免疫层析试验
免疫层析法步骤
免疫层析法步骤
免疫层析法是一种常用的生物检测技术，主要应用于医学诊断、食品安全检测等领域。
以下是其基本步骤：
1. **样本准备**：收集并准备好待检测的样本。
2. **加样**：将样本加入到层析试纸的一端，让样本与试纸上的反应物质进行反应。
3. **反应**：让试纸上的反应物质与样本中的目标物质进行反应，形成复合物。
4. **洗涤**：用洗涤液将未结合的反应物质冲洗掉，只留下结合的目标物质。
5. **检测**：观察试纸上的反应结果，如果有目标物质存在，就会在试纸的一定位置显示出颜色或其它标记。
6. **结果解读**：对比试纸的颜色或标记与标准品，解读出样本中目标物质的浓度或存在与否。
请注意，具体操作可能因检测目的、试剂、设备等不同而有所差异，在进行实验时应按照具体指南进行操作。
同时，免疫层析法也有一定的局限性，如检测灵敏度、特异性等问题，也需要在使用时进行评估。
临床免疫学：胶体金免疫层析试验
胶体金-乙肝表面抗原 加样区
C：乙肝表面抗体
主要试剂
• 试剂条 • 采血针 • 缓冲液
操作方法与结果判定
• 将血清/血浆/全血标本直接加入加样区,
• 静置10分钟后判定结果，20分钟后判定结 果无效；
• 两条带有效，标本阳性；
• 仅质控区有带， 标本阴性;
<<临床免疫学检验>>操作考试
班级
姓名
学号
分数
题号 操作题 理论题
操作（50分）
实验报告：（30分，其中实验原理8分、试剂与器材 2分、操作步骤5分、注意事项5分、结果分析与 判断5分、临床意义5分）
理论题（20分）
操作考试时间：2017-12-12下午
分两批进行： 第一批：1、2班：14：00~15：30 第二批：3、4班：15：30~17：00
• 仅测试区有带， 无
• 无带；
效
注意事项
• 测试条从冰箱取出后应恢复至室温； • 加标本不可越过加样区。
方法学评价与临床应用
• 操作简单、方便，结果快速； • 符合床边检验POCT要求； • 不能准确定量。
作业：要求大家对前面7次实验报告按
照老师批改意见进行订正。下周操作考试 时学委收齐交到讲台上。
胶体金免疫层析试验
• 胶体金免疫技术
胶体金免疫测定技术
胶体金渗滤试验 胶体金层析试验
胶体金免疫层析试验原理
一种将胶体金免疫技术和蛋白质层析技术相 结合的快速固相膜免疫分析技术。所用试剂全部 为干试剂，测试时滴加在膜一端的待测标本溶液 受载体膜的毛细管作用向另一端移动，在移动过 程中待分析物与固定于载体膜上的抗原或抗体结 合而被固相化，最终通过胶体金的呈色条带来判 断试验结果。
免疫层析方法的检测
免疫层析方法的检测
免疫层析方法是一种常见的生物化学分析技术，用于检测和测定生物样本中特定分子的存在和浓度。
它是一种快速、简便、灵敏度高的方法，广泛应用于医学诊断、生物技术和环境监测等领域。
免疫层析方法的检测原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合。
在免疫层析试剂盒中，通常包含有特定抗体的检测试剂纸条，样本加入后，如果样本中含有目标分子，就会与抗体结合形成复合物。
当复合物在试剂纸条上移动时，会与固定在纸条上的另一种特定抗体结合，形成可见的线条。
通过观察线条的出现与否、颜色深浅及位置，可以判断样本中目标分子的存在与否以及浓度大小。
免疫层析方法的检测具有许多优点。
首先，它是一种快速的检测方法，通常只需几分钟到半个小时就能得出结果，适用于临床急诊和野外快速检测。
其次，该方法操作简单，无需复杂的仪器和技术，即使是非专业人员也能够进行操作。
而且免疫层析方法的检测结果直观易读，不需要专门的数据处理和解读。
免疫层析方法的检测在医学诊断中得到了广泛应用。
例如，临床常用的急性心肌梗死标志物肌钙蛋白、白细胞介素-6、前白蛋白等都可以通过免疫层析试剂盒进行快速检测。
此外，在生物技术领域，免疫层析方法也常用于检测重组蛋白、抗体、核酸等生物分子的存在和浓度，广泛应用于疾病诊断、药物筛选和基因工程等领域。
总之，免疫层析方法的检测具有快速、简便、灵敏度高的特点，适用于多种生物样本的分析。
随着生物技术的不断发展和进步，相信免疫层析方法的检测将在未来得到更广泛的应用。
免疫层析实验双抗体夹心法测大分子抗原
免疫层析实验双抗体夹心法测大分子抗原嘿，大家好！今天咱们来聊聊一个看似高大上的话题——免疫层析实验双抗体夹心法测大分子抗原。
别被这长长的名字吓到了，其实说白了就是一种用来检测大分子抗原（比如病毒、细菌或者蛋白质等）的方法，简单点说就是把抗体当做“捕手”，去“捉”那些我们想知道的抗原。
你看，咱们生活中就有很多小抓捕队一样的事情，免疫层析实验的工作原理也差不多，就像警察抓小偷一样！那双抗体夹心法又是什么呢？哈哈，其实它就像一个夹心饼干。
你看，它有三层结构：上下两层是抗体，而中间的“夹心”就是咱们的目标抗原。
这样，上下抗体就能把目标抗原“夹住”，好像两只手把心爱的玩具抓得紧紧的。
是不是觉得挺有意思的？这一法子可厉害了，不仅能帮助咱们快速、精准地检测出那些难以察觉的大分子抗原，还能做到不需要复杂设备、操作起来也很简便。
就像咱们做个家庭聚会，不需要大厨，只要厨房里有点工具就能做出大餐。
要是你想了解一下这个技术怎么实施，也不复杂。
你得有一个带有抗体的试纸条。
这些抗体被特意设计成只跟某些抗原“配对”，就像一对儿死党，只有在见到对方的时候才能手拉手，互相认同。
如果目标抗原真的出现了，这俩抗体就会“紧紧抱住”它，就像母亲紧紧搂住自己的孩子，不放手。
而这个过程就能让我们看到肉眼无法直接看到的东西。
是不是有点神奇？这也是免疫层析法的魅力之一，能在短时间内给我们答案。
不过，这个过程看起来简单，背后的原理可不简单。
双抗体夹心法得依赖抗体的高度特异性，也就是说，抗体得像警犬一样，嗅得准、抓得稳。
因为如果抗体抓错了，那我们的结果就可能大打折扣，甚至变得毫无意义。
想象一下，警察抓错了人，岂不是闹了个大笑话？所以，设计合适的抗体，确保它们只对目标抗原“有兴趣”，是免疫层析实验成功的关键。
不仅如此，免疫层析法还特别讲究实验环境的控制，特别是温度和pH值。
这些环境因素会影响抗体与抗原的“互动”，如果不注意，很容易出错。
就像你做饭时，锅里的火候太大或太小，菜就做不好一样，温度控制得当，实验结果才有可能如你所愿。
免疫层析法
免疫层析法免疫层析法是一种分子生物学技术，用于检测和鉴定有机物质的结构、物性和功能，其原理是利用生物体中的免疫反应物质（抗体）对有机物质的特异性结合作用来识别和结构分析某种有机物质。
通常情况下，免疫层析法有抗原层析、抗体层析和抗原-抗体双层析三种形式。
抗原层析是指将有机物质加入抗体溶液中，通过特异性结合作用将其抗原与抗体结合，而使其抗体溶液中抗体与抗原结合形成免疫复合物，最终在层析过程中，抗原-抗体复合物将在离心力的作用下离心到检测杯的底部形成一层块状的膜层。
抗体层析是指，将抗体加入抗原溶液中，当抗原与抗体结合时，抗体溶液中抗原将与抗体结合形成抗原-抗体复合物，最终在离心力的作用下将复合物离心至检测杯底部形成一层块状的膜层。
抗原-抗体双层析是指将抗原和抗体同时加入溶液中，当抗原与抗体结合时，溶液中抗原与抗体结合形成抗原-抗体双层复合物，复合物最终将在离心力的作用下离心到检测杯的底部形成一层块状的膜层。
免疫层析法的原理极其复杂，它结合了化学、生物学等多种学科，利用高度特异性的可逆结合作用，精确测定某种物质的结构、物性和功能。
它的用途非常多，可用于生物医学领域，如病原体检测、发现新药物、环境污染检测等。
它也可用于工业检测，识别和监测某种物质的含量，以探索物质的结构和特征、研究新产品的性能等。
此外，免疫层析法具有灵敏度高、可重复性强、体积小等特点，且简便快捷、易于操作。
由于该方法的众多优势，如今已经成为分子生物学实验中最常用的一种技术，在药物研发、病原检测、蛋白质组学、基因表达定量研究等方面发挥着重要作用。
然而，由于免疫层析法受环境因素影响较大，抗原-抗体结合受抗体活性和抗原浓度限制，实验结果非常容易受到影响。
因此，在实验前应考虑加以控制，分析时应对抗体活性进行测定和校正，以确保实验的可靠性和准确性。
就目前而言，免疫层析法在药物研发、病原检测、蛋白质组学、基因表达定量研究等方面发挥着重要作用。
它的用途非常广泛，已经成为分子生物学实验中最常用的一种技术，在这方面取得了很大的成就。
pct免疫层析实验原理
pct免疫层析实验原理
PCT（procalcitonin）是一种内源性蛋白质，是钙卫素前体的一部分。
PCT可作为感染和炎症的标志物，能够帮助医生确定是否需要使用抗生素
等治疗方法。
PCT免疫层析实验是一种常见的检测PCT含量的方法。
原理是利用
PCT的特异性抗体与PCT结合生物学反应来检测样品中的PCT含量。
具体
实验流程如下：
1.将样品加入试剂盒中，和PCT单克隆抗体反应，形成夹心免疫复合
物（PCT-抗体-抗体）。
2.在一个特殊的“漫游卡条”上，将该复合物固定在测试区，形成一
条浅色的线。
未被PCT-抗体-抗体捕获的剩余抗体会继续向上漫游至控制区，形成一条深色的线。
3.经过一定时间后，将检测卡条放入检测仪中，通过检测卡条上的两
条线的颜色、强度、位置等信息，来判断样品中PCT的含量。
PCT免疫层析实验是一种简单、快速、灵敏的检测方法，它可以在20
分钟内完成，能够帮助医生快速地确定患者的病情。
斑点免疫层析试验报告
斑点免疫层析试验报告
一、实验目的
通过斑点免疫层析试验检测特定抗体的存在，判断样本中是否含有目标抗体。
二、实验原理
斑点免疫层析试验利用抗原与抗体的特异性结合性质，检测样本中是否存在与特定抗原结合的抗体。
在试验过程中，将包含目标抗原的蛋白质在膜上固定，待其干燥后滴加待检测样本，目标抗体与蛋白质结合，再加入掺杂有染色剂的检测抗体，与样本中的抗体结合后呈色，通过颜色变化来判断样本中是否含有目标抗体。
三、实验步骤
1.将含有目标抗原的蛋白质涂在膜上，在室温下静置1小时。
2.将膜表面上的蛋白质冲洗干净，并加入待检测样本。
3.样本和蛋白质在室温下结合30分钟。
4.将掺杂染色剂的检测抗体加入，与样本中含有目标抗体的检测位点结合。
5.再次冲洗样品，待染色剂充分浸染30分钟。
6.观察染料颜色的变化。
四、实验结果及分析
将待检测样品加入检测后，测定斑点颜色变化。
颜色变化为深棕色代表样品中含有目标抗体，未检测到颜色变化则代表样品中不含目标抗体。
五、实验结论
根据斑点颜色变化判断出待检测样品中存在/不存在目标抗体。
六、实验注意事项
1.斑点免疫层析试验产生的颜色变化取决于样品中的目标抗体
浓度。
如果样品中目标抗体浓度较低，则可能无法检测到颜色变化。
2.在试验过程中，一定要注意卫生和消毒，避免出现污染。
3.试剂的储存和使用必须遵从说明书的规定。
4.使用试剂前进行试剂准备，检查是否过期或损坏。
5.在试验过程中，必须严格按照实验步骤进行，避免试验失败。
胶体金免疫层析试验.ppt
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
胶体金免疫层析试验
选择题：
胶体金免疫层析试验是一种常用的什么类型的检测方法？
A. 物理学方法
B. 化学发光法
C. 免疫学方法（正确答案）
D. 分子生物学方法
在胶体金免疫层析试验中，胶体金主要作为什么使用？
A. 标记物（正确答案）
B. 反应底物
C. 催化剂
D. 抑制剂
胶体金免疫层析试验通常用于检测哪些类型的样本？
A. 土壤样本
B. 水质样本
C. 生物体液样本（正确答案）
D. 空气样本
下列哪项不是胶体金免疫层析试验的优点？
A. 灵敏度高
B. 操作复杂（正确答案）
C. 结果快速
D. 特异性好
胶体金免疫层析试验中的“层析”是指什么过程？
A. 胶体金与样本的混合过程
B. 标记物与抗体或抗原的结合过程
C. 标记物在固相载体上的迁移和分离过程（正确答案）
D. 样本的预处理过程
在胶体金免疫层析试验中，常用的固相载体是什么？
A. 玻璃片
B. 滤纸（正确答案）
C. 塑料管
D. 硅胶板
胶体金免疫层析试验可用于检测哪些疾病？
A. 所有疾病
B. 某些传染病和肿瘤（正确答案）
C. 仅限于心血管疾病
D. 仅限于神经系统疾病
下列哪项不是影响胶体金免疫层析试验结果的因素？
A. 样本的保存时间和方式
B. 操作人员的熟练程度
C. 试验环境的温度（正确答案）
D. 试剂的质量和有效期
胶体金免疫层析试验的结果判读通常依据什么？
A. 胶体金的颜色变化
B. 固相载体上的标记物分布（正确答案）
C. 样本的浑浊度
D. 反应时间的长短。
胶体金免疫层析法实验报告
胶体金免疫层析法实验报告胶体金免疫层析法实验报告胶体金免疫层析法是一种常用的生物化学实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
本实验旨在通过胶体金免疫层析法检测目标蛋白质的存在与浓度。
1. 实验原理胶体金免疫层析法基于抗原与抗体的特异性结合原理，利用胶体金颗粒的特殊性质进行检测。
胶体金颗粒具有较大的比表面积和表面增强效应，能够与抗体发生特异性结合。
当抗原与抗体结合形成免疫复合物时，会导致胶体金颗粒的聚集或分散，从而产生可见的颜色变化。
2. 实验步骤2.1 样品制备：将待检测的目标蛋白质样品进行提取和纯化，获取高纯度的目标蛋白质溶液。
2.2 胶体金标记：将胶体金颗粒与特异性抗体进行结合，形成胶体金-抗体复合物。
这一步需要注意控制反应条件，使得胶体金颗粒均匀分散，避免团聚。
2.3 免疫层析：将样品和胶体金-抗体复合物混合，使其发生特异性结合。
然后将混合物加载到层析柱中，通过重力或离心作用，将未结合的物质流出。
2.4 结果分析：观察层析柱中的颜色变化，根据颜色深浅判断目标蛋白质的存在与浓度。
3. 实验结果实验结果显示，当目标蛋白质存在于样品中时，胶体金颗粒会与其特异性抗体结合，导致胶体金颗粒聚集，层析柱呈现深色。
而当目标蛋白质不存在或浓度较低时，胶体金颗粒不会聚集，层析柱呈现浅色或无色。
4. 实验优势与应用胶体金免疫层析法具有以下几个优势：4.1 灵敏度高：胶体金颗粒具有较大的比表面积和表面增强效应，能够增强目标物的检测信号，提高灵敏度。
4.2 特异性强：通过特异性抗体与目标蛋白质结合，可以准确检测目标物，避免干扰物的干扰。
4.3 操作简便：实验步骤简单，无需复杂的仪器设备，适用于实验室和临床现场。
4.4 多样性应用：胶体金免疫层析法可用于检测血清中的生物标志物、药物残留、病原微生物等，广泛应用于临床诊断、食品安全和环境监测等领域。
5. 实验注意事项5.1 样品处理：样品的提取和纯化过程需要严格控制，以避免杂质的干扰。
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免疫层析试验
以双抗体夹心法测尿hCG 为例来介绍免疫层析试验的方法。
[目的]
(1) 掌握免疫层析试验的原理。
(2) 熟悉双抗体夹心法测尿hCG 的方法、结果判定及应用。
[原理]
抗hCG 免疫金复合物干片粘贴在试剂条近下端G区(图1- 17)，抗hCG 单克隆抗体和小鼠IgG 抗体分别固化于NC 膜的测试区(T区) 和质控参照区(C 区)。
当试纸条下端(A区) 浸入液体标本中，吸水材料即吸取液体，通过层析作用，液体向B 端移动，流经干片时，使抗hCG免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。
若标本中有hCG，可与抗hCG 免疫金复合物结合。
此抗原体复合物流至T 区时即被固相抗hCG 单克隆抗体所获，形成金标抗体一抗原一抗体复合物，在T 区显现出红色反应线条。
过剩的免疫金复合物继续前行，至C 区被固相抗小鼠IgG 捕获，呈现出红色质控线条。
[材料]
(1) “一步金”法早早孕妊娠诊断试纸条(有商品供应)。
(2) 孕妇尿液，待测尿液。
(3) 尿液收集杯等。
[方法]
(1) 将试剂条及待测标本置室温一定时间以充分复温。
(2) 从原包装铝箔袋中取出试剂条，将试剂条按箭头方向插人尿液标本中。
注意: 尿液液面不能超过试剂条的标记线。
(3) 约5 S 后取出放于干净平整的台面上观察，3 min 时读取结果，10 min 后判定无效。
在戏迟出死~条心线待技床样无h(G(阴临)
[结果判断]
1.阴性试剂条上仅质控区出现条紫红色线，在测试区内无紫红色线出现(图1- 18a)。
2.阳性试剂条上出现两条紫红色线，一条位于测试区内，另一条位于质控区内(图1-
18b)。
3.弱阳性试剂条测试区的线条颜色明显浅于质控区内的紫红色线，表明可疑，2 d 后应重
新测试，以免漏诊(图1- 18c)。
4.无效试剂条上无任何线条出现，或仅出现测试区线条而质控区未出现，表明操作过程不正确或试剂条已变质失效。