分光光度法测定总黄酮含量-操作流程图-简易图解-李熙灿-Xican Li
运用分光光度法测定黄花菜中总黄酮的含量
１ 实验部分
１ １ 仪器 、 料与试 剂 ． 材
系数 ｒ ０ ９９ ， 明总黄 酮在该 条 件下在 ４ ０２～ ＝ ．９ ３ 表 ．１ １．６ ／００ Ｌ浓度 之 间吸 光 度 与 浓度 呈 现 良好 ２ ３ｍｇ１０ ｍ
度， 备用 ．
活血化瘀、 肝抗 炎、 菌 抗 病毒 等 多种 保 健 功 保 抗 能 ． 正由于黄花菜具有诸多益处与药用价值 ， 所以 对黄 花菜 的研 究 越来 越 多 ． 总 黄 酮 含量 测 定 的方 对 法很 多 ， 多采用高效 液 相色谱法 ， 法测 定成 本 但该
高 ， 作复 杂． 操 本课题 采 用分光 光度 法对 黄花 菜 中总 黄酮 进行 含 量 测 定 ， 察 该 法 是 否 简 便 可 操 作 、 考 科
明供 试品溶液 在 １０ ｉ ０ ｒｎ内稳 定 ． ａ
３ ４ 重复性 试验 ．
其 他试 剂均 为国产分 析纯试 剂
２ 总黄酮含量测定 ２１ 样品溶液的制备 ．
称取 ８％恒 温 干 燥 的 黄 花 菜 ５ ０９ ｇ７ ％ 乙 ０ ． １６ ，５
・
取 同一 批样 品 ６份 ， 按供 试 品 溶 液 的制 备方 法
５ ・ ０
分别处理 ， 依次测定吸光度值 ， 计算得总黄酮 的平均 含 量为 ０ ４ ７ ， Ｓ ． ３ ％ Ｒ Ｄ为 １ ８ ％ ， 明重 现性较 好 ． ．９ 表
３ ５ 含量 测定 ．
３ ６ 加 样 回收试 验 ．
取 已知含量的样品共 ６ ， 份 精密称定 ， 向其 中准 确加入芦 丁对照 品适量． ２ １ 依 ． 项供试 品溶液的制 备方法制 备． 取样 测吸光度值 ， 算平均 回收率 为 计
分光光度法测定总黄酮含量-操作流程图-简易图解-李熙灿-Xican Li
分光光度法测定总黄酮含量：操作流程图2017.10【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.2012;26:1050-1053.【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。
为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。
其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。
常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。
采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。
【检测方法与实验流程图】图1实验流程图【溶液配制】1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。
2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。
3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。
4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。
5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。
浓度尽量高，但要有精确的数值。
【标准曲线绘制】（芦丁）精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准液，代替上图中的“样品液0.5mL”，依“实验流程图”，测A508nm值：绘制标准曲线如下：mn85AConcentration (mg/ml)总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。
紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量
紫外分光光度法测定市售檀香中总黄酮含量
需要准备一定的试剂和仪器设备。
试剂包括：乙醇、硫酸、铝石、铝石试液、石蜡片等。
仪器设备包括：紫外分光光度计、移液器、比色皿等。
1. 检测条件的选择
根据檀香中总黄酮的特性和紫外吸收谱的特点，可以选择适当的检测条件。
总黄酮的最大吸收波长一般在250-380 nm范围内，选择最大吸光度波长进行测定。
还需要选择适当的溶剂来提取檀香中的总黄酮。
2. 样品的制备
将市售檀香样品中的总黄酮提取出来。
将一定量的檀香样品粉碎并过筛，取10 g样品加入250 mL锥形瓶中，加入100 mL的乙醇，用紫外灯加热反应，恒温回流提取1小时。
然后，将提取液过滤，取适量的样品溶液进行稀释。
3. 建立标准曲线
准备一系列不同浓度的标准溶液，可以使用均匀檀香总黄酮提取液进行稀释得到，浓度范围可根据样品含量设定。
使用比色皿分别加入不同浓度的标准溶液和空白对照液，然后用紫外分光光度计在选择的最大吸收波长下测定吸光度。
绘制标准曲线，计算出标准曲线方程。
总结：通过采用紫外分光光度法，可以准确测定市售檀香中总黄酮的含量。
该方法操作简便，结果准确可靠。
但需注意的是，在实际操作中应严格控制好样品的提取条件和测定条件，以确保结果的准确性和可重复性。
需要注意避免不同批次的檀香样品的差异对测定结果的影响，建议进行多重并行实验以保证结果的可靠性。
紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量
３ ０ ｍｇ Ｘ９ ６ ． Ｏ ） ｎ ａ ｇ ， 精 密称定 ， 置于 ５ Ｏ ｍＬ量瓶 中， 加 ３ ０ 乙 醇溶解并稀释至 刻度 ， 摇匀 ， 得浓 度为 约 ０ ． ６ ｍｇ ／ ｍＬ的对照 品溶液 。再取绞股蓝泽泻茶 ， ６份粉末约 ０ ． ２ ５ ｇ ， 精密称 定 ， 再
密量取续滤液 １ ｍＬ， 置 ５ ０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 加３ ０ 乙 醇 稀 释 至 刻度 ， 摇匀， 即得 。
中图分类号 ： Ｒ ２ ８ ４ ． ２
文 献标 志 码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ ７ －２ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ９ －０ ０ ５ ７ －０ ２
酮的含量 ， 为检验 ， 控 制保健食 品 中葛根 总黄 酮的含量提 供 方 法。方法 采用紫外分光光度法， 以葛根 中的活性 成分 葛根 素
样 品 中 的 为对 照 品 ， 对１ ７ 批 保 健 食 品 进 行 含 量 测 定 。结 果
以葛根素计 ， 葛根 总黄 酮含 量参 差不 齐， 更 有甚 者 几乎 不含 。 结论 该方法简便 、 准确 ， 可为葛根 总黄酮在样 品 中的含 量 测 关键 词 ：葛根 ； 葛根 总黄酮 ； 含量； 测 定方法 ； 紫外 分光光
分别精密吸取上述对照 品溶液 ５ ｍＬ， 同时置于 １ ０ ０ ｍＬ容量
瓶 中， 加入 ３ Ｏ 乙醇定 容至刻度 ， 照上述样品溶液处理方法得
溶液 ， 依次 测定 ６ 份溶液 的吸光度 ， 计算 回收率。平 均 回收率
为９ ９ ． ９ １ ， Ｒ Ｓ Ｄ 为 １ ． ０ ９ ２ 。结果 表明本实验 方法 准确度 高， 精 密度好 ， 方法可行。
２ ５ ０ ｎ Ｉ ｎ。
２ ． １ ＿ １ 标 准 曲 线 的 建 立 精 密 称 取 葛 根 素 对 照 品 约
总黄酮测定方法
总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。
分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。
从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。
式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。
样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。
分光光度法测定芜菁中总黄酮含量
分光光度法测定芜菁中总黄酮含量梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【摘要】目的研究芜菁中总黄酮的最佳提取工艺并测定其含量,为芜菁资源的合理开发和利用提供科学依据.方法以乙醇为溶剂,采用索氏提取,分光光度法测定芜菁中总黄酮的含量,并通过稳定性、精密度和回收率试验检验了该方法的可靠性和重现性.结果标准液及供试液均在510nm处有最大吸收.回归方程:A =0.01853 c+0.07628,r =0.9998;平均总黄酮的含量:2.797％,平均加样回收率:101.6％;精密度和加样回收率的RSD值分别为:0.85％,1.21％.本法具有操作简单,稳定,准确,重复性好,灵敏度高,可作为芜菁总黄酮的含量测定法.【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2012(007)010【总页数】3页(P36-38)【关键词】芜菁;总黄酮;分光光度法【作者】梁永红;阿提合尼木;海力茜·陶尔大洪;王松芝【作者单位】830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科;新疆医科大学药学院;830011乌鲁木齐,新疆医科大学附属肿瘤医院药剂科【正文语种】中文维药芜菁的植物学名为芜菁，来源于十字花科植物芜菁的块根，药食同源，历史悠久，疗效显著，可用支气管炎，食欲不振，消化不良的治疗。
通过研究提示芜菁药材中含有皂苷，黄酮类，糖类及其苷，生物碱，内酯，挥发油，酚类，鞣质，氨基酸，蛋白质等化学成分［1］，并且研究了多糖的提取及含量测定，而其他相关性研究尚在进行当中。
本实验选用了新疆9个不同产地的芜菁药材，按照《中国药典》(2005)的相关规定进行实验并且采用荧光分析法对其总黄酮含量进行了测定［2］，旨在以评价药材的质量，并且为相关部门今后制定该药材质量标准时提供参考依据。
1 仪器与试剂SX721分光光度计﹙上海第三分析仪器厂﹚;索氏提取器;回流提取装置。
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法
紫外分光光度法是一种常用的测定植物黄酮含量的方法。
以下是一种可能的测定方法：
1. 提取样品：将植物中的黄酮化合物提取出来。
可以使用乙醇、甲醇或醚等有机溶剂进行提取。
2. 制备标准曲线：准备一系列已知浓度的黄酮标准溶液，用紫外分光光度法测定其吸光度，并绘制标准曲线。
3. 测定样品：将提取的样品稀释合适倍数，用紫外分光光度法测定其吸光度。
4. 计算黄酮含量：根据样品的吸光度和标准曲线，计算出样品中的黄酮含量。
需要注意的是，测定植物黄酮含量的方法可能会因样品的不同而有所变化，具体的操作步骤还需根据具体情况进行调整和优化。
分光光度法测定蔓性千斤拔中总黄酮的含量
ａ ｅ ｒｎｅｓｂｔ ｃ ， ｅｃｎｅｔ ｆｔａ ｔ ｖ ｏ ｓ ａ ｅ ｒ ｉｅ ｔｈ ａｅｅｇｈｏ ３５ｎｎ １ ｅｕｔ １ ｅａｅａｅｒ ｏｅｙｂ ｉｂｅｌ ｈ ｍｅ ｏ ｓｒｆ ｅｃ ｕｓ ｎｅ ｔ ｏｔ ｏ ｌｌ ｏ ｉ ｓｄｔ ｍｎｄａ ｔｅｗ ｖｌ ｔ ｆ ５ ／．Ｒ ｓｌＪ ｈ ｖｒ ｃｖｒ ｙｖ ｉｌ ｉ ｔ ｔ ｄ ｅ ａ ｈ ｎ ｏ ｔ ａｎ ｄ ｗ ｅ ｎ ｇ ｅ ｓ ｇ ｈ ｗ ｓ ９６ ％ ．ｉ 兄 Ｄ ０ １ ３％ ．ｈ ｖｒｇ ｅｏｅｙｂ ｌ ｉｌ ｐｃ ｏｈｔ ｔ ａ ９ ０ ％ ， ｉ Ｓ ｆ ９ ％ ． Ｃｎｌｓ ｎ ５ｔｖｏ ｔ ａ ．８ ｗｔ Ｓ ｆ ．７ １ ｅａｅａｅｒ ｖｒ ｖｕｔ ｏ ｔ ｅｔ ｐｏｏ ｒ ｗ ｓ ． ９ ｈ ｃ ｍｖ ｅ ｓ ｒ ｅ ｍ ｙ ９ ７ ｗｔ Ｒ Ｄ ｏ ０．４ １ ｏｃ ｉ １ ｒ ｉｌ ｈ ｕ ｏ Ｊ １ａ ｅ ｓｅｔｐｏｏ ｅ ｉａｋｎ ｆ ｏｅｉｅｌ ｅ ｒ ｎ ｔｎｍ ｔ ｄｏ ｔ ａｏｏｄ 蒯 却 ｐｃｒ ｈｔ ｂ ｓ ｉｄｏ ｍ ｌ ａ ｄｔ ｍｉ ｉ ｈ ｆｏ ｌ ｖｎｉ ｉ Ｆ． ｏ ｍ ｄ ｅ ａｏ ｅ ｏ ｔａ ｆ ｌ ｓｎ ．
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分光光度法测定总黄酮含量：操作流程图2017.10
【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.
2012;26:1050-1053.
【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。
为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。
其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。
常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。
采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。
【检测方法与实验流程图】
图1实验流程图
【溶液配制】
1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。
2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。
3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。
4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。
5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。
浓度尽量高，但要有精确的数值。
【标准曲线绘制】（芦丁）
精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准液，代替上图中的“样品液0.5mL”，依“实验流程
图”，测A508nm值：
绘制标准曲线如下：
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n
8
5
A
Concentration (mg/ml)
总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。