EAAL方法预防肝癌复发转移的研究
基因治疗对肿瘤复发与转移的预防策略
基因治疗对肿瘤复发与转移的预防策略肿瘤复发和转移是肿瘤治疗中面临的主要挑战之一。
即使原发肿瘤被成功治疗或手术切除，仍有可能出现复发并转移到其他部位。
然而，基因治疗作为一种新兴的治疗方式，为预防肿瘤复发和转移提供了新的策略。
基因治疗是通过改变或修复人体基因的方法，以治疗疾病。
在肿瘤治疗中，基因治疗可以通过不同的方式来预防肿瘤的复发和转移。
首先，基因治疗可以用于增强免疫系统的功能。
免疫治疗是一种以增强免疫系统来攻击肿瘤细胞的策略。
其中一种方法是采用基因工程技术将肿瘤抗原基因导入免疫细胞中，使其能够识别和攻击肿瘤细胞。
这样的治疗方式能够提高免疫系统对肿瘤细胞的识别和消灭能力，从而预防肿瘤的复发和转移。
其次，基因治疗也可以通过靶向特定基因的表达和功能来预防肿瘤复发和转移。
研究人员可以通过基因编辑技术，如CRISPR-Cas9，精确地删除或修复与肿瘤复发和转移相关的基因。
例如，一些肿瘤具有过度活跃的增殖信号通路，导致肿瘤细胞无限增殖和转移。
基因治疗可以通过抑制或修复这些异常基因来阻断肿瘤细胞的增殖和转移能力，从而预防肿瘤的复发和转移。
此外，基因治疗还可以通过促进肿瘤细胞的凋亡来预防肿瘤复发和转移。
凋亡是一种程序性的细胞死亡方式，肿瘤细胞的逃逸凋亡常常导致肿瘤复发和转移。
基因治疗可以通过引入促凋亡基因来恢复肿瘤细胞的凋亡功能，从而阻止肿瘤复发和转移。
此外，近年来，基因编辑技术和干细胞疗法的发展为肿瘤复发和转移的预防提供了新的策略。
基因编辑技术可以精确地编辑人体细胞的基因，使其具有更强的抗肿瘤功能。
干细胞疗法可以提供具有特定基因改变的干细胞，这些改变可以使细胞更好地识别和攻击肿瘤细胞。
这些新的技术和策略为肿瘤复发和转移的预防带来了更多希望。
然而，尽管基因治疗在肿瘤复发和转移的预防中显示出巨大的潜力，但仍然存在一些挑战和限制。
首先，基因治疗仍处于发展的早期阶段，技术和安全性等方面仍需进一步研究和改进。
此外，成本和治疗可行性也是影响基因治疗广泛应用的因素之一。
复发性肝癌的治疗
显著 。据 相关 统 计 ． 癌 行 根 治 性切 除 术后 的 ５年 肝
总 生存 率 已能达 到 ５ ％左 右 Ｅ４ ０ ｔ１ － 。然 而 由于术 后 肿
定 程 度 的打 击 ， 时处 在 代 偿 或 失代 偿 的状 态 。 有
瘤在肝 内外的高复发率和 高转率 ，肝癌 术后 ５
年 复发 率 可高 达 ３ ％至 ６ ．％Ｅ ． 而 ５年 的无 瘤 ８ １ ５ － 一
的疗 效 ，发 现 两 组 受试 者 的术 后 平 均 存 活 时 间差
发。 但反对观点认为 Ｔ Ｃ Ａ Ｅ可进一步抑制尚未完全
从 手 术 创 伤 中恢 复 的机 体 免 疫 功 能 ， 从 而促 进 了 肿瘤 的复发 。目前 研 究 的焦 点集 中在 Ｔ Ｃ Ａ Ｅ是 否 能
改善 肝 癌 患 者 无 瘤 生存 或 总体 生存 上 ． 以及 是 否 有增 加 术 后 肝癌 转 移复 发 的可 能 。很 多 临床 研 究
复发 的风 险［－］ ２２。而国内相关 的回顾性研究却发 ０２
现 ， 后 ２月 内接 受 预 防性 Ｔ Ｅ治疗 有利 于 减 少 术 ＡＣ 术 后 １ 内 的早 期 复发 率 ．但 无 法 降低 术 后 １年 年
肝 癌 常 见 的 转 移 部 位 除 肝 内播 散 和 肺 转 移 外 ， 腔 的种 植 ， 腹 骨骼 、 巴结 、 淋 肾上 腺 甚 至 脑 转 移 也 不 少 见 。对 于 肝癌 单 发 或局 限的肝 外 转 移 患者 ， 积 极地 手术 治疗 有 时仍 然 可 以提 高 生存 率 。 Ｚ ｏ ｈｕ 等 ［］ 道 了 ３例 伴 有 单发 肺 转 移 的小 肝癌 复发 患 报 者 行 手 术切 除后 获 得 了长 期 生存 。甚 至有 报道 肝 癌 肾 上腺 转移 灶 并 侵 犯 下 腔 静脉 行 肾上 腺 切 除加
EAAL方法预防肝癌复发转移的研究
EAAL方法预防肝癌复发转移的研究发表者：毛一雷(访问人次：547)研究摘要：肝癌手术后复发转移的控制，是肝癌治疗面临的最主要挑战。
细胞免疫治疗方法EAAL在大规模随机临床试验中被证明可以降低肝癌术后复发率18%，使复发的危险率减少41％。
在本研究中，我们将采用不同的治疗方案，对EAAL配合手术、介入化疗和局部栓塞等常规肝癌治疗方法对复发和转移及病人生存期的影响进行系统的临床研究。
在此基础上，我们将进一步研究EAAL方法作用的可能机制，及肝癌特异性淋巴细胞的治疗可行性。
名词缩写：EAAL: expanded activated autologous lymphocytes, 扩增活化的自体淋巴细胞CIK Cells: cytokine induced killer cells, 细胞因子诱导的杀伤细胞TIL: tumor infiltrating lymphocytes, 肿瘤浸润淋巴细胞研究目的：1. 在大规模随机临床试验的基础上，试验EAAL方法作为免疫辅助治疗，对手术和其它常规治疗后病人复发和转移的抑制作用；2. 通过设计不同的EAAL使用疗程和使用频率，试验该方法延长病人生存期的效果；3. 在上述基础上，研究EAAL方法可能的作用机制；4. 通过引入肿瘤特异性淋巴细胞的方法，研究更有效的肝癌细胞免疫治疗方法。
研究背景：大多数肝细胞肝癌，特别是伴发肝硬化和其它一些症状的情况下，预后往往都很差。
外科手术，包括肿瘤切除术或是肝移植，往往是肝癌治疗的唯一手段。
化疗和肿瘤栓塞术只能缓解症状，对存活率和存活时间没有显著改善[1]。
因此，寻找肝癌手术后预防转移和复发的手段，成为肝癌治疗的重要研究方向。
尽管大多数肝癌病人的预后不好，但越来越多的证据表明，免疫应答至少在部分肝癌病人中，对疾病的进展乃至病人的存活至关重要。
1. T淋巴细胞:（1）CD8+ T细胞对肝癌细胞具有特异性识别杀伤作用：较早的研究表明，与大量无T淋巴细胞的样本相比，有T淋巴细胞浸润的小肝癌的复发率低、5年生存率高。
EAAL
EAAL扩增活化的自体淋巴细胞治疗肿瘤技术简介Introduction of EAAL Therapy 肿瘤免疫治疗的机制Mechanisms of Cancer Immunotherapy通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。
? 前提：–肿瘤细胞有别于正常细胞? 肿瘤抗原? 肿瘤特异性T细胞免疫应答? 肿瘤特异性抗体免疫应答? 天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用如何达到有效的免疫治疗效果? 有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞? 机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能–Th1/Th2 – Treg ? 这些T细胞可以到达肿瘤组织局部– T 细胞归巢? 在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能–肿瘤基质及肿瘤组织微环境肿瘤的免疫治疗方法Approches of Cancer Immunotherapy 肿瘤疫苗过继细胞免疫治疗细胞免疫治疗Cellular Immunotherapy ? ? 包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法之一肿瘤的细胞免疫治疗：–非特异性※LAK细胞※CIK细胞※EAAL细胞–特异性※Provenge,树突状细胞※肿瘤特异性T细胞其它慢性病的细胞免疫治疗：※慢性病毒感染性疾病乙肝、丙肝艾滋病※慢性寄生虫感染※糖尿病※多发性硬化症※系统性红斑狼疮扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）的定义自体免疫细胞治疗技术CD3+ T淋巴细胞为主（95.91%±0.24% ），含少量NK细胞体外扩增活化肿瘤杀伤功能改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体淋巴细胞）的简称。
其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得以CD3细胞为主的，包含CD8+ T淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD3+CD56+ NKT细胞、NK细胞，细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。
什么是EAAL技术疗法
EAAL技术疗法
定义
EAAL，是扩增活化的自体淋巴细胞的英文 Expanding Activated Autologous Lymphocytes的缩写， EAAL细胞技术是最新的治疗肿瘤和慢性传染性病毒 感染的细胞免疫治疗方法之一。其技术是从患者自 体外周血（20-100毫升）中分离单个核细胞，经过 体外刺激扩增培养，使在生理条件下具有杀伤肿瘤 细胞和病毒感染细胞的杀伤性效应的细胞亚群，主 要是CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTL，约70%）和自然 杀伤细胞（NK，约20%）得到大量扩增和活化，之 后经一次或多次回输给患者。作为细胞过继性免疫 治疗方法，可有效辅助恶性肿瘤和慢性传染性病毒 感染的治疗。
1. 感染发热期的患者（肿瘤热除外） 2. 进行器官移植的患者 3. 有严重自身免疫病的患者 4. T细胞相关淋巴瘤和白血病患者
谢谢
EAAL细胞免疫疗法
效应
1. CD8+ 杀伤性T淋巴细胞比例上升； 2. NK细胞比例上升； 3. CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降； 4. 分泌的IFN-γ细胞比例上升； 5. IFN-γ的分泌量上升。
Байду номын сангаас
疗效
1. 有效控制实体肿瘤复发和进展、延长患 者无瘤生存期； 2. 有效杀灭实体肿瘤细胞及体内散在的肿 瘤细胞，包括复发和转移的肿瘤； 3. 配合常规放化疗延长病人生存期，实现 无瘤、带瘤生存； 4. 提高放化疗耐受性，形成综合治疗的协 同性； 5. 显著提高病人生存质量。
特点
1. 使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证 没有潜在的病源微生物感染； 2. 细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为 200~1000倍； 3. 不需使用单采机，对患者免疫系统没有破坏作用； 4. 独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次 细胞回输的要求； 5. 可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治 疗次数和细胞治疗数目的要求，从而产生较好的协 同治疗肿瘤效果； 6. 可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果。
肝癌转移复发的防治新策略
肝癌转移复发的防治新策略作者：樊嘉来源：《祝您健康》 2016年第12期【专家简价】樊嘉医学博士，享受国务院特殊津贴专家。
现任上海市肝病研究所所长，上海市肝肿瘤临床医学中心主任，复旦大学器官移植中心主任，复旦大学附属中山医院院长兼肝外科主任、主任医师、教授、博士生导师。
同时兼任中华医学会肿瘤分会副主任委员、中国抗癌协会肝癌专业委员会副主任委员、上海市抗癌协会副理事长、上海市医学会肿瘤分会副主任委员、上海市医学会器官移植分会委员等职务。
老百姓都知道，肿瘤一旦复发转移，其凶险程度极大，随时可能夺人性命。
而造成肿瘤复发转移的病理机制却异常复杂，目前尚未完全清楚，有细胞本身的原因，也有身体内外环境的影响，这是世界医学界的一大难题。
针对中国第一大癌“肝癌”，究竟该如何将复发转移率控制在最低水平？●留心肝炎病毒感染史肝癌以其高死亡率，历来都被肿瘤业内称为是“癌症之王”。
据相关流行病学调查显示，目前，我国每年肝癌新发病人超过了34.7 万。
而之所以肝癌死亡率高居不下，主要是因为早期肝癌患者一般无明显症状，而当患者出现肝痛、乏力、食欲缺乏、消瘦等特征性临床症状时再去就诊，大多数已经是中晚期，80% 的患者失去了手术治疗的机会。
每年几乎都会有超过10% 的肝硬化患者进展为肝癌。
目前临床上能遇到的早期肝癌，大多是通过集体体检或因患其他疾病到医院做相关检查时被发现的；也有一小部分早期肝癌是因为了解自己属于肝癌高危人群，主动定期做检查而查出的，但遗憾的是，肝癌的早期确诊率相比整个肝癌人群，依然很低。
此外，值得提醒的是“二对半检查”中除了表面抗体阳性是保护性抗体，其他四项指标出现阳性者都属于肝炎病毒感染者或者曾经感染者，应该引起高度警惕，要有防癌意识。
●根据临床分期，选择治疗方案一旦确诊后，如何根据肝癌分期选择个体化治疗方案，是肝癌防控的关键所在。
临床上，通常把肝癌分为早、中、晚及终末期（BCLC分期）。
早期肝癌是指一个肿瘤、直径小于3 厘米，或不超过3 个肿瘤、最大径小于3 厘米；中期肝癌是指肿瘤大于3厘米以上、多个结节；晚期肝癌则是指肿瘤侵犯血管或发生肝外转移；此外，早、中、晚期肝癌患者的肝功能为Child-Pugh A-B 级、PST 评分为0-2 分。
肝癌术后预防复发的临床研究进展与展望
肝癌术后预防复发的临床研究进展与展望
李超樟
【期刊名称】《中国医药指南》
【年(卷),期】2008(0)23
【摘要】@@ 原发性肝癌(肝癌)是临床上常见的恶性肿瘤之一,已上升为我国恶性肿瘤的第2位,在城市仅次肺癌,在农村仅次于胃癌.在肝癌的各种治疗方法中,手术切除已得到公认[1].
【总页数】3页(P280-282)
【作者】李超樟
【作者单位】广西贵港市中医医院,537100
【正文语种】中文
【中图分类】R711.6
【相关文献】
1.肝癌术后复发转移研究的若干进展与展望 [J], 周信达
2.肝癌术后门静脉持续灌注化疗预防复发的临床研究 [J], 武强;李强
3.肝动脉化疗栓塞联合细胞免疫治疗对肝癌术后预防复发的研究 [J], 陈示光;余文昌;张孔志;林海澜;周东;叶韵彬;郝明志;陈起忠;胡育斌
4.肝癌术后肝血管区域化疗与腹腔置管灌注化疗预防复发的临床研究 [J], 王广田;孙培春;庞志刚;牛跃平;刘超;芦跃峰;樊长坤
5.中药联合耳穴治疗小儿化脓性扁桃体炎及预防复发的临床研究 [J], 董书桂;孙波;刘伟然;孙映雪;王巍
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EAAL
EAAL一、EAAL的定义EAAL，是扩增活化的自体淋巴细胞的英文Expanding Activated Autologous Lymphocytes的缩写，EAAL细胞技术是治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染的细胞免疫治疗方法之一。
其技术是从患者自体外周血（20-100毫升）中分离单个核细胞，经过体外刺激扩增培养，使在生理条件下具有杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤性效应的细胞亚群，主要是CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTL，约70%）和自然杀伤细胞（NK，约20%）得到大量扩增和活化，之后经一次或多次回输给患者。
作为细胞过继性免疫治疗方法，可有效辅助恶性肿瘤和慢性传染性病毒感染的治疗。
二、EAAL治疗肿瘤的作用机制根据体外实验和临床试验证明，EAAL细胞可通过多种途径直接杀伤肿瘤细胞：1) 患者回输EAAL细胞后可以导致CD8+杀伤性T淋巴细胞比例上升，NK细胞比上升，CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降。
这些杀伤性淋巴细胞以不同的机制识别肿瘤细胞，通过穿孔素等作用，穿透封闭的肿瘤细胞胞膜，实现对肿瘤细胞的裂解；2) 回输EAAL细胞后，可促使机体分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子，诱导肿瘤细胞凋亡；3) 回输EAAL细胞后可以改善机体的免疫环境，提高机体的免疫机能。
一、EAAL的定义EAAL，是扩增活化的自体淋巴细胞的英文Expanding Activated Autologous Lymphocytes的缩写，EAAL细胞技术是治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染的细胞免疫治疗方法之一。
其技术是从患者自体外周血（20-100毫升）中分离单个核细胞，经过体外刺激扩增培养，使在生理条件下具有杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤性效应的细胞亚群，主要是CD8+杀伤性T淋巴细胞（CTL，约70%）和自然杀伤细胞（NK，约20%）得到大量扩增和活化，之后经一次或多次回输给患者。
作为细胞过继性免疫治疗方法，可有效辅助恶性肿瘤和慢性传染性病毒感染的治疗。
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EAAL方法预防肝癌复发转移的研究发表者：毛一雷(访问人次：547)研究摘要：肝癌手术后复发转移的控制，是肝癌治疗面临的最主要挑战。
细胞免疫治疗方法EAAL在大规模随机临床试验中被证明可以降低肝癌术后复发率18%，使复发的危险率减少41％。
在本研究中，我们将采用不同的治疗方案，对EAAL配合手术、介入化疗和局部栓塞等常规肝癌治疗方法对复发和转移及病人生存期的影响进行系统的临床研究。
在此基础上，我们将进一步研究EAAL方法作用的可能机制，及肝癌特异性淋巴细胞的治疗可行性。
名词缩写：EAAL: expanded activated autologous lymphocytes, 扩增活化的自体淋巴细胞CIK Cells: cytokine induced killer cells, 细胞因子诱导的杀伤细胞TIL: tumor infiltrating lymphocytes, 肿瘤浸润淋巴细胞研究目的：1. 在大规模随机临床试验的基础上，试验EAAL方法作为免疫辅助治疗，对手术和其它常规治疗后病人复发和转移的抑制作用；2. 通过设计不同的EAAL使用疗程和使用频率，试验该方法延长病人生存期的效果；3. 在上述基础上，研究EAAL方法可能的作用机制；4. 通过引入肿瘤特异性淋巴细胞的方法，研究更有效的肝癌细胞免疫治疗方法。
研究背景：大多数肝细胞肝癌，特别是伴发肝硬化和其它一些症状的情况下，预后往往都很差。
外科手术，包括肿瘤切除术或是肝移植，往往是肝癌治疗的唯一手段。
化疗和肿瘤栓塞术只能缓解症状，对存活率和存活时间没有显著改善[1]。
因此，寻找肝癌手术后预防转移和复发的手段，成为肝癌治疗的重要研究方向。
尽管大多数肝癌病人的预后不好，但越来越多的证据表明，免疫应答至少在部分肝癌病人中，对疾病的进展乃至病人的存活至关重要。
1. T淋巴细胞:（1） CD8+ T细胞对肝癌细胞具有特异性识别杀伤作用：较早的研究表明，与大量无T淋巴细胞的样本相比，有T淋巴细胞浸润的小肝癌的复发率低、5年生存率高。
而且占优势的浸润淋巴细胞为CD8+的T淋巴细胞，而非CD4+的T淋巴细胞[2]。
随后，在肝癌组织中发现了特异性识别多种肿瘤相关抗原[3]、肿瘤特异性共享抗原[4]、自体抗原（AFP[5]和SART-1[6]）、病毒表位[7，8]的T细胞。
CD8+ T细胞的浸润与肝癌细胞的凋亡呈正相关[Eur J Surg Oncol. 2004 Feb;30(1):53-7. CD8+ lymphocyte infiltrat ion and apoptosis in hepatocellular carcinoma.Ikeguchi M, Oi K, Hirooka Y, Kaib ara N.]我们自己的工作证明，肝癌组织浸润的CD8+ T细胞，在体外经过活化后，具有杀伤自身肝癌细胞的功能（未发表数据）。
（2） CD8+ T细胞可特异性识别杀伤具有干细胞特征的肿瘤细胞肿瘤干细胞被发现普遍存在于包括肝癌[ ]在内的多种恶性肿瘤组织中，并被认为是肿瘤常规治疗后复发和转移的直接原因[Cancer Cell Int. 2007; 7: 9. Role of stem cells in cancer therapy and cancer stem cells: a review Jayesh Sagar,Boussad Chaib, Kevin Sales, Marc Winslet, and Alexander Seifalian]。
而另一方面，肿瘤干细胞同样表达肿瘤特异性抗原，并可作为免疫治疗的靶点，如前列腺癌细胞表达的前列腺干细胞抗原PSCA [ ]。
最新的研究表明，多发性骨髓瘤（MM）的癌前病变MGUS常常表达胚胎干细胞参与自我更新的关键分子SOX2。
而识别该分子特异性T细胞的存在提示癌前病变的良好预后。
我们最近建立的一株干细胞样肝癌细胞系中，发现该株细胞表达大量肿瘤特异性共享抗原，同时可被来源于同一病人自身的CD8+ T细胞特异性杀伤。
这提示我们通过利用免疫治疗杀伤肿瘤干细胞，可能达到控制肿瘤复发和转移的目的。
（3）辅助性CD4+ T细胞对移植后肝癌的复发有抑制作用有文献表明，肝癌患者进行肝移植后，肝癌复发的危险率与CD4：CD8的比例呈正相关，但此种CD4+ T细胞为辅助性T细胞，而不是表达CD25分子的调节性T细胞（regulatory T cells）[9]。
（4） CD4+CD25+调节性T细胞可通过抑制CD8+ T细胞的作用促进肝癌细胞生长存在于肿瘤边缘位置及肿瘤浸润性调节性CD4+CD25+T细胞具有抑制肿瘤特异性CD8+ T细胞增殖和活化的作用，成为肝癌细胞不受控制生长的原因之一[9，Hepatology. 2005 Apr;41 (4):722-30. Compromised lymphocytes infiltrate hepatocellular carcinoma: the ro le of T-regulatory cells.Unitt E, Rushbrook SM, Marshall A, Davies S, Gibbs P, Morris LS, Coleman N, Alexander GJ.]。
此外，在肝癌病人的外周血中，其CD4+CD25+调节性T细胞也明显增加，并于肿瘤局部CD4+CD25+调节性T细胞的浸润呈正相关。
这些调节性T细胞在体外与非调节性T细胞共同培养时，抑制后者的增殖和细胞因子的分泌[Cancer Res. 2005 Mar 15;65(6):2457-64.Increased populations of regulatory T cells in p eripheral blood of patients with hepatocellular carcinoma.Ormandy LA, Hillemann T, Wedemeyer H, Manns MP, Greten TF, Korangy F.]。
2. 细胞因子：细胞因子是调节机体天然免疫和获得性免疫的关键因子。
细胞因子环境的平衡对获得保护性免疫（如抗病毒，抗肿瘤，抗细菌免疫）及避免病理性免疫（如自身免疫病）至关重要。
一般来讲，Th1 类细胞因子有利于抗肿瘤免疫，而Th2类细胞因子可能有抑制肿瘤免疫的作用。
Budhu A等人最近报道，肝癌的局部转移与局部组织的细胞因子为环境直接相关。
相比于不利于肝内静脉转移的微环境（MAM），趋于肝内静脉转移的微环境中的细胞因子标签出人意料地高表达Th2类细胞因子IL-4, IL-5, IL-8和IL-10，而明显低表达Th1类细胞因子，包括IL-1A, IL-1B, IL-2, IFN-g和 TNF。
在利用细胞因子进行的肿瘤治疗试验中，有证据表明，在作为细胞因子配合疫苗使用时，Th1类细胞因子，包括IL-2，-7，-12，-18，IFN -g，TNF-a及部分Th2 类细胞因子，包括IL-4，-6，可诱导抗肿瘤抗原特异性的免疫应答。
在直接使用细胞因子进行恶性肿瘤的治疗中，IL-2 和IFN-a，-g应用得最为广泛。
而在评价抗肿瘤免疫中，T细胞在识别肿瘤细胞后分泌IFN-g的量成为评价抗肿瘤免疫应答的最重要指标之一。
针对肝癌免疫应答的上述特性，适当的免疫治疗方法有可能通过杀伤肿瘤细胞，包括肿瘤干细胞的方式，达到控制肝癌复发和转移的目的。
这需要解决两方面的问题（1）有识别肝癌细胞的特异性杀伤性T细胞；（2）能够改善患者体内免疫环境和免疫微环境，使控制和杀伤肿瘤细胞的免疫细胞能够发挥功能。
这包括降低CD4+CD25+调节性T细胞的数量，并使T h1/Th2细胞因子水平向Th1平衡。
为此，我们拟采用细胞过继免疫治疗---扩增活化的自体淋巴细胞（Expanded Autologou Activated Lymphocytes，EAAL)的方法，探索免疫治疗对肝癌复发和转移的预防性效果和对病人生存率、生存期的影响。
肿瘤免疫治疗的主要手段之一，细胞过继免疫治疗，是通过离体扩增病人自身特异性或非特异性淋巴细胞、扩增并回输的过程，来满足上述条件，达到杀伤和/或控制肿瘤细胞的目的。
这种方法建立于T细胞活化分子白细胞介素2 (IL-2)的发现，包括肿瘤浸润淋巴细胞（Tum or Infiltrating Lymphocytes，TIL）方法，LAK（Lymphokine-induced Killer）细胞、C IK （Cytokine-induced Killer）细胞和EAAL。
这些方法最主要的不同在于培养前所使用的细胞、培养后所获得的细胞种类不同、培养效率和临床效果不同（表1）。
表1. 不同细胞过继免疫治疗方法的比较细胞免疫治疗名称TIL LAK CIK EAAL 起始细胞类型/数量肿瘤浸润淋巴细胞PBMC，3000-5000ML*PBMC，3000-5000ML*PBMC，20-100ML 产出细胞主要类型CD8+ T细胞NK细胞CD3+CD56+ T细胞（〉50%）CD8+ T细胞：63.0±24.6%CD4+CD25+ 调节性T细胞无相关报道无相关报道无相关文字报道，口头报告数据：20-50%1.7±1.1%扩增倍数无相关报道无相关报道1-10倍100-1000倍以上产出细胞特异性肿瘤特异非特异非特异ND临床试验有效性晚期恶性黑色素瘤消退肿瘤作用可达70%[ ]血液肿瘤血液肿瘤降低41% 肝癌术后复发危险率[ ]副作用白化病（自身免疫病）无相关报道无相关报道主要为自限性低热，未见II级以上副作用PBMC：外周血单个核细胞ND：未检测*使用单个核细胞采集机分离病人相当于此体积的PBMC。
二十世纪八十年代，Steven Rosenberg等开始在体内或体外利用IL-2刺激机体的T淋巴细胞，治疗转移的恶性黑色素瘤（恶黑）和肾癌。
在早期的研究中，大剂量IL-2直接给予病人。
在对567名恶黑患者的临床试验研究中，21％的病人有临床效果12。
然而，大剂量IL-2的治疗同时带来了严重的副作用，包括肾衰、严重的口炎和全身反应等。
2002年，Rosenberg等报道了一种新的细胞过继回输方法，进行肿瘤的免疫治疗13。
他们在体外筛选出具经过EAAL方法扩增活化的自体淋巴细胞，回输的细胞中CD4+CD25+ 抑制性T细胞的百分率仅约1.7±1.6%。
因此，细胞回输后不会增加免疫抑制性淋巴细胞，有利于细胞毒性淋巴细胞发挥其抗肿瘤作用及分泌Th1类细胞因子。
3． EAAL分泌的细胞因子以Th1类细胞因子为主：经过培养的EAAL细胞，在经过活化后，其分泌的细胞因子主要为Th1类细胞因子，尤其是对肿瘤、病毒等具有杀伤功能的细胞因子IFN-γ和TNF-a（图1）。