枯草芽孢杆菌对几种植物病原真菌的抑菌活性
枯草芽孢杆菌B579抑真菌作用的初步研究
通信作者 ： 王
敏 ， 士， 博 教授 ， 主要从事微 生物制药研究 。Ｅ— ａ ： ｍｉ ｌ
２ Ｃ ８ｃ培养箱中培养 。待对照处理 的菌丝 生长边缘超 过牛津 杯的外缘 ， 用测微尺测量菌丝 生长边缘与牛津杯 之间的宽度
方 园艺 ，０ ７ ３ １４—１５ ２ ０ （ ）：２ ２．
ｍｉ ｗ＠ ｔ ｓ ． ｄ ． Ｂ ｎ ｕｔｅｕ Ｃ
，．—
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２ ４． １ － — —
江苏农 业科 学 ２ １ 年第 ３ ０１ ９卷第 ６期
陈 芳， 韩德铎 ， 郑 宇， 等．枯 草芽孢杆菌 Ｂ ７ ５ ９抑真菌作用的初步研究［ ］ Ｊ ．江苏农业科学 ，０ １３ （ ）２ ４—２６ ２ １ ，９ ６ ：１ １
枯草芽孢杆菌 Ｂ７ ５９抑真菌作用 的初步研究
陈 芳 ， 韩德 铎 ，郑 宇 ，张艳春 骆 健 美 ， ，王 敏
（． １聊城大学生命科学学院， 山东聊城 ２ ２ ５ ； ． ５ ０９ ２ 工业微生物教 育部重点实验室／ 天津科技大学生物工程学院， 天津 ３ ０ ５ ） ０ ４７
摘要 ： 通过平板对峙培养试验考察了从植 物根围分 离的 １ 株生防枯草芽孢 杆菌——Ｂ ７ ５ ９对 ８ 主要植物病原菌 株
关键词 ： 草芽孢杆菌 ； 枯 抑菌作用 ； 枯萎病 ； 菌代谢物 抗
中图分类号 ： ９ ９９ Ｑ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： ０ １ ２—１０ （０ １ ０ ０ １ ０ ０ ３２ ２ １ ）６— ２４— ３
枯草芽孢 杆菌 （ ａｉｕ ｕｔｉ 是普遍 存在于土壤 和植 Ｂ ｃｌｓ ｂｌ ） ｌ ｓ ｉｓ
细菌培养基为 Ｌ Ｂ培养 基 ， 原菌培 养基 为马铃薯 葡萄 病
糖琼脂培养基（ Ｄ ） ＰＡ 。
枯草芽孢杆菌的生物学特性及其在植物保护中的应用
枯草芽孢杆菌的生物学特性及其在植物保护中的应用枯草芽孢杆菌是一种常见的植物保护中的生物防治剂。
它具有很多独特的生物学特性，能够广泛应用于植物病害的防治中。
本文将为您详细介绍枯草芽孢杆菌的生物学特性，并探讨其在植物保护中的应用。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的细菌，广泛存在于土壤、植物表面以及水体中。
它是一种革兰氏阳性菌，形态呈杆状，菌株数量庞大，种群稳定。
枯草芽孢杆菌具有多种抗逆性，适应性强。
它能在广泛的温度和湿度条件下生存和繁殖，耐受低温和高温，并且能耐受许多化学物质的作用。
这使得它能够在不同地区和不同环境条件下应用于植物保护工作。
枯草芽孢杆菌具有广谱的抗病能力。
它通过产生一系列的抗生素和抗菌化合物，能有效地抑制和杀死多种植物病原菌，例如革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌。
此外，枯草芽孢杆菌还能够通过竞争和侵占作用，在植物表面形成一层保护膜，阻止其他有害微生物的入侵。
枯草芽孢杆菌具有良好的环境适应性。
它是一种益生菌，对植物无害，对环境友好，不会对农田生态系统产生负面影响。
此外，枯草芽孢杆菌还具有生物肥料的功能，能够促进植物的生长和发育。
在植物保护中，枯草芽孢杆菌已经被广泛应用于农作物的防治中。
其主要应用包括：1. 作为生物杀菌剂的应用：枯草芽孢杆菌能够产生多种抗菌物质，具有较强的抑菌和杀菌活性。
因此，它可以在农作物生长过程中，通过根系喷施、叶面喷洒等方式，抑制和杀死一些常见的植物病原菌，防治根腐病、叶斑病等病害。
2. 作为生物肥料的应用：枯草芽孢杆菌具有促进植物生长和发育的作用。
它能够产生促进植物生长的激素和酶类，提高植物的营养吸收能力和抗逆能力。
因此，它可以在播种前、移栽、追肥等阶段，通过土壤施用、根际喷洒等方式，提高农作物的产量和品质。
3. 作为土壤修复剂的应用：枯草芽孢杆菌具有强大的生化降解能力，能够分解和降解土壤中的有机污染物，改善土壤质量。
因此，它可以用于污染土壤的修复和治理工作，例如农田退化改造、重金属污染土壤修复等。
枯草芽孢杆菌HAB-1产生抗菌物质的最优发酵条件
摘
要 ：为筛选 适合 Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ Ｈ Ａ Ｂ ． １生长和抑菌物质产生 的最佳培养基和最佳培养条件 ， 采用摇 瓶培
养法和平板对峙 法 ， 通过单 因子试 验筛选适合菌株 ＨＡ Ｂ 一 １生长 的碳 源、 氮 源、 金属离 子及最佳 培养条件 。结
枯草芽孢杆菌 Ｈ Ａ Ｂ － １产 生抗 菌物 质 的 最 优 发 酵 条 件
孙 亮 ， 刘文波 ， 杨廷雅 ， 和虹 宇 ， 邬 国 良， 张 宇 ， 缪卫 国 ， 郑 服 丛
（ 海南省热带生物 资源可持续利用重点实验室／ 海南大学 环境与植物保护学院 ， 海南 海 １ ３ ５ ７ ０ ２ ２ ８ ）
实验室分离 、 鉴定与保存 。Ｐ Ｄ Ａ ， Ｎ Ｂ和 Ｎ Ａ培养基配方见《 植病研究方法》 。基础发酵和种子培养基均
为Ｎ Ｂ培 养基 。
收稿 日期 ： ２ ０ １ ３— ０ ４— ２ ３ 基金项 目：国家重 大基 础研 究计划项 目（ ２ ０ １ １ Ｃ Ｂ １ １ １ ６ １ ２ ） ； 国家 自然科学基金项 目（ ３ １ １ ６ ０ ３ ５ ９ ） ； 国家农业产业技
第 ４卷 第 ３期
２ ０ １ ３年 ９月
热 带 生 物 学 报
9种药用植物内生或附生真菌的分离及其杀虫、抑菌活性
Ｆ Ｎ Ｌｘ ， ｎ ｕ Ａ ｉｉ ＷＵＷｅ ｑ ｎ —ａ
（ ｓ ｔ ｔ ｏ ｅ ｔ ｉｅ ｃｅ ｃ ． ｒ ｗ ｓ Ａ＆ ＦＵｎｖ ｒｉ ， ａ ｇｉｇ７ ２ ０ ， ｈ ａ ｘ ， ｉａ Ｉ ｔ ｕｅ ｆ ｓ ｃｄ ｉｎ ｅ Ｎｏｔ ｅ ｔ ｎｉ Ｐ ｉ Ｓ ｈ ｉｅｓ ｙ Ｙ ｎ ｌ １ １０ Ｓ ａ ｎ ｉＣｈｎ ） ｔ ｎ
本研究选用9种药用植物采用5种植物病原真菌5种病原细菌1种蚊幼虫进行系统的生物测定以期评价这些植物内生附生真菌的生物活性为筛选结构新颖的农药活性化合物和综合开发利用植物资源提供依据
第 ４ 卷第 ４ ８ 期
农 药
ＡＧＲ０ＣＨＥ＾ 缸ＣＡＬ Ｓ
Ｖ ． ８ ＮＯ ４ ｂ１ ４ ． ． 至 ຫໍສະໝຸດ Ａｐ ． ０９ １ ２０
我国有丰富的药用植物资源 ， 筛选可控制农作物主要 菌 （ ｕ ａ ｉｍ ｘ ｓ ｏ ｕ 、 Ｆ ｓ ｒｕ ｏ ｙ ｐ ｒ ｍ） 番茄 灰 霉 病 菌 （ ｏ ｒ ｔｓ Ｂ ｔｙ ｉ
病 虫 害的药 用 植物 ， 发现新 的有 一 定作 用特 点 的杀 虫抑 菌 ｃ ｅｅ ）玉米 弯 孢 叶斑 病菌 （ ｕ ｖ ｌｒ ｕ ａａ 、 ｉ ｒａ 、 ｎ Ｃ ｒｕａｉ ｌｎ ｔ）油菜 菌 ａ 的植 物 内生 、 附生 真 菌 ， 于 进 一 步 研 究 植 物 源农 药 、 对 开 核病菌（ｃ ｒｔ ｉ ｓｌｒｔ ｒｍ）由西北农林科技大学植 Ｓｌ ｏｉ ａ ｃ ｏｉ ｕ ， ｅ ｎ ｅ ｏ 发 利 用宝 贵 的 药用 植 物 资 源 有 十分 重 要 意义 。本 研 究 选 物病 理 室提 供 。枯 草 芽孢 杆 菌（ ａ ｉ ｕ ｕ ｔ ｉ 、 状芽 Ｂ ｃｌ ｓｓｂｉｓ 蜡 ｌ ｌ） 用 ９ 药 用 植 物 ， 用 ５ 植 物 病 原 真 菌 、 种 病 原 细 菌 、 孢杆菌（ａ ｉｕ ｅｅｓ、 种 采 种 ５ Ｂ ｃｌ ｓｃｒｕ ）金黄色葡萄球菌（ｔ ｈ ｌｃｃｕ ｌ Ｓ ｐ ｙｏｏ ｃｓ ａ ｕ ｕ ）大 ｒ Ｅｓ ｈ Ｃ ｉ ｃ ） 绿 ｒ Ｚ １ 种蚊 幼虫进行 系统 的生物测定 ， 以期评价这 些植物 内 ａ ｅ ｓ 、 肠 杆 菌 （ Ｃ ｅ ｉ ｈ ａ ｏ ｉ 、 脓 杆 菌 生、 附生 真 菌 的生 物 活性 ， 为筛 选结 构 新 颖 的农 药 活 性 化 （ ｓｕ ｏ ｎ ｓａ ｒｇｎ ｓ）购 自中国科 学 院普 通微 生物 Ｐ ｅ ｄ ｍｏ ａ ｅｕ ｉ ａ ， ｏ
枯草芽孢杆菌在农业领域的应用研究进展
枯草芽孢杆菌在农业领域的应用研究进展
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境中，具有多种生物学功能和应用价值。
在农业领域，枯草芽孢杆菌被广泛应用于土壤改良、植物生长促进、生物防治等方面，并取得了一系列研究进展。
枯草芽孢杆菌在植物生长促进方面的应用研究取得了显著进展。
枯草芽孢杆菌可以产生多种有益物质，如植物生长激素和溶磷酸酶等，促进植物的生长和发育。
研究表明，枯草芽孢杆菌可以提高植物的抗逆性、促进根系发育、增加养分吸收等，从而提高作物的产量和质量。
枯草芽孢杆菌在生物防治方面的应用研究也取得了一定进展。
枯草芽孢杆菌具有广谱的抗菌活性，可以抑制多种病原菌的生长和繁殖，从而有效防治作物病害。
研究表明，枯草芽孢杆菌可以抑制棉花、番茄、水稻等作物的一些重要病害，如青枯病、灰霉病和纹枯病等。
枯草芽孢杆菌还可以产生一些杀虫物质，用于防治害虫，如蚜虫、蚜虱等。
枯草芽孢杆菌在植物健康管理和生态环境保护方面的应用研究也取得了一些进展。
枯草芽孢杆菌可以通过产生抗生素、次生代谢物质等机制，对土壤中一些化学污染物进行降解和解毒，提高土壤质量，减少环境污染。
枯草芽孢杆菌还可以促进土壤有机质的分解和循环，改善土壤生态环境，保护生物多样性。
枯草芽孢杆菌在农业领域的应用研究取得了显著进展，并显示出广阔的应用潜力。
枯草芽孢杆菌的应用技术和产品仍面临一些问题和挑战，如菌株选择、大规模生产、有效存活和释放等。
还需要进一步加强对枯草芽孢杆菌的基础研究和应用研究，提高其在农业领域的应用效果和经济效益，为农业可持续发展做出更大贡献。
枯草芽孢杆菌对农作物的作用,附使用方法
枯草芽孢杆菌对农作物的作用，附使用方法1、抗拮作用：枯草芽孢杆菌高抗重茬，在生长期间它可以分泌细菌素、有机酸类物质、脂肽类化合物，这些物质可以抑制病原菌的生长。
2、杀菌溶菌：枯草芽孢杆菌可消耗、分解病原菌，导致其菌丝发生断裂，避免病菌进一步危害作物。
3、调节生长：枯草芽孢杆菌可产生类似植物生长激素的物质，对植物的生长具有促进作用。
一、枯草芽孢杆菌对农作物的作用1、抗拮作用（1）使用枯草芽孢杆菌可高抗重茬，它在生长期间可以分泌细菌素（多粘菌素、制霉菌素、枯草菌素）、有机酸类物质、脂肽类化合物，这些物质可以抑制病原菌的生长，或将其溶解。
（2）枯草芽孢杆菌分泌出来的“几丁质酶抗菌蛋白”可抑制多种植物病原菌。
（3）枯草芽孢杆菌可通过争夺空间、养分等方式达到对致病菌的竞争性抑制。
2、杀菌溶菌（1）枯草芽孢杆菌可伴随病原菌的菌丝一起生长，从而消耗、分解病原菌，导致其菌丝发生断裂，避免病菌进一步危害作物。
（2）枯草芽孢杆菌可以病害，比如小麦白粉病，水稻稻瘟病、赤霉病、纹枯病、炭疽病，黄瓜霜霉病，番茄青枯病、灰霉病等。
3、调节生长枯草芽孢杆菌在繁殖过程中，可产生类似植物生长激素、细胞分裂素的物质，比如增加赤霉素、吲哚乙酸等内源激素的含量，降低脱落酸的含量，这对植物的生长具有促进作用，还有助于植物抵抗病原菌的侵染。
二、枯草芽孢杆菌使用方法1、拌种种植西瓜、黄瓜、西红柿、茄子等蔬菜，时可在播种前用枯草芽孢杆菌悬浮种衣剂（300亿芽孢/毫升）和种子按照1：50（或1：100）的比例做拌种处理，拌种后可在种子外部形成保护层，从而达到抑制枯萎病、根腐病等土传病菌侵染种子的效果。
2、喷雾防治稻瘟病、黑胫病、赤星病、黄萎病、枯萎病等病害，可在发病初期亩用7.5-10枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（2000亿CFU/克）兑水30公斤进行喷雾，每隔7天喷1次，连喷2-3次即可。
3、灌根西红柿、黄瓜、茄子、西瓜等枯萎病发生前或发生初期，亩用200-250克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂（100亿/克）兑适量清水做灌根处理即可。
枯草芽孢杆菌CS16抑菌活性与胞外产物成分分析
枯草芽孢杆菌CS16抑菌活性与胞外产物成分分析李占飞;林陈强;张慧;李昱;林新坚;陈济琛【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2013(034)006【摘要】通过测定枯草芽孢杆菌CS16菌株的抑菌活性,对其胞外代谢物活性与成分进行分析,以期开发有效的生防菌剂.结果表明:CS16菌株对多株植物病原真菌具有明显的抑制作用,对病原细菌的抑菌作用相对较弱;CS16发酵液中羧甲基纤维素酶、淀粉酶和木聚糖酶活力分别为509.58 U/mL、7 198.71 U/mL和1 853.68 U/mL;其发酵液经酸沉淀所得粗提物可明显抑制香蕉枯萎病菌丝生长,最小抑菌浓度为0.062 5 mg/mL;利用反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和正相硅胶柱分离纯化获得较纯的抑菌物质,经薄层层析和HPLC定性分析,初步认为其胞外抑菌物质中含有Iturin A.%In order to develop effective biocontrol agents,the antimicrobial activity and extracellular metabolites of Bacillus subtilis strain CS16 were analyzed.The results showed that strain CS16 had strong inhibition against many pathogenic fungi but rather weak in anti-bacterial activities.The activities of carboxymethyl cellulase,amylase and xylanase in fermented liquid of CS16 were 509.58 U/mL,7198.71 U/mL and 1853.68U/mL,respectively.The crude extract of the fermented liquid from strain CS16 had distinct inhibition against Fusarium oxysporum f.sp.cubense and its minimal inhibitory concentration(MIC)was 0.062 5 mg/mL.And then the extract was purified by reverse-phase silica gel column,sephadex LH-20 gel column and normal-phase silica gel column.The antimicrobial substance inthe purified extract was Iturin A by thin-layer chromatography and HPLC analysis.【总页数】6页(P1155-1160)【作者】李占飞;林陈强;张慧;李昱;林新坚;陈济琛【作者单位】福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州 350003;福建农林大学生命科学学院,福建福州 350002;福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州350003;福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州 350003;福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州 350003;福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州350003;福建省农业科学院土壤肥料研究所,福建福州 350003【正文语种】中文【中图分类】S476【相关文献】1.三株产乳酸芽孢杆菌共生培养胞外代谢产物的活性与成分分析 [J], 钟日聪;刘影;徐春厚2.Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外发酵产物对食源性致病菌抑菌活性的初步研究 [J], 周文杰;杨建;张瑞娟;万茵;韩蓓3.枯草芽孢杆菌CS16菌株抑菌活性物质的提取分析 [J], 张慧;刘永华;林陈强;邱宏端;陈济琛4.青虾源维氏气单胞菌胞外产物生物学特性及蛋白成分分析 [J], 单晓枫;张海月;孙武文;康元环;陈龙;张冬星;安鼎杰;田佳鑫;钱爱东5.短小芽孢杆菌X93及胞外产物抑菌活性的研究 [J], 郭婧;王娟;宋增福;贾亮;张永华;范斌;张庆华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
枯草芽孢杆菌的作用
枯草芽孢杆菌的作用1.生物防治作用：枯草芽孢杆菌是一种植物病原真菌的天敌，可以通过竞争和抑制其他细菌、真菌和病毒的生长来保护植物免受病原微生物的侵害。
枯草芽孢杆菌产生的抗生素和其他化合物可以杀灭或抑制一些植物病原菌，例如立枯病菌、纹枯病菌等，从而减少农作物的损失。
2.促进植物生长：枯草芽孢杆菌具有产生植物生长激素的能力，如植物生长素和赤霉素。
这些激素可以促进植物根系的生长和发育，增加农作物的产量。
此外，枯草芽孢杆菌还可以促进植物根部的磷和钾的溶解和吸收，提高植物对营养物质的利用效率。
3.抗逆作用：枯草芽孢杆菌具有一定的耐逆性，可以在低温、高盐、低水分等恶劣环境条件下存活和生长。
它能产生一些抗寒、抗干旱、抗盐等相关的蛋白质和化合物，帮助植物应对逆境胁迫，提高植物的生存能力和抗病能力。
4.有机肥料降解：枯草芽孢杆菌可以分解有机肥料，将有机物转化为植物可吸收的形式。
它具有蛋白水解酶、葡萄糖水解酶、纤维素酶等多种酶活性，可以降解复杂的有机化合物，释放出营养元素供植物吸收利用。
5.污水处理和环境修复：枯草芽孢杆菌可以降解有机废水和重金属污染物。
它能产生一些特殊的酶类，如脱氮酶、酚酸羟化酶等，用于污水处理和土壤修复中，能有效去除废水中的有机物和重金属离子，改善环境质量。
6.食品工业应用：枯草芽孢杆菌通过产生抗生素、乳酸和其他化合物，可以抑制食物中的有害菌，延长蔬菜、水果等食品的保鲜时间。
它还可以用于酿造食醋、面食等食品的发酵过程，提高产品的质量。
7.生物农药生产：枯草芽孢杆菌被广泛应用于生物农药的生产。
根据其对不同病原菌的特异性和高度选择性，可以定制生物杀菌剂来防治不同的病害，从而减少对环境和人体的污染。
总的来说，枯草芽孢杆菌在农业、环境和食品工业中具有重要的作用。
它既可以作为生物农药用于植物病虫害防治，又可以作为生物肥料促进植物生长，还可以用于环境修复和污水处理。
枯草芽孢杆菌的研究和应用将为可持续农业和环境保护提供重要的支持。
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枯草芽孢杆菌对几种植物病原真菌的抑菌活性杨晓燕;王钰鑫;叶伟伟;黄俊;张龙【摘要】枯草芽孢杆菌是目前国内外比较具有应用潜力的生防菌种之一.本文主要研究了枯草芽孢杆菌菌液对几种植物病原菌的菌丝抑制试验、菌丝形态影响试验以及分生孢子萌发抑制试验,了解枯草芽孢杆菌菌液对尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢、尖孢镰刀菌的抑制作用及抑菌机理.结果显示:枯草芽孢杆菌菌液对6种病原真菌的菌丝形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用.用枯草芽孢杆菌菌液处理尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢、尖孢镰刀菌后,在PDA培养基上均形成了明显的抑菌圈,直径达3.00 cm左右;菌液处理后分生孢子的萌发率仅30％左右.显微镜观察发现,处理组菌丝生长异常,体表凹凸不平,局部膨大,分枝变多,原生质体外泄.研究表明枯草芽孢杆菌菌株对尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢和尖孢镰刀菌有良好的抑制作用,并且可以有效控制尖孢镰刀菌古巴专化型、灰葡萄孢、茄病镰刀菌、大丽轮枝菌、麦根腐平脐蠕孢和尖孢镰刀菌病害的发生.【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2018(048)006【总页数】7页(P32-38)【关键词】枯草芽孢杆菌;菌丝抑制试验;菌丝形态;分生孢子萌发【作者】杨晓燕;王钰鑫;叶伟伟;黄俊;张龙【作者单位】山东劲牛生物科技股份有限公司,山东济南250000;山东劲牛生物科技股份有限公司,山东济南250000;山东劲牛生物科技股份有限公司,山东济南250000;山东劲牛生物科技股份有限公司,山东济南250000;山东劲牛生物科技股份有限公司,山东济南250000【正文语种】中文我国是农业大国，农业生产对中国经济的发展起着决定性的作用。
尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp. cubense)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)、麦根腐平脐蠕孢(Bipolaris sorokiniana)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)这几种植物病原真菌对农作物的危害较大，一旦发病则大量减产，给农业生产带来巨大的经济损失。
Fusarium oxysporum f.sp. cubense可以侵染香蕉造成香蕉枯萎病，100多年来一直是香蕉生产的技术难题，属于一种毁灭性的病害，成为香蕉产业发展的巨大瓶颈[1-2]；Botrytis cinerea可以侵染多种蔬菜、水果和观赏植物的茎、叶、花和果实，寄主范围较广，危害较大[3]；Fusarium solani在多种植物上可以引起根茎腐病、枯萎病、根腐病等[4-5]，造成多种农作物和经济作物发生严重的病害；Verticillium dahlia可导致660多种双子叶植物发生黄萎病，对农业生产造成严重的经济损失，其中包括多种重要农业作物大豆，棉花，玉米，草莓等；Bipolaris sorokiniana是小麦的整个生育期病害，病原菌可以侵染茎秆基部以及根系，加快叶片衰老，引起小麦的倒伏，严重时造成枯白穗，轻者减产5%～10%，重则减产20%～50%[6]；Fusarium oxysporum侵染引起的枯萎病为毁灭性的土传病害，造成农作物严重减产甚至绝收。
目前，国内外通常采用物理、化学及生物方法防治植物病害。
物理防治费时费力，且防治效果有限、受环境条件影响较大，因此应用受到限制；化学药剂由于其使用方便效果明显而被广泛使用，但长期大量使用使病害产生抗药性，造成环境污染、破坏生态平衡，且易造成农药残留，对人畜副作用大[7]；生物防治与其它方法相比，具有安全、有效和持久的特点，特别是避免了化学防治带来的一系列问题[8-10]，近年来倍受关注。
因此，更好地利用有益微生物防治植物病害是目前最为切实可行的策略之一。
几十年来植物病害的生物防治微生物已涉及到真菌、放线菌、细菌乃至病毒(噬菌体)等多种种群。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在国内外已经被广泛用于防治多种植物病害且很多已经商品化生产，是自然界中广泛存在的不污染环境，对人畜无害的非致病细菌和植物内生细菌，具有较强抑制植物病害的能力；其抗逆能力强、内生芽孢、繁殖速度快、营养要求简单和对农作物安全，可以产生细菌素、酶类、活性蛋白质类、脂肽类和多肽类等多种抗菌物质[11]。
其具有高效广谱的抑制植物病原菌的作用，包括根部病害、枝干病害、叶、花部病害和收获后果品病害等，且不易产生抗药性，能够促进植物生长等，是一种理想的生防微生物[12]。
枯草芽孢杆菌对于开发用于微生物菌肥和农药具有非常大的应用潜力。
本文主要研究枯草芽孢杆菌对几种植物病原菌的抑菌活性及其抑菌机制，通过抑菌试验研究其对植物病原菌的抑菌效果，通过被菌液处理过的孢子萌发和菌丝形态变化揭示其生防效果及抑菌机制，为该菌株作为生防菌的进一步开发应用提供理论基础。
1 材料与方法1.1 供试材料供试枯草芽孢杆菌菌株，于-80 ℃下保存在含20%甘油的LB培养基(胰蛋白胨10 g，氯化钠10 g，酵母粉5 g，蒸馏水1 000 mL)中和固体LB培养基试管斜面上。
试验时在固体LB(胰蛋白胨10 g，氯化钠10 g，酵母粉5 g，蒸馏水1 000 mL，固体加入18 g琼脂粉)培养基平板上划线活化，用接种环挑取新鲜单菌落接入含有50 mL液体LB的250 mL三角瓶中，于37 ℃、200 r/min条件下振荡培养72 h，4 ℃下保存，备用。
Fusarium oxysporum f.sp. cubense, Botrytis cinerea, Fusarium solani, Verticillium dahlia, Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum均来自实验室保存菌株，用固体PDA(马铃薯200 g，葡萄糖18 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1 000 mL)培养基繁殖培养，斜面保存于4 ℃冰箱。
1.2 枯草芽孢杆菌菌株的拮抗效果观察1.2.1 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌菌丝生长的抑制作用采用牛津杯法[13]。
在PDA平板上距中心2.5 cm的对称位置接种2块直径为5 mm的菌饼，平板中心放置1个内径为6 mm的牛津杯，杯内分别加入200 μL菌液原液及其10、50、100倍稀释液，每个试验3个重复，置于25 ℃恒温培养箱内黑暗培养；以灭菌的LB液体培养基为对照。
培养5 d，测定抑菌圈直径，观察实验结果，拍照记录。
1.2.2 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌分生孢子萌发的影响将Fusarium oxysporum f.sp. cubense, Botrytis cinerea, Fusarium solani, Verticillium dahlia, Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum接种于PDA培养基上，25 ℃恒温培养7 d后，用无菌水洗脱孢子，孢子悬液经Miracloth过滤去除菌丝碎片，慢速离心，清洗两遍后得孢子悬液[14]。
取50 μL孢子悬浮液滴加于1.8%水琼脂培养基上，涂布均匀，再分别滴加50 μL枯草芽孢杆菌菌液及其10、50和100倍稀释液，每个试验3个重复，以滴加灭菌LB液体培养基为对照。
涂布均匀后置于25 ℃下黑暗培养6 h和24 h。
于6 h时在40×物镜下镜检，一个视野镜检孢子60个左右，统计萌发孢子数，分别按公式计算萌发率和抑制率，并观察24 h时孢子的萌发情况。
分生孢子萌发率1.2.3 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌菌丝形态的影响牛津杯法培养5 d后，在病原真菌抑菌圈最前端边缘处取菌丝样品，用显微镜(OLYMPUS CX31)观察菌丝的形态变化。
2 结果与分析2.1 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌菌丝生长的影响结果如图1显示：灭菌LB液体培养基处理的植物病原真菌正常生长，而枯草芽孢杆菌菌液处理过的植物病原真菌菌丝生长均受到明显地抑制。
如表1所示：Fusarium oxysporum f.sp. cubense, Botrytis cinerea, Fusarium solani, Verticillium dahlia, Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum的抑菌圈直径分别达到2.9 cm、3.0 cm、3.1 cm、3.0 cm、3.0 cm和3.0 cm，与对照相比差异明显；而随着菌液稀释倍数的增加，抑菌效果虽有轻微变化，但并不明显，说明菌液浓度达到一定量后就会对致病菌产生抑菌作用。
A: 尖孢镰刀菌古巴专化型； B: 灰葡萄孢； C: 茄病镰刀菌； D: 大丽轮枝菌； E: 麦根腐平脐蠕孢； F: 尖孢镰刀菌1: 灭菌LB液体培养基处理； 2-5: 枯草芽孢杆菌不同稀释浓度处理(2: 原液; 3: 10倍稀释液; 4: 50倍稀释液; 5: 100倍稀释液)图1 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌的抑制作用2.2 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌孢子萌发的影响如图2病原真菌孢子萌发试验结果显示：经灭菌LB液体培养基处理的植物病原真菌分生孢子正常萌发，而经枯草芽孢杆菌菌液处理过的植物病原真菌分生孢子萌发异常。
在6 h时，对照组70%以上萌发，而经枯草芽孢杆菌菌液处理过的分生孢子，萌发率只有30%左右，24 h时，显微镜观察发现，处理组萌发的孢子其生长速度明显低于对照组，且萌发的分生孢子被菌液包围、畸形率较高、分支增多。
A: 尖孢镰刀菌古巴专化型； B: 灰葡萄孢； C: 茄病镰刀菌； D: 大丽轮枝菌； E: 麦根腐平脐蠕孢； F: 尖孢镰刀菌1: 灭菌LB液体培养基处理6 h孢子的萌发； 2: 枯草芽孢杆菌菌液处理6h孢子的萌发 3: 灭菌LB液体培养基处理24 h孢子的萌发； 4: 枯草芽孢杆菌菌液处理24 h孢子的萌发图2 枯草芽孢杆菌菌液处理后植物病原真菌分孢子的萌发情况表1 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌抑菌圈直径病原菌CK/cm 100倍稀释液/cm 50倍稀释液/cm 10倍稀释液/cm 原液/cm 尖孢镰刀菌古巴专化型0.002.462.522.662.90灰葡萄孢0.002.272.602.933.00茄病镰刀菌0.002.262.402.603.10大丽轮枝菌0.002.262.402.523.00麦根腐平脐蠕孢0.002.802.903.003.00尖孢镰刀菌0.002.732.862.903.00注：CK为灭菌LB液体培养基处理2.3 枯草芽孢杆菌菌液对植物病原真菌菌丝形态的影响显微观察如图3所示：与对照经灭菌LB液体培养基处理相比，经枯草芽孢杆菌菌液处理后，植物病原真菌菌丝生长缓慢，菌丝形态异常，影响其正常生长。