蛋白质磷酸化
蛋白磷酸化的名词解释
蛋白磷酸化的名词解释蛋白磷酸化是一种重要的细胞信号传导过程，它在调控蛋白功能、细胞生理和病理过程中起着关键作用。
磷酸化是一种化学修饰，通过在蛋白质分子上加上磷酸基团改变其结构和功能。
一、蛋白磷酸化的基本概念蛋白磷酸化是指将磷酸基团（PO4）连接到蛋白质的氨基酸残基上。
磷酸化可以发生在多种氨基酸残基上，包括丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）。
这个化学修饰过程由蛋白激酶（protein kinase）和蛋白磷酸酶（protein phosphatase）这两类酶催化进行。
二、蛋白磷酸化的功能蛋白磷酸化在调控细胞的多种生理过程中起着重要作用。
它可以调节蛋白质的酶活性、亚细胞定位、特异性结合以及稳定性。
这种化学修饰可以改变蛋白质的电荷分布和构象，从而调控它们与其他蛋白质、DNA或小分子的相互作用。
1. 调节酶活性：许多蛋白激酶通过磷酸化来激活或抑制底物的酶活性。
例如，丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine kinase）可以磷酸化肌球蛋白，进而改变细胞骨架的结构和细胞形态。
另外，酪氨酸激酶可以磷酸化细胞表面受体，从而触发细胞信号通路。
2. 调节亚细胞定位：磷酸化可以改变蛋白质的亚细胞定位，影响它们在细胞内的分布。
例如，磷酸化可以使特定的核转录因子转入或转出细胞核，从而影响基因的转录。
此外，它还可以调节细胞骨架的动态重组，参与细胞的形态变化和迁移。
3. 调节特异性结合：蛋白磷酸化可以改变蛋白质与其他分子的结合能力。
例如，磷酸化可以促使某些蛋白质与DNA结合或解离，从而影响基因的表达。
此外，它还可以调节蛋白质与其他蛋白质之间的相互作用，介导细胞信号转导。
4. 调节蛋白稳定性：磷酸化可以影响蛋白质的降解速率。
一些磷酸化位点的出现或消失可以增加或降低蛋白质的稳定性。
这种调控方式在一些疾病的发生中起着重要作用，如肿瘤的发生和进展。
三、蛋白磷酸化与人类疾病蛋白磷酸化异常与多种人类疾病的发生和进展相关。
蛋白质的磷酸化和修饰
蛋白质的磷酸化和修饰
蛋白质是机体重要的生物大分子之一，是构成细胞器官、组织
器官、细胞膜和某些激素等多种生物活性物质的基础。
而蛋白质的磷酸化（Phosphorylation）及修饰也成为研究对象
之一。
磷酸化是指通过蛋白激酶作用，将单磷酸（如ADP）转移给蛋白质的一种共价修饰方式，磷酸化后的蛋白质分子具有更强的生
物活性，可以催化更多底物的反应，促进细胞正常生理活动的进行。
许多蛋白质在磷酸化后会发生结构和功能的改变，比如许多酶
在磷酸化后会活性增强，增强催化能力。
蛋白的折叠状态、结构、亲水性、疏水性、受体结构等方面都能被磷酸化过程所改变，反
过来这些改变也可以调节蛋白的活性从而参与，乃至于控制细胞
的生长和分化。
磷酸化一般发生在氨基酸残基的氢原子和羟基之间，通过混合
酸酸催化反应来将磷酸基团引入到大分子中。
而常见的磷酸化发
生在天冬酸（Asp）、丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）等的羟基上，其中丝氨酸的磷酸化是最为普遍的，好在丝氨酸在蛋白质链中极
其常见。
目前，磷酸化在多种生理过程中都起着非常重要的调控机制，
如信号转导、新陈代谢、基因转录等，是一种广泛应用在细胞信
号与代谢调控中的特殊分子修饰方式。
除磷酸化外，蛋白质的修饰还包括糖基化、乙酰化、甲基化和
磷酰化等。
其中，磷酰化中的降钙素/钙蛋白信号通路修饰是常见
的一种，激活信号通路乃至于参与胚胎发育、细胞凋亡等。
在各种疾病的迅速发展下，研究不断深入，磷酸化等修饰和自
身的意义也逐渐得到了更深层次的解读和探究。
对磷酸化等修饰
的广泛应用可能开启了更加宏大的医学研究之路。
蛋白质结构中的磷酸化修饰
蛋白质结构中的磷酸化修饰蛋白质是生物体中最为基本的分子，它们能够发挥许多生物学功能。
然而，一种单一的蛋白质分子并不一定只有一种构象，因为它们可以通过某些化学修饰而协同进化。
其中，磷酸化修饰因其潜在的功能增强效果而成为了一个广泛讨论的主题。
磷酸化修饰是指一种常见的生物化学修饰方式，它通过添加磷酸基团来改变蛋白质分子的结构和功能。
磷酸基团的附加可以在许多不同的氨基酸上发生，主要是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。
此外，还有其他较少见的氨基酸，如赖氨酸和组氨酸。
虽然磷酸化好像只是一种小小的改变，但它却可以广泛影响蛋白质分子的转录、转导、代谢和运动功能。
具体来说，磷酸化能够引起蛋白质分子的构象改变，从而影响其结构和功能。
磷酸化修饰还会影响蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核酸相互作用以及酶活性，从而进一步调节了各种生理过程。
举例来说，许多重要的细胞信号传导通路的激活都是由蛋白质磷酸化激酶引发的。
在这些过程中，细胞表面或胞内蛋白质的磷酸化修饰能够激活或抑制特定的蛋白质，从而导致通路的激活或抑制。
此外，磷酸化还可以扩大蛋白质分子的功能，例如增加它们的亲水性、稳定性和可溶性，并能在某些情况下影响它们的转运性质或者自身聚集。
对于真核生物，磷酸化还可以引起蛋白质的转位，这将影响到它们在细胞中的位置和功能。
许多磷酸化修饰还可以在其他类型的化学修饰中扮演关键角色。
虽然磷酸化修饰是一个广泛讨论的主题，其调节机制仍然理解不足。
此外，还有很多问题需要解决，例如当有多个氨基酸同时被磷酸化修饰会发生什么、靶位点的磷酸化修饰是加法还是乘法、磷酸化修饰是否可以被种类繁多的蛋白质磷酸酯酶去除等等。
因此还需要进一步的研究来完全理解磷酸化修饰的生物学作用。
综上所述，磷酸化修饰是一种重要的蛋白质化学修饰方式，可通过改变蛋白质分子的结构和功能来影响各种生理过程。
虽然已经对这种修饰方式的许多作用有了很好的认识，但磷酸化的调节机制仍然需要进一步探索。
期待未来更深入的研究，在生物学和医学研究领域中，通过对磷酸化修饰的研究来发掘更多新信息。
化学方法蛋白去磷酸化
化学方法蛋白去磷酸化
蛋白质磷酸化是一种重要的后转录修饰过程，它在细胞信号转导、细胞周期调控、细胞分化和凋亡等生物学过程中起着关键作用。
蛋白质磷酸化的研究对于深入了解细胞功能和疾病机制具有重要意义。
以下是一些常用的化学方法用于蛋白质去磷酸化。
1. 碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase）处理，碱性磷酸酶是
一种常用的酶，它能够去除蛋白质上的磷酸基团。
将含磷酸化的蛋
白质与碱性磷酸酶一起孵育，酶会催化磷酸基团的水解，从而实现
蛋白质去磷酸化。
2. 酸性磷酸酶（Acid Phosphatase）处理，类似于碱性磷酸酶，酸性磷酸酶也能够催化蛋白质上的磷酸基团的水解。
该方法适用于
对特定磷酸化位点的去磷酸化。
3. 热酸处理，将蛋白质样品在酸性条件下加热处理，可以促使
磷酸基团的水解。
这种方法适用于一般性的蛋白质去磷酸化。
4. 强还原剂处理，一些强还原剂如二巯基甲酰乙酸（DTT）或
巯基乙醇（β-ME）可以还原蛋白质上的磷酸基团，从而实现蛋白质
去磷酸化。
5. 选择性磷酸酶抑制剂，某些磷酸酶抑制剂可以选择性地抑制
特定的磷酸酶，从而实现对蛋白质特定位点的去磷酸化。
需要注意的是，选择合适的方法取决于研究的具体目的和样品
的特性。
在进行蛋白质去磷酸化实验时，需要仔细优化实验条件，
控制实验的时间和温度，以确保去磷酸化的效果和特异性。
总结起来，蛋白质去磷酸化可以通过碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、热酸处理、强还原剂处理和选择性磷酸酶抑制剂等多种化学方法来
实现。
这些方法的选择应根据具体需求和实验条件来确定。
什么是磷酸化蛋白质组学
什么是磷酸化蛋白质组学为什么磷酸化蛋白质组学很重要？DNA转录成mRNA再翻译成具有特定氨基酸序列的蛋白质才能在体内发挥作用，而这些蛋白质中的大多数通常需要化学修饰才能发挥作用，即翻译后修饰（PTM）。
翻译后修饰是在蛋白质的氨基酸序列中加入特定的氨基酸或改变特定的化学官能团，从而改变蛋白质结构的过程。
目前已发现三百多种潜在的PTM类型，同一个蛋白具有多个不同修饰位点，有利于形成结构和功能不同的蛋白质。
什么是磷酸化修饰？在众多PTM类型中，磷酸化修饰约占所有蛋白质的三分之一，是最普遍的修饰类型之一。
它影响细胞内信号转导、细胞结构、细胞增殖、细胞凋亡、转录、代谢过程以及病原微生物适应能力的调节等。
因此，不同细胞的蛋白质磷酸化水平不同，特定部位的磷酸化水平可能从不到1%到90%以上。
磷酸化的过程是在激酶的催化下，将三磷酸腺苷的磷酸基团转移到蛋白质的氨基酸侧链上，然后三磷酸腺苷变成二磷酸腺苷。
对于大多数蛋白质来说，磷酸化修饰是一种可逆的瞬时修饰。
当蛋白质的某个部位帮助蛋白质完成任务时，蛋白质就会在磷酸酶的作用下被去磷酸化，就像蛋白质功能的一种“开关”，少量的磷酸化就是永久性的修饰。
多种氨基酸残基均可发生磷酸化修饰，可分为四类：1.丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、羟脯氨酸的羟基残基发生O-磷酸化；2.酸、赖氨酸残基上的组氨酸N-磷酸化；3.半胱氨酸残基的S-磷酸化；4.天冬氨酸、谷氨酸残基的酰基磷酸化。
磷酸化蛋白质组学应用磷酸化蛋白质组学是对磷酸化蛋白质的综合分析，包括磷酸化的鉴定、定位和定量。
药物。
利用质谱法已经在人类细胞中识别出超过10万种不同的磷酸化修饰，这些修饰可能会影响每种蛋白质的功能。
许多研究表明，一些重要生物标记物的磷酸化在肺癌、皮肤癌、慢性髓系白血病、阿尔茨海默病和糖尿病等疾病中调节失调。
例如2019年发表在《Nature》上的一篇文章利用磷酸化蛋白结合蛋白质组学、转录组学和全基因组测序寻找早期肝癌的新治疗靶点。
磷酸化受磷蛋白
磷酸化受磷蛋白
磷酸化是一种常见的蛋白质修饰方式，可以通过磷酸化酶将磷酸基团转移到蛋白质上，从而改变蛋白质的活性和功能。
受磷蛋白是一种与磷酸化相关的蛋白质，其磷酸化水平可以通过特定的磷酸化位点进行检测。
受磷蛋白在细胞信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡和肿瘤发生等方面具有重要作用。
其磷酸化水平的变化可以影响受磷蛋白的功能，进而影响细胞的各种生理活动。
因此，检测受磷蛋白的磷酸化水平对于研究细胞生理和疾病机制具有重要意义。
通过使用各种磷酸化抗体和技术，可以定量或定性检测受磷蛋白磷酸化的状态，进而揭示其在特定生理或病理过程中的作用。
如果您需要了解更多关于受磷蛋白磷酸化的信息，建议您查阅相关文献或咨询生物化学领域的专家。
常见的蛋白质磷酸化位点
常见的蛋白质磷酸化位点
蛋白质磷酸化是一种常见的后转录修饰方式，可以改变蛋白质的结构和功能。
在细胞信号传导和代谢调节等生物学过程中，磷酸化是一种重要的调节机制。
以下是一些常见的蛋白质磷酸化位点：
1. 丝氨酸磷酸化位点：丝氨酸是最常见的磷酸化位点之一，能够影响蛋白质的构象和功能。
2. 酪氨酸磷酸化位点：酪氨酸磷酸化常被用于调节酪氨酸激酶的活性，从而影响信号传导和细胞增殖。
3. 赖氨酸磷酸化位点：虽然赖氨酸磷酸化不太常见，但在某些蛋白质中也会出现，并被认为与细胞周期和增殖有关。
4. 鸟氨酸磷酸化位点：鸟氨酸磷酸化在很多生物过程中都发挥了重要功能，包括细胞凋亡、代谢调节和信号传导等。
以上是一些常见的蛋白质磷酸化位点，了解这些位点对于理解细胞信号传导和调节机制非常重要。
- 1 -。
蛋白质磷酸化修饰的生物学意义
蛋白质磷酸化修饰的生物学意义磷酸化是指将磷酸基团转移给某些生物分子的反应。
在细胞内的调控过程中，磷酸化是一种非常常见的修饰方式。
磷酸化后会影响受体、酶、元件以及其他蛋白质的结构和功能，因此在细胞信号转导、代谢、细胞分裂等多个过程中发挥着重要的作用。
其中，蛋白质磷酸化修饰与信号转导密切相关，是生物学领域的研究热点之一。
蛋白质磷酸化修饰的机制蛋白质磷酸化是一种广泛存在于细胞内的修饰方式，磷酸基团的转移一般由蛋白激酶完成，而去磷酸化则由蛋白磷酸酶来完成。
基本的机制是：蛋白激酶对特定的蛋白底物进行磷酸化修饰，而这个过程是可逆的。
当信号分子到达受体处时，会激活受体和激酶，进而引起了下游分子的磷酸化修饰，从而发挥一定的生物学作用。
蛋白质磷酸化修饰的生物学功能蛋白质磷酸化修饰通过改变蛋白质的构造或功能来调节不同代谢途径，从而完成生物学功能。
例如，磷酸化状态可以影响酶的激活与失活，使其从一个酶形式转变为另一种酶，或者使底物可以结合酶，从而促进反应发生。
另外，磷酸化还可以影响蛋白质与其他生物分子的相互作用，如DNA结合、蛋白质底物结合和蛋白质互相作用等。
蛋白质磷酸化还可以影响细胞的生长、分化和凋亡，是细胞信号转导中非常重要的一环。
蛋白质磷酸化修饰与疾病蛋白质磷酸化修饰在疾病的发生和发展中也有关键作用，例如，在白血病的发病机制中，磷酸化调节了BCR-ABL复合物的结构和功能，从而促进了细胞增殖。
在肿瘤形成过程中，一些细胞内生化事件的调控机制失常，使得癌细胞能够过度活跃，进而形成恶性肿瘤。
因此，通过磷酸化修饰控制肽酶、激酶、转录因子等分子活性，可能是研究和治疗癌症的一条重要路径。
总结蛋白质磷酸化修饰在生命活动中发挥着非常重要的作用，它可以影响细胞信号转导、代谢、细胞分裂等多个过程。
蛋白质磷酸化修饰通过改变蛋白质的构造和功能来调节不同代谢途径，从而完成生物学功能。
随着研究的深入，磷酸化作为一种独特的信号转导方式将会为治疗一些病症提供新的思路和方法。
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（续表） PhosphoSitePlusTM PHOSPHONET
/ homeAction.do
该数据库是PhosphoSite的新版，它是 基于网络的数据库，主要收集的是蛋白
该数据库是磷酸化位点的三维结构数据 库，储存了来自phospho.ELM 数据库 的信息，在结构和氨基酸残基水平的信 息非常丰富。
/ PPEP/
该数据库是由10类磷酸化蛋白结合域 （PPBD）介导的人的蛋白-蛋白相互作 用数据库。
27
生命奥秘
残基水平
cSNP 蛋白质 数据库 dbSNP和蛋白质 数据库
表4 预测非特异性或组织特异性磷酸化位点的工具
数据库名称 NetPhos 2.0 CRP[63]
DISPHOS 1.3 NetPhosYeast 1.0 NetPhosBac 1.0
网址
http://www.cbs.dtu.dk/ services/NetPhos/
生命奥秘
3.3.2 同位素代谢标记技术
15N标记法（15N labeling）是Oda等人最早提出的一种同位素代谢标记技术，它是在培养基中分别掺入 14N和15N来寻找差异表达蛋白的一种方法。虽然该方法非常适用于追踪单个磷酸化位点的动力学变化，但它 仅限于分析那些表达水平相对较高的蛋白质。SILAC（stable isotope labeling by amino acid in cellculture） 技术[25]出现以后，很快取代了15N标记法。SILAC技术，即细胞培养过程中氨基酸的稳定同位素标记，具有显 著的优点（表2），因而迅速获得认可并在国际著名实验室中广泛使用。已经使用过的稳定同位素标记氨基酸 有精氨酸（Arg）、赖氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）和亮氨酸（Leu）等。
的综合性数据库，它包含4,195种磷酸化 蛋白，带有15,738个磷酸化位点。
/search. php
该数据库是预测体内激酶-底物关系的 工具，有助于深入了解激酶和磷酸化蛋 白。它是发展磷酸化调节网络的重要资 源和门户。
http://cbm.bio.uniroma2.it/ phospho3d/
衔接，并将继续发展为磷酸化蛋白质组
学的重要资源库。
PHOSIDA
PhosphoPep version2.0 PhosPhAt 2.2 P(3)DB SwissProt knowledgebase PhosphoPOINT NetworKIN
phospho3D PepCyberP~Pep
/
pkaPS/
点。
http://www.ptools.ua.ac.be/ 该工具可预测激酶特异性磷酸化位点，是免费的学
CRPhos
术资源，并且能够被Linux/Unix系统所兼容。
AutoMotif 2.0
http://ams2.bioinfo.pl/
该工具可鉴定包括磷酸化在内的转录后修饰位点。
SMALI
该数据库是一个磷酸化位点数据库，整 合了几千种可信度较高的体内磷酸化位 点的数据，这些数据来自不同种属的质 谱测试结果。对于每一个磷酸化位点， PHOSIDA均列出匹配的酶模块，预测 二级结构，保守模式以及在刺激作用下 的动力学调整，还可以在一定条件下预 测非特异性的磷酸化位点。
/
PhosphoBlast[67]
/ pELMBlastSearch.html
有了该工具，用户可以查询目的蛋白相关的磷酸 化短肽。
RLIMS-P KEA DOG 1.0
特征描述
该工具包含描述蛋白域、家族、功能位点以及鉴定 这些信息的模式和图解。
该数据库是预测真核蛋白功能位点的数据库。
该工具用来分析蛋白的短期功能模块，用以描述蛋 白的转录后修饰，与其它蛋白、核酸、小分子蛋白 的结合以及蛋白运输过程。
PhosphoMotif Finder
PREDIKIN 1.0[64]
http://www.phoscan.ca/
一种在线工具，用于预测激酶特异性磷酸化位点， 目前这种工具已被应用于BDT。
该工具用于预测现有蛋白序列的激酶特异性磷酸化 位点。
该工具是KinasePhos的新版本。
该工具预测激酶特异性磷酸化位点并带有序列特 征。
pkaPS CRPhos 0.8
http://mendel.imp.ac.at/sat/ 该工具采用简化的激酶结合模型预测PKA磷酸化位
该服务器用于预测细菌蛋白丝氨酸和苏氨酸磷酸化 位点。
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表5 预测激酶特异性磷酸化位点或磷酸结合基序的工具
数据库名称
PROSITE ELM
Minimotif Miner （MnM）
网址
http://www.expasy.ch/prosite/ /
/ MNM/SMSSearchServlet
六、磷酸化蛋白质组学数据库及应用工具
表3~表7列出了部分磷酸化蛋白质组学数据库及应用工具的名称、网址及其特征。
数据库名称
Phospho.ELM 8.1 （PhosphoBase）
表3 磷酸化数据库
网址
特征描述
/ about.html
该数据库包含4,384种实验已确证的磷酸 化蛋白。这些蛋白来自不同种属，带有
修饰位点方面的数据，包括文献和高通
量开发过程中发现的蛋白磷酸化位点。 目前，该数据库包含66,045个磷酸化位 点。
http://phosphonet.ca/Default. aspx?AspxAutoDetectCookie Support=1
该数据库目前拥有来自5,350人的蛋白上 超过26,000个磷酸化位点的数据。这个 数据库能够与几种相关的重要数据库相
该数据库收录了4个物种的质谱磷酸化 数据，包括果蝇、人类、线虫以及酵
母。
http://phosphat.mpimp-golm. mpg.de/
该数据库收录了拟南芥磷酸化位点的数 据。这些数据来自全世界多个研究小组 的6,282条磷酸肽的质谱测试结果。
/
该数据库收录了多种植物的蛋白磷酸化
http://lilab.uwo.ca/SMALI.htm
该工具可搜索人蛋白中最有可能与SH2结构域结合 的短肽配体。
29
生命奥秘
表6 其它相关计算工具
数据库名称 Motif-X
网址
http://motif-x.med.harvard. edu/
特征描述
该工具是一种用于提取任何序列数据组中过度反 应模式的软件工具。
/
该工具用于寻找蛋白内最有可能被特定的蛋白激酶 磷酸化的位点。
http://www.cbs.dtu.dk/ services/NetPhosK/
http://phosphovariant. ngri.go.kr/seq_input_ predphospho2.htm?PHPSES SID=0e390b13ed30d0beaf5a2 d42896c993e
http://www.cbs.dtu.dk/ services/NetPhosYeast/
http://www.cbs.dtu.dk/ services/NetPhosBac-1.0/
该工具采用无序信息提高磷酸化和非磷酸化位点间 的分辨率，预测蛋白中丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的 磷酸化位点。
该工具用于预测酵母蛋白丝氨酸和苏氨酸磷酸化位 点。
特征描述
该工具用于预测真核蛋白在神经网络中的丝氨酸、 苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点。
http://fasta.bioch.virginia. edu/crp/
该工具用于执行溶解性蛋白裂解，报告预测好的
Edman循环，一旦有特定的丝氨酸、苏氨酸或酪氨 酸被磷酸化，就可以观察到相应的放射性现象。
/ pred/pred.html
/
该神经网络用于预测激酶特异性的真核蛋白磷酸化 位点。
该工具被应用于SVM计算法则，能够预测激酶特 异性磷酸化位点。
该工具是GPS系统的最新版本，能够预测408种人 蛋白激酶的特异性磷酸化位点。
/
http://kinasephos.mbc.nctu. edu.tw/ http://kinasephos2.mbc.nctu. edu.tw/Comparison.html
a.基因表达（皮尔森相关系数） b.模块基因和多基因 c.基因本体（相似性）
激酶 （518）
2,947 3,974
423
1,911
蛋白水平
相互作用的蛋白 （类别1）
相互作用的磷酸-蛋白 （类别2）
已知的底物 （类别3）
相互作用的磷酸-蛋白 及已知底物 （类别4）
蛋白与蛋白相互作用 以பைடு நூலகம்磷酸化
图16 PhosphoPOINT是人类激酶和磷酸化蛋白的综合性数据库。 图片来源：http://kinase.bioinformatics.tw/introduction.html
表2 SILAC标记技术具有以下显著优点
蛋白质损失小； 标记效率高、误差低； 可以实现多种样本比较； 肽段覆盖率高，可以提高定量结果和鉴定结果的可靠性； 实验操作简便。
3.3.3 18O标记技术
18O标记技术是将蛋白质酶切时或酶切后放入H218O中，在蛋白酶催化作用下将羧基上的两个氧替换成18O 而进行的。除了C端肽之外，在适宜的条件下，所有的肽段一般都可以替换上两个18O，使肽段质量数相差4 u。Korbel等人[29]采取免疫沉淀反应/IDE/LC/MS与18O标记来分析EPO受体依赖的蛋白质，鉴定并定量了187 个磷酸化蛋白，发现89个蛋白质上的酪氨酸以EPO受体依赖的方式发生变化。18O标记技术是一种操作简单、 条件温和、应用广泛（trypsin、chymotrypsin、lys-C和glu-C都能被用来标记酶切肽段的C端），并且没有副 产物的标记技术。它能与多种磷酸化肽段富集方法连用，适于低丰度磷酸化肽段的定量标记。目前，18O标记 技术已得到国际上一些大型实验室的青睐。但是，用18O进行同位素标记经常产生标记一个氧原子和两个氧原 子不等的现象，即产生分子质量+2和+4两种混合的产物。此外，18O与16O交换速率也依肽段的大小、氨基酸 的类型、酶的类型以及肽段序列而有所变化。所以，尽管该技术已经得到比较普遍的应用，但是要得到准确 的定量结果还需对其进一步优化。