酶法制备魔芋甘露寡糖和产物分析
魔芋葡甘露寡糖的制备、化学结构及对胰岛NO自由基释放量的影响
魔芋葡甘露寡糖的制备、化学结构及对胰岛NO自由基释放量的影响陈秀敏;吕秀菊;傅德贤;欧阳藩【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2002(18)6【摘要】魔芋精粉经β 甘露聚糖酶酶解成寡糖后 ,用活性炭柱进行分离纯化 ,以不同浓度 (5 % ,10 % ,2 0 % )的乙醇洗脱 .研究不同洗脱组分对链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病模型的胰岛NO自由基释放量的影响 .发现 1mg ml以 5 %乙醇洗脱的寡糖可以使胰岛培养液中的NO自由基释放量平均下降2 5 4 % (P <0 0 5 ) ,0 1mg ml以 5 %乙醇洗脱的寡糖使NO自由基水平下降 2 0 % (P <0 0 5 ) .结果表明 ,5 %乙醇洗脱的魔芋寡糖对保护胰岛免受链脲佐菌素 (STZ)的破坏有一定的作用 .用凝胶色谱、红外光谱、元素分析、核磁共振光谱、质谱等方法初步分析了 5 %乙醇洗脱的魔芋寡糖的化学结构 .发现该糖是一种四糖 ,分子量为 6 6 6 .其推测性结构式为:β D Man(1→ 4 ) β D Man(1→ 4 ) β D Glc(1→ 4 )α D Man ,β D Man(1→4 ) β D Glc(1→ 4 ) β D Man(1→ 4 )α D Man或β D Glc(1→ 4 ) β DMan(1→4 ) β D Man(1→ 4 )α D Man .【总页数】5页(P741-745)【关键词】降血糖作用;魔芋;葡甘露寡糖;制备;化学结构;胰岛;NO自由基释放量;影响【作者】陈秀敏;吕秀菊;傅德贤;欧阳藩【作者单位】中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R285;Q946.3【相关文献】1.魔芋葡甘露聚糖的化学结构与流变性质 [J], 许时婴;钱和2.含魔芋胶/魔芋葡甘露低聚糖悬浮饮料的制备 [J], 吴月蛟;邓利玲;张志刚;钟耕3.魔芋葡甘露寡糖的干燥加热硒酸化及其产物的抗氧化性 [J], 和智坤;赵改红;李梦婷;王晓燕;李灿鹏4.魔芋葡甘露寡糖铬(Ⅲ)络合物的制备及其对小鼠血糖的影响 [J], 陈秀敏;傅德贤;欧阳藩5.魔芋葡甘露聚糖化学结构及改性研究进展 [J], 陈秀敏;傅德贤;欧阳藩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酸酶结合法水解魔芋葡甘露聚糖工艺研究
4. 5 -
3. 11
5. 0 13. 6 2. 88
5. 5 -
2. 76
6. 0 13. 4 2. 68
3期
陶兴无 : 酸酶结合法水解魔芋葡甘露聚糖工艺研究
3
从 表 2 可 以 看 出 , 使 用 柠 檬 酸 水 解 效 果 差 (6. 0 h后水解液的粘度才达到 13. 4 mPa. s) ,且加 入的柠檬酸量较大 ( 200 mL 溶液用量达 30. 72 g) , 无实际应用价值 。采用酸性较强的盐酸水解 KGM , 盐酸用量少 ,但水解效果比柠檬酸要好得多 。 2. 3 KGM 的酸酶结合降解
表 2 KGM 酸解液的粘度 /m Pa. s
酸解时间 / h 柠檬酸 盐酸
0
1. 0
30 500. 00 32. 2
30 500. 00 -
1. 5 20. 2 8. 74
2. 0 16. 5 7. 49
2. 5 15. 3
-
3. 0 14. 3 4. 80
3. 5 -
3. 93
4. 0 13. 9 3. 40
表 1 KGM 酶解液的粘度 /m Pa. s
酶解时间 / h β2葡聚糖酶
纤维素酶 对照 (不加酶 )
0 30 500. 00 30 500. 00 30 500. 00
0. 5 25. 12 1500. 00
—
1. 0 10. 62 480. 00 30 100. 00
1. 5 7. 86 230. 00
JJ21增力电动搅拌器 (江苏省金坛市医疗仪器 厂 ) ; HHSZ212不锈钢恒温水浴锅 (武汉市琴台医疗 器械厂 ) ; DHG29140A 电热恒温鼓风干燥箱 (上海精 宏设备有限公司 ) ; NDJ21 旋转黏度计 (上海精科天 平厂 ) ; TDL 25离心机 (上海安亭科学仪器厂 ) ; 7220 分光光度计 (尤尼柯上海仪器有限公司 ) 。 1. 3 实验方法 1. 3. 1 KGM 的酶解 称取一定量魔芋精粉 ,溶解 于少量 pH缓冲液中 ,搅拌溶胀 1h后 ,定容至试验 要求的浓度 。然后置恒温水浴锅上加热 ,并加入酶 制剂 。酶解一定时间后 ,取出加热 5m in灭酶 。冷却 后再用蒸馏水定容至反应前体积 (补充蒸发的水 分 ) ,离心并取上清液测粘度 、还原糖和总糖含量 。 1. 3. 2 KGM 的酸解 称取一定量魔芋精粉 ,溶解 于少量蒸馏水中 ,搅拌溶胀 1h后 ,定容至试验要求 的浓度 。然后置 80 ℃恒温水浴锅上加热 ,并加入 酸 。酸解一定时间后取出 ,冷却后再用蒸馏水定容 至反应前体积 (补充蒸发的水分 ) ,离心并取上清液 测粘度 、还原糖和总糖含量 。
饲用葡甘露低聚糖的酶法制取
饲用葡甘露低聚糖的酶法制取摘要：葡甘露低聚糖是一种重要的双歧因子，近年来已被作为一种功能性饲料添加剂，成为动物营养研究的新方向。
试验通过对黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶酶解魔芋粉制备甘露寡糖进行条件研究，获得了以葡甘露低聚糖为主的酶解产物。
酶解条件为：用煮沸的 pH 值 3.5 的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制 180 g/l 的魔芋粉溶液，加酶量按 30 IU/g 魔芋粉计算，酶解水浴温度为65 ℃，酶解时间为4 h。
酶解结束后，将酶解液进行高温灭菌并接种酿酒酵母进行发酵，发酵温度为30 ℃，摇床转速200 r/min，发酵 20 h 后将发酵液离心，所得上清液即为不含单糖的葡甘露低聚糖，得率可以达到35.73%（以魔芋粉计）。
关键词：葡甘露低聚糖；β-甘露聚糖酶；魔芋粉葡甘露低聚糖是双歧杆菌和乳酸菌最好的生长因子之一，除具有一般低聚糖的双歧因子功能外，尚具有吸附、排除人和动物肠道病原菌，调节免疫功能，增强人和动物非特异性免疫活性，促进肝脏合成甘露糖结合蛋白等独特的生理功能。
近年来已被作为一种功能性饲料添加剂，成为动物营养研究的新方向(张力华等，2006) 。
葡甘露聚糖是魔芋块茎特有的主要成分，是由 d-葡萄糖和 d-甘露糖按 1： 1.6 摩尔比以β-1，4 糖苷键连接的杂多糖，其含量约为 44%～64%。
β-甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及半乳葡萄甘露聚糖的内切酶，β-甘露聚糖酶水解植物胶(如角豆胶、瓜儿豆胶和魔芋等)可生成低聚甘露糖，引起了国内外食品、医药、动物饲料添加剂等领域的兴趣。
文中对β-甘露聚糖酶酶解魔芋粉制备葡甘露低聚糖的条件进行研究。
1 材料与方法1.1 酸性β-甘露聚糖酶的来源黑曲霉 Aspergillus niger MA-56 由本课题组筛选分离获得，为酸性β-甘露聚糖酶高产菌株（李艳丽等，2009；许少春等，2009）。
发酵培养基（以 10 g 干基为标准）：麸皮 8 g、豆粕 2 g、魔芋粉 0.1 g。
酵母甘露寡糖及其制备方法和应用
《酵母甘露寡糖：制备方法和应用》一、引言在当今社会，随着人们对健康饮食的重视和需求的增加，功能性食品逐渐受到人们的关注和喜爱。
其中，酵母甘露寡糖作为一种功能性食品成分，受到了越来越多的关注。
它在医学、保健品、食品等领域有着广泛的应用，对人体健康起着重要的作用。
本文将深入探讨酵母甘露寡糖及其制备方法和应用，帮助读者更全面地了解这一主题。
二、酵母甘露寡糖的概念酵母甘露寡糖是一种由酵母菌发酵制备而成的寡糖，具有多种生物活性，是一种天然的生长促进剂。
在多种生物学功能方面均有研究表明具有广阔的应用前景。
酵母甘露寡糖通常被制备成粉剂或溶液形态应用在食品、医药和保健品等领域。
三、酵母甘露寡糖的制备方法1. 酵母发酵法酵母发酵法是指将酵母菌培养在适宜的培养基中，通过其对底物的代谢作用合成寡糖。
这种方法制备的酵母甘露寡糖纯度较高，操作简便。
2. 酶法酶法是利用酶催化反应，将酵母菌中的多糖水解成寡糖。
这种方法得到的酵母甘露寡糖纯度较高，适用于大规模工业生产。
3. 生物技术法生物技术法是利用生物技术手段，将酵母菌中的基因进行改良，使其在代谢过程中能够直接合成寡糖，从而得到酵母甘露寡糖。
这种方法的制备成本较低，但操作复杂度较高。
四、酵母甘露寡糖的应用1. 食品行业酵母甘露寡糖可作为一种功能性糖类添加剂，被广泛用于保健食品、乳制品、饮料、烘焙食品等领域，具有调节肠道菌群、增强免疫力、促进钙质吸收等作用。
2. 医药行业酵母甘露寡糖在医药领域被用作一种治疗肠道疾病的药物成分，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗过敏等多种功能，对人体健康有着积极的影响。
3. 其他领域除了食品和医药领域，酵母甘露寡糖还在化妆品、农业等领域有着广泛的应用，如在护肤品中起到保湿、抗菌的作用，在农业中可以用作生长促进剂。
五、个人观点和总结通过本文对酵母甘露寡糖的深入探讨，我对其功能和应用有了更加全面深入的了解。
酵母甘露寡糖作为一种功能性食品成分，具有广泛的应用前景，在人体健康和医疗保健方面发挥着重要的作用。
魔芋甘露聚糖肽的制备工艺及理化特性研究
魔芋甘露聚糖肽的制备工艺及理化特性研究魔芋甘露聚糖肽的制备工艺及理化特性研究摘要：魔芋甘露聚糖肽是一种新型的活性多糖肽，具有广泛的生物功能和医疗应用前景。
本文通过研究魔芋甘露聚糖肽的制备工艺和理化特性，旨在为其进一步应用提供科学依据和参考。
1. 引言魔芋甘露聚糖肽是从魔芋中提取的一种新型多糖肽，其结构特殊且活性突出。
魔芋甘露聚糖肽具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂等生物功能，并且对人体健康具有明显的保健作用。
因此，研究魔芋甘露聚糖肽的制备工艺和理化特性，对其广泛应用具有重要意义。
2. 制备工艺2.1 魔芋提取将新鲜魔芋经过洗净、切片、蒸煮等处理工艺，使其表面的有毒物质和杂质得以去除。
然后使用水或酸进行提取，取得魔芋提取液。
2.2 蛋白酶水解将魔芋提取液与蛋白酶进行反应，在适宜的温度和pH条件下进行酶解反应。
通过控制反应时间和酶解度，可以得到魔芋的蛋白质水解产物。
2.3 水解产物纯化采用超滤、透析等分离技术，将魔芋蛋白质水解产物中的杂质、溶剂等去除，得到纯净的魔芋甘露聚糖肽。
3. 理化特性3.1 成分分析利用高效液相色谱法（HPLC）分析魔芋甘露聚糖肽的分子量分布和含量。
通过比较样品与标准品的峰面积，计算出魔芋甘露聚糖肽的含量。
3.2 理化性质测定魔芋甘露聚糖肽的溶解度、水分吸附性、离子交换容量等理化性质。
结果表明，魔芋甘露聚糖肽具有良好的溶解度和吸水性，同时还具有一定的离子交换容量。
3.3 结构分析通过红外光谱分析和核磁共振技术，研究魔芋甘露聚糖肽的分子结构。
结果显示，魔芋甘露聚糖肽中含有多种官能团和结构单元，这些结构单元赋予了其生物活性和功能性。
4. 结论本研究通过对魔芋甘露聚糖肽的制备工艺和理化特性进行研究，为其应用提供了科学依据和参考。
魔芋甘露聚糖肽具有广泛的生物功能和医疗应用前景，未来有望成为一种重要的保健和治疗物质。
此外，魔芋甘露聚糖肽的结构也需要进一步研究，以更好地理解其生物活性和功能性通过对魔芋甘露聚糖肽的制备工艺和理化特性的研究，我们得到了以下结论：魔芋蛋白质水解产物可以通过控制反应时间和酶解度来得到。
甘露聚糖酶制备魔芋葡甘露低聚糖的研究_李剑芳
按文献[ 10 ]并略作改动 :吸取 011 mL 适当稀释 的粗酶液 ,加到 214 mL 用 p H 418 的 Na2 HPO42柠檬 酸缓冲液配制的质量浓度为 5 g/ L 的角豆胶溶液中 , 50 ℃准确反应 15 min ;采用 DNS 法测定酶解产生的 还原糖量 。在上述条件下 ,以每分钟酶解角豆胶底物 产生 1μmol 还原糖 (以甘露糖计) 的酶量定义为 1 个 β2甘露聚糖酶单位 ( IU) 。 11212 魔芋胶总糖含量测定
微生物发酵法是利用葡甘露低聚糖的难发酵性 ,
选择合适的微生物 (如酿酒酵母) 将酶解产物中的甘
露糖等可发酵性单糖除去 ,从而提高葡甘露低聚糖的
纯度[2 ] 。酵母发酵方法 :在待处理的魔芋胶酶解液中
添加酵母膏 210 g/ L 、蛋白胨 410 g/ L 、NaCl 012 g/ L 、
MgSO4·7 H2O 012 g/ L 、KH2 PO4 015 g/ L ,自然 p H ,
610 23197 50142
710 21108 44134
去离子水 27142 57167
21212 酶解加酶量的选择
试验了不同加酶量 (以 IU/ g 魔芋胶计) 对魔芋
胶水解率的影响 (表 2) 。
表 2 加酶量对魔芋胶水解率的影响
加酶量 / IU·g - 1 还原糖量 / g·L - 1 水解率
产黄青霉β-甘露聚糖酶的高效表达、性质及应用
产黄青霉β-甘露聚糖酶的高效表达、性质及应用甄红敏1，华晓晗1，马俊文2，温永平1,3，李延啸2,*，闫巧娟2,*，江正强1（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083；2.中国农业大学工学院，北京100083；3.蒙牛高科乳制品（北京）有限责任公司，北京100101）摘 要：将产黄青霉（Penicillium chrysogenum）来源的β-甘露聚糖酶（Pc Man26A）在毕赤酵母中高效表达，经高密度发酵，发酵液酶活力达25 200 U/mL。
该酶属于GH26家族，与黑曲霉（Aspergillus niger）CBS 513.88来源的β-甘露聚糖酶同源性最高（67.8%），是一个新型β-甘露聚糖酶。
Pc Man26A的最适催化条件为pH 6.0和50 ℃，在pH 4.0～8.0和45 ℃下具有良好的稳定性。
该酶对魔芋粉具有最高的比活力，为3 581.0 U/mg。
进一步利用该酶水解魔芋粉得到魔芋甘露寡糖，产品得率为86.2%；经分析，其主要组分为聚合度大于4的甘露寡糖。
该β-甘露聚糖酶适用于生产魔芋甘露寡糖，为魔芋甘露寡糖的酶法生产提供了更多的选择。
关键词：产黄青霉；β-甘露聚糖酶；毕赤酵母；魔芋粉；甘露寡糖High-level Expression, Characterization, and Application of a Novel β-Mannanase from Penicillium chrysogenum ZHEN Hongmin1, HUA Xiaohan1, MA Junwen2, WEN Yongping1,3, LI Yanxiao2,*, YAN Qiaojuan2,*, JIANG Zhengqiang1(1. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China;2. College of Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China;3. Meng Niu Hi-Tech Dairy (Beijing) Co. Ltd., Beijing 100101, China)Abstract: A cloned β-mannanase (Pc Man26A) gene from Penicillium chrysogenum was successfully expressed in Penicillium chrysogenum. At the end of high cell density fermentation, the enzymatic activity of the fermentation supernatant reached 25 200 U/mL. The enzyme belonged to the glycoside hydrolase family 26 and shared the highest amino acid sequence identity (67.8%) with β-mannanase from Aspergillus niger CBS 513.88. The optimal reaction conditions for Pc Man26A were pH 6.0 and 50 ℃, and it was stable at 45 ℃ and within a broad pH range of 4.0–8.0. The enzyme showed the highest specific activity (3 581.0 U/mg) towards konjac powder. Furthermore, Pc Man26A was used for konjac powder hydrolysis, yielding konjac manno-oligosaccharide with a yield of 86.2%. The main composition of the konjac manno-oligosaccharide was manno-oligosaccharides with degree of polymerization > 4. The recombinant β-mannanase provides a new option for the enzymatic production of konjac manno-oligosaccharide.Keywords: Penicillium chrysogenum; β-mannanase; Pichia pastoris; konjac powder; manno-oligosaccharideDOI:10.7506/spkx1002-6630-20200819-248中图分类号：Q814 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）08-0098-08引文格式：甄红敏, 华晓晗, 马俊文, 等. 产黄青霉β-甘露聚糖酶的高效表达、性质及应用[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 98-105.DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200819-248. ZHEN Hongmin, HUA Xiaohan, MA Junwen, et al. High-level expression, characterization, and application of a novel β-mannanase from Penicillium chrysogenum[J]. Food Science, 2021, 42(8): 98-105. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200819-248. 收稿日期：2020-08-19基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31901627）；中国博士后科学基金面上项目（2018M641539）第一作者简介：甄红敏（1986—）（ORCID: 0000-0003-2233-1639），女，博士后，研究方向为食品生物技术。
魔芋甘露聚糖肽制备技术研究
魔芋甘露聚糖肽制备技术研究魔芋甘露聚糖肽制备技术研究引言魔芋甘露聚糖肽是一种新型的生物活性多糖肽，具有广泛的应用前景。
魔芋是一种天然植物，其根茎富含魔芋甘露聚糖，而魔芋甘露聚糖则是由魔芋中提取得到的。
魔芋甘露聚糖肽具有多种生物活性，包括抗肿瘤、降血糖、降血脂等作用，因此受到了越来越多的关注。
魔芋甘露聚糖肽制备技术魔芋甘露聚糖肽的制备技术主要包括魔芋提取、酶解、纯化和评价等步骤。
1. 魔芋提取魔芋富含魔芋甘露聚糖，因此首先需要将魔芋从植物中提取出来。
提取魔芋的方法通常有水煮、蒸煮和酶解等。
水煮法是目前应用较为广泛的一种方法，它能够高效地溶解魔芋甘露聚糖，并且能够同时去除魔芋中的杂质。
蒸煮法和酶解法相对来说操作更加简单，但是提取效果较水煮法略差。
2. 酶解酶解是将魔芋中的魔芋甘露聚糖水解成肽段的过程。
常用的酶有红曲酵素、玉米淀粉酶等。
酶解的条件包括酶解温度、pH值、酶解时间等。
在酶解过程中，需要控制好这些参数，以达到最佳的酶解效果。
研究表明，酶解时间和酶解温度是影响魔芋甘露聚糖肽得率和分子量分布的重要因素。
3. 纯化纯化是将酶解产物中的目标魔芋甘露聚糖肽提取出来的过程。
常用的纯化方法包括离心、超滤、反渗透和离子交换等。
离心是最简单的一种方法，它能够去除酶解产物中的悬浮颗粒。
超滤和反渗透则是通过膜的选择性渗透性质将魔芋甘露聚糖肽分离。
离子交换则是利用魔芋甘露聚糖肽的带电性与离子交换树脂之间的作用力进行分离。
4. 评价评价是对制备得到的魔芋甘露聚糖肽进行活性检测的过程。
常用的评价指标包括抗氧化活性、保护胃粘膜、抗炎活性等。
抗氧化活性是最常用的一种评价指标，它可以通过自由基清除实验来确定。
保护胃粘膜和抗炎活性则可以通过小鼠实验来评价。
发展趋势随着对生物活性多糖肽的研究不断深入，对魔芋甘露聚糖肽的制备技术也在不断改进。
目前，有学者利用基因工程的方法将魔芋甘露聚糖肽的合成酶引入到合适的宿主中进行大规模生产。
此外，还有学者利用纳米技术将魔芋甘露聚糖肽封装起来，以提高其生物利用度和稳定性。
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‰＠）＝、／灯伪）＋订④１）＋时＠２）＋玎④３），由表４，
计算‰ｌⅨ）＝１．８１ｘ１０－２，则“何）＝０．００４。 ２．２．６扩展不确定度 取包含因子ｋ＝２，则扩展不确定度为ＵⅨ）＝０．００８。
２．２．７测量不确定度的结果报告与表示
该白酒样品中氰化物含量的测定结果为Ｘ＝（０．２１±
用０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲液和０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸氢二钠缓
冲液配成ｐＨ值为５．５、６．０、６．５、７．０、７．５的磷酸氢二钠．柠檬 酸缓冲液各１００ｍＬ，准确称取０．３９魔芋粗粉分别加入上述 不同ｐＨ值的缓冲液中，加热制各成魔芋胶溶液；用缓冲 液配置５ＩＵ／ｍＬ的１３一甘露聚糖酶液。向４组试管（每组６支） 中分别加入１．８ⅡｌＬ魔芋胶，４５℃水浴５ｍｉｎ后，分别向试管中入
合成不确定度
Ｕ饼）＝０．００８。各不确定度分量评定结果显示，白酒中氰化 物含量测定的不确定度主要来源于重复性实验引入的不 确定度及标准溶液引入的不确定度，故本实验要求人员 具有较高的操作水平，且应从正规渠道采购符合要求的标 准溶液。 本方法较国标方法操作简便、快捷，且克服了国标法 中显色液浑浊、回收率低等问题，可替代国标法，作为白酒 中氰化物检测的方法。 参考文献：
附表葡萄糖标准曲线的设定
Ａ牡ａｃｈｅｄ ｔａｂｌｅ Ｓｅｔｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｃｕｒｖｅ
体系０ 体系中标准物／ｍｇ 双蒸水／．２ １．８ ３
２ ０．４ １．６ ３
３ ０．６ １．４ ３
４ ０．８ １．２ ３
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆｋｏｎｊａｃ ｍａｎｎｏｓｅ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ
ＨＥ Ｄａｎｌ，ＧＵＯ Ｘｉｏｎ９１，ＹＡＮＧ Ｓｈｕａｎｇｌｉａｎｌ，ＬＩ
ｐ－ｍａｎｎａｎａｓｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
Ｚｕｎｘｉｕ，ＴＡＮＧ Ｘｉａｎｇｈｕａｌ。‘
ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｊｕｎｊｕｎｌ，ＨＵＡＮＧ
１：２。
６０ＩＵ／ｍＬ、７０ＩＵ／ｍＬ各５０ｍＬ，ｐＨ值为６，５的Ｂ．甘露聚糖酶液 （要求每克魔芋粉按照５０ＩＵ、１００ＩＵ、１５０ＩＵ、２００ＩＵ、２５０ＩＵ、 ３００ＩＵ、３５０ＩＵＩ约１３．甘露聚糖酶添加，探究酶添加量对寡糖得 率的影响）。向上述梯度的反应瓶中，分别加入１０９魔芋粗粉，
显色剂：２ｍＬ苯胺、２９二苯胺、１０ｍＬ ８５％磷酸溶于
ｆ１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｙｕｎｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅ岱ｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＢｉｏｍａｓｓ Ｅｎｅｒｇｙ，Ｍｉｍ＇ｓｔｒｙ ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９２，Ｃｈｉｎａ）
【ｌ】王汉斌，牛文凯，刘晓玲．急性氰化物中毒的诊治现状【Ｊ】．中国全科医 学，２００９，１２（１０Ｂ）：１８８２．１８８４． 【２】李源栋，樊林，钱海燕，等．酒中氰化物测定方法的研究进展【Ｊ】酿 酒，２００９，３６（６）：１６．１８。 【３】黄选忠，杜洪山，吕全勇．ＣＴＭＡＢ．异烟酸．吡唑酮显色光度法测定 白酒中氰化物的研究［Ｊ】．湖北预防医学杂志，２００１，１２（１）：３５．３６． 【４】辛若竹，康澍．白酒中氰化物测定方法的改进［Ｊ】．理化检验，２００５，４１
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ
ａｓ
ｗｅｉ＇ｅ
ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｎｅ－ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐＨ ｖａｌｕｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｎｚｙｍｅ ａｄｄｅｄ ａｎｄ
ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ
ｍａｎｌｙ
ｏｐｔｉｍａｌ
ｆｏｌｌｏｗ，ｐ・ｍａｎｎａｎａｓｅ ２５０ＩＵ／ｇ，ｐＨ ｖａｌｕｅ ６．５，ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ ｉｎ ４５℃ｆｏｒ ５０ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
１．１．３
１００ｍＬ丙酮中。 １．２试验方法 １．２，ｌ葡萄糖标准曲线的制作 准确称取１００ｍｇ干燥葡萄糖，用少量蒸馏水溶解后， 转移多］１００ｍＬ容量瓶中，定容、摇匀，浓度为ｌ ｍｇ／ｍＬ。按附 表分别加入试剂，将各管溶液混合均匀后，在沸水浴中加 热５ｍｉｎ，立即用冷水冷至室温，分别定容至２０ｒａＬ，摇匀，于 波长５４０ｈｍ处测吸光度值。然后根据吸光度值作标准曲线。
研究报告
中
国
酿造
２０１３年第３２卷第５期 总第２５４期
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５ １．０ １．０ ３
６ １．２ ０．８ ３
１．２．２魔芋粗粉酶解寡糖得率（以还原糖计）的测定
用Ｂ．甘露聚糖酶水解魔芋粗粉，将酶水解后的产物经 离心取上清液适当稀释后，用ＤＮＳ法测定酶解液中还原糖 的含量，寡糖得率计算公式：
寡糖得率（％）＝酶解液中还原糖的量（ｇ）／魔芋精粉的量（ｇ）
１．２．３
ｐＨ值对酶水解魔芋粉能力的影响
０．２ｍＬ
３－甘露聚糖酶液４５℃水浴５ｍｉｎ，对照组加入０．２ｍＬ蒸
馏水，反应１０ｍｉｎ，取出加入３ｍＬ ＤＮＳ试剂，煮沸５ｍｉｎ， 定容至２０ｍＬ，波长５４０ｎｍ处比色，测定还原糖含量。 １．２．４反应温度对酶水解魔芋粉能力的影响 配锘ｌＪｐＨ值为６．５的０．３％魔芋胶溶液和５１Ｕ／ｍＬ酶液，向 ４组试管（每组６支）中分别加入１．８ｍＬ魔芋胶，并分别将其 置于３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃的水浴锅中，恒温水 浴５ｒａｉｎ，加入０．２ｍＬ酶液，对照组加入０．２ｍＬ蒸馏水，反应 １０ｍｉｎ，取出加入３ｍＬＤＮＳ试剂，煮沸５ｍｉｎ，定容至２０ｍＬ， 波长５４０ｎｍ处比色，测定还原糖含量。 １．２．５酶添加量对寡糖得率的影响 根据１．２＿３和１．２．４的试验结果，选取ｐＨ值为６．５，温度为 ４５％的条件下，研究不同量的酶降解２０％底物的魔芋粉，分 别配制ｌ ０砌／ｍＬ、２０ＩＵ／ｍＬ、３０ＩＵ／ｍＬ、４０ＩＵ／ｍＬ、５０ｎ
【５】ＧＢ／Ｔ ５７５０．５—２００６，生活饮用水标准检验方法无机非金属指标【ｓ】． 【６】郭虹．异烟酸一巴比妥酸分光光度法测定酒中氰化物【Ｊ】．中国卫生 检验杂志，２００５，１５（１２）：１４５２．１４５３． 【７】ＪＪＦ １０５９－１９９９测量不确定度评估与表示【Ｓ】．
２０１ ３ Ｖ０１．３２ Ｎｏ．５
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，口・ｍａｎｎａｎ鹤ｅ ＷａＳ ｕｓｅｄ ｔｏ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ
２０％ｋｏｎｊａｃ，ａｎｄ ｔｈｅｎ
ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ
ｋｏｎｊａｃ
ｉＴｌａｎｎｏｓｅ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗａｓ
ａｎａｌｙｓｉｓｅｄ，Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
研究报告
中
国
酿造
２０１３年第３２卷第５期 总第２５４期
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酶法制备魔芋甘露寡糖和产物分析
何丹－，郭 熊，，杨双莲，，李俊俊１，黄遵锡“ｚ，唐湘华ｎｚ木
（１．云南师范大学生命科学学院，云南昆明６５０５００；２．生物能源持续开发利用教育部工程研究中心，云南昆明６５０５００） 摘要：利用Ｂ一甘露聚糖酶水解２０％魔芋粗粉制备魔芋甘露寡糖并对其产物进行成分分析。在工艺研究中对反应的ｐＨ值、温度、酶添 加量、时间等进行单因素试验，确定最佳工艺条件为酶添加量为２５０ＩＵ／ｇ，ｐＨ值６．５，４５℃条件下，酶解５０ｍｉｎ，寡糖得率为３５％。魔芋甘 露寡糖的粗产物经硅胶薄层层析（ｎＣ）分离表明。三糖、四糖含量较大。 关键词：Ｂ．甘露聚糖酶；魔芋粗粉；魔芋甘露寡糖；薄层层析 中图分类号：ＴＳ２０２。３ 文献标识码：Ａ 文章编号：０２５４－５０７１（２０１３）０５—００８５—０４
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Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．２５４
Ｃｈｉｎａ Ｂｒｅｗｉｎｇ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ
魔芋是唯一可进行商业化提取魔芋葡甘聚糖的植 物，广泛分布在云南、贵州、四川Ｉ等地【ｌ】。魔芋甘露寡糖 （ＭＯＳ）又称甘露低聚糖或甘露寡聚糖，能利用Ｂ．甘露聚 糖酶降解魔芋葡甘聚糖得到。ＭＯＳ是由几个甘露糖分子或 甘露糖与葡萄糖主要通过ｄ—ｌ，２糖苷键、ｏ【一ｌ，３糖苷键、仅．１， ６糖苷键或ｐ．１，４糖苷键、Ｂ．１，３糖苷键连接成的寡聚糖【２】。 魔芋甘露寡糖具有极高的应用价值，国ｉ为Ｊ＇ｂ科学家做 了大量的相关研究。在国内，江海燕等［３】的实验表明，利用 实硫酸化魔芋葡甘低聚糖对Ｈｅｐ Ｇ２．２．２．１５细胞株ＨＢｓＡｇ、 ＨＢｅＡｇ和乙肝病毒ＤＮＡ的产生均有一定程度的抑制作 用，其中对ＨＢｓＡｇ最为显著；高启禹等【４】对糖尿病小鼠模 型的研究表明，甘露寡糖具有降低血清中的血脂作用；于 艳梅等［５１研究表明，魔芋甘露寡糖能提高黄颡鱼非特异性 免疫功能。在国外，ＭＩＧＵＥＬ ＪＣ等Ｉ叼报道，甘露寡糖作为断 奶仔猪的生长促进剂，断奶初期仔猪的应激最大，此时饲 喂甘露寡糖，效果最好；ＢＡＲＢＡＲＡ Ｇ等［７－８）研究表明，饲喂 寡糖可以促进肠道内有益菌的生长、抑制有害菌的繁殖， 改善肠道微生态系统、提高非特异性免疫，最终达到促进 生长的目的。魔芋甘露寡糖具有重要的功能，但是在甘露 寡糖的组分中，功能性糖是哪一类还没有具体的报道，本 次实验旨在通过１３一甘露聚糖酶降解魔芋甘露聚糖，并利用 硅胶薄层层析（ＴＬＣ）对其产物进行分析，以期为其后期进 行单一组分的化学分析研究奠定基础，同时也是为其工业 化生产提供理论依据。 １材料与方法 １．１材料与仪器 １．１．１主要试剂 魔芋粗粉：云南丽江市玉元食品有限公司；３－甘露聚 糖酶（酶活力７９５１ＩＵ／ｇ，最适温度４５％，最适ｐＨ值为６．０）： 昆明爱科特生物有限公司；葡萄糖：Ｓｉｇｍａ公司；其他试剂 均为国产分析纯。 １．１．２主要材料 ＵＶ一２０００型紫外分光光度计：上海菁华科技有限公司； Ｇ一硅胶板：青岛海洋化工厂分厂；电子天平：奥豪斯仪器有 限公司；ｐＨ计：赛多利斯科学仪器有限公司；恒温水浴锅。