2015版中国药典 灯盏细辛中野黄芩苷的测定
高效液相法测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量
高效液相法测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量摘要】建立测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的高效液相色谱方法。
采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm, 5μm)；流动相为0.1%磷酸(A)-乙腈(B)；梯度洗脱；流速为1.0mL?min-1；检测波长为333nm。
小檗碱在0.0061～0.0243mg?mL-1范围内，黄芩苷在0.038～0.152mg?mL-1范围内线性关系良好。
本文中所建立的色谱方法可以简便、准确同时测定三黄片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量。
【关键词】三黄片；盐酸小檗碱；黄芩苷；高效液相色谱法【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）07-0219-02Determinationof the Contents ofBerberine Hydrochloride and Baicalinin Sanhuang Tablet byHPLCZhang Linzhu. Zhe Jiang Jiaxing Sheng Kang Medicines Co, JiaxingZhejiang,314001,China【Abstract】To establish a HPLC method for the simultaneously determination of berberine hydrochloride and baicalin in Sanhuang tablet.The determination was performed on a Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm ×150 mm, 5 μm) with mobilephase(using gradient) consisted acetonitrile-0.1%H3PO4 at flowing rate 1.0 mL?min–1. The detection wavelength was at333nm.Themethodhadgoodlinearrelationshipwithintherangeof 0.0061~ 0.0243 mg?mL-1 forberberine hydrochlorideandwithintherangeof 0.038 ~ 0.152 mg?mL-1forbaicalin.The chromatographic method established can be used simply and accurately to simultaneously determine berberine hydrochloride and baicalin in Sanhuang tablet.【Key words】Sanhuang tablet; Berberine hydrochloride; Baicalin; HPLC三黄片由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成，具有清热燥湿、泻火解毒等功效，主治热毒内盛、高热烦躁、湿热黄疸、下痢。
高效液相色谱法测定痛舒片中野黄芩苷的含量
高效液相色谱法测定痛舒片中野黄芩苷的含量作者：牛延菲等来源：《云南中医中药杂志》2013年第08期摘要：目的：建立用高效液相色谱法测定痛舒片中野黄芩苷含量的方法。
方法：用waters XTerra C18柱（5μm，4.6×250 mm）色谱柱；流动相：甲醇-四氢呋喃-0.1%磷酸溶液（14：14：72）；检测波长335 nm；柱温30℃，流速1.0 mL/min，进样量5 μL。
结果：对照品线性范围为0.1316μg～2.632μg，相关系数0.9997，平均回收率为100.64%，RSD=1.22%（n=9）。
结论：该方法简便可行，重复性好，能有效控制痛舒片的质量。
关键词：痛舒片；野黄芩苷；高效液相色谱法中图分类号：R284.2文献标志码：A文章编号：1007-2349（2013）07-0051-03痛舒片由云南省药物研究所制药厂生产，由七叶莲、三七、灯盏细辛、玉葡萄根等组成，对治疗跌打损伤、风湿性关节痛、肩周炎、痛风性关节痛、乳腺小叶增生等疾病有显著疗效。
灯盏细辛作为其处方中药味之一，具有活血通络止痛，祛风散寒之功效，用于中风偏瘫，胸痹心痛，风湿痹痛[1]。
野黄芩苷为灯盏细辛的有效成分，具有降低脑血管阻力，改善脑血循环、增加脑血流量及抗血小板凝集的作用。
同时，野黄芩苷也是中国药典规定的灯盏细辛药材中的主要检验指标。
在痛舒片药品质量标准中未对野黄芩苷的含量进行控制，本文以灯盏细辛的有效成分野黄芩苷为对照，对HPLC测定痛舒片中野黄芩苷含量的方法进行研究，确定了易控的高效液相色谱方法。
1实验部分1.1仪器与试药美国Agilent1100高效液相色谱仪：包含四元泵、DAD检测器、自动进样器、在线真空脱气机、智能化柱温箱及HP化学工作站；SK3200LH超声波处理器；痛舒片（批号：100831、100929、110211、110315、110627、110719、110808、110826、110923、111012），由云南省药物研究所制药厂提供；野黄芩苷对照品（批号：110842-200403），供含量测定用（纯度97.12℅），由中国药品生物制品检定所提供；所用流动相甲醇、四氢呋喃为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水，处理样品的甲醇为分析纯。
灯盏细辛中野黄芩苷提取纯化工艺研究
作者简介 : 田帅华 ( 1984- ) , 男 , 硕士研究生 , 研究方向 : 中药质量评价与新药开发。 * 通讯作者 : 李 钦 ( 1965- ), 男 , 教授 , 博士 , 硕士生导师 , 研究方向 : 中药质量评价。 T e:l ( 0378 ) 3880589, E-m ai: l liq in@ henu. edu . cn
F
图 1 不同提取方法灯盏细辛 HPLC 色谱图
A. 对照品溶液 B. 浸渍提取样品 C. 超声提取样品 F. 回流提取样品 D. 组织破碎提取样品 E. 碱水提取样品
表 1
不同方法提取 野黄芩苷的转移率 ( n = 3)
提取方法 浸泡提取法 超声提取法 组织破碎提取法 碱水提取法 回流提取法 转移率 /% 21. 46 12. 26 24. 97 7. 59 65. 02
水平 乙醇浓 度 A /% 45 60 75
因素水平
溶剂量 B /倍 6 8 10 提取时间 C /m in 30 60 90 提取次 数 D /次 1 2 3
B 1 2 3
表 3
试验号 C 1 2 3 4 5 6 7 D 8 9 A 1 1 1 2 2 2 3 3 3 36. 77 35. 56 K1 K2 K3 R E 42. 03 12. 26 11. 85 14. 01 2. 16
关键词 : 灯盏细辛 ; 野黄芩苷 ; 提取 ; 纯 化 中图分类号 : R 284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 1001 -1528( 2010) 01-0124-04 样 , 按上述色谱条件测定。以进样量 X ( g ) 为横坐标 , 峰面 积值 Y 为纵坐 标 , 绘制 工作 曲 线 , 得回 归 方程 为 Y = 4 271 661 611. 66 X - 193 253 . 90, r = 0 . 999 9 , 线 性范 围 0. 436 ~ 6. 54 g 。 2. 1. 4 精密度试验 精密吸取对照品 溶液 10 L, 重 复进 样 6 次 , 测定 野黄 芩苷的峰面积 , 计算 RSD 为 0. 27% 。 2. 1. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液 , 分别在 0、 1、 2、 4 、6 、8 h 进样 10 测定野黄芩苷的峰面积 , 计算 R SD 为 0 . 38 %。 2. 1. 6 重复性试验 同一批号灯盏细辛药材 6 份 , 按 2. 2. 5 项下方 法制备供 试品溶液 , 测定野黄芩 苷的峰面积 , 计算 R SD 为 2 . 21% 。 2. 1. 7 回收率试验 精密称取同一批号灯盏 细辛 药材 , 共 6 份 , 精密 加入对 照品适量 , 按 2. 2. 5 项下方法平行制备 , 测定 , 计算 平均回收 率为 99. 72% , RSD = 1. 46 %。 2. 2 供试液制备 2. 2. 1 浸渍法 取灯盏细辛 30 g , 精密 称定 , 加 60 % 乙醇 1 000 mL浸泡 10 d, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水相浓 缩 , 烘 干 , 精密称取相 当于 1 g 原药 材的 浸膏 , 用甲 醇溶 解并 转移 至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 2 超声提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 于烧杯中 , 加入 60% 乙 醇 1 4. 6 mm, 5 m ), 85 000 mL, 超声处理 ( 功率 225W, 频率 45 kH z) 30 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水 相浓缩 , 烘 干 , 精密称 取相当于 1 g 原药材的浸膏 , 用甲 醇溶解并转 移至 50 mL 量 瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 3 组织破碎提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 加 60% 乙醇 1 000 mL, 用闪 式提取器提取 3 次 , 每次 1 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇 味 , 醋 酸乙酯脱脂 , 水相浓缩 , 烘干 , 精 密称取相当 于 1 g原 药材的 浸膏 , 用甲醇溶解并转移至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即 g取率最高的是 回流提取法 , 故选择回流提 取法。 2. 5 回流提取工艺参数优化 2. 5. 1 提取工艺的正交试验考察
HPLC法测定灯盏花素注射液中野黄芩苷
Table 4Results of determinationBatch number m ethod content(%)mean(%)RSD(%)t 970815HPLC 0.800.790.810.810.800.800.932TLC SC 0.800.810.810.810.820.810.78970820HPLC 0.550.560.540.530.550.54 1.870TLC SC 0.510.540.540.570.540.54 3.51970824HPLC0.660.650.670.670.650.66 1.35TLC SC 0.650.640.670.670.680.66 2.20t 0.01,8=3.36 t <t 0.01,83.2 该产品依据2000版中国药典厚朴药材含量测定规定,将厚朴酚与和厚朴酚合并计算,制定标准,所以在回收率试验中也是将二者合并计算结果。
在实际计算过程中,我们也将二者的回收率做了分别计算,结果厚朴酚平均回收率为99.11%,R SD 为2.40%,和厚朴酚平均回收率为101.59%,RSD 为1.17%。
3.3 用HPLC 法及TLC SC 法测定开胸顺气胶囊中厚朴酚与和厚朴酚含量,二法结果经t 检验,无显著性差异(t <t 0.01,8)。
用H PLC 法测定有取样量小,影响因素少,测试方便等优点。
且从中药现代化发展及与国际接规的角度看,HPLC 法更具优势,值得采用。
参考文献[1] 高家鉴,周羽琪,章建民.双波长薄层扫描法测定开胸顺气胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中国药师,1999,2(5):260.HPLC 法测定灯盏花素注射液中野黄芩苷张世轩1,牛玉娟1,吕浩然1,鞠秀兰2(1.大连市药品检验所,辽宁大连116021,China; 2.大连铁路卫校,辽宁大连,China)关键词:灯盏花素注射液;HP LC 指纹图谱;野黄芩苷;黄芩苷;高效液相色谱法摘要:目的:用HP LC 法以黄芩苷为内标加校正因子法测定灯盏花素注射液的主成分野黄芩苷(scutellarin)的含量。
高效液相色谱法测定灯盏细辛提取物中两种有效成分的含量
高效液相色谱法测定灯盏细辛提取物中两种有效成分的含量李春平;欧春燕【摘要】目的：探讨灯盏细辛提取物中野黄芩苷、3，4-二-O-咖啡酰奎宁酸2种有效成分含量的高效液相色谱测定方法。
方法：色谱柱选择Dikma Kromasil C18（250mm×4.6mm，5.0μm），流动相选择乙腈：0.2%磷酸溶液=30∶70，检测波长为332nm，柱温为35℃。
结果：野黄芩苷的线性回归方程为Y=1.554×103-0.201×102（r=0.9997）；3，4-二-O-咖啡酰奎宁酸的线性回归方程为Y=1.724×103-0.081×102（r=0.9996）；野黄芩苷在0.0341～1.3121μg范围内，3，4-二-O-咖啡酰奎宁酸在0.0592～2.3426μg范围内呈良好的线性关系。
结论：采用高效液相色谱法同时测定灯盏细辛提取物中2种有效成分的含量，操作简单，精密度高，重现性好，可以作为灯盏细辛提取物中这2种有效成分的定量分析方法。
%Objective:To investigate the High Performance Liquid Chromatography in the determination of the content o Scutellarin and Isochlorogenic acid Bf two kinds of active ingredients in Erigeron breviscapus extract. Methods:The Column Selection was Dikma Kromasil C18 (250mm×4.6mm,5.0μm) ,the mobile phase was acetonitrile:0.2%phosphoric acid solution=30∶70,the detection wavelength was 332nm, the column temperature was 35℃. Results:The scutellarin linear regressio n equation was:Y=1.554×103-0.201×102(r=0.9997);Isochlorogenic acid B regression equationwas:Y=1.724×103-0.081×102(r=0.9996);scutellarin was at the range of0.0341~1.3121μg,3,4-O-dicaffeoylquinic range was 0.0592~2.3426μg, which showed a good linear relationship. Conclusion:The HPLC method forthe determination of the content of two kinds of active ingredients in Erigeron breviscapus extract is simple and easy operation,with high precision,reproducibility,and can be used as a quantitative analysis method for the two kinds of active ingredients in Erigeron breviscapus extract.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2016(013)010【总页数】2页(P8-8,9)【关键词】灯盏细辛提取物;野黄芩苷;高效液相色谱法;3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸【作者】李春平;欧春燕【作者单位】福建省东山县医院东山 363400;福建省东山县医院东山 363400【正文语种】中文【中图分类】R927.2灯盏细辛为菊科（Asteraeeae）植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand-Mazz.的干燥全草[1]。
HPLC法测定灯盏花素胶囊中野黄芩苷的含量
HPLC法测定灯盏花素胶囊中野黄芩苷的含量熊魏;彭红;廖夫生【摘要】建立了灯盏花素胶囊中野黄芩苷的含量的测定方法.采用HPLC测定胶囊中野黄芩苷的含量,C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5 μm),柱温40℃,进样量20 uL,流动相:甲醇-0.1％磷酸(40:60),流速1.0 mL/min,检测波长:335 nm.野黄芩苷在20 ～ 160 μg/mL范围内,进样量与峰面积积分值之间线性关系良好,平均回收率为99.1％,RSD为0.46％.本方法操作快速简单,准确可靠,可用于灯盏花素片的含量测定和质量控制.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2013(041)004【总页数】2页(P138-139)【关键词】灯盏花素;HPLC;野黄芩苷【作者】熊魏;彭红;廖夫生【作者单位】江西中医学院,江西南昌330004;江西中医学院,江西南昌330004;江西中医学院,江西南昌330004【正文语种】中文【中图分类】R284.1灯盏花素是菊科植物短葶飞蓬属植物灯盏花中提取的黄酮类成分，具有活血化瘀，通络止痛的功效，为脑血管扩张剂，对血栓及后遗症、冠心病、心绞痛类疾病有较好的临床疗效［1］。
其现有剂型普遍生物利用度低，溶出度差，药物作用时间短的缺点，胶囊剂能够何很好解决这些问题，它可在较短时间内达到所需有效血药浓度，并可在较长时间内保持所需血药浓度。
胶囊中其主要活性成分野黄芩苷不溶于水，目前野黄芩苷的含量测定方法主要有紫外分光光度法［2］及HPLC法［3］等。
本文采用了HPLC测定本品中野黄芩苷的含量。
结果表明本方法具有分离效果好，灵敏，准确等优点，能用于灯盏花素胶囊的质量控制。
1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪 (DAD检测器);Sartorius BS214－D(万分之一);Mettler AE240天平 (十万分之一)，北京赛多利斯;自动双重蒸馏水器，上海亚荣生化仪器有限公司;野黄芩苷对照品 (批号:110846－200828)，中国药品生物制品检定所。
灯盏细辛质量标准及检验操作规程
XXXXXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：灯盏细辛1.2 汉语拼音：Deng zhanxixin2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2015年版一部）。
6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：盐酸、硝酸、硝酸银、氨试液、二氧化锰、硫酸、碘化钾淀粉试纸、乙醇、磷酸、甲醇、野黄芩苷对照品适、三氯甲烷、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂。
7.2 仪器与用具：电子天平、显微镜、烘箱、马弗炉、高效液相色谱仪、中药二氧化硫测定仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：7.4.1取本品制片置10×10显微镜下做显微鉴别。
7.4.2取本品，照〔含量测定〕项下的方法试验，供试品色谱应呈现与对照品色谱保留时间相一致的色谱峰。
7.5 检查：7.5.1水分：不得过12.0%（附录15第二法）。
7.5.2总灰分：不得过15.0%（附录17）。
7.5.3酸不溶性灰分：不得过8.0%（附录17）。
7.5.4二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。
7.6 浸出物照醇溶性浸出物测定法（附录19）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于7.0 %。
7.7 含量测定：照高效液相色谱法（附录8）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（40：60）为流动相；检测波长为335nm。
理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml 含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粗粉约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流至提取液无绿色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml ，密塞，称定重量，放置1小时，水浴中加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
灯盏细辛药材中总黄酮含量测定方法及质量标准建立的研究
灯盏细辛药材中总黄酮含量测定方法及质量标准建立的研究作者：尹力高志毅陈绍明来源：《科学与财富》2019年第36期摘要：目的：对灯盏细辛药材中总黄酮含量测定方法进行研究，建立相应的内部质量标准，对灯盏细辛药材中总黄酮含量进行控制。
方法：用65%的乙醇溶液超声60分钟对灯盏细辛药材进行提取，用紫外分光光度法在510nm处测定吸收度，用芦丁配制对照品溶液，绘制标准曲线计算灯盏细辛药材中总黄酮的含量，建立相应内部质量标准。
结论：用65%乙醇作为提取溶剂超声处理，方法简便，精密度，重复性，稳定性良好。
结论：本方法简便，准确，重现性良好，可用于灯盏细辛药材总黄酮含量检测，此方法可作为灯盏细辛药材总黄酮含量控制的质量标准。
关键词：灯盏细辛药材;总黄酮;含量测定;质量标准灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，夏、秋二季采挖，除去杂质，晒干。
味辛、微苦，性温，归心，肝经。
具有活血通络止痛，祛风散寒之功效。
常用于中风偏瘫，胸痹心痛，风湿痹痛，头痛牙痛等[1]。
灯盏细辛中黄酮类化合物为主要有效成分，具有较广泛的药理活性，中国药典将高效液相法检测野黄芩苷作为质量控制依据。
紫外分光光度法检测总黄酮含量，显色稳定，提取方法简便。
灯盏细辛临床上主要制剂有灯盏细辛注射液，灯盏花素片，灯盏细辛胶囊等。
采用紫外分光光度法[2]检测灯盏细辛药材中的总黄酮含量，可以对药材的质量优劣提供有效依据，为后期产品提供质量保证。
本研究通过实验，探索灯盏细辛药材总黄酮的提取，检测方法等，为有效控制产品质量建立质量标准。
一、概述对灯盏细辛药材总黄酮含量的测定方法进行系统适用性试验、精密度试验、线性关系与线性范围考察、准确度试验（加样回收试验）的验证，确保检验方法对被检物质有足够的专属性和灵敏度，通过回收率试验验证检验过程的回收率，用以确定HPLC法在本实验室的适用性及可控性。
二、验证内容1.仪器与试药北京普析生产紫外分光光度计，型号为：TU-1810上海科导生产的超声波清洗器（型号为：SK7210LHC）梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司生产的电子天平（型号：ME204E/02）芦丁对照品主要是经过中国食品药品检定研究院提供，批号100080-201408灯盏细辛药材（云南白药有限公司购进检测合格药材留样，批号YC2421301）2.方法2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液精密称取无水芦丁21.51mg，置于100mL容量瓶中，加60%乙醇适量，微热使其溶解，放冷，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，置50mL容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，即得（浓度0.099591mg/ml）2.1.2供试品溶液取灯盏细辛药材1g，精密称定，置锥形瓶中，加入65%的乙醇200ml超声60分钟，过滤，滤液蒸干，用60%乙醇溶解残渣，置100mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，过滤。