基于紫外分光光度法的金花茶叶中总黄酮含量的测定

基于紫外分光光度法的金花茶叶中总黄酮含量的测定朱华1,2,唐桂兴2,张可锋23,邹登峰2,杜正彩1　(1.广西中医学院,广西南宁530001;2.桂林医学院,广西桂林541004)摘要　[目的]建立金花茶材叶中总黄酮含量的测定方法。

[方法]采用紫外分光光度法测定药材中总黄酮含量。

[结果]采用紫外分光光度法测定总黄酮含量时,在0.00864～0.06912mg/m l 浓度范围内线性关系良好(r =0.9999),平均回收率=100.4%,RSD =0.0180。

[结论]所用方法简便、准确,可用于金花茶药材的质量控制。

关键词　金花茶叶;总黄酮;含量测定;紫外分光光度法中图分类号　T Q 461 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2010)09-04559-01D eterm i na tion of Tota l Flavono ids Con tent i n Cam ellia ch rysan tha (Hu)Tuyama.Ba sed on UV Spectrophotom etry ZHU Hua et a l (Guangxi College of Traditi onal Chinese Medicine,Nanning,Guangxi 530001)Abstract [Objective ]The ai m was t o establish the method f or deter m ining total flavonoids content in Cam ellia chrysantha (Hu )Tuyama ..[Method ]UV s pectr ophotometry was adop ted t o deter m ine the content of total flavonoids .[Result]The results showed that in the range of0.00864-0.06912mg/m l,linear relationshi p was good (r =0.9999),the average recovery rate was 100.4%,RSD was 0.0180.[Con 2clusi on ]The method is si mp le and reliable,which could be used to control the quality of C.chrysantha .Key words Cam ellia chrysantha (Hu )Tuyama .;T otal flavonoids;Content deter m ination;UV s pectr ophotometry作者简介　朱华(1959-),男,广西柳州人,博士,教授,博士生导师,从事中药质量标准研究。

3通讯作者,E 2mail:xueshengcailiao @ 。

收稿日期　2009212214 金茶花(Cam ellia chrysantha )为山茶科山茶属国家一级保护植物。

其有很高的观赏、科研和开发利用价值,素有“植物界的大熊猫”、“茶族皇后”之称,在国际上负有盛名。

金花茶叶具有清热解毒、止痢的功效,主要用于治疗痢疾、咽喉炎、肾炎、水肿、尿路感染、黄疸型肝炎、肝硬化腹水、高血压、预防肿瘤等症,外用于疮疡[1]。

多数黄酮类化合物能防治心脑血管和呼吸系统疾病,具有抗炎抑菌、降血糖、抗氧化、抗辐射、抗癌、抗肿瘤及增强免疫能力等药理作用[2]。

为此,笔者测定金花茶叶中总黄酮含量,以期为探索其药效物质基础和农业生产质量控制提供参考依据。

1　材料与方法1.1　材料1.1.1　研究对象。

金花茶叶,为山茶科植物金花茶[Cam el 2lia chrysantha (Hu )Tuya ma .]的叶,阴干,粉碎,备用。

1.1.2　试剂。

芦丁标准对照品(批号:1008029705,中国药品生物制品检定所);其他均为分析纯。

1.1.3　主要仪器。

UV2550紫外分光光度计(日本岛津公司);B2200S 2T 型超声仪(上海必能信超声有限公司);BT224S 电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);单道微量可调移液枪(芬兰Ther mo Finnp i pette );R 2200旋转蒸发仪(瑞士BUCH I 公司)。

1.2　方法1.2.1　标准溶液的配制。

精密称定芦丁标准品10.8mg 于50m l 量瓶中,加入75%乙醇至刻度,摇匀,得浓度为01216mg/m l 的标准品溶液。

1.2.2　供试品溶液的配制。

取药材粉末1g,精密称定,加入75%乙醇100m l,水浴回流提取2h 。

过滤,滤渣用75%乙醇洗涤,合并滤液;滤液置于25m l 容量瓶中,放冷,用75%乙醇定容至刻度,摇匀,得供试品溶液。

1.2.3　方法学考察。

1.2.3.1　最大波长的确定。

取适量标准品与供试品溶液,分别置于25ml 容量瓶中,加入75%乙醇至8ml,再加入1ml 亚硝酸钠溶液(50g/L ),摇匀,静置5min;加入1ml 硝酸铝溶液(100g/L ),摇匀,静置6min;加入10ml 氢氧化钠溶液(40g/L ),用蒸馏水定容至刻度,摇匀,静置15min 显色。

立即在200～800n m 波长范围内进行扫描,确定最大吸收波长。

1.2.3.2　线性关系考察。

取标准品溶液0、1、2、4、6、8m l,分别置于25m l 量瓶中,其他“1.2.3.1”项操作。

以吸光度(A )为纵坐标、浓度(C )为横坐标绘制标准曲线。

1.2.3.3　稳定性试验。

精密量取供试品溶液2m l,按“1.2.3.1”的方法显色,每隔4h 测定1次吸光度,共测定6次,计算总黄酮含量及相对标准偏差(RSD ),考察样品的稳定性。

1.2.3.4　精密度试验。

取某一浓度标准品溶液2m l,按“1.2.3.1”的方法,显色,测定吸收度,连续6次,计算总黄酮含量及RSD ,考察仪器的精密度。

1.2.3.5　重现性试验。

精密称取同一批样品6份,每份约1g,按“1.2.2”的方法制备溶液;每份取2m l,按“1.2.3”的方法显色,测定吸光度,计算总黄酮含量及RSD ,考察方法的重现性。

1.2.3.6　加样回收率试验。

精密称取已知含量的金花茶粉末6份,每份约0.2g,均加入已知含量的芦丁标准品3mg,按“1.2.2”的方法制备溶液;每份取2m l,按“1.2.3.1”的方法显色,测定各份样品中吸光度,计算总黄酮及RSD 含量。

1.2.4　总黄酮含量的测定。

精密量取供试品溶液2m l,按“1.2.3.1”的方法显色,测定吸光度,计算总黄酮含量。

2　结果与分析2.1　方法学考察结果2.1.1　最大波长的确定结果。

标准品与供试品溶液在500n m 处均有最大吸收,故选择500n m 为测定波长。

2.1.2　线性关系的考察结果。

求得回归方程为:A =13165C -010045(r =0.9999),线性范围为0100864～0106912mg/ml 。

2.1.3　稳定性试验结果。

测得总黄酮含量的RSD =1.5900%,表明在24h 内样品的稳定性良好。

(下转第4561页)安徽农业科学,Journal of Anhui Agri .Sci .2010,38(9):4559,4561责任编辑　姜丽　责任校对　卢瑶值,绘制4种元素的标准曲线。

测定各样品的原子光谱吸收值,根据标准曲线计算样品中各元素的含量。

1.2.4　回收率测定。

在过江藤样品中加入Fe、Mn、Cu、Zn 标准溶液各1100m l,定容至100100m l,根据标准曲线计算回收率。

回收率(%)=(加标测定值-样品测定值)/加标量×100。

设4次重复,按“1.2.3”法计算各元素的含量、回收率和RSD(%)。

2　结果与分析2.1　标准工作曲线的绘制　根据“1.2.3”方法计算出Cu、Zn、Fe、Mn标准曲线的回归方程及相关系数(表2)。

由表2可知,在确定的浓度范围内,各元素的浓度与吸光度均呈良好的线性关系。

表2　标准工作曲线Table2　St andard work i n g curve元素Ele ments回归方程Regressi on equati on相关系数Correlati on coefficient线性范围L inear rangeCu C=10.6627A+0.0607r=0.999801100～01900 Zn C=2.9495A-0.1318r=0.999201100～01900 Fe C=47.9085A+0.0182r=0.999301500～91000 Mn C=8.5106A-0.0638r=0.999501100～51000 2.2　过江藤不同植体部位中4种微量元素的含量　取过江藤植物根、茎、叶3个不同部位的干样,按“1.2.1”方法进行前处理后上机测定,测定结果见表3。

表3　过江藤不同植体部位中4种微量元素的含量Table3　Four ele m en t con ten ts i n d i fferen t parts of P.nodifloraμg/g部位Parts Cu Fe Zn Mn根Root34.750626.60028.50096.000茎Ste m18.575240.90048.05025.675叶Leaf15.925433.35059.75093.375 直观分析,在根中各元素含量Fe>Mn>Cu>Zn;茎中Fe>Zn>Mn>Cu;叶中Fe>Mn>Zn>Cu。

过江藤3个不同部位均以Fe含量最高。

在茎、叶中Zn的含量也较高,是根中的1倍。

2.3　试验方法验证　按“1.2.4”法进行了回收率的测定,结果Fe回收率为107191%,RSD为11556%;Zn回收率为94180%,RSD为01410%;Cu回收率为99104%,RSD为11784%;Mn回收率102108%,RSD为11150%。

结果表明,该方法测定过江藤微量元素的数据真实可靠。

3　小结过江藤在我国为花生等旱作物田间杂草,但它也是一种很好的中草药材,在泰药中多有应用[10]。

过江藤全草中Fe、Zn、Cu、Mn含量均较高,其全草入药较为适宜,这与药典中用药部位相一致。

参考文献[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典1990年版(一部)[M].北京:人民卫生出版社,1990:103.[2]中华本草编委会.中华本草:4卷[M].上海:上海科学技术出版社,1998:789.[3]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编[M].北京:人民卫生出版社,1975.[4]龙川,袁兴亮,范杰.铲除水花生阔封显身手[J].四川农业科技,2006(2):34.[5]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1983:10.[6]彭密军.火焰原子吸收法测定杜仲纯粉中八种微量元素的含量[J].经济林研究,2000,18(1):40-42.[7]李奇凤,彭珊珊.原子吸收光谱法测定12种中成药10种无机元素[J].光谱学与光谱分析,2001,21(2):237-239.[8]李盛亮,夏令伟,袁俊华.原子吸收光谱法[M].上海:上海科学技术出版社,1989:1-128.[9]吴炳辅,崔万钧.中药中微量元素研究的状况与展望[J].中草药,1986,17(4):38.[10]过江藤.w w w.med126.co m/mingzu/2009/20090512121653_153871.sht2ml.(上接第4559页)2.1.4　精密度试验结果。