2020年人教版高中生物选修1专题2微生物培养和应用知识点总结
2020—2021学年高中生物选修一复习课件：专题二 微生物培养与应用 高中生物精品公开课
思 考:
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与 系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
答：应从操作的各个环节保证“无菌”。 1.酒精灯与培养皿的距离要合适； 2.吸管头不要接触任何其他物体； 3.要在火焰周围迅速操作。
将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到 370C的恒温箱中，培养12～24h后进行观察并记录结果。
二、纯化大肠杆菌——稀释涂布平板法
a.梯度稀释菌液：1ml Biblioteka ml 1ml 1ml 1ml 1ml
重复以上操作，在三、四、五区域内划 线。注意不要将最后一区的划线与第一 区相连。
左手将皿盖打开一条缝隙，右手将 沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，
划___3__至__5___条平行线，盖上皿盖。
注意不要划破培养基。
将入培平养板箱_倒_中_置_培_放
养。
将已_冷___却__的接种环伸
.
入菌液中蘸取一环菌液
微量移液器
101
102
103
104
105
106
菌液
注意：
6支试管，分别加入9ml无菌水
1.移液管需要经过灭菌
2.操作时，试管口和移液管应在离火焰1-2CM处
二、纯化大肠杆菌——稀释涂布平板法
b.涂布平板：
1、从酒精中取出涂布器时，要让其上多余的酒精滴 尽，然后 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃
2、所有操作都应在火焰附近进行
较为温和理化方法， 强烈的理化方法，
高中生物选修一：2.1微生物的培养与应用
纯化微生物：每次划线前的灼烧，为杀死上次残留的菌种，
保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划 线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次 划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
四、 纯化大肠杆菌（微生物的接种） （一）平板划线法
接种针、钩、环
二、 无菌技术
2)干热灭菌
干热灭菌箱内160～170℃ 1～2小时，适 用于耐高温、需保持干燥的物品（吸管、 培养皿）和金属用具等。
3)高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅内100KPa、121℃、 15～30min；适用于培养基、水的灭菌。
灭菌完毕后，若压力未降到零就打开气阀， 利用干热灭菌箱和高压蒸汽灭菌锅灭菌时， 高压蒸汽灭菌前，为什么要将灭菌锅内的 超 会出现什么现象？为什么？ 物品不能摆的太挤，为什么？ 冷空气排尽？ 净 工 利于温度升高。若冷空气未排尽，当压力升 灭菌容器内的液体冲出容器。因为灭菌锅内 作 时，锅内温度不会上升到应有高度， 到100kpa 以免妨碍热空气或蒸汽的流通 外压力不平衡的缘故 台 导致灭菌不彻底
孢子：细菌的生殖细胞
细菌芽孢的结构模式图
（五）菌落
菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细
胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形 成肉眼可见的子细胞群体。 菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。 菌落是鉴定菌种的重要依据。
（六）病毒的繁殖
吸附
注入
合成
释放
组装
噬菌斑即噬菌体侵染细菌细胞，导 致寄主细胞溶解死亡，因而在琼脂培养 基表面形成的肉眼可见的透明小圆斑 （“负菌落”）。 在适当条件下，一个噬菌体形成一 个噬菌斑。
人教版高中生物选修1知识点总结
第 1 页 共 22 页 高中生物选修一生物技术实践 知识点总结专题一 传统发酵技术的应用 课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C 6H 12O 6＋6O 2→6CO 2＋6H 2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C 6H 12O 6→2C 2H 5OH ＋2CO 26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2C 2H 5OH ＋4O 2→CH 3COOH ＋6H 2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2ｍL ，再滴入物质的量浓度为3mol/L 的H 2SO 43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色 酶酶酶13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
高中生物选修一知识点总结
高中生物选修一生物技术实践知识点总结专题一传统发酵技术的应用1、：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、果酒制作中用到的微生物是，它是生物，代谢类型为，其生殖方式分为有性繁殖和无性繁殖，其中无性繁殖主要是，也有分裂生殖和孢子生殖。
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，。
方程式为在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
方程式为。
左右最适宜酵母菌繁殖，酒精发酵时一般将温度控制在。
在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是，在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,,使葡萄酒呈现深红色.3、果醋制作中用到的微生物是，它是生物，代谢类型是,生殖方式为。
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为，再将其变为醋酸。
醋酸菌最适生长温度为，控制好发酵温度使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
4、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）5、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是。
使用该装置制果酒时，应该；制果醋时，应该6、发酵产物的检测：酒精检验：可以用来检验。
在条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现。
7、发酵过程中的注意事项：发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒，果酒制作时要注意排气，每次排气时只需瓶盖，不要完全揭开瓶盖；果醋制作时要注意一直通入，因为醋酸菌对氧气的含量特别敏感，进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
专题二微生物的培养与应用1、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基、、。
在液体培养基中加入凝固剂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
高中生物微生物的培养与应用2
加棉塞 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它 可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些 微生物的休眠体，同时可以基本保持培养 基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌 。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污 染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子 塞属口、，塑通料常及采硅用胶培 加 染帽棉养 一 ，，花基 个 保分 棉 证它塞装 塞 通们，完 。 气也只毕 棉 良可可以塞好采让后能，用空，防加各气在止棉种通杂管塞菌口时金过污上， ，而空气中的其应他使微棉塞生长物度不的能2通／3过在。试管口内，
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室 中培养24—48小时，以检查灭菌是 否彻底。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃ 左右时，才能用来倒平板。你用什么 办法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥 形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚 不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过 火焰？
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳 水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成 本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细 胞生长需要。
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想 使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然 培养基（如血清）。————半合成培养基
血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶 原蛋白等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
定义
常用方法
微生物培养和组 培中的应用
消 使用较为温和 煮沸
玻璃仪器
毒 的物理或化学 紫外线
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高中生物选修一生物技术实践知识点总结专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培育来生产大量代谢产物的进程。
2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(要紧) 割裂生殖孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁衍。
C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C6H12O6→2C2H5OH＋2CO26、20℃左右最适宜酵母菌繁衍酒精发酵时一样将温度操纵在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的进程中,起要紧作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵进程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌能够生长繁衍，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二割裂9、当氧气、糖源都充沛时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变成乙醛，再将乙醛变成醋酸。
2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O 10、操纵发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量专门灵敏，当进行深层发酵时，即便只是短时刻中断通入氧气，也会引发醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，操纵好发酵温度，使发酵时刻缩短，又减少杂菌污染的机遇。
③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）12、酒精查验：果汁发酵后是不是有酒精产生，能够用重铬酸钾来查验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反映呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2ｍL，再滴入物质的量浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观看颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
人教版高级高中生物选修一专题二微生物的培养与应用知识点归纳
人教版高级高中生物选修一专题二微生物的培养与应用知识点归纳文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
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高中生物选修一生物技术实践 知识点总结课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵：醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵 乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C 6H 12O 6＋6O 2→6CO 2＋6H 2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C 6H 12O 6→2C 2H 5OH ＋2CO 26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
2C 2H 5OH ＋4O 2→CH 3COOH ＋6H 2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2ｍL ，再滴入物质的量浓度为3mol/L 的H 2SO 43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
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课题 1 微生物的实验室培养一、培养基 1． 培养基的类型及其应用：标准 培养基类型配制特点主要应用固体培养基加入凝固剂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养 物理性质基加入凝固剂较少菌种保存液体培养基不加入凝固剂工业生产，连续培养合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定化学组成 天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明 工业生，产降低成本确鉴别培养基 目的用途选择培养基添加某种指示剂或化学药剂 添加（或缺少）某种化学成分菌种的鉴别 菌种的分离2、琼脂是从红藻中提取的_多糖__________，在配制培养基中用作为____凝固剂_____ __。
3、培养基的化学成分一般含有__水_______________、________无机盐______________、 ____________碳源_____、________氮源 ________四类营养成分。
培养基成分还需满足微生物生长对__pH_________、_特殊营养物质________、氧气_______ 等要求。
4、牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供____碳源、氮源、维生素_______ ___________ ___________ 等营养物质。
5、培养乳酸杆菌时需要添加__维生素_________ ，培养霉菌时需要将培养基 pH 调节 为____酸性_______ ___________ ，培养细菌时需要将 pH 调节为 __中性或微碱性 _________ ___________ 。
6、培养基的配制原则：① 目的 制量。
要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配② 营养 要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。
③ pH 酸性。
要适宜：细菌培养基 pH 呈 中性或微碱性性，霉菌培养基呈二、无菌技术1．获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵。
2、 无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近___________ _______ 进 行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与______周围物品_____ 相接触。
3、比较消毒和灭菌（填表）比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭消毒较温和部分微生物一般不能灭菌强烈所有微生物能4、无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是__有效避免操作者自身被微生 物感染和污染环境____________________。
5、消毒方法： （1）日常生活经常用到的是___煮沸________ 消毒法； （2）对一些不耐高温的液体，则使用____巴氏_______ 消毒法；温度 70-75煮 30 分钟时间，或者 80°煮 C15 分钟（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 ___石炭酸或煤酚皂________等溶液以增强消毒效果，然后使用 _紫外线照射 30 分钟__________ 进行物理消毒。
（4）实验操作者的双手使用__酒精_________进行消毒；（5）饮水水源用___氯气________进行消毒。
6、灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用__灼烧_________灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用 干热灭菌法。
（3）培养基、无菌水等使用 灭菌锅__________ 。
高压蒸汽灭菌法，所用器械是 _高压蒸汽（4）表面灭菌和空气灭菌等使用__紫外线_________ 灭菌法。
7、对接种环灭菌时要用酒精灯的 __充分燃烧________ 层火焰灼烧可能伸入试管或 培养皿的部位。
8、利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是 避免影响热空气流通9、物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的 是_____让锅内温度迅速升高______ ___________ ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ________100k___ Pa，温度为__121_°C________ ，并维持 __15-30 分钟_________；最 后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至___零________ 时打开锅盖，其目的是防止 ____容器内的液体会冲出容器，造成污染_。
_____ ___________三、大肠杆菌的纯化培养1、包括： 制备培养基 阶段和 纯化大肠杆菌两个2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 步骤：2.1 计算 ：根据配方比例，计算 100mL 培养基各成分用量。
2.2 称量：准确称取各成分。
称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速潮。
，目的是防止吸2．3 溶化：①加水加热溶化 牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入 琼脂 ；整个过程不断用玻棒搅拌，目的是 防止琼脂糊底而使烧杯破裂④用蒸馏水定容到 100mL。
2．4 调 pH：用 1mol/LNaOH 溶液调节 pH 至 中性或微碱性。
2．5 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用 高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用 干热灭菌箱灭菌。
2．6 倒平板：待培养基冷却至 50°C左右时在酒精灯 火焰附近操作进行。
其过程是：② 在 酒精灯火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口 迅速通过火焰；③左手将培养皿打开一条 稍大于瓶口的缝隙 刻 盖上皿盖 。
，右手将培养基倒入培养皿，立③ 待平板冷却凝固后，将平板 倒过来 放置。
④ 平板倒置的目的是___既可以防止皿盖上的冷凝水落入培养基，又可以避免培养基 水分过快的挥发______________________________________。
3、纯化大肠杆菌1）微生物接种的最常用方法是___平板划线法________和__稀释涂布平板法_________，另 外还有___斜面接种________和_穿刺接种__________等。
2）平板划线法：通过 接种环 逐步稀释分散在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种 到培养基表面。
数次划线培养后，分离到单个菌落。
其操作步骤是：② 将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至 接种环 烧红。
②在 火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③ 将菌种试管口通过火焰。
④ 将 已 冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。
⑤ 将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥ 将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划 3～5 条__平行线_________线，盖上 皿盖，不要划破培养基。
⑦ 灼烧接种环，冷却后从第一区划线 末端开始向第二区域内划线。
重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。
注意不要将第五区的划线与第一区划线 相连。
⑧ 将平板 倒置放在培养箱中培养。
取菌种前灼烧接种环的目的是__避免接种环上可能存在的微生物污染培养物_______；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是 杀死上一次划线后残留在接种环上的菌种 ，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是 防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是 杀死接种环上残留菌种，防止污染环境 和感染操作者 在第 1 次划线后都从上次划线末端开始的目的是____划线后，线条末端的细菌数目比起始 处要少。
每次从上一次末端开始划线，能够使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最 终分散成单个菌落__________________________________。
3） 稀释涂布平板法：将菌液进行 一系列的梯度稀释 ，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培 养。
当稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，即可获得单个菌落系列稀释操作：② 取盛有 9mL 水的 灭菌试管6 支，编号 101、102、103、104、105、106。
②用灭菌的移液管吸取 1mL 菌液注入编号为 101 试管中，并吹吸 3 次，使菌液和水分充 分混匀。
③从 101 倍液中吸取 1mL 菌液注入到编号为 102 试管内吹吸均匀，获得 102 倍液。
依此类 推。
4）操作中试管口和移液管应在离火焰 1-2cm处。
整个操作过程中使用了 1 支移液管。
涂布平板的操作：将涂布器浸在盛有 酒精 的烧杯中，取少量菌液（不超过 0.1mL），滴加到培养基表面，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上 引燃，待酒精燃尽后， 冷却8-10s，用将菌液均匀的涂布在培养基表面。
涂布时可 转动培养皿，使菌液分布 均匀。
注意：培养未接种培养基：作用是 对照 制备成功，可以使用；若有菌落产生结果：若无菌落产生 ，则培养基灭菌不彻底。
则，培养基四、菌种保藏：1、频繁使用的菌种利用 临时保藏法保存，利用 固体斜面 培养基培养后，保存在 4°C冰箱中，每 3～6 个月转种培养一次。
缺点是保存时间不长 ，容易 被污染或产生变异；2、长期保存菌种的方法是甘油管藏 法。
将菌种与无菌体积等量甘油 混合后保存在 -20℃ 冷冻箱中。
课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株1、 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为 ___热泉的高温条件淘汰了绝大多 数微生物 ________ ___________ ___________ ___________ 。
2、原理：人为提供有利于目的菌株 生长的条件（包括_营养、温度、PH__等），同时 抑制或阻止 其他微生物生长 。
3、选择培养基是指允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基。
4、 尿素是一种重要的氮肥，农作物____不能_______（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 氨 和 CO2，这是因为细菌能合成 脲酶。
方程式：5、 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助_生物化学__________的方法。
6、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的_脲酶__________将尿素分解成了_______ 氨和 CO2____。
氨会使培养基的碱性__增强_________，PH___升高________。
因此，我们可 以通过检测培养基_pH__________变化来判断该化学反应是否发生。
7、 在以___尿素________为唯一氮源的培养基中加入_酚红__________指示剂。
培养 某种细菌后，如果 PH 升高，指示剂将变__红_________，说明该细菌能够 ____分解尿素__。
二、统计菌落数目1、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是___稀释涂布平板法_____。
除此之外， ____显微镜直接计数法_______ 也是测定微生物数量的常用方法。