§7-1菌种的衰退、复壮分析

5~15年 以上
简便 简便 简便 简便 有效 简便 有效
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
主要措施
适宜菌种 保藏期 评 价
冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体）
石蜡油封藏法* 沙土保藏法
冷冻干燥法
低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养
干燥、无氧、 低温、有保护
剂
各大类 细菌、酵母菌
各大类** 产孢子微生物
各大类
3~6月 6~12月 1~2年 1~10年
❖ ②连续传代
❖ ③不适宜的培养和保藏条件：PH，温度，湿度。
3。菌种衰退的防止：
①控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错
配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏 方法，可以减少移种和传代的数）；
②创造良好的培养条件； ③利用不易衰退的细胞移种传代（对丝状微生 ； 物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种） ④采用有效的菌种保藏方法。 ⑤讲究菌种选育技术 ⑥定期进行分离纯化
(3)菌种保藏的法 连续在活宿主上（内）移种
保
固体斜面
藏
湿法 半固体琼脂柱
方 休眠态
液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）
法
干法 藏在玻璃管内
吸附在合适的载体上
①低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。
模块一 菌种的衰退和复壮
一、 菌种的衰退
1.菌种衰退的现象
(1).菌种衰退是指由于自发突变的结果，而使某 物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变 的现象。常见的衰退现象：
菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 代谢产物生产能力下降； 致病菌对宿主侵染能力下降； 对外界不良条件抵抗力减弱等。
由此可见，狭义的复壮
菌种的复壮措施：
①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注 法、单细胞挑取法等）。
②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） ； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化
条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退 个体）。
④采用有效的菌种保藏方法。
二、 菌种的复壮 1、复壮
使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种 已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法， 从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型 性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有 意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种 的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地 从生产中选种
5.2、菌种保藏：
(1) 目的： ①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种
(2) 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分 生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度， 生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环 境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂 等）
❖ 2.菌种衰退的原因：
❖ 菌种衰退不是突然发生的，而是从量变到质变的逐 步演变过程。开始时，在群体细胞中仅有个别细胞 发生自发突变（一般均为负变），不会使群体菌株 性能发生改变。经过连续传代，群体中的负变个体 达到一定数量，发展成为优势群体，从而使整个群 体表现为严重的衰退。
❖ ①基因突变：如果控制产量的基因发生负突变，则 表现为产量下降。
干法保藏菌种的方法
滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法（L-干燥法）
冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒）
滤纸片 薄片状载体 明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成）
血清蛋白小片（…乙烯薄膜… ）
国内外菌种保藏机构：
❖菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、
菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及 便于研究、交换和使用的目的。
❖菌种保藏机构：
中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL）
③干燥保藏法
将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保 藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌 保藏，保藏时间几至几十年。
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。
⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。