶液.
2.1.2 供试品溶液的制备.
将芦丁颗粒研细,取约2 g,置50 mL量瓶中,加甲醇20 30 mL,摇匀,超声30 S,用甲醇稀释至刻度,制得供试品溶液.
2.1.3 黄酮含量测定方法.
分别精密量取芦丁对照品溶液与供试品溶液各 3 mL,分置25 mL量瓶中,加5%NaNO~溶液1 mL,摇匀,静置6 min,再加人10%(NO3) 溶液1 mL,摇匀,继续静置6 min,加4%的NaOH溶液5 mL,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,静置15 min,于505 nln波长处测定吸光度,分别记为As及.另在25 mL量瓶中制备一不含黄酮的试剂空白,测定其在506 nln 波长处的吸收度,记为.并以以( 一)及( 一)比值计算总黄酮含量.
2.2 空白干扰试验
取按处方配制的不含芦丁提取物的空白颗粒2 g,按“2.1.2”项下所述方法操作,制成供试品溶液,在10 000 rpm下离心5 min,精密量取上清液3 mL,置25 mL量瓶中,照“2.1.3”项下所述方法操作,于200 600啪波长范围内扫描,结果见图1.另取芦丁对照品溶液,同法操作,A.扫描曲线见图2.由图1、2可知,芦丁在碱性条件下与AP 形成的络合物在505 nln波长处有最大吸收,而空白辅料在此处无吸收,故对黄酮类化合物的测定无干扰.
2.3 线性关系
分别精密量取浓度为0.22 n~CmL的芦丁对照品溶液0、1、2,3、4、5、6 mL,分置于25 mL量瓶中,记为l~7号,按“2.1.3”项下操作,以1号为空白,在506 llla处测定其吸光度.以吸光度A为纵座标,芦丁浓度为横座标,进行线性拟合,得回归方程为,A =5.5356C+0.0059(r=0.9992).实验表明,总黄酮浓度在8.8—52.8 tcCmL范围内,吸光度与浓度有良好线性关系.
2.4 回收率试验
取芦丁对照品贮备液及空白辅料适量,分别制成芦丁浓度为0.16、0.20、0.24 ncCmL的混合溶液,10000 rpm下离心5 min后,分别精密量取上清液3 mL,置25 mL量瓶中,按“2.1.3”项下所述方法操作,测定其总黄酮含量,以测得量与加入量相比较,计算回收率.低、中、高浓度的平均回收率分别为100.2%、100.3%及99.6%.实验结果表明本方法准确度较高.
2.5 重复性试验
取同一批芦丁颗粒剂6份,按“2.1.3”项下所述方法操作,测定其总黄酮含量.6份样品总黄酮含量分别为3.46、3.4l、3.46、3.5O、3.48、3.40 n1g,g,RSD 为1.20%.实验结果表明本方法精密度良好.
2.6 稳定性试验
分别精密量取芦丁对照品溶液及供试品溶液各 3 mL,分置25 mL量瓶中,按“2.1.3”项下所述方法加入各试剂,最后用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,分别在0、15、30、45、60 min时,于506 nln波长处测定吸收度,结果见表1.由表1可知,对照品溶液和供试品溶液在15 min前的吸光度较为稳定,15 min后吸光度开始下降.
2.7 样品测定
取批号为070301、070302、070303的芦丁颗粒剂,按照本实验所建立的方法测定样品的总黄酮含量,结果分别为3.46、3.4l、3.50 ms/g.
3 讨论
本实验方法的显色原理为:黄酮类化合物含邻苯二酚的结构,在碱性和NaN02存在的条件下,可与Ar 发生络合反应,生成在506nm波长处有最大吸收的络合物.3】.实验结果表明:本方法灵敏、专属性高,可广泛应用于黄酮类化合物的含量测定上.。

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