治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考_张峰概要
China Licensed PharmacistJan. 2013, Vol.10No.1合理用药呵护公众健康1982年 , 重组人胰岛素作为人类历史上的第一种生物治疗药物被美国食品药品监督管理局 (FDA 批准进入市场 , 从此 , 重组生物制品开始逐步增多并在生物制品市场中占据越来越大的市场份额 , 特别是近年来单克隆抗体 (以下简称单抗类药物的发展 , 更受到业界的关注 , 越来越多的企业投入到单抗的开发和生产中来。
同时 , 随着一大批疗效明确的单抗药物专利即将到期 , 如 :赫塞汀 (曲妥珠单抗、美罗华(利妥昔单抗、爱必妥 (西妥昔单抗和类克 (英利西单抗等 , 许多医药企业通过生物仿制药的方式加入到单抗制品的开发和生产中。
随之而来的问题是 , 由于缺乏对单抗结构与其安全性和有效性间关系的深入了解 , 新加入企业和生物仿制药企业在单抗制品的质量控制方基金项目:“ 重大新药创制” 科技重大专项(2009ZX09307-001 ;国家高技术研究发展计划(863计划 (2007AA021601, 2007AA021204作者简介 :张峰, 男 , 硕士, 副主任技师。
研究方向:治疗性单克隆抗体的质量控制。
E-mail :zhf5122@治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考张峰综述孟淑芳审校(中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室 , 北京 100050【摘要】治疗性单克隆抗体制品在肿瘤、自身免疫、器官移植和感染性疾病的治疗中均取得了显著疗效 , 其品种和市场份额逐年显著提高。
随着新的治疗性单克隆抗体制品的研发和上市, 不同产品的质量控制研究 , 特别是新技术在质量控制中的应用被提到新的高度。
由于治疗性单克隆抗体制品结构和生产的复杂性 , 使得质量控制的复杂程度也相应提高。
本文结合治疗性单克隆抗体质量控制的工作经验和国际上的最新进展 , 对治疗性单克隆抗体质量控制项目设定、标准和方法进展进行论述。
【关键词】治疗性单克隆抗体 ; 质量控制 ; 方法 ; 标准doi :10.3969/j.issn.1672-5433.2013.01.006The Quality Control of Therapeutic Monoclonal Antibody ProductsZhang Feng/writing , Meng Shufang/proofreading (Division of Monoclonal Antibody Products of the National Institutes for Food and Drug Control , Beijing 100050, China ABSTRACTThe curative effects of therapeutic monoclonal antibody products have been proved for the treatment ofcancer , autoimmune diseases , transplantation and infectious diseases. The varieties and market share of therapeutic monoclonal antibody products have risen considerably year after year. Along with the development and marketing of new therapeutic monoclonal antibodies , more importance has been attached to the quality control of these products so as to ensure their quality. Because of the complexity of therapeutic monoclonal antibody products both in their structure and manufacturing , the quality controls of the products become more difficult. This article briefly reviewed the principleof standard establishment and methods for the quality control of therapeutic monoclonal antibody products based on the latest progress in the world and our working experience in the quality control of the products. KEY WORDSTherapeutic Monoclonal Antibody ; Quality Control ; Method ; Specification25中国执业药师 ·面往往通过模仿其他单抗质量控制项目和方法的方式解决质量控制问题 , 这种方式在确保实现质量控制目标方面存在一定的局限性。
同时 , 一大批新技术的出现和应用 , 极大地促进了单抗质量控制技术项目和方法的发展。
现结合工作经验和对单抗质量控制的理解对单抗质量控制项目和方法的研究现状进行讨论。
1抗体结构简介抗体为通过链间二硫键连接的 2条重链和 2条轻链构成的“ Y ” 形结构 , 重链和轻链通过链内二硫键形成多个结构域 , 其中重链和轻链N 端的第 1个结构域氨基酸序列多变 , 被称为可变区 (VH 和 VL , 二者为抗体同抗原结合的结构基础。
另外 , 重链和轻链分别有 3个和 1个结构域的氨基酸序列相对保守 , 被称为恒定区 (CH 和 CL , 重链的第 2个恒定区(CH2 中存在 1个 N 糖基化位点 , 该位点的糖基化对其发挥抗体依赖细胞介导的细胞毒效应具有重要作用 [1-2], 同时该糖基化位点上连接的寡糖链的唾液酸化程度对于抗体稳定性也存在重要影响 [3]。
重链第 3个恒定区(CH3 介导抗体同 Fc 受体和补体的结合 , 从而在抗体效应的发挥和清除中发挥重要作用。
不同的抗体由于其种类和亚类不同而在重链恒定区数目、附属结构和一些细微结构中存在一定差异。
治疗性单抗一般为人鼠嵌合、人源化或人源单抗 , 多为 IgG1亚类 , 可根据其治疗目的和作用机制选择其他亚类 , 如 IgG2a , 并可在抗体基本结构的基础上对抗体结构进行改造 , 如 :为了消除抗体依赖的细胞介导的细胞毒效应而在大肠杆菌中表达或突变 CH2糖基化位点 ; 为了消除补体激活效应而采用单臂结构或 F (ab 2结构 ; 为了提高对低抗原表达量细胞的杀伤效应而在单抗上偶联细胞毒性药物等 [4]。
由于抗体对应不同的抗原特异性、其结构的复杂性、作用机制的多样性以及生产工艺的复杂性都会影响抗体的质量 , 因此需采用多种质量控制项目和方法对单抗的质量进行评价。
单抗的质量控制项目和方法选择是在对抗体结构与其安全性和有效性之间关系不断深入了解的基础上逐步发展的 , 同时 , 对方法的运用和对结果的解释也是在对分析方法的不断发展和深入理解的基础上而不断深入和变更的一个动态过程。
2单抗制品的质量控制项目及要求单抗制品同其他生物制品的要求一致 , 质量控制是贯穿终产品生产的全过程控制 , 从生产用起始材料或原材料的质量控制至终产品的质量控制 , 根据生产工艺的不同阶段设置不同的质量控制项目要求 , 本文主要讨论单抗原液至终产品的质量标准及相关要求。
总体上看 , 单抗的质量控制项目 (见表 1 主要包括一般项目、理化检测、含量、鉴别、纯度、活性、安全性等几个方面 [5], 其中安全性方面检测包括 :DNA 残留、宿主细胞蛋白残留、生产过程相关外源因子和异常毒性检测。
作为对纯化工艺去除外源因子能力的验证 , 宿主细胞 DNA 、宿主细胞蛋白残留和生产过程相关外源因子的检测主要在注册阶段的原液样品中进行 , 考虑到最适样本的问题 , 这些项目在成品检测中可以不检测。
在产品质量标准设定和检测方法选择的过程中 , 应根据制品的具体情况选择合适的检测方法 , 并根据工艺的稳定性、产品的安全性和有效性以及方法本身的变异情况设定合适的质量标准。
由于对结构与功能间关系认识的不断深入和检测技术的不断发展 , 产品的检定方法和质量标准是一个不断发展提高的过程 , 下面就当前单抗制品的检测方法和质量标准进行说明和论述。
3单抗质量方法研究现状及其标准制定的注意事项从表 1可以看出 , 对于一个质量控制项目可能会采用不同的方法 , 从不同的侧面反映单抗的质量 , 特别是近年来一些新技术应用于单抗的质量控制 , 对单抗制品的质量控制提供了更高的保障。
但同时也需考虑到 , 对于单抗 , 表 1中所列出的项目只是一个较为普遍的原则 , 但并不是所有的检测方法都适用于每一种单抗制品 , 表中所规定的标准也并非适用于所有的制品 , 针对于某一个特定单抗来说 , 都会有一些特殊的因素需要考虑 , 下面就不同检测方法在单抗质量控制中的作用及其标准制定时需要考虑的问题作简单分析。
在一般检测项目中的可见异物检查中 , 要求应无肉眼可见异物 , 但在一些特殊单抗制品中 , 由于其某些特征 , 如分子表面有大量疏水基团或有游综述 26China Licensed PharmacistJan. 2013, Vol.10No.1合理用药呵护公众健康表 1单抗质量控制项目及要求注 :BCA 法:二辛可酸法; SEC-HPLC :分子尺寸排阻高效液相色谱法; ELISA 法:酶联免疫吸附法; SDS-PAGE :十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳; CE-SDS :十二烷基硫酸钠 -毛细管电泳; IEC-HPLC :离子交换 -高效液相色谱法; CIEF :毛细管等电聚焦电泳; Western-Blot 法:蛋白印迹法; PCR :聚合酶链反应; Threshold 法:阈值法; a :可对非还原法电泳中的蛋白纯度进行相应规定; b :可对样品电泳条带的等电点 (pI 范围进行相应规定, 在 CIEF 检测中, 可对各峰面积百分比进行相应规定; c :需根据方法的精确性和临床试验结果制定检测大类检测项目检测方法质量标准制定参考外观肉眼观察根据制品情况, 制品的外观应符合要求, 不得有污染和破损颜色在限定光强度条件下肉眼观察根据制品的具体情况, 为澄清或具有轻微乳光的无色或淡黄色(≤ 特定参比溶液液体 (冻干制剂应复溶浊度浊度计检测根据制品的具体情况应符合要求(≤ 特定参比溶液理化检测复溶时间(仅冻干制剂人工测定符合相应规定装量体积测定不少于标示装量装量差异称重法符合相应规定水分 (仅冻干制剂费休氏测定法不高于 3.0%pH 电位法在规定范围内渗透压冰点降低法在规定范围内不溶性微粒光阻法注射剂:≥ 10μm 微粒每瓶不得超过 6000个; ≥ 25μm 微粒每瓶不得超过 600个; 眼用制剂:≥ 10μm 微粒每瓶不得超过 50个; ≥ 25μm 微粒每瓶不得超过 5个滴定法 (Lowry 法、BCA 法等测定结果应位于规定范围内 SEC-HPLC 测定结果应位于规定范围内SEC-HPLC 单体含量不少于 95%SDS-PAGE (还原法重链 +轻链含量不少于 95%SDS-PAGE (非还原法同参比品一致 aCE-SDS (还原法产品峰总面积≥ 90%CE-SDS (非还原法电泳图谱同参比品一致 a 等电点测定等电聚焦电泳同参比品一致 b CIEF同参比品一致 b毛细管区带电泳毛细管区带电泳法电泳图谱同参比品一致, 且样品主峰迁移时间应位于规定范围内 IEC-HPLC IEC-HPLC酸性区、主峰、碱性区峰面积百分比位于规定范围内肽图胰蛋白酶等肽图法阳性 (同参考图谱比较, 有所有 /部分特定色谱峰,且无明显新峰 N -末端氨基酸序列测定 Edman 降解法同理论序列一致免疫学鉴别 ELISA 法阳性 Western-Blot 法阳性 ELISA 法、流式细胞术法、表面等离子共振法、Biacore 等对参比品的相对活性在规定范围内 c 无菌膜过滤法 /培养法无菌生长热原动物实验符合相应规定内毒素鲎试剂测定符合相应规定宿主细胞蛋白残留 ELISA 法≤ 0.01%蛋白 A 残留ELISA 法≤ 0.01%宿主细胞 DNA 残留杂交法符合相应规定荧光定量 PCR 法 [6]符合相应规定 Threshold 法 [7]符合相应规定其他添加因子 (如:牛血清白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、胆固醇和其他的培养基内特殊添加物质等相应测定方法符合相应规定异常毒性、 Tween-80、唾液酸含量等相应测定方法符合相应规定结合活性一般检查鉴别活性安全性纯度蛋白纯度可见异物肉眼观察无肉眼可见异物分光光度法测定结果应位于规定范围内含量蛋白含量ELISA 法测定结果应位于规定范围内IEC-HPLC 法酸性区、主峰、碱性区峰面积百分比位于规定范围内双向免疫扩散法符合规定种属鉴别生物学活性特定的生物学活性测定法对参比品的相对活性在规定范围内 c 27中国执业药师 ·离的半胱氨酸等 , 使其可能会形成肉眼可见的蛋白颗粒 , 这些制品使用时多采用在线滤器过滤的方式除去蛋白颗粒 , 在充分阐明颗粒性质和有具体临床研究资料的情况下 , 这类制品的可见异物项目检查中可以容许有肉眼可见的颗粒样物质。
人用单克隆抗体制品生产及检定考虑重点
人用单克隆抗体制品生产及检定考虑要点（FDA，CBER，1994）前言生物制品评价和研究中心（CBER）正在修订1987年的“人用单克隆抗体的生产和检定考虑要点（PTC）”。
该最新修订本的目的是向开发单克隆抗体制品的发起人和研究人员提供帮助，包括研究性新药（IND）和产品许可证申请时应提交的资料。
此文件取代了1987年的文件，并反映了在多次国内、国际会议上讨论过的值得重视的经验，这些会议包括：1．FDA疫苗和相关生物制品咨委会于1990年8月召开的“生物制品潜在逆转录病毒污染”讨论会。
2．由国际生物标准化学会（IABS）发起并于1990年11月在伦敦召开的“生物制品安全性的病毒学方面会议”。
3．由FDA、IABS、NIH、国家疫苗规划办公室、HHS和WHO发起，于1991年3月在Bethesda召开的“传代细胞系当前所面临的问题”的国际性会议。
4．由FDA和NIH联合发起，于1992年1月在Bethesda召开的”单克隆抗体的临床前安全性试验工作会议”。
单克隆抗体和其他生物制品一样都有可供参考的法规（21 CFR部分200～299和600～680）。
与CBER制定的其他考虑要点一样，单克隆抗体考虑要点亦不试图包容所有问题。
当特殊制品产生特殊的未包括在“考虑要点”中的问题时，则应根据具体情况进行评估。
本文及相应的法规本对生产和生产设施进行讨论，发起人应与治疗药物研究和评审办公室及生产企业许可证发放和产品监督办公室磋商。
某些单克隆抗体可由CDER负责主要审查工作，或由CDRH与CBER联合复审，各中心的管辖权依据1991年10月CBER和CDER及CBER和CDRH的内部协议执行。
本考虑要点适合于按此协议联合复审的单克隆抗体。
主档案在研究性新药申请初始阶段不需要全部完成本文中讨论的所有资料，而应在临床开发阶段，由适当的中心以对话方式指导下，使资料不断完善。
在某些情况下，在同一设施内以相同的方法制备及检定的单克隆抗体时，资料应归于单一主档案（Master File）中。
CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点
CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点目录一、引言 (1)二、适用范围 (2)1、本技术要点适用于哪类CAR-T 细胞产品？ (2)2、本技术要点包括哪些内容？ (2)3、本技术考虑要点的基本原则是什么？ (2)三、原材料和辅料及其质量控制： (3)1、在CAR-T 细胞产品的原材料和辅料通常都要考虑哪些因素？ (3)2、转导/转染T 细胞的病毒载体/质粒载体是否可按照原材料管理？ (4)3、如何进行原材料和辅料的选择和风险控制？ (4)4、在载体物质或CAR-T 细胞终产品中是否需要进行原材料残留的质量检测？ (5)四、病毒转导载体及质粒转染载体制备及质量控制： (5)1、转导/或转染载体制备的起始原材料包括哪些或如何定义转染载体的起始原材料？ (5)2、起始原材料要建立种子库系统吗？ (6)3、如何建立种子库系统？如何确定各级种子库的代次及数量？ (7)4、种子库的质量要求是什么？如何管理种子库？ (8)5、如何考虑质粒载体的生产工艺及规模？质粒载体的质量控制包括哪些？ (9)6、病毒载体的生产规模要设计多大？是否可以采用细胞培养皿进行病毒载体的培养？关键工艺研究包括哪些？病毒载体制备过程中如何降低牛血清的风险？ (11)7、是否要进行病毒载体生产终末细胞的检定？ (12)8. 如何开展病毒载体中的外源因子污染的检测？ (12)9、病毒载体是否要纯化？纯化及浓缩工艺应考虑哪些因素？纯化的病毒载体如何保存？ (13)10、纯化后的病毒载体的质量控制检测需要考虑哪些参数？ (13)11、采用何种方法进行病毒载体的滴度测定？是否需要规定病毒载体的比活性？. 1412. 采用何种方法进行RCR/RCL 检测？ (14)13、如何考虑病毒载体工艺杂质质量控制的要求？ (16)14、是否要开展病毒载体的稳定性研究以及如何设定稳定性评价参数？ (16)15、转导载体是否允许外包加工？如何控制外包加工的转导载体的质量？ (16)五、建立可提供T 细胞的供体资质标准： (17)1、选择T 细胞供体的基本考虑是什么？ (17)2、细胞供体（者）应进行哪些传染性疾病因子的检测？应采用何种方法检测？. 183、自体细胞供体是否必须要进行传染性疾病因子筛查和检测？ (18)4、如使用可建系的细胞制备CAR-T 细胞，如何评估其供体及细胞的风险？ (18)5、在临床试验过程中如何进一步开展供体资质的研究？ (18)六、CAR-T 细胞产品的生产、质量控制研究及检测 (19)1、CAR-T 细胞产品的生产工艺研究应考虑哪些因素？ (19)2、如何定义CAR-T 细胞的批次及批量？ (20)3、CAR-T 细胞产品的质量控制研究及检测至少应包括哪些项目？应如何设置这些质控项目更符合CAR-T 细胞产品的特点？ (20)4、选择或建立质量控制检测方法时应考虑哪些因素？如何制定其每一检测项目的质量标准？ (21)5、CAR-T 细胞产品如何留样更为合理？为便于质量检测及留样，是否可以将需在最终包装中检测的项目分装在非最终包装容器中？ (25)6.是否要开展CAR-T 细胞稳定性研究？ (25)七、CAR-T 细胞的非临床研究 (26)1、非临床研究的一般原则 (26)2、CAR-T 细胞产品的药效学研究 (28)3、CAR-T 细胞产品的药代动力学（药代）研究 (29)4、CAR-T 细胞产品的非临床安全性研究 (31)结束语 (35)参考文献 (35)起草单位及起草人 (38)参与提出意见及建议的单位 (38)CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床评价考虑要点一、引言嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T，Chimeric antigen receptor T cell）是指通过基因修饰技术，将带有特异性抗原识别结构域及 T 细胞激活信号的遗传物质转入 T 细胞，使 T 细胞通过直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而激活，通过释放穿孔素、颗粒酶素 B 等直接杀伤肿瘤细胞，同时还通过释放细胞因子募集人体内源性免疫细胞杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的，而且还可形成免疫记忆 T 细胞从而获得特异性的抗肿瘤长效机制。
BLI技术高通量测定抗体浓度的方法学建立
BLI技术高通量测定抗体浓度的方法学建立曾秀引;周冬梅;徐军;杨彬【摘要】This research focused on the high throughout method for developing of antibody concentration detection based on the Bio-layer interferometry ( BLI) . The method gained the optimum efficiency with a 2 minutes binding on protein A sensor at a temperature of 30℃ and a shake speed of 400 r/min. The validation includes specificity, repeatability, accuracy and durability. The results showed that it fit a good linear relationship within an antibody concentration range of 0. 781-400 μg/mL; relative deviations of repeatability including precision, intermediate precision and inter-day precision were below 2. 5%. The accuracy ranged from 94. 46% to 114. 00%, the detection limit was 0. 781μg/mL and the limit of quantification was 1μg/mL. The results certified the reliability of the method. The method can be used for detection of samples with a large scale benefitt from its high speed and throughout.%验证了一种采用生物膜干涉技术(Bio-layer interferometry,BLI)快速高效高通量检测抗体浓度的分析方法.主要采用Protein A生物传感器,在温度为30℃、样品盘震摇速度为400 r/min、结合时间为2 min的条件下检测,可以达到最佳的测定效果,并对专属性、重复性、线性、准确度进行了验证.结果表明:抗体浓度在0.781~400μg/mL范围内线性关系良好,精密度(包括分析重复性、中间精密度和日间精密度)相对偏差均小于2.5%,准确度范围在94.46%~114.00%之间,检测限为0.781μg/mL,定量限为1μg/mL,检测结果表明该方法可靠.此方法检测速度快、通量高,特别适合用于单克隆抗体细胞株筛选阶段大批量样品的检测与评估.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2017(034)005【总页数】4页(P105-107,115)【关键词】生物膜干涉技术;单克隆抗体;高通量筛选【作者】曾秀引;周冬梅;徐军;杨彬【作者单位】广东东阳光药业有限公司,东莞 523867;广东东阳光药业有限公司,东莞 523867;广东东阳光药业有限公司,东莞 523867;广东东阳光药业有限公司,东莞523867【正文语种】中文【中图分类】R319Abstract This research focused on the high throughout method for developing of antibody concentration detection based on the Bio-layer interferometry (BLI). The method gained the optimum efficiency with a 2 minutes binding on protein A sensor at a temperature of 30℃ and a shake speed of 400 r/min. The validation includes specificity, repeatability, accuracy and durability. The results showed that it fit a good linear relationship within an antibody concentration range of 0.781-400 μg/mL; relative deviations of repeatability including precision, intermediate precision and inter-day precision were below 2.5%. The accuracy ranged from 94.46% to 114.00%, the detection limit was 0.781 μg/mL and the limit of quantification was 1 μg/mL. The results certified the reliability of themethod. The method can be used for detection of samples with a large scale benefitt from its high speed and throughout.Keywords bio-film interferometry(BLI); monoclonal antibody; high throughput单克隆抗体药物因具有生物靶向性、给药周期长、频率低、毒副作用相对低等特点，成了理想的治疗药物[1]。
基因治疗的质量控制与标准化操作指南
基因治疗的质量控制与标准化操作指南基因治疗是一种新兴的治疗方法，通过调整患者的基因表达来治疗疾病。
然而，如何确保基因治疗的质量和安全性仍然是一个挑战。
为了提高基因治疗的质量控制，制定标准化操作指南是至关重要的。
本文将介绍基因治疗的质量控制和标准化操作指南的内容和重要性。
首先，基因治疗的质量控制是确保治疗产品符合一定质量标准的一系列活动。
这些活动包括基因治疗产品的制备、质量检测、储存和管理等方面。
其中，制备过程需要严格遵循一系列标准化操作步骤，以确保产品的一致性和纯度。
质量检测是一个关键环节，用于验证治疗产品的纯度、有效性和无毒性。
储存和管理方面需要遵守一定的条件和规定，保证产品的长期稳定性。
标准化操作指南是制定出来的一套规范操作要求，旨在确保基因治疗产品的质量和安全性。
标准化操作指南的制定需要依据国际、行业和监管机构的相关准则，并结合实际治疗的需求和技术发展。
标准化操作指南通常包括以下几个方面。
首先，标准化操作指南应明确基因治疗产品的制备过程。
制备过程应包括起始材料的选择、基因转导载体的构建、细胞培养和基因传递等关键步骤。
每个步骤都应有明确的操作要求和检测标准，以确保产品的一致性和质量。
其次，标准化操作指南还应明确基因治疗产品的质量检测方法。
质量检测是确保治疗产品的有效性和无毒性的关键步骤。
标准化操作指南应包括各种质量检测方法，如基因转导效率的检测、细胞毒性的评估和基因表达的定量分析等。
这些方法可以为治疗产品的质量控制提供有力的支持。
此外，标准化操作指南还应明确基因治疗产品的储存和管理要求。
储存和管理是确保治疗产品长期稳定性和可追溯性的关键环节。
标准化操作指南应明确储存条件，如温度、湿度和光照等，以及管理要求，如产品标识、记录和追溯等。
这些要求可以保证治疗产品在储存和使用过程中的质量和安全。
最后，标准化操作指南的实施和执行需要有严格的监管和管理。
相关机构和实验室应建立质量管理体系，包括标准操作程序（SOP）、员工培训、设备验证和纪录保留等。
抗表皮生长因子受体2单克隆抗体质量控制中的趋势分析
的 变化情况 ， 对评价单抗的批 间一致性 和生产工艺稳 定性提供 了参考 ， 为其他 单抗质量控 制 中关键质 量属性 的趋 势分析提供
重要指导和借鉴 。
关键词 ： 抗表 皮生长 因子 ２单克隆抗体 ； 质量控制 ； 趋 势分析
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ １ ６ ６ ９ ／ ｃ ｐ ｊ ． ２ ０ １ ５ ． １ ６ ． ０ １ ６ 中图 分 类 号 ： Ｒ ２ ８ ４ 文 献标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ — ２ ４ ９ ４ （ ２ ０ １ ５ ） １ ６—１ ４ ３ ０— ０ ６
ｍ ｇ 。 。 ； 蛋 白质含 量均值 分别为（ ４ ４ ２ ． １ ５ ４ － １ ３ ． ５ ９ ） 和（ ４２ ． ０ ７±６ ． ６ ０ ）ｍ ｇ・ 瓶 ～； 离子 交换 色谱 主峰 面积均值 分 别为 （ ７ ６ ． ２ ９－ ４ － １ ． ３ ６ ） ％和（ ７ ３ ． ７ ６±１ ． １ ７ ） ％； ｐ Ｈ值均值分别为 （ ６ ． １ ６± ０ ． １ １ ） 和（ ６ ． ２ ２±０ ． ０ ８ ） 。对上述 结果进行 连续性 和周期 性趋 势分析 ， 总体趋势较平稳。结论 首次通过对抗表皮生长 因子受体 ２单克 隆抗 体 的部 分 关键 质量属性 （ Ｃ Ｑ Ａ） 趋 势分析 ， 反映 了制 品
ｓ ｉ ｎ ｇ Ｂ Ｔ － ４ ７ ４ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｓ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ，ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｃ ｙ ｏ ｆ ａ ｎ ｔ ｉ — ＨＥ Ｒ ２ ｍＡｂ ｓ ｗａ ｓ ｃ ａ ｌ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ
组织工程医疗产品质量控制的关键技术要求和标准
组织工程医疗产品质量控制的关键技术要求和标准王春仁;冯晓明;韩倩倩【摘要】The progress has been made rapidly in the tissue engineering research and development in China. So the tissue engineered medical products (TEMPs) begin from the laboratory bench move into market since some products realize the commercialization. The most important point is how to control the safety and effectiveness of the TEMPs. In this paper we propose some principle for the quality control of TEMPs associated with seeding cel resource, cel quality control, culture medium, raw material and scaffold characterization and standard etc.%我国组织工程医疗产品的研发迅速，已逐渐从实验室阶段进入临床研究阶段，有的产品已经实现产业化，如何控制组织工程医疗产品的安全性和有效性是实现产业化的关键。
本文对组织工程医疗产品的种子细胞来源、细胞的质量控制、培养基、材料支架表征等质量控制的关键技术要求和标准进行了综述。
【期刊名称】《中国医疗器械信息》【年(卷),期】2016(022)019【总页数】5页(P1-4,45)【关键词】组织工程;组织工程医疗产品;安全性;有效性;评价;标准【作者】王春仁;冯晓明;韩倩倩【作者单位】中国食品药品检定研究院北京 100050;中国食品药品检定研究院北京 100050;中国食品药品检定研究院北京 100050【正文语种】中文【中图分类】R318内容提要：我国组织工程医疗产品的研发迅速，已逐渐从实验室阶段进入临床研究阶段，有的产品已经实现产业化，如何控制组织工程医疗产品的安全性和有效性是实现产业化的关键。
如何改进治疗性抗体的安全性和疗效特征
24PHARMA TECHNOLOGY • 医药技术自从首次发现单克隆抗体(MAbs)在医药和工业中可能存在的应用价值后，它们已被经常性地用于研究和诊断试验室中，而对其用于治疗的可能性的研究正在以指数级的速度推进。
现在，MAbs成为了发展最快的一类蛋白治疗性抗体，当前主要被研发用于治疗癌症、自身免疫性疾病、感染性疾病和炎性疾病。
它们代表了生物技术行业内出现的销量最大的一类制品—治疗性抗体。
截止2008年年底，美国治疗性抗体的市场估计价值达40bn美元，预计抗体很快就会超越较大制药市场的销售额。
过去MAb是通过细胞培养生产，由于价格昂贵而难以用于治疗。
然而，在过去的几年间，由于MAb的设计和生产采用了新技术，因此成本急剧下降，目前，细胞培养生产的MAb每克价值为200到300美元。
在更为有效、更安全和更经济的Mab在生产上存在着严苛的竞争。
革新者和同类生物公司对于自身MAb糖酰化过程的优化有助于实现有效、安全和经济的目的。
MAbs 如何发挥作用？单克隆抗体是高度复杂的糖蛋白，由各种多肽结构域组成，其中一些存在糖基化。
这些结构域组织在一起形成两种类型的功能区—Fab和Fc，它们在治疗中发挥着各自不同的功能性作用。
泛泛而言，这些结构域的蛋白结构决定着这些功能区的主要功能活性，而其中的聚糖则可以调整或者协调这些活性的强度。
MAbs的各种作用模式包括对靶物质的中和作用，补体依赖的细胞毒作用(CDC)以及抗体依赖的细胞毒作用(ADCC)。
抗体的中和作用依赖于Fab(或者可变区)区与靶物质上的表位相结合，从而阻止因生物分子相互作用而引起的疾病的进展。
Since it was first noted that monoclonal antibodies (MAbs) could be valuable for medicine and industrial use they have become routinely used in research and diagnostic laboratories and their potential as therapeutics has continued to be explored at an exponential rate. MAbs now comprise the fastest growing class of protein therapeutics and are currently being used and developed primarily to treat cancers, autoimmune diseases, infectious diseases and inflammatory diseases. They represent some of the largest selling products to emerge from the biotechnology industry – by 2008 the US therapeutic antibody market was estimated to be worth around USD 40bn – and antibodies are soon expected to outpace the sales of the larger pharmaceutical markets.MAbs have traditionally been produced in cell culture and have been prohibitively expensive for most therapeutic uses. Over the years, however, the cost has dropped and, as a result of new technologies for their design and production, MAbs are now being produced in cell culture for USD 200 to USD 1,000 per gram. There is fierce competition to produce more effective, safer and less expensive MAbs. Innovator and biosimilars companies can help achieve these aims by optimising the glycosylation of their MAbs.How do MAbs work?Monoclonal antibodies are highly complex glycoproteins composed of various polypeptide domains, some of which are Dr. Claire Morgan and Dr. Daryl Fernandes from Ludger discuss how the glycan structures of a therapeutic monoclonal antibody can significantly influence a product’s safety and efficacy profilesHow to improve safety and efficacy profiles of therapeutic antibodies来自于Ludger的Dr. Claire Morgan 和 Dr.Daryl Fernandes对治疗性单克隆抗体的聚糖结构如何显著影响产品的安全性和疗效特征进行讨论如何改进治疗性抗体的安全性和疗效特征Molecular Biology 分子生物学25医药技术 • PHARMA TECHNOLOGY MAb重链的Cγ2区MAb重链的Cγ3区聚糖到蛋白的连接处核心岩藻糖Galβ(1,4)无Gal加帽的外臂N-乙酰葡糖胺（GlacNac）结构域间正面图侧面图Molecular Biology分子生物学glycosylated. These domains are grouped into two types of region – Fab and Fc – which play different functional roles in the therapeutic. Broadly speaking, the protein structures of the domains determine the primary functional activities of these regions while the glycans tune or modify the intensity of these activities. The various modes of action of MAbs include neutralisation of the target, complement dependent cytotoxicity (CDC) and antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC). Neutralising antibodies rely on binding of the Fab (or variable) region to an epitope on the target to block biomolecular interactions involved in disease development. MAbs working via CDC and ADCC (so called “Fc effector functions”) rely on two stages of action. The first stage – antigen binding – involves binding of the antibody Fab region to a specific epitope on the target cell (e.g. the CD20 receptor on the surface of cancer cells). During the following effector通过CDC和ADCC的MAbs(所谓的“Fc效应功能”)依赖于两阶段的作用：第一阶段—抗原结合，涉及到抗体Fab区与靶细胞上特异的表位结合(例如：癌细胞表面上的CD20受体)。
人用重组单克隆抗体产品总论
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90 无菌容器密封以防污染，如需冷冻干燥，先进行冷冻干燥再密封。
91 3. 产品检定
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应根据产品关键质量属性、对产品和工艺理解认识的积累和风险评估的原则，制定
93 相应质量控制策略。产品检定采用的检测方法应经验证并符合要求。纳入质量标准的检
94 定项目、可接受标准限度，应结合来自于临床前和／或临床研究时多批样品的数据、用
42 参比品
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选择已证明足够稳定且适合临床试验的一个/多个批次，或用一个代表批次作为参比
44 品，用于鉴别、理化和生物学活性等各种分析，并应按特性分析要求进行全面分析鉴定。
45 中间品
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生产工艺的设定应优先采用连续不间断的生产方式，如需储存中间品，应对中间品
47 的贮存条件进行验证，证明该贮存条件不影响后续工艺用物料的质量指标和产品在有效
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采用适宜的方法对供试品氧化产物、脱酰胺产物或其他结构不完整分子进行定量分
121 析。供试品测定结果应在规定的范围内。
122 3.2.4 工艺相关杂质
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采用适宜的的方法对供试品宿主蛋白、宿主细胞和载体 DNA、蛋白 A 及其他工艺
124 相关杂质进行检测。供试品测定结果应在规定的范围内。
27 原、产品相关杂质和工艺相关杂质的去除、纯化用材料（如色谱柱填料）的重复使用性
28 的可接受限度、产品质量属性批间一致性、抗体偶联药物的偶联方法或基于品种质量属
29 性的其他抗体修饰方法、以及对生产中所需一次性材料的监控等。
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30 特性分析
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应采用现有先进的分析手段，从物理化学、免疫学、生物学等角度对产品进行全面
单抗质量管理体系
单抗质量管理体系1.引言1.1 概述单抗质量管理体系是指针对单抗产品开展的一套质量管理体系。
单抗（Monoclonal Antibodies）作为一种重要的生物药物，具有高选择性、高效性及广泛的临床应用前景。
然而，由于其复杂的制备工艺、敏感的质量要求以及潜在的安全风险，单抗产品的质量管理显得尤为重要。
概括来说，单抗质量管理体系是一种针对单抗产品全生命周期的质量控制体系，旨在确保单抗产品在研发、生产、运输和使用过程中的质量与安全性。
该体系包括了从原料采购、生产工艺控制、质量监控到产品追溯等各个环节的管理和控制措施，以确保单抗产品质量的稳定和一致性。
单抗质量管理体系的核心目标是通过各项管理措施，提高单抗产品的质量可靠性和有效性，降低生产和使用过程中的风险。
它不仅涉及到制药企业内部的质量管理要求，还关系到与供应商、承运商、临床机构等外部合作伙伴之间的质量合规性。
通过建立规范的操作流程、质量数据的监控和纠正措施，以及员工培训等手段，单抗质量管理体系可以提供一种持续改进的质量保证机制，为单抗产品的质量和安全提供有效的管理保障。
总之，单抗质量管理体系的概念、作用和目标都是为了确保单抗产品的质量可控、安全可靠。
它不仅对于制药企业的合规性和竞争力至关重要，也为患者提供了更可靠的治疗选择和健康保障。
在本文的后续部分，我们将更详细地探讨单抗质量管理体系的定义、重要性以及实施效果和未来发展方向。
1.2 文章结构本文共分为三个部分，分别是引言、正文和结论。
引言部分主要对单抗质量管理体系进行概述，介绍了文章的结构和目的。
正文部分将重点讨论单抗质量管理体系的定义和重要性。
在2.1节中，将详细说明单抗质量管理体系的定义，包括其组成要素和相关流程。
在2.2节中，将强调单抗质量管理体系的重要性，探讨其在医药领域中的作用和意义。
结论部分将对单抗质量管理体系的实施效果进行评估和总结。
在3.1节中，将分析单抗质量管理体系的实施效果，包括其对产品质量和生产效率的影响。
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则(2003)
2003 年 03 月 20 日发布本要点合用于供治疗的体内诊断用的利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体，合用于在人体内应用的利用重复 DNA 技术制备的基因工程抗体。
一、杂交瘤技术制备的单克隆抗体(一)杂交瘤细胞1．亲本细胞(1)骨髓瘤细胞SP2/0 或者其他适宜的骨髓瘤细胞系。
应为不合成或者不分泌免疫球蛋白链型，具有符合骨髓瘤细胞的染色体特征，并有明确的来源历史及符合要求的保存条件。
(2)免疫亲代细胞经抗原免疫的鼠脾 B 淋巴细胞或者外周血 B 淋巴细胞。
应有明确的免疫原来源、性质及动物种系，免疫原详细的制备过程。
适宜的免疫方案及免疫淋巴细胞制备的方法。
2．细胞融合与克隆化采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。
3．杂交瘤细胞检定(1)抗体分泌稳定性连续克隆化后抗体阳性率达 100%，经体外连续传代 3 个月以上和反复冻存、复苏，细胞系能保持稳定分泌特异性抗体。
(2)细胞核学特征检查细胞分裂中期染色体，应符合杂交瘤细胞特征。
4．鼠源病毒检查按附录要求检测鼠源病毒。
5．支原体检查按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
6．无菌试验按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
(二)单克隆抗体的检定1．免疫球蛋白类及亚类用免疫双扩散法或者其他适宜的方法测定。
2．亲和力用可靠、准确的方法测定单克隆抗体 (以下简称为单抗) 的亲和常数或者相对亲和力。
普通情况下，对于免疫原为可溶性的单抗，测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗，测其相对亲和力。
3．特异性测定单抗对靶抗原的特异性；对多株单抗识别的抗原决定簇进行相关性分析。
4．交叉反应按附录要求。
免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的各种正常脏器组织测定。
来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。
5．效价测定用适宜方法测定。
(三)其他原材料1．细胞培养用小牛血清支原体检测应为阴性。
经小量试验适于杂交瘤细胞生长。
2．培养液应有培养液来源，质量指标。