翻译-Peak_Broadening_with_notes

Mike：当然，也有一些特殊的仪器和色谱柱问题我们将要讨论。但是首先，为了展示给您我们将要讨论的内容，在屏幕上，[insertpeak_broadening_test_mix.jpg]我们将给您展示一个测试混合物的色谱图，该混合物中含萘…正如您所看到的，我们这里第二个色谱图中的峰正在变宽，在右边区域[indicate with arrow, lower chromatogram and right areas]。因此，我们假设这是您正在面对的数据。
金属套环不能固定在合适的位置就会发生渗漏。
现在请看我们这里展示的另一个例子[show wrong_connection_too_short.gif]。这里我们会看到管线的探出不够长。这个无用的空隙将产生一个混合腔或死体积，导致很差的峰形。
如果您使用了不同厂家的色谱柱，确保您使用了合适的接头以避免产生混合腔，或是由于金属套环固定位置不恰当带来的问题。
这是另一张图表[insert fitting type chart.jpg]，您可以看到您可能用到的多种不同类型的接头，使用哪些取决于您仪器的供应商所能提供的种类。
我们会把这些参考资料放在下载区里供您参考。
Bill：这里我演示一下如何连接一个接头[voiceover with demo]。我首先选择一个对于我将会使用到的接口来说足够长的螺丝接头。注意图例中Valco和Waters螺丝接头的螺纹长度相对稍微长一些。考虑到我将来可能会用到这些商家的配件或色谱柱，我就采用了一个较长的安捷伦螺丝接头装在我的安捷伦仪器上。金属套环的后退安装位置，正如Bill所说的，对于减少接口处的扩散和防止色谱柱接口的损坏十分关键，因此理想的情况就是为将会使用接头的装置准备新接头。因此，装配这个接头时，我们首先要适当滑动螺丝接头到管线末端，再小心滑动金属套环到螺丝接头上面，并用手向接口内拧紧该组装配。[show]然后使用扳手轻轻地进一步旋紧它，这样管线就会被金属套环束缚住。可是不要拧得过紧，因为那将会降低接口的使用寿命。许多人总希望把它拧得很紧，这会导致接口渗漏，甚至是损坏。一旦您确信已经把接口装配完毕，我想您最好松开接口并检查一下金属套环在管线上的位置是否合适。
2）滑动螺丝接头到管线末端
3）小心滑动金属套环到螺丝接头上面，并用手向接口内拧紧该组装配。
4）然后使用扳手轻轻地进一步旋紧它，这就会使管线被金属套环束缚住。可是不要拧得过紧，因为那将会降低接口的使用寿命。
5）一旦您确信已经把接口装配完毕，请松开接口并检查一下金属套环在管线上的位置是否正确，管线只需稍微探出金属套环顶部一点点。
请看这里[indicate instrument with 30 cm column set up, and extra tubing]。运行旧的USP方法的色谱分析人员可能会使用这种配置。此时，额外的管线体积并不是一个很大的问题，因为它并没有超过那个非常大的色谱柱体积。
但是如果这名分析人员想要调整他的方法，使用较短的、更高效的色谱柱，例如Poroshell120色谱柱，这些额外的管线体积将会导致出现非常宽的峰。因此，这里展示的是采用更小色谱柱分析时您希望了解到的管线配置方式[show another instrument, set up with a shorter column and reduced tubing]。看这里[indicate]这些连接是多么短。而且，我们甚至使用了更窄内径的管线，即红色的0.12mm管线。
我们怎么解决这个问题呢？
引起峰展宽的原因有很多。一些可能的原因有：
-不合适的接头/连接
-不合理的仪器叠放
-多余的管线体积
-流动相问题
-系统参数设置（数据采集速率）
保证良好的连接
Bill：对于初用者，我们首先讨论正确的连接。我们的技术支持团队告诉我们他们发现导致峰展宽的首要问题是不正确的连接。
连接问题经常被误认为是色谱柱问题。我们推荐您使用Swagelok接头或者更好的手动拧紧接头，因为它们使用更容易。不同的制造商可能会使用不同种类的接头。这是我们推荐的不锈钢和聚合物材料接头的示例。您需要买的各种接头看起来非常相似，这里有个图表展示我们要表达的意思[insertfingertight_ fittings.jpg]。
进样的影响
Mike：现在让我们来讨论一下进样。就这个问题，我在其它内容里已经涉及许多，但是现在，我们只讨论标度您样品的进样体积对您色谱分析的结果是十分重要的。如果您的进样体积太大，色谱柱会超载并导致峰展宽，就像这一系列色谱图所展示的。[insert sample_loading_chromatogram.gif)
Bill：屏幕上我们正在展示一张我们视频记录中也有的图[insert 1260_ stacking.gif]，来强调我们推荐的1260 Infinity色谱系统的叠放结构，在本例中，该色谱系统装备了低扩散的毛细管线。
这是另一张图，它详细描述了如果您正在使用一个质谱仪的话，您如何去优化您仪器的摆放[show inverted_setup.gif]。这里的关键是减少您连接组件时使用的管线数量。
Bill：我仅简单的使用零死体积的TCC温控模块。它非常的有用，并且很沉重，不能移动，但当您把住接头时，您可以空出一只手来推动管线。
Mike：这确实需要多出一只手来才能完成…
Bill：是啊…，重要的是您要保证探出金属套环的管线只有一点点。
在这种情况下，不合适的金属套环安装可以导致问题的产生。[showwrong_connection_too_long.gif – note that image is about 1” long]在第一个图中您可以看到管线探出太长了。
好，现在我们观察一下分别使用1、2、5和10µL进样量时的情况，您可以看到色谱峰是如何随着进样体积的增加而展宽的。
另外，样品中稀释溶剂的强度会影响峰形，这也可能是峰展宽的一种原因。
Bill：是的，是那样。请看这个例子[insertstrong_diluent_ example.gif]，在低扩散系统中使用这个小规格色谱柱时பைடு நூலகம்进样5µL强溶剂造成了谱带展宽[point to green line]。并且进样10µL时，[point to pink line, and wider gap]峰对称性的损失成为一个显著的问题。这最终限制了检测灵敏度，除非通过蒸发浓缩分析物以支持更小的进样体积。
Bill：但是，我们当然需要知道从各个角度解决问题的有效方式。
Mike：非常正确。
MikeWoodman工作于AgilentMidwest Center of Excellence（安捷伦卓越的中西部中心），并且擅长安捷伦仪器的使用。BillLong是化学品及耗材部的一名资深应用科学家。
为什么会出现峰展宽
我们也将给大家看一个非常有用的管线规格参考表[show tubing_chart.jpg]，都附有部件号，帮助您确定不同连接时所需要的管线种类。
这些记录可以下载，或者您可以在我们的网站上搜索“峰展宽视频记录”来获得。
Mike：好，到目前为止我们已经谈到了一些可以导致峰展宽的问题，但是涉及的仍有很多…
好，Mike，你可以开始下一个话题了。
Mike：好的，这是您应该知道的所有关于接头的内容！看起来很简单，但是对许多人来说却是容易出现问题的地方。
良好的线路连接是获得理想分析结果的关键。安捷伦推荐使用Swagelok接头或者更好的手动拧紧接头。
装配一个满意的接头：
1）选择一个对于您将要装配的接口来说足够长的螺丝接头。
金属套环在管线上的后退安装位置是很关键的，因此理想的情况就是为将会使用接头的系统准备接头，那么您就可以确保对于该仪器接口来说，金属套环在管线上的后退位置是合适的。
仪器的叠放和管线体积
Mike：现在，我们转换话题，讨论一下您仪器组件的安排问题。您仪器的安装方式会影响您的色谱分析结果，同时也能影响到您要使用的管线。但许多人并没有意识到这一点。[show examples of improperly stacked instrument and explain]
如果您观察到了峰展宽，您需要关注的另一个设置是流速或更适当的线速度。每种不同粒径的色谱柱填料都有一个最优的线速度，这需要通过试验来获得。[show]
数据采集速率是导致峰展宽的一种常见原因。您应该核查数据采集速率以确保它与您使用的色谱柱最适合。
通过调整检测器设置和/或不降低信噪比的、可能的最大的时间常量值来优化数据采集速率。ChemStation工作站的峰宽控制功能可以使您为分析方法选择适当的峰宽或响应时间参数。
要知道您所有组件的安全摆放非常重要。我们有最新型的LC支架，您可以购买它来帮助您实现最佳的系统叠放。它的部件号是5001-3726。
这样实验室看起来也很整洁。
另外，管线的体积也是您需要关注的，尤其是在您调整分析方法的时候。您仪器上多余的管线数量会随着您使用更高效和更小尺寸的色谱柱而对您仪器性能的影响变得越来越大。
文稿
边栏附注
前言
MichaelWoodman：嗨，大家好！我是MikeWoodman，是一名致力于安捷伦LC仪器性能研究的应用科学家。这是BillLong，是一名在化学品及耗材部工作的资深应用科学家。我们都是在HPLC应用方面工作多年的色谱专家。Bill解决色谱柱方面出现的问题，我更多的是关注仪器的性能。
Mike：如果使用常规的4.6mm内径色谱柱，10µL的进样体积看起来真的很小，但是如果我们希望节省溶剂和联用质谱仪时，所用色谱柱一般会非常小，所以进样体积，就像Bill早先说的，需要与柱体积匹配。
进样是另一个常见的引起峰展宽问题的原因。如果您的进样体积太大，色谱柱会超载并导致峰展宽。
梯度洗脱
Mike：迄今为止，我们仅仅从等度洗脱的角度讨论了峰展宽问题。如果您运行一个梯度洗脱方法，您会发现通常不会遇到那么多的峰展宽问题，因为梯度洗脱通常能减小谱带展宽。不过，如果您的梯度程序设计不合适，您可能会在运行的初始阶段观察到一些峰展宽，因为梯度运行的开始实际上是等度洗脱状态。这是梯度洗脱方法的延迟体积造成的。