HBV基因分型的检测方法及临床意义
乙肝病毒基因分型及其临床意义
乙肝病毒基因分型及其临床意义周光耀;蒋道荣;姚登福;李金强【期刊名称】《交通医学》【年(卷),期】2006(020)001【摘要】目的:探讨南通地区乙肝病毒(HBV)基因型分布状况及其临床相关性.方法:选择南通地区HBV-DNA阳性者200例,其中乙肝表面抗原携带者(ASC)28例,慢性乙型肝炎(CHB)89例,重型肝炎(FHF)26例,肝硬化(LH)30例,肝细胞癌(HCC)27例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型.结果:200例中B型51例(25.5%),C型141例(70.5%),BC混合型8例(4.0%);C基因型在FHF组、LC组、HCC组中的比例显著高于ASC组(P＜0.05).B型、C型、BC混合型HBeAg阳性率分别为49.0%、53.2%和37.5%,无统计学意义(P＞0.05).C型和BC混合型HBV-DNA载量显著高于B型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:南通地区HBV基因型以B、C型为主,C型为优势基因型,并与重型肝炎、肝硬化、肝癌的发生及血清HBV-DNA高载量相关.【总页数】3页(P49-50,53)【作者】周光耀;蒋道荣;姚登福;李金强【作者单位】南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001【正文语种】中文【中图分类】Q754【相关文献】1.乙肝病毒的基因分型对患者治疗有临床意义吗？ [J], 易银（编译）;杨月（审校）2.乙肝病毒基因分型的临床意义 [J], 李天一;陈青锋;吴国琳3.实时荧光PCR方法对乙肝病毒基因分型的检测及临床意义 [J], 肖晓光;李艳莲;王晶;孙国华4.乙肝病毒基因分型的临床意义 [J], 区映研;杨海红;曾文铤;朱科伦;马佩球5.宁夏地区乙肝病毒感染者HBV基因分型与临床意义 [J], 孙珍;赵志军;师志云;赵玥;赵洁;魏军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义
乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义目的阐述血清标本的乙型肝炎病毒(HBV)标志物的临床意义,指导临床工作者对乙型肝炎的正确诊治。
方法结合自己工作经验并参考相关文献,阐述检测血清标本的HBV标志物方法和临床参考值的意义。
结果血清标本的HBV 标志物的检测可以作为快速诊断乙肝的简便方法,为临床所应用。
结论正确认识乙型肝炎病毒血清标志物对临床医生有十分重要的指导意义。
标签：乙型肝炎病毒标志物临床意义肝炎病毒感染机体后,血液中可产生一种或多种抗原抗体系统。
检测病人血清中的这些病原标志物,对病毒性肝炎的分型、临床诊断、传染性的判定、发病机理的研究和流行病学调查具有重大意义。
本文就乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物的检测及临床意义阐述如下。
HBV至少有3个抗原抗体系统:表面抗原抗体系统(HbsAg,HBsAb)、e系统(HbeAg,HBeAb)和核心抗原抗体系统(HbcAg,HBcAb)。
目前HbcAg在一般化验室中尚难直接检测到,临床上常用的指标如下。
(1)HbsAg和HbsAb:HBsAg是HBV感染后第1个出现的血清指标,HbsAg阳性表明有HBV急性感染或持续感染。
持续6个月以上阳性为慢性感染。
HbsAg 在血液中以下列3种形式存在：①Dane颗粒(HBV完整病毒)外壳是HbcAg,内心为HbeAg;②小球形颗粒(HbsAg本身)是Dane颗粒装配后过剩外壳;③管状颗粒可裂解而成为数个小球形颗粒。
HbsAg是HBV感染后最早和最常见的指标,它一般多在感染后4～6周(转氨酶或黄疸升高前2～4周)出现,至恢复期消失(感染后5～7个月)。
如转为慢性肝炎或携带者,可持续数年或终生。
但是:①HbsAg阳性表示有过感染或正在感染,并不说明现在HBV是否复制;②HbsAg滴度与肝脏病变类型无关,也不指示预后好坏;③HbsAg滴度与病情变化无肯定一致的关系,也不应将HbcAg滴度升降作为判定病情好坏和药物疗效的指标。
HbsAg>100mg/L时,多同时伴有HBeAg(+)。
肝癌患者血清中乙型肝炎病毒基因分型及临床意义
肝癌患者血清中乙型肝炎病毒基因分型及临床意义徐天敏;王永忠;濮翔科;卫峥【期刊名称】《中西医结合肝病杂志》【年(卷),期】2008(018)005【摘要】目的:探讨血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型及HBV DNA水平与肝细胞癌的关系.方法:应用巢式聚合酶链反应扩增乙型肝炎病毒与基因,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较,应用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平.对61例肝癌、65例慢性乙型肝炎、10例乙型肝炎病毒携带者进行了检测.结果:136例中B基因型59例(43.4%)、C 基因型77例(56.6%),随着病情加重,C基因型比例逐渐增高;不同基因型HBV感染的肝癌患者间HBV DNA水平差异有显著意义,P＜0.05;在慢性乙型肝炎患者中,HBV DNA水平差异无显著性意义.结论:本地区乙型肝炎病毒以B、C基因型为主,乙型肝炎病毒C基因型及高水平的HBV DNA感染与肝癌的发生相关.【总页数】2页(P269-270)【作者】徐天敏;王永忠;濮翔科;卫峥【作者单位】常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.肝癌患者乙型肝炎病毒血清标志物及核酸检测的临床意义 [J], 刘红军2.肝癌患者血清中乙型肝炎病毒前C和BCP区基因变异的临床研究 [J], 周国平;白敬羽;罗立波;唐向荣;王永忠;陈敏;杭双荣3.血清中乙型肝炎病毒转录的检测在母婴垂直传播中的临床意义 [J], 赵薇4.肝癌患者血清中SIX1、SIX2的表达及临床意义 [J], 张新;焦明克5.血清可溶性甘露糖受体在肝癌患者中的表达及其临床意义 [J], 黄程荣;李太平;汪静;张浩;谢然;王琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙肝病毒HBV血清学标志物检测的临床意义
乙肝病毒HBV 血清学标志物检测的临床意义HBV 是一种小的有包膜病毒它被分类为嗜肝 DNA 病毒科中的一员。
虽然HBV 在动物病 毒中有若干近亲，但人类病毒中没有与 HBV 相似者,HBV 的DNA 基因组只含四个编码病毒蛋 白的基因：编码三种形式的表面抗原的表面基因S ,编码HBeAg 和HBcAg 的前核心/核心基因C ,编码x 抗原的基因X 和编码HBVDNA 聚合酶的聚合酶基因 P 。
HBV 的复制000*4^ A(n)cccDNA 转录 mRNA | 细胞核HBV 利用一种与逆转录病毒如人类免疫缺陷病毒 Human 1mmunodeficiency Virus,HIV 复制方式相关的新复制策略•在这一过程中，将 RNA 逆转录为DNA 是复制周期中极其重要的一 步。
然而与逆转录病毒不同的是HBVDNA 在复制时并不整合到宿主细胞的DNA 中去。
当一个有感染性的 HBV 颗粒结合并进入肝细胞时，HBVDNA 进入肝细胞并变为共价闭合环状DNA,cccDNA,CoValent Closed C yc1ic DNA 。
这种 cccDNA 是高度稳定的， 而且是 HBV 复 制过珵中重要的中间产物，其作用是作为 RNA 拷贝的模板。
这些 RNA 拷贝中最大者被称为 HBV 前基因组mRNA ，它被转运到细胞浆中，它有双重功能，一方面作为合成新的 HBVDNA 的 模板;另方面又携带遗传信息指导病毒某些蛋白质合成，较小的HBVmRNA 则参与其他病毒蛋白质的合成。
病毒蛋白质合成开始之后，前基因组mRNA 、HBV 核心蛋白和HBVDNA 聚合酶装配在起形成新的病毒颗粒。
每个颗粒中的前基因组 mRNA 被HBVDNA 聚合酶转录为DNA 负链,minus sense,同时此RNA 模板被降解。
而负链 DNA 再作为模板合成正链 DNA 。
当 HBVDNA 的合成正在进行时，病毒颗粒在内质网中获得包膜并从细胞中输出到细胞外 •少量新的HBV 颗粒仍在细胞内，并以其DNA 补充细胞核内cccDNA 的储备。
HBV基因和亚型：分型技术
参考文献：南方医科大学硕士学位论文~《HCV基因型和亚型：分型技术、临床意义及其流行病学研究》HBV基因型和亚型：分型技术乙肝临床与分型研究国际现状：乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝病毒，在全世界长期感染约3亿人，据报道每年造成约100万人死亡。
基于对完整基因组的序列相似性，将诸多HBV分离株分为8个基因型A至H。
HBV基因型显示特征性地理分布：基因型A流行最广，但普遍是在北欧、北美和中非;在东亚，韩国、中国、日本、波利尼西亚和越南发现了基因型B和C;基因型D也是大流行性基因型，但最要在地中海地区、中东和印度为主要分布地;基因型E是非洲的典型常见型;美国当地人和波利尼西亚发现基因型F;基因型G在西欧和北美，基因型H主要发现在中美洲。
不仅对于分子流行病学的目的，HBV的基因分型是重要的；最近的几项研究也表明，一些基因型的慢性结局和肝脏疾病的严重程度可能是不同的。
来自：National Center for Biotechnology Information—Viral Genotyping Tool Hepatitis B virus (HBV) is a hepatotropic virus, that chronically infects some 300 million people worldwide and is thought to be responsible for a million deaths annually. Numerous HBV isolates have been grouped into eight genotypes, A through H, on the basis of sequence similarities of their complete genomes. HBV genotypes show a characteristic geographical distribution: genotype A is pandemic but most prevalent in northern Europe, North America and central Africa; genotypes B and C are found in eastern Asia, Korea, China, Japan, Polynesia and Vietnam; genotype D is also pandemic but is predominant in the Mediterranean area, the Middle East and India; genotype E is typical for Africa; genotype F is found in American natives and in Polynesia; genotype G in western Europe and North America and genotype H is found predominantly in Central America. Genotyping of HBV is important not only for molecular epidemiology purposes. Several recent researches demonstrated that rate of the chronic outcome and the severity of liver disease can be different for some genotypes. 来自：National Center for Biotechnology Information—Viral Genotyping Tool乙肝临床与分型研究中国现状：目前（追溯至2005年），根据乙型肝炎病毒（HBV）全基因组序列差异大于8%或者S基因序列大于4%，将HBV分为A、B、C、D、E、F、G、H等8个基因型，当时报道，HBV每个基因型还可以分为不同亚型，如：A基因型可分为Aa和Ae亚型；B基因型可分为B1、B2、B3和B4亚型，C基因型可分为C1、C2、C3和C4亚型等。
乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测.doc
乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测一．检验项目：乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测二．检验目的：在进行抗病毒治疗前和抗病毒治疗中进行乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测，能够：1). 区分中国和其他亚洲国家常见的HBV-B、C、D基因型；2). 检测HBV抗病毒药物5个热点突变位点的6种突变类型；3). 对HBV实行动态监控，辅助确定个性化的临床诊疗方案，进行HBV流行病学研究。
三．临床意义：HBV基因型分为9种（A-I），其分布具有地域性，中国乃至亚洲流行的乙型肝炎病毒几乎都是B、C型，此外还有少量D型，不同的基因型易发生的突变类型不同，与病情转归也密切相关，如基因型C较B更容易引起严重的肝炎或肝癌，对干扰素的应答率A型高于D型，B型高于C型，C型高于D型。
与C型患者相比，B型患者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎，肝硬化和原发性肝细胞癌。
核苷（酸）类似物，如拉米夫定（Lamivudine，LMV），替比夫定（Telbivudine,LdT），阿德福韦酯（Adefovir,ADV）和恩替卡韦（Enticavir,ETV）等是抗HBV常见药物。
但这些药物都无法彻底清除大多数乙肝病人体内的HBV，患者需要长期维持治疗。
HBV在宿主体内感染以及抗病毒治疗的过程中会发生基因变异，并在宿主体内免疫系统的压力下和在治疗干预过程中进行变异的优势选择，以达到逃逸免疫、对抗药物、实现物种生存的目的，进而发生耐药。
乙肝病人一旦出现耐药突变，其肝功能恶化的比例将显著增高，甚至快速进展至肝衰竭。
四．标本送检要求：4ml黄色帽血清管，空腹采集后立即送检，室温放置不宜超过2小时，如不能立即送检可于4℃保存一周，如需长期保存请放入－20℃冻存，运输过程中请注意保持低温。
五．开单名称：乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测进入本科室“医生工作站”→选择开单病人“姓名”→选择“项目类别”→选择“检验”→选择“乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测”→确定或进入本科室“医生工作站”→选择开单病人“姓名”→选择“项目类别”→选择“检验”→选择“实验室”→选择“乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测”→确定六．收费：570元/例七．送检时间：周一至周日8：00am－12：00am八．送检地点：检验科三楼服务台九．报告时间：抽血后，7个工作日后进入我院计算机检查报告系统，查看检测结果。
乙型肝炎病毒基因型检测的临床意义
乙型肝炎病毒基因型检测的临床意义乙型肝炎病毒（HBV）基因型分为A～H八个型，不同基因型与病情的严重程度、预后、抗毒治疗效果等方面都可能有一定的相关性[1-3]。
本文对上海市165例乙肝患者的HBV基因型布及与病情严重程度的关系，进行了初步的研究。
另外，HBV的前C区变异会影响抗病毒药物选择及治疗的效果，本文就HBV基因型与这些变异及病毒的复制能力是否相关，进行了探讨。
材料与方法 1. 研究对象：165份血清标本来自上海市传染病医院的住院和门诊乙肝患者包括114例慢性乙型肝炎（CHB），26例慢性重型乙型肝炎（CHG），22例肝硬化（LC），2例性乙型肝炎（AHB），1例肝癌（HCC）。
疾病的诊断依据2000年全国病毒性肝炎和肝病会议拟的方案。
并从上述收集的部分标本进行HBV血清学标志物、前C区1896位变异及HBV DNA定检测。
2. 方法：HBV基因型检测：以特异性引物套式PCR法检测不同的HBV基因型[4]取部分不同基因型的扩增产物进行测序分析，证实二种分型方法的结果一致。
前C 变异检测：以特异性引物PCR法进行检测，部分结果也经测序证实。
HBV DNA载测定：以TaqMan探针实时荧光PCR法定量检测。
3. 统计学处理：用卡方检验分析所得数据。
结果 1. HBV感染者的基因型分析结果：从表1可以看出，A型1例（0.6%），型55例（33.3%），C型105例（63.6%），D型2例（1.2%）A/B和B/C混合型各1例（0.6% 0.6%），没有发现E、F、G、H型及其混合型。
基因型在不同临床型患者中的分布情况其总体成比中，LC与CHB患者的基因型分布有统计学差异，C型在CHB和LC患者中所占百分比明高于B型，分别为61.4%比36.8%（P<0.01）和90.9%比9.1%（P<0.001）。
CHG患者的基型分布无显著差异。
因HCC 、AHB患者病例数少难以进行统计学分析。
乙型肝炎血清HBV-DNA定量检测及其临床意义
中外医疗 CH IN A F OR EI G N ME DI C AL T R EA TM EN T 临 床 医 学乙型病毒性肝炎在我国有较高的发病率,已经成为危害群众健康的公众性问题［1］,实验室的诊断对于乙型肝炎的预防以及患者的病情观测、抗病毒治疗效果的观察等有着至关重要的作用,目前临床上检测乙肝病毒及其复制情况的方法主要有酶联免疫法检测乙肝两对半(HV B M)血清标志物和P CR法测定H BV-D NA［2］。
因此在临床中通过监测乙肝患者血清HB V-DN A的动态变化,来了解乙刑肝炎H B V-D N A病毒复制活跃与临床的关系以及拉米夫定治疗效果。
1 材料与方法1.1 标本来源100例,乙型肝炎均为我院2006年9月至2008年4月门诊或者住院患者,男68例,女32例,年龄(50.48±11.52)岁,诊断符合西安病毒性肝炎学术会议诊定诊断标准［3］。
其中25例为对照组,75例肝功能化验治疗前A L T>40μ,H B V-D N A≥1.0×104c o p i e s/m LH B V-M示H b s A g、H B c A b均为阳性的患者。
(1)HBV-DNA检测采用荧光定量方法,检测试剂盒购自深圳匹基生物工程有限公司。
(2)肝功能检测,血清ALT测定采用全自动生化分析仪,ALT> 40UL视为异常。
(3)乙肝二对半检测采用酶联免疫方法,乙肝检测试剂盒为夏门新创生物制品所提供。
(4)LAM(葛兰素史克中国投资有限公司)100mg片/d,疗程52周,于治疗前治疗期间,每隔3个月检测H B V-M、H BV-D VA定量,并动态观察ALT水平,疗程结束后随诊24周。
1.3 仪器美国PE7700自动荧火PCR仪、日本奥林巴斯AU600全自动生化分析仪。
1.4 疗效评价完全应答治疗结束时H b eA g转阴,或H Be A g/HB e Ab出现转换,A LT正常,HB V-D NA阴性,部分答应:HB e Ag阴转或H Be Ab未阳转,HB V-DN A短暂消失,AL T值下降为治疗前一半,无应答:未达上述标准者。
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HBV 亲 缘 树 分 析
B基因型
C基因型
B、C混合型
荧光PCR检测特点：
1.准确性好:与核酸序列测定分型比较，两者结 果吻合率100%。 2.有效防污染: PCR反应和分析在完全闭管条件 下进行，同时采用了d-UTP-UNG系统，有效防范 PCR产物污染，提高检测结果的可靠性。 3.操作简单、耗时短、结果判断直观明确 :试 剂在荧光PCR检测仪上进行扩增和分型分析，不 需进行电泳、核酸纯化、紫外灯观测、测序反 应等步骤。只需0.5~1.2小时即可完成PCR过程， 有利于提高报告速度。只需根据双通道荧光增 长曲线或Ct值即可直接判断HBV基因型。
88.9
50
42.7
81.4
40%
20%
11.1
25
32.8
17.2
沈阳
北京
广州
上海
HBV基因型的临床意义
近年来研究发现, HBV基因型具有如下意义
HBV标志物清除 病毒致病性 乙型肝炎的病程及转归 药物敏感性
与HBV血清型比较,HBV 基因型具有更加重要的意义。
HBV标志物清除
HBV基因型和ＨＢｅＡｇ的清除的关系
核酸序列测定法检测HBV基因 分型方法
首先采用末端终止法，获得待检样本的 核酸序列，通常按照国际惯例选择HBV S 区基因进行扩增，获得HBV S区的序列， 然后将该序列与国际基因库中HBV 各个 基因型的标准序列进行比对，建立亲缘 树，分析待检HBV与何种基因型的遗传 距离最近，即判断为该种基因型。
Patients Without HBsAg Seroclearance (n = 50)
1 (3.3) 16 (53.3%) 10 (33.3%) 2 (6.7) 1 (3.3) -
2 (4) 15 (30%) 32 (64%) 1 (2)
Among patients with single genotype B or C, those with HBsAg seroclearance had a higher proportion of genotype B and lower proportion of genotype C when compared to controls; odds ratio 3.41; (95% CI, 1.26-9.28); P = .014.
HBV的基因型和分布
亚洲部分地区的基因型分布
100% 80%
32 81.4
HBV基因型B
84.7
60% 40%
53
HBV基因型C 其他基因型
20%
17.2 12.2
0% 中国 (上海） 台湾 日本
国内部分地区基因型分布
100%
25
2.5 23
1.4 其它基因型 B、C混合型 C型 B型
80%
60%
Kao JH, et al. J Hepatol 2000;33:998–1002.
核苷类药物疗效与HBV基因型的关系。
注：最近文献倾向于没有两者没有差异，但是基因型B除外。 Intervirology 2003;46:373–376
检测基因分型的常见方法
基因测序法 PCR-RFLP ELISA 生物芯片 实时荧光PCR法
病毒致病性
HBV基因型与肝硬化的关系
病毒致病性
HBV基因型和肝细胞癌的关系
KAO等在进一步对67 例无症状HBV携带,103 例慢性肝
炎,32 例肝硬化,20 பைடு நூலகம்肝细胞癌患者进行基因分型研究中发现,
各组均以B/ C 型为主,C基因型所占比例按上述顺序逐渐增大, 而B 基因型的比例逐渐减小;与B 基因型比较,C 基因型在肝硬 化及50 岁以上的肝细胞癌患者中比例较高,而B 基因型与50 岁 以下,特别是35 岁以下的肝细胞癌患者有关。
HBV基因分型检测方法及其意义
杭州博赛基因诊断技术有限公司
HBV的基因型和分布
1. 根据ＨＢＶ全基因核苷酸序列异源性≥８％或者Ｓ基因 区核苷酸序列异源性≥４％，将不同病毒株分为不同的 基因型，迄今为止，ＨＢＶ可以分为８个基因型，即Ａ、 Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ和Ｈ型。 2. A B D E F G H 型：西欧,北欧、北美洲及非洲地区; 型和C 型：亚洲,澳大利亚; 型：中东、北非和南欧; 型：非洲撒哈拉沙漠地带; 型：美国; 型：法国和美国; 型：尼加拉瓜、墨西哥,及美国加里弗尼亚地区。
临床资料显示，ＨＢｅＡｇ的清除可能与ＨＢＶ基因型有关。
与Ｂ基因型相比，Ｃ基因型有更高的ＨＢｅＡｇ阳性率，分别为 １６％与５３％。
Ｂ基因型的自发性ＨＢｅＡｇ清除要比C基因型早１０年，并且在 ＨＢｅＡｇ清除后，肝脏生物化学指标持续正常。
HBV标志物清除
HBeAg累积清除率
Journal of Medical Virology 70:350–354 (2003)
HBV标志物清除
HBV基因型与HBsAg转阴 的关系
No. of Patients Single genotype* A (%) B (%) C (%) D (%) Mixed genotypes A + D (%) B + C (%)
*
Patients With HBsAg Seroclearance (n = 30)
HBV基因型与抗病毒药物敏感性的关系
不同基因型HBV 感染对干扰素治疗的反应有差别
Kao 对58 例慢性乙型肝炎患者给予干扰素治疗48周,B 基因型和C 基因型的完全应答率(血清ALT 恢复正常,HBeAg 消除,HBV DNA 转阴) 分 别为41％和15％ ,说明干扰素对B基因型治疗效果较好。
Hepatology. 2004 Jun;39(6):1694-701.
HBV 基因型与病毒致制病性的关系
• 日本学者Shiina分析了1 744 例HBsAg 阳性者的基因
型与肝功能异常的关系后发现,与B 基因型相比,C 基 因型的肝功能异常更为常见。
• C 基因型引起的临床表现及组织学损伤更严重。