脱钙方法总结
骨的煅烧和骨的脱钙实验
骨的煅烧和骨的脱钙实验骨骼是人体重要的组成部分，它不仅是身体的支撑系统，还有储存钙质、造血等重要功能。
骨骼中含有大量的有机和无机成分，其中有机成分主要是胶原蛋白，无机成分主要是磷酸钙。
骨的煅烧和骨的脱钙实验是研究骨骼组成的常用方法。
一、骨的煅烧实验骨的煅烧实验是一种通过高温处理来研究骨骼组成的方法。
该实验的原理是将骨骼样品加热至高温，使有机物质被分解，从而得到无机物质的残留物。
该残留物主要由磷酸钙和少量的其他无机盐组成。
该实验的步骤如下：1. 取骨骼样品，去除软组织，洗净并晾干。
2. 将样品放入炉中，加热至800℃左右，保持一定时间。
3. 取出样品，冷却后得到煅烧后的骨骼样品。
4. 对样品进行质量分析和化学分析。
通过煅烧实验得到的残留物主要是磷酸钙，因此可以通过测定残留物的重量和磷酸钙的含量来计算出煅烧前骨骼中磷酸钙的含量。
二、骨的脱钙实验骨的脱钙实验是一种通过化学方法去除骨骼中的钙质，从而研究骨骼有机成分的方法。
该实验的原理是将骨骼样品加入强酸中，使钙质溶解，从而得到有机物质的残留物。
该残留物主要由胶原蛋白等有机成分组成。
该实验的步骤如下：1. 取骨骼样品，去除软组织，洗净并晾干。
2. 将样品放入强酸中，如盐酸或硝酸，使钙质溶解。
3. 取出样品，冲洗干净，晾干。
4. 对样品进行质量分析和化学分析。
通过脱钙实验得到的残留物主要是胶原蛋白等有机成分，因此可以通过测定残留物的重量和有机成分的含量来计算出脱钙前骨骼中有机成分的含量。
总结骨的煅烧和骨的脱钙实验是研究骨骼组成的重要方法。
通过这些实验可以得到骨骼中有机和无机成分的含量，从而更深入地了解骨骼的构成和作用。
这些实验不仅可以用于医学研究，也可以应用于材料科学、地质学等领域的研究。
脱钙骨切片镀银法
脱钙骨切片镀银法
脱钙骨切片镀银法
一、脱钙骨切片制作
1．脱钙：新鲜骨10%福尔马林或4%多聚甲醛固定，5%硝酸或10~15%EDTA液脱钙
或以硝酸脱钙兼固定液处理：
硝酸5%，甲醛10%，水80%，甘油5%
2 蒸馏水洗去多余的酸液
3 5%硫酸钠水溶液中和
4 自来水浸泡或冲洗充分
5 脱水、透明或脱水兼透明：
脱水、透明：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→无水酒精→无水酒精-二甲苯→二甲苯
脱水兼透明：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→正丁醇（1-Butanol）2~4次
6 浸蜡
60~65℃：浸蜡2次，软蜡（48～52℃）30分钟，硬蜡（58～62℃）45~60分钟
7 包埋、切片、展片、烘干
切片厚度10微米左右（8~20微米）
二、镀银法（硝酸银染色法）
方法：
⑴切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至水。
⑵蒸馏水洗5~10分钟。
⑶入1%硝酸银（Silver nitrate）水溶液10~30分钟（暴露于阳光下）。
用普通灯光约需1~2小时，紫外线灯需5分钟。
⑷蒸馏水洗30~60秒。
⑸入5%硫代硫酸钠（sodium hyposulfite）水溶液处理3分钟。
⑹蒸馏水充分洗涤。
可用Cajal还原液或10%甲醛液还原。
⑺用1%中性红（Neutral red）、沙黄（Safranine）水溶液或van Gieson液复染，蒸馏水略洗。
⑻入95%酒精分色及无水酒精脱水
⑼二甲苯透明，中性树胶封片。
结果：
骨基质（骨质）质棕黑色，细胞核红色。
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。
因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。
1 材料与方法1．1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 －2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1．5cm 1．5 cm 0．5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0．1 cm) ，放入10% 中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。
1．2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸，即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。
具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段，小块骨组织标本不用改刀，然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。
②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中，脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。
③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 －60 min，肋骨、指趾骨需3 －6 d，皮质骨需要5 －7 d。
④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。
1．3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% －38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。
用微波炉进行微波时，微波辐射可加速组织内部分子运动，加快脱钙速度，因标本在酸性溶液中滞留的时间短，所以对组织的损伤小。
EDTA 脱钙液使用说明书
EDTA脱钙液使用说明书储存条件：常温保存，有效期1年。
产品内容：Components SL1500 EDTA脱钙液（pH7.2-7.4）500mL说明书1份产品说明：1.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
2.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织中的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。
然后再行常规制片。
3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。
借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。
其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
4.主要用途：用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明：1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。
3.组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。
4.组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。
如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。
如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。
5.用蒸馏水冲洗数次。
6.常规脱水、包埋。
注意事项：1．为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙的温度。
2．脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3．脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。
骨骼脱钙实验报告
甜豌豆-“甜脆皮”“甜脆皮”属早熟矮秧食英品种，株高50―80厘米，全生育期90天，每株结英5―10个，每英5―6粒，茎蔓生，花白色，种子为园校形有皱呈黄绦色，百粒重18克左右，鲜英肉厚多汁，清脆香甜，品质超过荷兰豆，是一种新型绿色保健营养蔬菜，亩产青英约1500斤左右。
生育期间要求凉爽而湿润的气候，种子发芽适宜温度为6―12℃，最低1―2℃。
在高温高湿或低温高湿的条件下易烂籽。
苗期较耐寒，不耐高温，生长期间气温以15℃为宜，温度提高可促进早熟，开花后要求15―18℃，结英成熟期18―20℃，气温高于26℃影响品质及产量。
它为长日照作物，长日照可提早开花。
生育期间需水较多，种子膨胀发芽需吸收种于本身重量100―120％的水分，吐丝、开花及结英期，也需有充足的水分，宜种植于排水良好酌粘性土壤；pH值5.6―6.7，较耐脊薄。
栽培要点“甜脆皮”与荷兰豆及普通豌豆栽培管理措施相似，只要注意病虫害防治，精心管理，在苗全、苗杜的基础上夺丰收，可以取得较高的经济效益。
(一)种植方式不宜连作，可平作也可与生育期相似的大麦和春麦混播。
宜选用玉米水稻、曾薯病虫害少，草少的作物为前作。
(二)整地与播种播种前需深耕细耙；土壤疏松、有利于根系发育，有条件可施用充足的有机肥，播种时每亩10―20斤磷酸二铵作种肥，并投毒谷防地下害虫。
播种期因地区而易，华北、东北为春播，南方为冬播，一般在10月下旬至11月底播种，北方冬季可采用温室、塑料大棚种植。
播种方式：条播或穴播，行距30cm左右，穴播每穴2―3粒，穴距10cm。
播量每亩一般为20―30斤，若田间管理粗放。
可适当加大播量，播种深度3―5厘米，不宜过深，不得大于7厘米。
播种可晒种，选种或采用增产菌拌种，提高种子发芽率，使苗全苗壮。
(三)田间管理1、施肥：以基肥为主，重施磷钾肥，氮磷钟比例为1:0.28:0.93，一般吐丝期结合灌水每亩施尿素10―20斤，开花至结英喷微肥及磷酸二氢钾，浓度为500一1000倍，对改善籽粒品质及增产有明显效果。
骨组织脱钙方法
骨组织脱钙方法
一、化学脱钙法
化学脱钙法是一种常用的骨组织脱钙方法，通过使用酸性溶液或者强酸来溶解骨组织中的钙盐，从而去除骨组织中的钙离子。
常用的化学脱钙溶液包括盐酸、硝酸、硫酸等。
这种方法的优点是操作简单、脱钙效果好，但同时也存在一些缺点，如酸性溶液对骨组织本身有一定的损伤，且脱钙过程中会产生有毒气体，需要良好的通风设施。
二、酶解脱钙法
酶解脱钙法是一种较为温和的骨组织脱钙方法，通过使用酶制剂来分解骨组织中的胶原蛋白和钙盐，从而达到脱钙的目的。
常用的酶制剂包括胶原酶、弹性蛋白酶等。
酶解脱钙法的优点是操作简单、对骨组织损伤小、不产生有毒气体，但同时也存在一些缺点，如脱钙速度较慢，需要较长时间才能完成脱钙。
三、微波脱钙法
微波脱钙法是一种新型的骨组织脱钙方法，通过使用微波辐射来加速骨组织中的水分子运动，产生热量使骨组织内部的温度升高，从而加
速骨组织中的钙盐溶解和脱钙过程。
微波脱钙法的优点是脱钙效果好、速度快、对骨组织损伤小，但同时也存在一些缺点，如需要使用特殊的微波设备，且操作技术要求较高。
综上所述，不同的骨组织脱钙方法各有优缺点，应根据实际需求和实验条件选择适合的脱钙方法。
edta脱钙液配制方法
edta脱钙液配制方法EDTA脱钙液是一种常用的化学试剂，适用于在生化、分子生物学以及细胞生物学实验中，去除镁和钙离子的干扰。
本文将介绍一种EDTA脱钙液配制方法。
1.原料准备：1) 乙二胺四乙酸(EDTA)：分子式为C10H16N2O8，化学纯，实验室常备品，一定要质量优良。
2) 纯水：经过蒸馏或离子交换处理的自来水。
3) 氢氧化钠(NaOH)：实验室常备品，化学纯。
4) 氯化钙(CaCl2)：实验室常备品，纯度要求95%以上。
2. 配制方法：1) 取EDTA 10克，加入100毫升蒸馏水中，并充分搅拌至完全溶解。
2) 用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，溶液会变成无色透明。
3) 用蒸馏水将溶液加至总体积200毫升，均匀混合。
4) 氯化钙和氯化镁分别加入到50毫升蒸馏水中，若有残留颗粒，则需过滤至溶液无颗粒为止。
5) 将氯化钙和氯化镁溶液缓慢滴加到EDTA水溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，注意滴加时不要加的过快，需滴加至完全反应。
6) 倒入500毫升容量瓶中，并用蒸馏水加至刻度处，摇匀。
3. 注意事项：1) 在配制EDTA脱钙液时，应严谨操作，确保实验的准确性。
2) 水溶液的pH值应被精确地测量，并调节至8.0，以确保溶液的准确性与稳定性。
3) 在溶液调节和滴加氯化钙和氯化镁的过程中，应缓慢平稳，反应完全，避免产生沉淀和反应失误。
4) 为了得到稳定的EDTA脱钙液，应将其保存在阴凉、避光的环境中，并尽量降低其与大气中的CO2接触的机会。
总结：以上就是制备EDTA脱钙液的方法，这是适用于实验室的一种方法。
在添加脱钙剂到实验中时，确保您了解反应的机理和适用于您实验的最佳体系。
脱钙液的配制
脱钙液配制30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g 氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。
在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但核染色不佳。
加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化,有利于切片,从而使制片效果更加理想。
对照组以单纯30%盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整,染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不清。
经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。
王淑兰，制作骨骼组织切片的新脱钙液改良的Plank·Rycho脱钙液的配制:氯化铝7g ,盐酸815ml ,甲酸5ml ,甲醛15ml ,TritonX-1000.5ml ,蒸馏水100ml。
为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们在Plank·Rycho脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。
甲醛不仅是优良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。
TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚)是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。
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（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s液：
10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点：
（1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点：
（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：
甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点：
（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点：
（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s液：
饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
9．AFIP甲酸-柠檬酸钠液：
A液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。B液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合，每日换1次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：
盐酸80ml。甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml甲醛100ml，生理盐水900ml。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
3．福尔马林-硝酸液：
40%甲醛5ml，浓硝酸10ml，蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。
优点：
（1）福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
（2）该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
（3）可作为紧急活检脱钙用。
（4）该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
EDTA-2NA脱钙：EDTA20g,双蒸水100ml，加NAOH充分搅拌溶解，用HCL调节pH至7.4左右。将骨组织放入微波炉专用盒，放入脱钙液，低温脱钙，也可以在微波下20--50℃间歇脱钙，每次循环辐射2分钟，以30个脱钙循环作为最佳脱钙终点。在各循环间从微波炉中取出标本盒，室温冷却。
优点：耗时短，容易控制。
（3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。
（4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
2．硝酸水溶液：
浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。
优点：
（1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
（2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
（3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。
目前所用的脱钙法主要见于下列：
1．硝酸-间苯三酚液：
浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。
骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。
优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点：
（1）细胞核染色很差。
（2）假如脱钙时间太长对组织有较大的损害。
（3）推荐用于小块组织和牙齿脱钙。
缺点：
（1）脱钙比较慢，不推荐作为常规标本脱钙使用。
（2）不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
（3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少18小时。
7．三氯醋酸液：
三氯醋酸5g，10%福尔马林盐95ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要5-8天。
优点：
（1）对细胞核染色好。
此液脱钙迅速，0.5cm厚的松质骨6-20小时就可以完成脱钙。对组织影响极小，染色效果好。配制简便，脱钙后不需要用碱性液中和。
（二）螯合脱钙剂脱钙法
EDTA是一种良好的脱钙液螯合剂，它对组织破坏极小，不产生气泡，不影响染色，假如加温至37℃，可以加快脱钙速度。
1.EDTA脱钙液：
乙二胺四乙酸（EDTA）5.5g，10%中性福尔马林100ml。
缺点：脱钙尽可能用低温，不适宜高温修复，可以直接进行免疫组化。有研究显示，4℃EDTA脱钙骨组织以及抗原成分保持完整，表明低温EDTA脱钙效果好，阳性高。同时显示，常温或者加热的标本免疫组化时可能会造成抗原丢失，导致假阳性和染色背景深。
（2）脱钙之后不需要水洗，酸乙醇可以去除。
缺点：
（1）脱钙作用慢，仅仅推荐用作骨的细针脱钙。
（2）不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
8．Flemming’s液：
1%铬酸15ml，2%四氧化锇4ml，冰醋酸1ml。
Flemming’s液虽然是一种固定液可作为微细骨针脱钙用。液体需要新鲜配制，并在容器底部会形成沉淀。脱钙后假如直接通过乙醇可以形成不能溶解的色素。脱钙之后标本必需充分流水冲洗去除过多的铬盐。使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。用苏木精染色时细胞核受抑制。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要7-21天。
优点：
（1）经EDTA脱钙的组织染色结果好。
（2）对组织的结构损害小。
（3）用化学方法测试可以确定脱钙的终点。
缺点：
（1）脱钙速度相当慢，不适合常规标本脱钙使用。
（2）脱钙后组织会稍微变硬。
2．EDTA+NAOH脱钙法：
固定剂宜用福尔马林或多聚甲醛固定4—12小时。