血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素.
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:【 1】电泳介质 pH 的影响:对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的 pH 影响蛋白质的电泳情况即可决定蛋白质的带电量(Q 。
pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。
pH 偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。
所以,当┃ pI-pH ┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。
【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在 pH 4~6 之间,因此,分离血清蛋白常用 pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷 (Tris 缓冲液。
【 2】缓冲溶液的离子强度:离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。
离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持 pH 的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。
所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适的离子强度。
【对应注意点】离子强度的选择要合适, 一般常用的离子强速为 0.02~0.2之间。
【 3】电场强度的影响:电场强度和电泳速度成正比关系。
电场强度一每厘米的电势差计算,也称电势梯度。
电场强度越高,则带电离子的移动速度越快。
随着电场强度的增高,电流强度增加,产热也增多。
产热的不良后果:①引起水的蒸发,改变溶液 pH 及离子强度②引起介质温度高,可使蛋白质变性。
另外,当电场强度过高时,电泳速度也会很快,分离区带将不清晰。
【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内, 进行高压电泳时, 必须装备有效的冷却装置。
【 4】电渗:在电场中,由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电,在电场作用下,溶液就像一定方向移动,此种现象称作电渗。
乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败原因
乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败原因乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败的原因可能有很多种，以下是一些可能的原因：
1. 样品不纯：如果血清样品中存在过多的杂质，可能会干扰电泳分离过程，导致蛋白分离效果不佳。
2. 操作不当：在进行电泳分离时，如果操作不当，例如加样量不准确、电泳槽中缓冲液不合适、电压过高或过低等，都可能导致蛋白分离效果不佳。
3. 薄膜质量问题：乙酸纤维素薄膜的质量也会影响电泳分离的效果。
如果薄膜的孔径过大或过小，或者存在其他质量问题，都可能导致蛋白分离效果不佳。
4. 血清蛋白变性：在电泳分离前，血清蛋白需要进行变性处理，如果变性处理不当，可能会导致蛋白分离效果不佳。
5. 电泳温度不适宜：电泳过程中的温度也会影响电泳分离的效果。
如果温度过高或过低，都可能导致蛋白分离效果不佳。
为了解决这些问题，可以采取以下措施：
1. 对血清样品进行预处理，去除杂质，提高样品纯度。
2. 严格按照操作规程进行电泳分离，确保加样量准确、电泳槽中缓冲液合适、电压控制在适宜范围内。
3. 选择质量好的乙酸纤维素薄膜，确保其孔径适宜且无质量问题。
4. 对血清蛋白进行正确的变性处理，使其能够更好地进行电泳分离。
5. 控制电泳温度在适宜范围内，确保电泳分离的效果。
4、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳目的：熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用，了解电泳技术的一般原理。
原理：1、电泳：带电质点在电场中移动的现象称为电泳。
影响电泳泳动速度的因素：《生化实验》p.51.内因：带电性质及电量，质点大小，质点形状外因：电场强度，溶液pH值，溶液离子强度，电渗现象等任何一个物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。
例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团，它们在溶液中会解离而带电。
一般来说，在碱性溶液中（即溶液的pH值大于等电点pI；本实验的pH值为8.6，pI不一样，样品带电荷也就不一样；选取不合适的pH，会使样品带有不同的正或负电荷，影响电泳），分子带负电荷，在电场中向正极移动。
而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极移动。
移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。
不同的质点在同一电场中泳动速度不同，常用泳动度（或迁移率）来表示。
泳动度的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。
即：p.53.《生化实验》泳动度首先取决于带电质点的性质，即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的形状。
一般来说，质点所带静电荷越多，质点直径越小，越接近于球形，则在电场中泳动速度越快；反之，则越慢。
泳动度除受质点本身性质的影响外，还受其它外界因素的影响，如溶液的粘度等。
影响泳动速度的主要外界因素有下列几种：p.53-56.一）电场强度二）溶液的pH值pH值距等电点越远，质点所带静电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。
因此分离某一混合蛋白质样品时，应选择一个合适的pH值，使各种蛋白质所带静电荷的量差异较大，以利于分离。
为使电泳过程中溶液的pH恒定，必须采用缓冲液。
三）溶液的离子强度越高，泳动速度越慢，一般最适离子强度在0.02~0.2之间。
为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性，缓冲液通常要保持一定的离子强度，一般在0.02－0.2，离子强度过低，则缓冲能力差，但如果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起电泳速度降低。
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨人体血清蛋白的组成可分为:A—白蛋白,G—球蛋白(其中包括:α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白)。
正常人血清中各种蛋白质的含量有其正常值范围,血清中白蛋白与球蛋白的百分比A/G值大于1,而异常人血清的A/G值小于1。
定量分析时灵敏度高,同时还便于照相和保存等特点。
因此近年来在医学临床化验中得到广泛采用。
然而,在实际的应用中由于影响其操作的因素甚多,常常导致薄膜上各条蛋白质区带分离不清晰,或蛋白质分离不完全,直接影响对血清蛋白的定量分析结果的准确性。
本文针对这一问题结合其原理及主要操作环节进行分析。
2操作原理采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,有强的渗透性,力,其厚度仅为120微米。
人体血清经点样器点样于薄膜的一端,,点均低于pH=7,因此在pH=816所以将点样端置于电泳槽的负极端后,接通电源,,。
又由于各种血清蛋白的等电点不相同,在同一pH,同时各种蛋白质还存在分子量的大小差异,。
蛋白质分子量小,而所带电荷数多,则移动速度快;反之亦然。
可以对人体血清的各种蛋白质进行分离。
分离出的蛋白质经过氨基黑染色,漂洗后便可在薄膜上形成各条蛋白质的染色区域色带,再根据这些色带的颜色深浅,染色区域的大小,经比色后可以定性或定量测定各蛋白带的含量。
3影响因素分析311血液样品处理方式的影响电泳使用的血液样品必须确保新鲜,不能发生溶血反应。
从患者身上采集的血液样品应即时分离出血清,以避免出现溶血现象。
为了尽快分离出血清,常常采用的方法是迅速地将采集到的血液样品采取离心分离,同时分离出的血清应尽快进行电泳,以避免血清蛋白变性沉淀或被微生物污染。
312醋酸纤维薄膜的选择的影响醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,薄膜的质地好坏将直接影响血清蛋白在薄膜上的分离。
而薄膜在生产,加工、包装、运输、裁剪等过程中常常会导致薄膜表面受损,影响其质地均匀。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验一．实验原理1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。
在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离。
2、影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。
3、影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。
4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
二．实验仪器和试剂✧器材醋酸纤维素薄膜（3×8cm），培养皿，载玻片，电泳仪，电泳槽，粗滤纸，镊子✧材料新鲜血清（未溶血）✧试剂1、巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.06）：巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。
置4℃冰箱保存，备用。
（已配置）2、染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏水40ml，混匀。
3、漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。
4、NaOH溶液：称取NaOH 16g，定容至1000ml。
实验乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白
【试验材料与试剂】
（一）醋酸纤维薄膜（2×8 cm）、电泳仪、电 泳槽、点样器（盖玻片）、载玻片、培养皿、镊 子
（二）新鲜血清、巴比妥/钠缓冲液（pH8.6， 离 子强度0.07）、染色液（氨基黑10B）、漂洗液
பைடு நூலகம்
【试验环节】
1. 薄膜旳处理 ⑴ 将醋酸纤维薄膜置于盛有巴比妥/钠缓冲液
旳平皿中，浸泡30 min以上。
4.8 5.06 5.06 5.12 6.85~7.5
69000 202300 300000 90000~150000
156000~300000
血清中各主要蛋白质旳等电点均低于 pH8.6，在该缓冲液中均带负电荷，在电场中 向正极移动。
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清 在pH8.6旳缓冲体系中电泳，染色后可显示5条 主要区带。其中清蛋白旳泳动速度最快，其他 依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
⑵ 盖上电泳 槽盖，使薄膜平 衡10 min。
连接电源、 电极线。
⑶ 通电，调整电压至100 V，电流强度为0.4～0.6 mA/cm膜宽度，电泳时间约45 ~60 min 。
4. 染色
电泳完毕后将薄膜取下, 放在氨基黑10B 染色液中浸泡5 ~10min。
5. 漂洗 将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中
漂洗多次，直至背景蓝色脱尽，条带清楚为 止，可得到色带清楚旳电泳图谱 。
+
-
【注意事项】
1. 市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片，薄 膜旳选择与浸润是电泳成败旳关键之一。若 浸透后旳薄膜色泽均匀，深浅一致，则可用 于电泳 。
2. 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比 妥－巴比妥钠缓冲液，其浓度为0.05～0.09 mol/L。选择何种浓度与样品和薄膜旳厚薄有 关。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
电泳：带电粒子在电场中Βιβλιοθήκη 其与本身电荷相反电极移动现象。
ν=
V d
q ·6πr
η ν-带电粒子移动速度；q-电荷量；
r-球形分子半径； η-溶液黏度。
V d
-电场强度
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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不一样分子所带电荷种类及数量不一样，在 相同电场强度及溶液（η）中经过一定时间必定 会泳动到不一样位置。所以，含有各种成份混合 物若进行电泳，则各成份在电场中将被逐一分开， 并集中到特有位置上面形成紧密区带，使混合物 成份到达分离目标。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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二、试验操作
1、仪器和薄膜准备
2、点样
- 点样区
+
1.5cm
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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3、电泳
将点好样薄膜点样面朝下置于电泳槽上, 使点 样端置于负极,而另一 端置于正极。平衡10分钟， 打开电泳仪开关，调整电流为4-6mA，电压为100120V,电泳40-60分钟。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜为支持物 电泳。
醋酸纤维薄膜含有均一泡末状结构，渗透性强， 用它作为支持物进行电泳含有简单、快速、定量轻 易、样品量少、对样品无吸附和拖尾现象、电泳区 带清楚等优点 。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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蛋白质是两性电解质，在不一样pH值缓冲溶液 中带有不一样电荷。当pH<pI时，蛋白质为正离子， 在电场中向负极移动；当pH>pI时，蛋白质为负离子， 在电场中向正极移动；当pH= pI时，蛋白质既不向负 极移动也不向正极移动。
4、染色：3-8分钟
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告一、实验目的1、掌握血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的基本原理。
2、熟悉电泳操作的基本技术和方法。
3、了解血清蛋白质的组成和相对含量。
二、实验原理血清中含有多种蛋白质，它们在 pH 值为 86 的缓冲液中均带负电荷，在电场中会向正极移动。
由于各种蛋白质分子大小、形状及所带电荷量不同，在电场中的迁移速度也就不同，从而可将血清蛋白质分离成不同的区带。
醋酸纤维薄膜具有均一的泡沫样结构，渗透性强，对蛋白质吸附极少，因此适合用于电泳。
三、实验材料1、器材电泳仪、电泳槽、醋酸纤维薄膜（2×8cm）、点样器、镊子、培养皿、滤纸、铅笔、直尺。
2、试剂巴比妥缓冲液（pH 86，离子强度 006）、染色液（氨基黑 10B）、漂洗液。
3、样本新鲜血清四、实验步骤1、准备醋酸纤维薄膜将醋酸纤维薄膜浸泡于巴比妥缓冲液中，浸泡时间约为 30 分钟，直至薄膜完全浸透。
2、点样取出浸透的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液，在无光泽面距一端15cm 处，用铅笔轻轻划一条横线作为点样线。
然后，用点样器蘸取血清，均匀地点在点样线上，使血清形成一条细窄的直线。
点样量要适中，过多会导致蛋白质区带扩散，过少则不易观察到清晰的区带。
3、电泳将点样后的薄膜小心地放入电泳槽中，点样端靠近负极，使薄膜平整地贴在电泳槽的支架上。
盖上电泳槽盖，接通电源，调节电压为120V，电泳时间约为 50 60 分钟。
4、染色电泳结束后，取出薄膜，直接放入染色液中浸泡 5 10 分钟，使蛋白质区带染上颜色。
5、漂洗将染色后的薄膜取出，放入漂洗液中漂洗数次，直至背景无色，蛋白质区带清晰可见。
五、实验结果经过染色和漂洗后，在醋酸纤维薄膜上可以观察到清晰的血清蛋白质区带。
从正极到负极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
通过与标准图谱对比，可以大致估算出各蛋白质组分的相对含量。
六、结果分析1、影响电泳结果的因素（1）点样不均匀或点样量过多过少都会导致区带不清晰或不完整。
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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析程驰;赵兴秀【摘要】血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳常因多种因素影响而出现区带分离不清晰、拖尾、区带歪斜、区带呈锯齿状或弯曲等现象。
该文结合教学实践，对造成不理想电泳图谱常见影响因素进行分析，提出相应的解决方法，有助于改进实验教学效果。
%Common problems such as unclear zone separation, trailing, askew zigzag or curved zones are often encountered in electrophoresis of serum proteins on cellulose acetate membrane due to various factors. Combined with the teaching practice, such influencing factors are analyzed in detail and corresponding measures are put forward. All of these will help to improve the experimental teaching effect.【期刊名称】《实验科学与技术》【年(卷),期】2012(010)003【总页数】3页(P24-26)【关键词】醋酸纤维素薄膜电泳;血清蛋白;影响因素;对策【作者】程驰;赵兴秀【作者单位】四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000 四川大学生命科学学院,成都610064;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000【正文语种】中文【中图分类】Q-33;Q5电泳是生物化学的一项基本技术。
因具有吸附少、电渗作用小、快速省时和成本低等优点，以醋酸纤维薄膜为支持物进行电泳分离血清蛋白已成为生化教学必开的基础实验项目之一。
但影响该实验的因素较多，往往因考虑不周而得不到理想的电泳图谱，主要表现为区带分离不清晰、拖尾、区带歪斜、区带呈锯齿状等。
笔者结合生化实验教学经验及他人研究工作，对影响实验效果的常见因素进行分析并提出相应对策，以供参考。
正常情况下，血清蛋白电泳后分离成5个较明显的条带:清蛋白、α1－球蛋白，α2－球蛋白，β－球蛋白和γ－球蛋白。
但溶血标本则表现为清蛋白含量下降，α2－球蛋白和β－球蛋白含量升高且区带分离不清，随溶血程度的增加，血红蛋白浓度达到2.50 g/L时，α2－球蛋白和β－球蛋白区带重叠，呈现出电泳扫描图中的α2－β桥，严重溶血时α2－β桥融合为一个波峰［1］。
琼脂糖凝胶电泳结果显示，血红蛋白会迁移到α2－球蛋白和β－球蛋白区带之间，从而使后两者的检测结果增高，所以应取用无溶血的血清标本。
以笔者所在的生化实验室为例来描述血清标本的制备，即取洁净的100 mL离心管到菜市接取健康兔血后，常温静置至血液凝固，5 000 r/m，离心5 min，上清液即为血清，小心移取分装，－20℃冻存备用。
实验结果表明，血清蛋白分离效果良好。
血清蛋白中除清蛋白外，其他的大多数都是糖蛋白［2］。
这些糖蛋白通过N－或O－连接的寡糖链增强了蛋白分子空间构象的稳定性，在一定程度上提高了抵抗蛋白水解酶的能力，半衰期延长［3］。
尽管在2℃～8℃保存，血清中多种酶的存在仍会分解蛋白，尤其像清蛋白这样缺乏对酶抵抗力血清蛋白，使血清蛋白质的组分发生改变，蛋白质的分解同时也引起电荷下降，使α2－球蛋白的电泳速度变慢［4］。
研究表明，血清在2℃～8℃的条件下保存48 h对电泳结果影响较小;在3～5 d内，除γ－球蛋白外，其他4种蛋白的质量百分比均出现了显著性变化(P ＜0.05)［5］。
在笔者实际教学中，发现血清在－20℃下冻存7 d也未见降解，但分装保存在4℃的血清确实最好在2 d内使用才能保证分离效果。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳对缓冲液的pH值和离子强度要求严格。
离子强度愈低，区带展开愈长，电泳速度愈快，带电颗粒在介质上扩散严重，可分辨性明显降低，区带展开延长，导致区带拖尾［6－7］。
当离子强度低于0.05时会出现区带拖尾现象，高于0.075时，区带则过于紧密。
虽然交换电极或是将缓冲液混合后滤过再使用有一定改善作用，但应该经常测试缓冲液的pH值和离子强度，尤其是阳极端的pH值变化，而且最好在电泳6次后就更换新的缓冲液［8－9］。
研究发现，在相同条件下，采用与巴比妥—巴比妥钠缓冲液pH值和离子强度相同的硼酸缓冲液能得到更清晰的图谱，表明这样的硼酸缓冲液是一种更经济环保的替代溶液［10］。
如果对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的要求不高，像笔者所在的地方理工高校所开设的生化实验，只要求得到5条清晰可辨的蛋白区带即可。
若要进行病理分析或得到更多区带的话，可基于不连续缓冲系统的原理，以氯离子作为前导离子，巴比妥离子作为后向离子，所产生的较大电势梯度使血清样品浓缩，血清蛋白分辨率可大大提高，非病理血清即可分出6～8条明显区带［11］。
厚薄不均，糙面微孔不均，脆性不一的纤维素膜将导致区带泳动速度稳定，蛋白质在白色斑点处甚至不泳动而造成区带分离不清晰，出现区带跑歪的现象。
因此应选用漂浮于缓冲液后能迅速浸润且色泽一致的薄膜。
浸泡充分的薄膜如果过湿则会因样品扩散迅速，浓度降低而导致区带分散不集中。
因此，在用滤纸轻吸膜片表面多余缓冲液时，应以不干不湿为宜，因为吸得太干的薄膜(醋酸纤维薄膜出现白斑)渗透性会变差，样品不易进入醋酸纤维素网孔内而达不到分离量。
从人为因素来看，因点样造成的蛋白分离失败所占比例最高。
点样量太多时容易导致电泳图谱分离不良或产生拖尾现象;点样量太少，区带则模糊不清［12］。
点样失败，一方面是点样器自身缺陷;另一方面同时也是主要方面，即熟练度不够。
用载玻片端面点样，会因其宽度略大于薄膜宽度而产生明显的边缘效应，并有拖尾现象。
如采用改制较窄的订书针端面或毛细管点样，效果明显优于载玻片端面点样［13］。
在实验教学中，笔者用宽度打磨成1.5 cm左右的盖玻片采用印章法点样的效果也不错。
点样时力度不均或蘸取样品太多，在膜上分布不匀会引起区带歪斜或边流，因此要求学生在滤纸上多练习点样是十分必要的。
另外，点样时还应辨别光泽面和无光泽面。
若点在光泽面上，血清不能渗入醋酸纤维薄膜微孔内，将导致电泳图谱不清晰。
笔者在准备时提前在干膜片光泽面的一端标上序号，无光泽面标上+号，并提醒学生注意在这+号面画线点样，这样就不易混淆，也便于实验评分。
薄膜在滤纸桥上的位置歪斜会引起区带歪斜和边流。
当薄膜两端与盐桥接触不紧密，存在小缝隙，薄膜不同位置电阻不一致而导致电流强度不同，出现同一区带的不同位点的迁移速度差异而造成锯齿状区带;当膜两端与盐桥接触程度不同时就会出现歪斜和边流。
此外，由于膜的扩散作用和边缘效应，搭桥时薄膜相互挤靠也会引起区带跑歪的现象。
因此，搭桥时薄膜与电流方向平行并与滤纸桥接触紧密，并保证上样点位置悬空，不与阴极盐桥相重叠，因为来自电极缓冲液的流动会改变部分低荷质比血清蛋白的电泳行为［14］。
但通常电场力决定蛋白质电泳行为，缓冲液流动对蛋白质电泳行为影响太小而难观察到［15－16］。
搭桥后还应盖上电泳槽盖平衡10 min，以保证薄膜湿度均匀。
电压及电流的正确选择对于区带的清晰分离十分必要。
电压过高，虽可缩短时间，但图谱展开距离短，蛋白质各组分之间出现挤压，区分困难;反之，以低电压进行电泳时，样品泳动速度慢并且容易扩散，图谱常出现拖尾现象。
影响质点迁移率的因素有多种，包括带电质点的性质、电场强度、缓冲液的黏度、温度、pH值和离子强度以及固体支持物的电渗现象等。
由于醋酸纤维薄膜电渗很小，假定缓冲液性质稳定，此时影响质点迁移的主要因素便是电场强度。
电泳速度与电场强度和电流强度成正比，电压增加，电流也相应增大，从而加速电泳。
但电流过大时，血清蛋白运动快但区带却分不开，产生的热效应足够高的话甚至会使血清蛋白变性而不能分离［17］。
有资料认为，实际操作时应根据具体的电泳设备性能，按电场强度6～8 mV/cm长(指薄膜与滤纸桥总长度)，0.4～0.8 mA/cm宽(薄膜数目的总宽度)来设定电压，以控制电流效果在10 mA为佳。
也有研究采用先细调到0.4 mA/cm膜宽，然后电泳10 min，再调到0.6 mA/cm膜宽，然后电泳70 min，可得到清晰可见的电泳图谱［18］。
此外，还应根据室温对电压适当调整［19－20］。
染色与漂洗充分与否也会影响蛋白区带的清晰程度。
由于清蛋白在血清蛋白中的含量高，染色时间短会造成清蛋白区带中间色浅的现象。
染色液重复使用次数过多或存放时间过长以及薄膜粘黏，也会使蛋白区带染色不均，出现空泡样。
染料配制过程中，将氨基黑10 B的用量增加30并贮存较长时间再用会提高染色效果，但需振摇染色充分。
实践表明，将染色充分的薄膜依次在盛有漂洗液的三个培养皿中分别来回漂洗几次，将减少脱色时长。
虽然研究认为温度提高会加快蛋白质的洗脱，但漂洗温度不应超过25℃。
实际操作发现，若无定量要求，一般情况下，室温漂洗并不影响区带的清晰度［21］。
尽管血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的影响因素较多，但在实际操作中，只要结合生物化学理论知识和对电泳原理的深入理解，就能够及时准确地分析问题的原因并对实验操作和器材进行调整，得到良好的实验结果。
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