慢病毒相关知识问答
慢病毒载体相关知识问答
Q:什么是慢病毒？
A: 慢病毒载体(Lenti vector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。DNA整合前复合体进入细胞核并整合到靶细胞的染色体DNA。由于靶基因或基因干扰序列整合到染色体上并且伴随着细胞分裂时DNA的复制一起复制，基因的导入能够获得稳定的表达。慢病毒的显著优势在于其可以整合到非分裂细胞，而其他载体（如非病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体）不具备整合到靶细胞染色体的特性，或者只能整合到分裂细胞的染色体（如常规的逆转录病毒）。目前我们使用的慢病毒载体是基于HIV-1改造而来，该载体使用最为广泛，经过科学家的多次改造在包装滴度和使用安全性等方面都非常理想。在实际的使用中我们可以用来表达目的基因或目的基因加上报告基因，近年来随着RNAi研究的深入，越来越多的科学家用慢病毒载体来表达干扰序列.
Q:慢病毒用于RNAi研究
A:目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体, 然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它
指导的转录就会停止，在转录产物3’端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA 茎环结构（stem loop）。在siRNA表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA), 载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5Ｔ转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ’ 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA表达载体。
Q:如何生产病毒？
A:载体质粒和辅助质粒转染293细胞后收获病毒上清，通过超滤和超速离心进行纯化和浓缩获得高滴度和高纯度的慢病毒颗粒。
Q:病毒是否可以重新冻融？
A:病毒可以冻融，但是反复多次的冻融会降低病毒的滴度。
Q:什么是病毒的滴度？
A:病毒的滴度即每升溶液中含有的病毒数量。滴度值用于评估转导一定数量靶细胞所需要的病毒数量。
Q:转导单位（TU）的含义？
A:转导单位（TU）即能够感染并整合到细胞内的病毒载体基因组,
Q:MOI的含义？
A:MOI指用来转染单个细胞的病毒数量，即含义是感染时病毒与细
胞数量的比值。如果MOI为1则感染每个细胞的病毒颗粒数为1。同一种类同一批次的病毒感染不同种类的细胞，其MOI值不尽相同，需要进行梯度实验测算；另外不同的滴度检测方法也会导致MOI很大的差异。
Q:可以获得的病毒可以达到多少滴度？
A:常规生产的病毒的滴度在2 x 10E8TU/ml之间。
Q:如何使用慢病毒感染细胞？
A:使用慢病毒感染细胞的操作流程取决于细胞种类，因此首先要了解细胞的来源和背景，我们将在发货时将通用操作流程发送客户。通常来讲首先要根据准确的MOI和需要感染的细胞量计算所需要的病毒量，然后将所需病毒也加入培养体系后4小时左右即可换成完全培养基正常培养。
Q:如何确定慢病毒感染靶细胞的感染效率？
A:慢病毒感染靶细胞的感染效率可以通过Real-time PCR检测靶细胞中的慢病毒载体拷贝数来测算。另外如果构建的慢病毒载体带有标记基因（如GFP、RFP等），则可以通过FACS检测阳性细胞的比例来评估感染效率。
Q:慢病毒感染靶细胞后，目的基因的表达是瞬时表达还是稳定表达？
A:慢病毒感染靶细胞后，目的基因或者干扰序列被整合到细胞的染色体DNA;并且随靶细胞的增殖分化，目的基因或者干扰序列也随靶基因DNA的一起复制并遗传到子代细胞中,所以是稳定表达。
Q:通常生产一个慢病毒载体的实验周期是多久？
A:我们将在收到您的订单和实验材料20个工作日左右完成病毒的生产和检测，如果客户需要委托购买或者合成目的基因（干扰序列），会增加相应的实验周期。
Q:是否可以直接从慢病毒颗粒中提取慢病毒载体？
A:不可以。慢病毒载体用于转染包装细胞后生产病毒，包装好的病毒颗粒只含有载体中5' and 3' LTR's的RNA。
Q:使用公司提供的病毒可以感染多少细胞？
A:可以感染的细胞量取决于您需要感染的靶细胞的易感性，原代细胞或者难感染的细胞需要较高的MOI,因此需要的病毒量也比较多。我们建议您可以通过预实验确定目的细胞的MOI,即使用公司的GFP 病毒设定不同的MOI（1、5、10、15等）分别感染目的细胞。
Q:如何知道靶细胞是否能够被慢病毒感染？
A:根据现有的研究表明，慢病毒感染谱很广，包括分裂和非分裂细胞。一方面可以通过查询文献得知是否可以被感染，另外也可以使用提供的GFP慢病毒载体对照颗粒进行预实验，确定细胞的易感性和MOI.
Q:在使用慢病毒时需要哪些预防措施？
A:慢病毒的操作要求在BSL2级别的生物安全柜内进行，实验操作人员需带上乳胶手套，按照标准的细胞培养操作流程进行。
Q:在实验室使用慢病毒是否安全？
A:慢病毒载体包括包装成分和载体成分：包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即
含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成CMV (巨细胞病毒早期启动子)、3′LTR换成SV40 polyA等。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。目前在用HIV-1载体已经进行的所有体内外实验中，未出现过有复制力的HIV，说明其安全性是有保证的。
Q:什么是自身失活慢病毒载体(SIN )？
A:SIN 载体的构建是将载体3′LTR(长末端重复序列) 中的U3区增强子和启动子序列删除。U3-LTR 是前病毒DNA 两端LTR 中U3 的模板, 在逆转录过程中, 3′L TR 中的缺失被传递到子代载体的5′L TR 中, 所形成的载体缺乏HIV-1 的增强子和启动子序列, 即使在所有病毒蛋白都存在的情况下也不能转录RNA , 产生了一个灭活的前病毒,但其中的外源启动子仍然有活性, 能进行基因转录与表达。这种方式主要用来消除病毒LTR 中的启动子/增强子序列对病毒载体中外源启动子指导转录的干扰作用，以及消除可能的由3′L TR 启动子指导的下游基因组中原癌基因的激活与转录作用, 一定程度上提高了载体的安全性
Q:获得慢病毒颗粒后是否可以在实验室中进一步增殖？
A:不可以。科学家考虑到了其使用的生物安全性将慢病毒载体改造成为复制缺陷型病毒载体。获得的病毒颗粒的基因组不具有重组所需要的基因，并且载体具有3'LTR.自身失活的特性。
Q:慢病毒颗粒能保存多长时间？
A:在-80度条件下，慢病毒可以保存6个月左右而滴度没有显著丢失。
Q:公司生产的慢病毒的滴度是怎么定义的？
A:公司生产的慢病毒的滴度是感染293T细胞后使用FACS检测有限
稀释的病毒感染细胞的阳性细胞比例来测算，或者使用Real-time PCR的方法检测获得的。
用于RNAi的慢病毒包装简要程序
摘要：慢病毒包装简要程序：以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1106个293FT细胞。 1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5g包装混合质粒和0.5g表达质粒以及250l的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5min。 2、取1.5ml灭菌EP管，取9l 脂质体2000l溶于250l无血清Opti-MEM I培
慢病毒包装简要程序：
以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293FT细胞。
1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育
5min。
2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。
3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min
4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM培养基重悬细胞。
5、在六孔板中每孔加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。
6、将1ml重悬的293FT细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。
7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。
7、转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。
8、病毒上清-80°C贮存。
包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。
影响溶解快慢的因素[精选.]
《《影响溶解快慢的因素》实验报告》 实验名称：影响溶解快慢的因素。 实验目标： 1.知道可溶解的固体物质在水中溶解的快慢与物体的颗粒大小（面积的大 小）、水的温度、水是否被搅动等因素有关。 2.亲历控制单个变量进行对比实验的活动过程。 3.体验探究影响溶解快慢因素的乐趣，感悟科学就在身边，要做爱科学的有心人。 实验材料：2个透明玻璃杯①号和②号、1根筷子、1个水槽（内盛冷水）、热水1壶、食盐、方糖、溶解快与慢实验记录表。 实验内容： 1．溶解的快慢可能跟物体的颗粒大小（面积的大小）有关。 2．溶解的快慢可能跟水的温度有关。 3．溶解的快慢可能跟水是否被搅拌有关。 4．综合运用第三种方法的效果是否会更好。 提出问题：物体溶解的快慢与哪些因素有关呢？ 实验步骤： 实验一：溶解的快慢可能跟物体的颗粒大小（面积的大小）有关。 1.实验猜测 ①物体的颗粒大（面积的大小），溶解慢；物体的颗粒小，溶解快。 ②溶解的快慢跟物体的颗粒大小（面积的大小）无关。 2.实验方法与设计 ①在两只形状大小相同、水量相等的玻璃杯中放入两块大小不一的方糖。 ②仔细观察方糖在水中的溶解速度并将相关数据记录在记录表单中。 3.实验条件 A：相同因素：①玻璃杯的形状大小。②水量的多少。③两杯水的温度。 ④投放方糖时要同时同步同高度。 B：不同因素：两块方糖的大小不同（物质颗粒粗细不同）。 4.实验操作（边操作边记录，见附表1） 5.实验结论 物体颗粒越粗（面积大）溶解速度越慢，物体颗粒越细（面积小）溶解速度越快。 实验二：溶解的快慢可能跟水的温度有关。 1.实验猜测 ①玻璃杯中水的温度越高溶解速度越快。 ②溶解速度快慢跟水的温度高低无关。 2.实验方法与设计 ①在两只形状大小相同，水量相等但水温不同的玻璃杯中放入两块形状大小质量完全相同的方糖。 ②仔细观察方糖在水中的溶解状况并将相关数据记录在记录表中。 3.实验条件 A：相同因素：①玻璃杯的形状大小。②水量的多少。③两块方糖的大小。 ④投放方糖时要同时同步同高度。⑤实验室内的温度要一致。
预防诺如病毒知识.doc
预防诺如病毒 学校卫生知识普及宣传稿 近期，北京和深圳都发生了诺如病毒疫情，我市疾控中心提醒：目前，正值诺如病毒感染高发季，市民要注意个人卫生，如发现儿童、学生出现聚集性恶心、呕吐、腹泻等症状，要及时就诊并居家隔离治疗，以下知识大家一定要弄懂！ 诺如病毒虽然听起来名字有点唬人，但其实它是一种常见病毒，并不是一种新型病毒。感染后 48 小时内，患者会出现呕吐、腹泻等急性胃肠炎症状，以呕吐症状更多见。冬季又是诺如病毒暴发流行的高发季节，所以诺如病毒感染性腹泻也被称为“冬季呕吐病”。 传播途径：诺如病毒感染性强，通过粪-口途径传播，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、养老院及军队等处引起集体爆发。 感染原因主要有： 1、食用或饮用诺如病毒污染的食物、水或饮料； 2、接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口； 3、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具等。 感染性极强： 这是一种感染性极强的病毒，只需要 10 - 100 个病毒粒子就可以致病。要知道，一次呕吐就可以排出数以亿计的病毒粒子。病毒通过气溶胶在空气中弥散，造成聚集性的疫情暴发。如果家中有人感染了诺如病毒，呕吐或腹泻后，记得按照正确的方法及时对被污染的家具、地板和衣服进行消毒——先洒上比如”84”这样含氯的消毒剂，呕吐物最好用消毒粉覆盖30分钟后，再清理。这时候，医用酒精可是无效的。 抗生素无效： 感染诺如病毒之后，是没有特效药物的。感染诺如病毒之后，会腹泻和呕吐，有时候我们会自行服用抗生素，这是错误的方法，抗生素对诺如病毒是无效的，只会造成抗生素的滥用。 好在它是一种自愈性的疾病，和感冒一样。只需要进行对症治疗即可，如果发烧就退烧，腹泻就止泻。值得注意的是，症状消失后的 3 天以内，身上携带的病毒仍然具有强传播力。所以，痊愈后的 3 天，最好不要去人群聚集的地方，以免造成病毒的再次传播。
慢病毒包装体系使用说明
慢病毒包装体系使用说明 本说明书适用于以下产品： 名称货号 慢病毒包装体系KLV3501 慢病毒包装体系（含293V细胞）KLV3502 慢病毒包装体系（含转染试剂）KLV3503 慢病毒包装体系（含293V细胞、转染试剂）KLV3504 北京英茂盛业生物科技有限公司 Web site：https://www.360docs.net/doc/85365241.html,
1 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/85365241.html,/ 产品内容 KLV3501 KLV3502 KLV3503 KLV3504 慢病毒载体（过表达或RNA 干扰载体任选一种） 3 3 3 3 辅助载体pH1 3 3 3 3 辅助载体pH2 3 3 3 3 HEK293V 细胞 3 3 Polyfect-V 转染试剂 3 3 载体采用质粒形式发货，请在收到质粒后放-20℃冻存，也可以直接转化大肠杆菌感受态进行质粒扩增。 HEK293V 细胞采用干冰或培养瓶发货。请在收到细胞后根据附带说明书进行复苏或传代。 慢病毒载体 慢病毒载体中含有病毒整合和表达所需原件及表达外源目的基因的元件。外源基因通过载体中的多克隆位点插入慢病毒载体中进行表达。 pLV-EGFP-C 的载体图谱见下，本公司的其它慢病毒载体结构与之基本相似。其它载体信息见本公司网站https://www.360docs.net/doc/85365241.html, 或本说明书后面的附表。
慢病毒包装载体 慢病毒包装载体包括pH1和pH2，表达生产病毒颗粒所需的病毒蛋白。载体图谱见下：
HEK293V细胞 包装细胞的状态对病毒包装效果有直接影响。我公司保存的293V细胞为低次代293V细胞，细胞性状稳定。在高密度下生长3天仍可保持贴壁状态，持续产生病毒颗粒，因此可多次收获病毒，降低病毒包装实验成本。 Polyfect‐V转染试剂 Polyfect-V转染试剂专为293V细胞转染及慢病毒包装研制,可以在细胞铺板同时进行转染，缩短病毒包装时间；无需要求细胞处于生长对数期，细胞转染时密度可以很高；细胞毒性极低；质粒和转染试剂用量是普通转染试剂的1/3到1/2等显著优点；包装病毒时转染效率接近100%，能提高病毒产量3-5倍。 3 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/85365241.html,/
诺如病毒感染防控知识
诺如病毒感染防控知识 诺如病毒具有高度传染性和快速传播能力，是全球急性胃肠炎的散发病例和暴发疫情的主要致病原。主要发生在学校、托幼机构和医疗机构等人群聚集场所。发病的主要表现为腹泻和/或呕吐，国际上通常称之为急性胃肠炎。 诺如病毒主要通过病人的粪便排出，也可通过呕吐物排出。病人在潜伏期即可排出诺如病毒，排毒高峰在发病后2-5天，持续约2-3周，最长排毒期有报道超过56天，在免疫抑制病人中更长。 1、定义为24小时内出现排便≥3次且有性状改变（呈稀水样便），和/或24小时内出现呕吐≥2次者。 2、诺如病毒的潜伏期相对较短，通常12-48小时。 3、诺如病毒感染发病以轻症为主，最常见症状是腹泻和呕吐，其次为恶心、腹痛、头痛、发热、畏寒和肌肉酸痛等。诺如病毒感染病例的病程通常较短，症状持续时间平均为2-3天。 4、诺如病毒传播途径包括人传人、经食物和经水传播。人传人可通过粪口途径（包括摄入粪便或呕吐物产生的气溶胶）、或间接接触被排泄物污染的环境而传播。食源性传播是通过食用被诺如病毒污染的食物进行传播，污染环节可出现在感染诺如病毒的餐饮从业人员在备餐和供餐中污染食物，也可出现食物在生产、运输和分发过程中被含有诺如病毒的人类排泄物或其它物质（如水等）所污染。经水传播可由桶装水、市政供水、井水等其他饮用水源被污染所致。
保持良好的手卫生是预防诺如病毒感染和控制传播最重要最有效的措施。此外，还需注意不要徒手直接接触即食食品。 诺如病毒消毒方法 一、病人呕吐物、粪便 用一次性吸水材料（如纱布、抹布等）沾取5000mg/L～10000mg/L 的含氯消毒液完全覆盖污染物，小心清除干净。清除过程中避免接触污染物，清理的污染物按医疗废物集中处置，或用含有效氯5000mg/L 消毒剂溶液浸泡消毒30min后处理。厕所马桶或容器内的污染物，可小心倒入足量的5000 mg/L～10000mg/L的含氯消毒液，作用30min 以上，排入有消毒装置的污水处理系统。清洁中使用的拖把、抹布等工具，盛放污染物的容器都必须用含有效氯5000mg/L消毒剂溶液浸泡消毒30min后彻底冲洗，才可再次使用。厕所、卫生间的拖把应专用。 二、地面、墙壁及物体表面 用于消毒地面、墙壁及物体表面的消毒液，应含有效氯1000mg/L 。有肉眼可见污染物时应先清除污染物再消毒。无肉眼可见污染物时，家具和生活设施用消毒液进行浸泡、喷洒或擦拭消毒，作用30分钟后用清水擦拭干净。墙壁可直接用消毒剂按100ml/m2～300ml/m2用量擦拭或喷洒消毒。地面消毒先由外向内喷洒一次，喷药量为100ml/m2～300ml/m2，待室内消毒完毕后，再由内向外重复喷洒一次。消毒作用时间应不少于15分钟。 三、衣物、被褥等织物
诺如病毒防治知识宣传
诺如病毒防治知识宣传 一、概述 诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒属病毒引起的腹泻，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。 诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。 二、临床症状 诺如病毒感染主要引起胃肠炎，具有发病急、传播速度快、涉 及范围广等特点。胃肠炎的症状是恶心、呕吐、腹泻等，部分人主诉有头痛、发热、寒战、肌肉疼痛。症状通常持续1-2天。普遍感到病情严重，一日多次剧烈呕吐。症状一般摄入病毒后24-48小时出现, 但是暴露后12小时也可能出现症状。没有证据表明感染者能成为长期病毒携带者，但是从发病到康复后2周感染者的粪便和呕吐物中可以检出病毒。 三、传播途径 诺如病毒主要经消化道传播，传染性强。感染者粪便和呕吐物中 可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒： 食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料;
接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口； 直接接触到感染者（如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具）。 食物和饮料很容易被诺如病毒污染，因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。 有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。 四、治疗方法 诺如病毒引起的感染尚无特殊的治疗手段，以对症治疗为主，病 程一般为2~3天，恢复后无后遗症。然而不能喝足够多水来补充呕吐、腹泻丢失的水分，可能出现脱水，需要特殊的医学观察的人包括儿童、年老者和不能自理的所有年龄段人。 五、预防措施 预防诺如病毒感染性腹泻的关键是把好病从口入”这一关，要注意饮食和饮水卫生，养成良好的卫生习惯。 1、保护环境卫生。不乱扔垃圾，不随地大小便，对病人的呕吐物及粪便要及时消毒处理，确保周围环境的清洁；被污染衣物应该用肥皂水彻底清洗； 2、注意饮食卫生，以免病从口入” A、不吃不洁净的食物、不购买街边小店的零食，如：烧烤、串串香、凉
病毒包装原理
汉恒生物2017产品手册 --您身边的病毒载体专家
专注于基因技术的研发与应用转化 病毒载体为工具的基因技术操作全平台 汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商 覆盖、并抢占国内主流科研、临床前研究及药物研发的AAV市场，完成基础底层市场的教育及占领 与国内临床机构合作申报并实施基因治疗临床前及临床研究项目 上市1-2种自主知识产权的基因治疗AAV药物 2012年4年多的发展短期目标 中期目标2-5年内长期目标10年内 2010成立汉恒简史 汉恒生物成立于2010年，专注于基因技术的研发与应用转化。2012年， 汉恒建立了以病毒载体为工具的基因技术操作全平台，经过7年多的发展，汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商。 汉恒在一系列基因载体技术如腺病毒、慢病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、细胞功能学服务的基础上，进一步开发基因及信号通路研究工具，包括自噬流 研究工具、lncRNA&环状RNA载体工具、分子载体探针、基于病毒载体的Crispr/Cas9基因编辑工具等。 以核心基因技术为基础，汉恒更加注重技术应用与临床转化。 公司简介 目 录 1 Zhu Y , Di S, Hu W et al. A new flavonoid glycoside (APG) isolated from Clematis tangutica attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating PKCepsilon signaling. Biochim Biophys Acta 2017; 1863:701-711. 2 Zheng X, Chen W, Hou H et al. Ginsenoside 20(S)-Rg 3 induced autophagy to inhibit migration and invasion of ovarian cancer. Biomed Pharmacother 2017; 85:620-626. 3 Zhao H, Xue Y , Guo Y , Sun Y , Liu D, Wang X. Inhibition of endocan attenuates monocrotaline-induced connective tissue disease related pulmonary arterial hypertension. Int Immunopharmacol 2017; 42:115-121. 4 Yang Z, Hou Y , Hao T et al. A human proteome array approach to identifying key host proteins targeted by Toxoplasma kinase ROP18. Mol Cell Proteomics 2017. 5 Xu J, Zhang X, Wang H et al. HCRP1 downregulation promotes hepatocellular carcinoma cell migration and invasion through the induction of EGFR activation and epithelial-mesenchymal transition. Biomed Pharmacother 2017; 88:421-429. 6 Wang X, Fu Z, Chen Y , Liu L. Fas expression is downregulated in gastric cancer. Mol Med Rep 2017; 15:627-634. 7 Wang T, Wang P , Cao Z et al. Effects of BMP9 and pulsed electromagnetic fields on the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells. Bioelectromagnetics 2017; 38:63-77. 8 Wang P , Wang Y , Tang W et al. Bone Morphogenetic Protein-9 Enhances Osteogenic Differentiation of Human Periodontal Ligament Stem Cells via the JNK Pathway. PLoS One 2017; 12:e0169123. 9 Li M, Y uan Y , Hu B, Wu L. Study on Lentivirus-Mediated ABCA7 Improves Neurocognitive Function and Related Mechanisms in the C57BL/6 Mouse Model of Alzheimer's Disease. J Mol Neurosci 2017. 10 Li C, Guo XD, Lei M et al. Thamnolia vermicularis extract improves learning ability in APP/PS1 transgenic mice by ameliorating both Abeta and 2017客户最新文献节选 06一流质量标准汉恒专利08 产品介绍 07公司优势 02汉恒客户发表文献专题研究 33HB-infusion TM 无缝克隆试剂盒 36SaveIt TM 抗支原体试剂盒 37 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 34LipoFiter TM 脂质体转染试剂汉恒自主研发试剂 30CRISPR-Cas9专题研究 27环状RNA专题研究28自噬专题研究 32 探针工具 细胞器定位工具 25悬浮细胞专用病毒 26 原代T细胞专用病毒 17化学遗传学AAV现货工具 14光遗传学AAV现货工具22慢病毒 24 逆转录病毒 09 腺相关病毒AAV 19腺病毒特色服务
诺如病毒的基本知识
附件： 诺如病毒的基本知识诺如病毒，或称诺罗病毒、诺沃克病毒，又称为小圆结构病毒，是一种能引起非细菌性急性胃肠炎的病毒。临床常表现为起病急骤、恶心、呕吐、腹部绞痛和头疼等不适症状，一般感染人口密度较高。在卫生环境差的地方，该病毒由粪便、口水等传播，人食用被污染的蚌类（如牡蛎）也会感染。 诺如病毒生物特性 诺如病毒是“打不死的小强”，对外界的抵抗力较强。这种病毒不管是冷冻数年,还是以60℃的水加热30分钟都能存活,只有在含较高浓度的氯消毒剂作用30分钟后才被杀死。所以污染物只能用漂白粉消毒，要泡半小时以上。 诺如病毒- 传播途径 诺如病毒的感染全年均可发生，尤以冬季较多。而人类是唯一已知的宿主。 传播途径主要有：生吃海鲜容易感染诺如病毒，如生食海贝类及牡蛎等水生动物。非细菌性急性胃肠炎患者的呕吐物及粪便，或者干燥之后通过尘埃感染。 诺如病毒- 临床表现 潜伏期为24-48小时，一般不超过96小时。 临床表现与其他病毒性胃肠炎相似，起病突然，主要症状为发热、恶心、呕吐、痉挛性腹痛及腹泻。可单有呕吐或腹泻，亦可先吐后泻。成人腹泻较突出，儿童呕吐较多。粪便呈黄色稀水便，每日数次至十数次不等，无脓血与黏液。可伴有低热、咽痛、流涕、咳嗽、头痛、肌痛、乏力及食欲减退。 多呈自限性，恢复后无后遗症，预后较好，少有死亡病例。病程长及病情较重者排毒时间也较长，传染性可持续到症状消失后两日。本病免疫期短暂，可反复感染。 诺如病毒- 易染人群 该疾病多发生在学校、家庭、旅游区、医院、食堂、军队等，饮用被病毒污染的水及生食牡蛎等水生动物是引起爆发流行的主要原因。 诺如病毒性胃肠炎的传染源为该病的患者、隐性感染者及健康携带者。主要传播途径是粪口传播。此外，日常生活接触也可引起该病的传播。 诺如病毒以老人和小孩等体质比较弱的人最容易感染。 诺如病毒- 治疗方法 目前尚无特效的抗病毒药物，以对症或支持治疗为主，使用抗生素是没用的，所以在治疗中不要滥用抗生素，诺如病毒感染的潜伏期只有1至2天，自然病程较短，一般患者3天左右即可自愈。 脱水是诺如病毒感染性腹泻的主要死因，所以补水非常重要。对严重病例尤其是幼儿及体弱者应及时输液或口服补液，以纠正脱水、酸中毒及电解质紊乱。 诺如病毒- 预防控制 预防 健康教育加强以预防肠道传染病为重点的宣传教育，提倡喝开水，不吃生的半生的食物，尤其是禁止生食贝类等水产品，生吃瓜果要洗净，饭前便后要洗手、养成良好的卫生习惯。 免疫接种目前尚无理想的疫苗。 加强饮用水卫生要加快城乡自来水建设。在暂时达不到要求的地区，必须保护水源，改善饮用水条件，实行饮水消毒。 抓好饮食卫生严格执行《中华人民共和国食品卫生法》，特别要加强对饮食行业（包括餐厅、个体饮食店、学校周边饮食摊档等）、农贸集市、集体食堂等的卫生管理。食物加工者要严
慢病毒包装原理-介绍学习资料
慢病毒包装系统简介及应用 一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。 U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。构建载体前通常要通过合成 siRNA 的方法，寻找高效的 siRNA ，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入 siRNA 表达载体。 慢病毒载体（ Lentiviral vector ）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达 shRNA 的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达 shRNA ，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。 慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
诺如病毒预防小常识
For personal use only in study and research; not for commercial use 诺如病毒预防小常识 诺如病毒（英语：Norovirus，NV），又称为诺罗病毒、诺沃克病毒或脓融病毒，是一种引起非细菌性急性胃肠炎的病毒。感染诺如病毒后最常见的症状是腹泻、呕吐、恶心，或伴有发热、头痛等症状。儿童患者呕吐、恶心多见，成人患者以腹泻为多，呕吐少见。病程一般为2-3 天，此病是一种自限性疾病，恢复后无后遗症。冬春开学季，也是学校诺如病毒爆发疫情的危险期。 对个人要求： （1）保持良好的饮食习惯。不要吃没熟的食物（如海鲜、沙拉类），不吃变质、不洁、生冷、生腌食物，食物需要至少煮沸15～20 分钟后才可放心食用。 （2）养成良好的个人卫生习惯。坚持勤洗手、勤剪指甲。进食或处理食物前，应用肥皂及清水洗净双手。如厕或处理呕吐物及粪便后须彻底洗净双手。 （3）及时就医。出现呕吐、腹泻等胃肠症状时，应尽早到各医院的肠道门诊就诊，不要跟亲朋好友接触。不去人群密集的公共场所，减少传染的机会。 对学校要求： （1）加强健康教育。学校开展多种形式的健康宣教，普及诺如病毒感染胃肠炎防治知识。 （2）加强消毒和通风。每日对教室、卫生间、楼道、门把手等公共场所和用品用具进行消毒，对呕吐物及时清除消毒。搞好环境卫生，保持教室和活动室通风。 （3）加强食品卫生和饮用水管理。工作人员要注意个人卫生，防止带病上岗，加工食物时防止生熟不分和交叉污染。桶装水应符合相关卫生标准，饮水机加强清洗消毒。 （4）加强个人防护。遇有学生在教室等公共场所呕吐，老师要及时疏散周边学生，及时清理消毒呕吐物，处理呕吐物时要注意个人防护，防止感染。 （5）加强风险沟通。与学生家长保持沟通，做好解释工作，防止造成不必
诺如病毒试题及答案
诺如病毒的防控知识培训试题 单位：姓名：成绩： 一、填空 1. 没有证据表明诺如病毒感染者能成为长期病毒携带者，但是从发病到感染者的粪便和呕吐物中可以检出病毒。 2. 诺如病毒属杯状病毒，源于的一所学校引起的一次胃肠炎暴发。 3. 目前，诺如病毒有个种，其中个种能感染人类。在这几个种中已经确认有个型，而新亚型也在不断涌现，这使得疫苗开发变得困难。 二、单选 1.关于诺如病毒感染引起的胃肠炎，说法不正确的是（） A.具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点。 B.症状是恶心、呕吐、腹部痉挛性腹泻。 C.症状通常持续5-7天。 D.症状一般摄入病毒后24-48小时出现，但是暴露后12小 时也可能出现症状。 2.诺如病毒的感染方式，说法不正确的是（） A.食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料； B.接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口；
C.照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 D.病毒很小，摄入1000个病毒才能使人发病。 3. 下列说法，错误的是（） A.诺如病毒很难灭活，它们存留在物体表面数天或数周后仍然可以感染人类。 B.可以在冷冻、加热条件下生存，甚至与一些消毒剂共存。 C.诺如病毒携带者粪便和呕吐物中带有数十亿病毒颗粒，少量病毒颗粒即可引起感染。 D.人群对诺如病毒普遍易感，感染后缺乏持久的免疫力,并且产生的免疫力对诺如病毒其他变异株也有保护作用。 三、多选 1. 下列关于诺如病毒急性胃肠炎说法正确的是（） A.诺如病毒可引起急性胃肠炎，主要症状为腹泻、呕吐、恶心和腹痛 B.潜伏期多为48～96小时。 C.儿童患者表现为呕吐为主，成人患者腹泻较多。 D.大多数感染者在1～3天后好转，但小孩、老人和低免疫力低下者可能导致严重脱水。 2. 预防诺如病毒暴发，下列措施正确的是（） A.厨工应保持良好的手部卫生，避免裸手直接接触即食食品。 B.厨工出现腹泻、呕吐等症状时应该避免进入厨房和制作食物。 C.目前尚未有疫苗可以预防诺如病毒感染。 D.呕吐或腹泻后应清洗和消毒被污染的地方和衣物。 四、判断 1.诺如病毒急性胃肠炎潜伏期多在48～96h，最短24h，最长96h。( ) 2. 除符合临床诊断病例条件外，必须在粪便标本或呕吐物中检测出诺如病毒才能成为确诊病例。( )
慢病毒载体包装构建过程
慢病毒载体包装构建过程 原理：慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 概念：慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 辅助成分：慢病毒载体辅助成分包括：慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。 基本原理：慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。
包装成分：由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞)，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 载体成分：与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。 一、实验流程（1和2为并列步骤） 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养24和48h后，分别收集富含
诺如病毒相关知识模板
诺如病毒相关知识 一、诺如病毒简介 诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒引起的腹泻，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播。潜伏期多在24～48小时，最短12小时，最长72小时。人感染诺如病毒发病突然，主要症状为呕吐和腹泻，
可伴有恶心、发热和腹痛，儿童病例以呕吐为主，成人病例腹泻为多，其他包括发热、头痛和全身酸痛等。24小时内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。大便常规镜检通常无炎性细胞，白细胞计数<10/HP，未见红细胞。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。多数患者发病后1-3天即可康复，愈后良
好。如频繁呕吐或腹泻，可导致脱水，引起严重的健康问题，尤其常见于幼小儿童、老年人和基础性疾病患者。 二、妥善处理，做好控制工作 1.做好病人的医疗救治，轻症患者可居家隔离治疗，症状严重者需送医院治疗，并做好病人隔离消毒等。病人患病期间应停止上课，至症状消失后72小时方可复课。 2.及时妥善处理病人的呕吐物、腹泻物和各种被污染的物品及场所。
病人的呕吐物、腹泻物要及时掩闭覆盖，消毒清理。各种被污染的物品和场所（如衣物、地板、桌椅、餐厨具、污水及厕所等），应进行彻底清洁、消毒。 三、诺如病毒感染性腹泻消毒处理方法 （一）消毒处理的基本要求 出现腹泻、呕吐症状病人，要对其进行隔离，尽快采取消毒措施。由于诺如病毒对常用的消毒剂抵抗力
较强，应选用高效消毒剂或有效的物理消毒方法才能达到消毒的目的。 要特别注意病人排泄物、呕吐物及其容器、餐饮具、食物、污水及厕所的彻底消毒。还要对病人经常接触的环境物体表面和疫点室内地面、墙壁、家具表面、衣服、家用物品、纸张、书报与垃圾等进行消毒。 消毒时应正确选择消毒剂，合理使用消毒方法，加强对消毒液浓度测
教科版四年级上册科学实验报告单含实验目的及实验现象
教科版四年级科学上册实验报告单 （1）实验名称：室内外温度的测量与比较 实验器材：温度计、线、笔 实验步骤： 1、取一支温度计，用线拴好。 2、将温度计悬挂，（离地面米左右，不能靠拢，在室外注意通风，阳光不能直射温度计）。 3、读数。 4、记录并比较。 实验结果：室内外温度存在差距，通过对大气温度的测量，可以了解当地的气温。 （2）实验名称：气温的测量 实验器材：温度计 实验步骤： 1、选择两个地点：阳光下和背阴处来测量它们的温度； 2、测量一天中，清晨、商务、中午、下午、傍晚的气温。 实验结果：1、阳光下的温度高，背阴处的温度低，说明测量气温时应该选择背阴的地方。2、一天中，中午的时候气温最高，清晨的时候气温最低；还发现在一天中的气温时从低到高，在从高到低的规律变化的。 （3）实验名称：用简易雨量器测量降水量 实验器材：温度计 实验步骤： 1、用喷水壶模拟降水，记录好时间。 2、把雨量器改在水平桌面，读出刻度 3、换算成24小时，核对雨量等级。 实验结果：根据24小时内测的降水量，对照等级表，确定了下雨的等级。 （4）实验名称：观察食盐、沙在水中的状态 实验器材：烧杯2个、搅拌棒2根、沙、食盐、水。 实验步骤： 1、取一小匙食盐，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。你有什么发现 2、取一小匙淘洗干净的沙，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。你有什么发现 3、比较食盐和沙在水中的状态。 实验结果：食盐在水中溶解了，沙在水中没有溶解。 （5）实验名称：观察面粉在水中溶解了吗 实验器材：烧杯1个、搅拌棒1根、面粉、水。 实验步骤： 1、取一小匙面粉，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。 2、你发现了什么
诺如病毒的宣传知识
诺如病毒宣传知识 诺如病毒是急性肠胃炎最常见的病原体，该病毒基因多样且高度变异，每隔数年就会出现新变异株，人一生中可多次获得感染。诺如病毒感染通常表现为自限性疾病，预后良好。 临床特征： 最常见的症状是腹泻、呕吐、反胃、恶心和胃痛，其他包括发热、头痛和全身酸痛等。多数患者发病后1-3天即可康复。如频繁呕吐或腹泻，可导致脱水，引起严重的健康问题，尤其常见于幼小儿童、老年人和基础性疾病患者。脱水主要表现为少尿、口干、咽干、站立时感头晕目眩，在儿童中可表现为啼哭无泪或少泪、异常瞌睡或烦躁。传播：诺如病毒传染性强，所有人群均易感。病人发病前至康复后2周，均可在粪便中检到诺如病毒，但患病期和康复后三天内是传染性最强的时期。通常通过以下途径获得感染： ⑴食用或饮用被诺如病毒污染的食物或水； ⑵触摸被诺如病毒污染的物体或表面，然后将手指放入口中； ⑶接触过诺如病毒感染患者，如照顾患者、与患者分享食物或共用餐具。 (4)诺如病毒在密闭场所中（如托幼机构、幼儿园、学校、养老院、游船等）传播速度快，易引起暴发。 治疗： 尚无特异的抗病毒药物。患者应补充足够的水分以预防脱水。轻
度脱水时，运动饮料或其他饮品（不含咖啡因或酒精）可起到一定的补水效果，但不能补充重要的营养成分和矿物质，因此，在药店购买口服补水溶液是最有效的治疗方法。严重脱水时应及时住院输液治疗。 预防： ⑴注意洗手卫生，用肥皂和清水认真洗手，尤其在如厕和更换尿布后，以及每次进食、准备和加工食物前。 ⑵水果和蔬菜食用前应认真清洗，牡蛎和其他贝类海产品应深度加工后食用。诺如病毒抵抗力较强，在60℃高温或经快速汽蒸仍可存活。 ⑶诺如病毒感染儿童应远离厨房或食物加工场所。 ⑷诺如病毒感染病人患病期至康复后3天内不能准备加工食物或为其他患者陪护。 ⑸及时用含氯漂白剂或其他有效消毒剂清洗消毒被患者呕吐物或粪便污染的表面，立即脱掉和清洗被污染的衣物或床单等，清洗时应戴上橡胶或一次性手套，并在清洗后认真洗手。
教科版四年级上册科学实验报告单含实验目的及
教科版四年级上册科学实验报告单含实验目的及实验现象
教科版四年级科学上册实验报告单 （1）实验名称：室内外温度的测量与比较 实验器材：温度计、线、笔 实验步骤： 1、取一支温度计，用线拴好。 2、将温度计悬挂，（离地面1.5米左右，不能靠拢，在室外注意通风，阳光不能直射温度计）。 3、读数。 4、记录并比较。 实验结果：室内外温度存在差距，通过对大气温度的测量，可以了解当地的气温。 （2）实验名称：气温的测量 实验器材：温度计 实验步骤： 1、选择两个地点：阳光下和背阴处来测量它们的温度； 2、测量一天中，清晨、商务、中午、下午、傍晚的气温。 实验结果：1、阳光下的温度高，背阴处的温度低，说明测量气温时应该选择背阴的地方。2、一天中，中午的时候气温最高，清晨的时候气温最低；还发现在一天中的气温时从低到高，在从高到低的规律变化的。 （3）实验名称：用简易雨量器测量降水量 实验器材：温度计 实验步骤： 1、用喷水壶模拟降水，记录好时间。 2、把雨量器改在水平桌面，读出刻度 3、换算成24小时，核对雨量等级。 实验结果：根据24小时内测的降水量，对照等级表，确定了下雨的等级。 （4）实验名称：观察食盐、沙在水中的状态 实验器材：烧杯2个、搅拌棒2根、沙、食盐、水。 实验步骤： 1、取一小匙食盐，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。你有什么发现？ 2、取一小匙淘洗干净的沙，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。你有什么发现？ 3、比较食盐和沙在水中的状态。 实验结果：食盐在水中溶解了，沙在水中没有溶解。 （5）实验名称：观察面粉在水中溶解了吗 实验器材：烧杯1个、搅拌棒1根、面粉、水。 实验步骤： 1、取一小匙面粉，放入盛水的烧杯内，用搅拌棒轻轻搅拌。 2、你发现了什么？
慢病毒包装简介及应用
慢病蠹包装系统简介及应用 、慢病蠹包装简介及其用途 慢病蠹(Lentivirus )载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I型病蠹)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病蠹载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病蠹载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 目前慢病蠹也被广泛地应用丁表达RNAi的研究中。由丁有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体，然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色丁体外合成siRNA ,在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶用启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶用有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶用遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3'端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶m依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位丁转录区的上游，适合丁表达?21ntRNA和?50ntRNA茎环结构(stem loop )。在siRNA 表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成siRNA ;也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA),载体包含位丁RNA聚合酶用启动子和4?5T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4个U 3 '突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA ,然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA表达载体。 慢病蠹载体(Lentiviral vector )较逆转录病蠹载体有更广的宿主范围，慢病蠹能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病蠹载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病蠹，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA ,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。 慢病蠹表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病蠹包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病蠹载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病蠹颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病蠹的包装，包装好的假病蠹颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上活液后，可以直接用丁宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平■的表达效应分子。 二、这一系统的目的，主要是为了解决以下问题：
诺如病毒知识及预防(参考文章)
病毒简介 显微镜下的诺如病毒诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒属病毒引起的腹泻，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。 传播途径 诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。疾控专家称，病程为自限性，一般2～3天即可恢复。 诺如病毒的各种传播途径，如牲畜等感染者粪便和呕吐物中可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒： 1、食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料；因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口。 2、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具也可引起传播。直接接触到感染者(如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 3、食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。 4、有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。 临床表现 潜伏期多在24～48h，最短12h，最长72h。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。大便常规镜检WBC<15，未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。 诺如病毒会引起胃肠道感染。主要症状为恶心、呕吐、腹部痉挛性腹泻，通常持续1-2天，一般在感染病毒后12-48小时出现症状。