微生物综合实验指导书
微生物实验指导书
实验一普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察一、实验目的1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。
2．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。
3．通过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物的一般形态。
二、实验原理普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。
图1-1 双目生物显微镜1．机械部分：（1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。
镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。
（2）转换器：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。
有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。
（3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。
（4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调节物镜和标本之间的距离。
2．光学部分：（1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。
（2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是显微镜中最主要的部分。
各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（AN ）及所要求盖玻片厚度等主要参数。
物镜的性能由数值孔径决定，并且还依赖于物镜的分辨率。
（3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。
聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。
孔径光阑是用来调节对比度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。
当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时，就可以得到足够对比度的良好图象。
如果开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；如果开得太小，则分辨率下降，降低物像的清晰度。
（4）电光源：在显微镜的下部，提供观察标本时所用光源。
三、实验器材1．普通光学显微镜（双目生物显微镜）2．载玻片、盖玻片若干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培养液，新鲜活性污泥四、实验方法１．低倍镜的操作（１）首先把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。
微生物实验指导书-教材
微⽣物实验指导书-教材微⽣物学实验指导书⽬录实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术 (3)实验⼆培养基的配制 (8)实验三从⼟壤中分离微⽣物及纯化 (11)实验四微⽣物的接种技术 (14)试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察 (17)实验六细菌的简单染⾊和⾰兰⽒染⾊ (20)实验七⼤肠杆菌⽣长曲线的测定 (23)实验⼋实验室环境和⼈体表⾯微⽣物的检查 (25)实验九乳酸菌的检测 (28)实验⼀玻璃器⽫清洗、包扎与常⽤灭菌技术【⽬的要求】1. 学习并掌握棉塞制作的⽬的、原理及⽅法；2. 学习并掌握玻璃器⽫清洗及包扎⽅法；3.掌握⾼压蒸汽灭菌的基本原理及操作⽅法。
4.了解其它常⽤消毒灭菌技术原理及技术【基本原理】棉塞的作⽤有⼆：⼀是防⽌杂菌污染，⼆是保证通⽓良好。
因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较⼤的影响。
微⽣物学实验所⽤的器⽫，⼤多数要进⾏清洗、消毒、灭菌，才能⽤来培养微⽣物。
玻璃器⽫的包扎⽅法正确合理，在使⽤过程中才能有效防⽌杂菌的污染。
玻璃器⽫包扎好后，⼀般⽤⾼压蒸⽓灭菌法进⾏灭菌。
⾼压蒸⽓灭菌是将待灭菌的物品放在⼀个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的⽔沸腾⽽产⽣蒸⽓。
待⽔蒸⽓急剧地将锅内的冷空⽓从排⽓阀中驱尽，然后关闭排⽓阀，继续加热，此时由于蒸⽓不能溢出，⽽增加了灭菌锅内的压⼒，从⽽使沸点增⾼，得到100℃以上的⾼温，导致菌体蛋⽩质凝固变性⽽达到灭菌的⽬的。
此外，常见灭菌⽅法还有⼲热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。
对空间灭菌常使⽤甲醛加⾼锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌⽅法。
【实验⽤品】棉花，试管，培养⽫，纱布，三⾓瓶，棉线，量筒，⽜⽪纸（或旧报纸），LDZX-50KBS ⽴式⾼压蒸⽓灭菌锅，常⽤灭菌⽤具、药剂等等。
【⽅法步骤】⼀、棉塞的制作正确的棉塞要求形状，⼤⼩，松紧与试管⼝（或三⾓瓶⼝）完全适合，过紧妨碍空⽓流通，操作不便；过松则达不到滤菌的⽬的。
制作过程见图1，包括取棉花、整理、折⾓、卷紧、成形、塞试管等步骤。
微生物实验指导书（1）范文
微⽣物实验指导书（1）范⽂《微⽣物学实验》实验⼀显微镜的使⽤、细菌⾰兰⽒染⾊法及细菌特殊结构的观察（⼀）实验⽬的1.了解普通光学显微镜的基本构造和⼯作原理2.学习并掌握油镜的原理和使⽤⽅法。
3. 在油镜下观察细菌⼏种基本形态4．掌握细菌⾰兰⽒染⾊法（⼆）实验原理1．显微镜的基本结构及油镜的⼯作原理现代普通光学显微镜利⽤⽬镜和物镜两组透镜系统来放⼤成像，故⼜常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两⼤部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
⽽在普通光学显微镜通常配置的⼏种物镜中，油镜的放⼤倍数最⼤，对微⽣物学研究最为重要。
与其他物镜相⽐，油镜的使⽤⽐较特殊，需在载玻⽚与镜头之间加滴镜油，这主要有如下⼆⽅⾯的原因：1. 增加照明亮度油镜的放⼤倍数可达100 Χ，放⼤倍数这样⼤的镜头，焦距很短，直径很⼩，但所需要的光照强度却最⼤。
从承载标本的玻⽚透过来的光线，因介质密度不同（从玻⽚进⼊空⽓，再进⼊镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进⼊镜头，致使在使⽤油镜时会因射⼊的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使⽤油镜时须在油镜与玻⽚之间加⼊与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常⽤⾹柏油，其折射率n=1.5 2）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨⼒(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最⼩距离的能⼒。
从物理学⾓度看，光学显微镜的分辨率受光的⼲涉现象及所⽤物镜性能的限制，分辨⼒D可表⽰为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7 µ m ），⽽数值孔径值则取决于物镜的镜⼝⾓和玻⽚与镜头间介质的折射率，可表⽰为：NA=n × sin α式中α为光线最⼤⼊射⾓的半数。
它取决于物镜的直径和焦距，⼀般来说在实际应⽤中最⼤只能达到120 O ，⽽n 为介质折射率。
微生物学实验指导书(1-5)
微生物学实验指导书目录实验一实验室环境和人体表面微生物的检查 (2)实验二普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (5)实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色 (12)实验四放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 (16)实验五酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法 (20)生命科学学院微生物学教研室编写实验一实验室环境和人体表面微生物的检查微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。
在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。
只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。
由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。
一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。
不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。
不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。
本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落的形态和数量。
一、实验器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。
2.溶液和试剂无菌水。
3.仪器和其他用品灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。
二、目的要求1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。
2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。
微生物的分离纯化综合实验
一、实验方案
1. 实验现象与结果
2. 本实验的关键环节及改进措施
⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前, 直接在酒精灯上烧灼灭菌, 把环和金属丝烧红即可。
接种环使用后, 先在火焰周围把环上标本烤干, 再烧灼灭菌, 以免标本汽化, 爆烈四溅, 污染环境。
金属杆快速通过火焰2－3次, 杀灭表面微生物。
⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。
⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。
思考题
1.食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？
2.食品被微生物污染后有哪些危害？
3、检样稀释时, 每个稀释度都要更换刻度吸管, 为什么？
1.答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物, 且无机盐含量相对较低, 食品中含有一定的水分, 并且食品包装后容易使内部升温, 这些都是很适合微生物(细菌、原虫、病毒)生长繁殖的情况, 因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。
所以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等, 或者真空包装。
2.答:⑴、降低食品的营养；
⑵、引起食品腐败变质；
⑶、引起呕吐、中毒或者某些疾病(如痢疾、腹泻、呼吸道感染等)和潜在性的慢性危
害等。
3.答: 每个稀释度都要更换刻度吸管可以在一定程度上保证不会沾有上一个稀释度得溶液, 且减少污染, 使浓度稀释得更加准确, 增加实验结果的准确性。
指导教师评语及评分:
签名: 年月日。
微生物学实验技术指导书
实验须知普通微生物学实验课的目的是，训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基础知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。
同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严谨认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的作风。
为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。
2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。
3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。
4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。
5.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。
如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。
必要时用灭火器。
6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。
对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。
7.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石碳酸液覆盖0.5小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。
凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前需浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。
8.每次实验需进行培养的材料，应标明姓名、组别及处理方法，放于教师指定的仪器内培养。
实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。
9.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。
10.实验结束后，整理桌面，物归原处，留人打扫室内卫生。
11.离实验室前，将手洗净，注意关闭火、煤气、灯、水管等。
微生物学实验室常用器皿微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌后用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。
微生物实验指导
二零零六年十月目录实验一显微镜油浸系物镜的使用 ------------------------------------ 3实验二细菌形态的观察 ---------------------------------------------------- 4实验三细菌简单染色法及口腔微生物的观察 -------------------- 5实验四细菌的革兰氏染色------------------------------------------------- 7实验五细菌的芽胞染色 ---------------------------------------------------- 8实验六酵母菌的形态观察实验----------------------------------------- 10实验七霉菌的形态观察 --------------------------------------------------- 12实验八细菌大小的测定 --------------------------------------------------- 14实验九细菌数量的测定（血球板计数） -------------------------- 16实验十培养基的配制------------------------------------------------------- 19实验十一消毒与灭菌------------------------------------------------------- 21实验十二稀释平板计数及微生物菌落形态的观察 ------------ 27实验十三紫外线对微生物生长的影响 ------------------------------ 30实验十四抗生素对微生物的作用 ------------------------------------- 30实验十五比浊法测定大肠杆菌的生长曲线 --------------------- 31实验十六土壤中好气性细菌的分离与计数(附划线分离法)33实验十七土壤中放线菌的分离与计数 ---------------------------- 35实验十八土壤中真菌的分离与计数-------------------------------- 36实验十九纤维素分解试验 --------------------------------------------------- 37实验一显微镜油浸系物镜的使用一、实验目的和实验内容目的：复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法内容：1、学习油浸系物镜的使用方法2、用油镜观察细菌三型和放线菌染色装片二、实验材料和用具细菌三型、放线菌的染色装片，香柏油、二甲苯，显微镜、擦镜纸。
微生物学类实验指导书(下)
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前，能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。
通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
1. 淀粉酶产生菌的分离与纯化1.1 实验目的学习从自然界中分离淀粉酶产生菌，并进行分离与纯化。
1.2 实验原理淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组成的。
按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。
产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。
利用淀粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判断淀粉酶活力的高低。
1.3实验仪器与材料土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
1.4 实验方法与步骤1.4.1分离1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；2）取1：10土壤悬液5 ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80 ℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于30-32 ℃培养24-48 h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
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食品微生物实验指导书（Ⅱ）上海理工大学食品与生物技术研究所2010年9月一、拟利用本实验室设备的名称及试剂需要五、审批意见四. 考核方法与要求(一) 基础性实验部分1．平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占30% 2．报告成绩：实验报告等，占30%3．考试成绩：占40%4．综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩(二) 综合性实验部分1. 平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占30%2. 设计成绩: 提交实验设计报告等，占30%3. 报告成绩：实验报告和实验产物等，占40%4. 综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩(三) 研究性实验部分1. 选做该类实验的同学可不选综合性实验项目，成绩评定参照综合性实验部分。
2. 实验报告要求以论文形式撰写。
第二部分应用性实验部分实验18 酒精发酵及糯米甜酒的酿制一、实验目的和内容目的：学习和掌握酵母茵发酵糖产生酒精和酒曲发酵糯米酿制糯米甜酒的方法。
内容：1．酵母菌的酒精发酵。
2．糯米甜酒的酿制。
二、实验材料和用具培养24h的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面菌种。
酒精发酵培养基、甜酒曲、蒸馏水、无菌水、糯米。
铝锅、电炉、三角瓶、牛皮纸、棉绳、蒸馏装置、水浴锅、振荡器、酒精比重计。
三、操作步骤(一)酵母菌的酒精发酵1．培养基配制好的发酵培养基分装入300mL三角瓶中,每瓶100mL, 121℃湿热灭菌20-30min。
2．接种和培养于培养24h的酿酒酵母斜面中加入无菌水5mL，制成菌悬液。
并吸取1mL接种于装有100mL培养基的三角瓶中，一共接2瓶，其中l瓶于30℃恒温静止培养，另l瓶置30℃恒温振荡培养。
3．酵母菌数目的计数每隔24h取样，经10倍稀释后进行细胞计数(方法参阅“细菌数量测定”)。
4．酒精蒸馏及酒精度的测定取60mL已发酵培养3d的发酵液加至蒸馏装置的圆底烧瓶中，在水浴锅中85—95℃下蒸馏。
当开始流出液体时，淮确收集40mL于量筒中，用酒精比重计测量酒精度。
5．品尝取少量一定浓度(30一40度)的酒品尝，体会口感。
(二)糯米甜酒的酿制1．甜酒培养基制作称取一定量优质糯米(糙糯米更好)。
用水淘洗干净后，加水量为米水比1：1，加热煮熟成饭。
或者糯米洗净后，用水浸透，沥干水后．加热蒸熟成饭，即为甜酒培养基。
2接种糯米冷却至35℃以下，加入适量的甜酒曲(用量按产品说明书)并喷洒一些清水拌匀，然后装人到干净的三角瓶中或装入聚丙烯袋中。
装饭量为容器的1/3一2/3，中央挖洞，饭面上再撒一些酒曲，塞上棉塞或扎好袋口，置25—30℃下培养发酵。
3．培养发酵发酵2d便可闻到酒香味，开始渗出清液，3—4d渗出液越来越多，此时，把洞填平，60 淮阴师范学院生物实验中心让其继续发酵。
4．产品处理 培养发酵至第7天取出，把酒糟滤去，汁液即为糯米甜酒原液，加入一定量的水加热煮沸便是糯米甜酒，即可品尝。
四、注意事项酿制糯米甜酒时糯米饭一定要煮熟煮透，不能太硬或夹生；米饭一定要凉适至35℃拌酒曲，否则会影响正常发酵。
五、演示酒精蒸馏过程 六、实验报告1．记录酵母酒精发酵过程，比较两种培养方法结果的不同，并解释其原因。
2．记录糯米酿制糯米甜酒的发酵过程，以及糯米甜润的外观、色、香、味和口感。
七、问题和思考1、为什么糯米饭温度必须降到35℃下拌酒曲, 发酵才能正常进行? 糯米饭一开始发酵时要挖个洞,后来又填平,为什么?2、酒精发酵培养基配方中如去掉KH 2PO 4矾，同样接入酒精酵母菌进行发酵，将出现何种结果?为什么? 参考书目钱存柔，童碧虹．微生物学基础知识与实验指导 北京；科学出版社，1979实验19 抗生素抗菌谱及抗生菌的抗药性测定一、实验目的和内容目的：学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。
内容：1．供试菌的培养与制备。
2．抗生素抗菌谱的测定。
二、实验材料和用具金黄色葡萄球菌(Staphylocuccus aureus )、大肠杆菌(E ．coli )斜面菌种(野生株及不同抗药程度的抗链霉素菌株3株)。
牛肉膏蛋白胨培养基斜面。
供试抗生素：氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、链霉素和四环素。
恒温培养箱、镊子、圆滤纸片(直径为8．5mm)或牛律杯、培养皿(直径12cm) 。
三、操作步骤(一) 供试菌的培养基制备金黄色葡萄球菌(代表革兰氏阳性菌)和大肠杆菌(代表革兰氏阴性菌)接种在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上，置37℃下培养18—24h ，取出后用5mL 无菌水洗下，使成菌悬液备用。
(二) 配制所需浓度的抗生素各抗生素分别配制成以下浓度：氨苄青霉素100ug ／mL(溶于水)，氯霉素200 ug ／mL (溶于乙醇)，卡那霉素100 ug ／mL (溶于水)，链霉素100卡那霉素ug ／mL (溶于水)，四环素100卡那霉素(溶于乙醇)，配制好的溶液经o ．45um 的滤膜无菌过滤后备用。
(三)抗生素抗菌谱的测定采用液体扩散法，分别吸取供试菌悬液0.5 mL 加在牛肉膏、蛋白胨琼脂平板上，用无菌涂布器涂布均匀(每个学生两只平板，一只涂布大肠杆菌，另一只涂布金黄色葡萄球菌)，待平板表面液体渗干后，在皿底用蜡笔分成6等份，每一等份标明一种抗生素(图26—1)，设一无菌水作对照，用滤纸片法或杯碟法测定。
具体方法是：用无菌镊子将滤纸片浸入上述抗生素溶液中，取出，并在瓶内壁除去多余的药液，以无菌操作将纸片对号转放到接好供试菌的平板的小区内，或将牛律杯置于供试菌的平板上，加入一定量的抗生素溶液．置37℃．培养18—24h，测定抑菌圈的直径，用抑菌圈的大小来表示抗生素的抗菌谱。
62 淮阴师范学院生物实验中心(四) 抗生素的抗药性测定1．制备链霉素药物平板取4套无菌培养皿，皿底标记编号，从链霉素溶液(100 ug／mL)中，分别吸出0.2、0.4、0.6和0.8mL．加至以上培养皿中，倒人冷却至50℃的融化牛肉育蛋白胨培养基中，迅速混匀，制成药物平板，待凝后在每个平皿的皿底划分成4份，并注明1—4号，备用。
2．抗药性测定在以上1—3号空格上分别接上不同抗药程度的抗链霉素菌株3株，在4号接入野生型菌株作对照，37℃培养24h后观察菌生长情况，并记录。
以“+”表示生长，以“一”表示不生长。
四、注意事项1. 供试菌液涂布于平板后，待菌液稍干再加入滤纸片或牛律杯。
2. 制备药物平板时，注意把药物与培养基充分混匀。
五实验报告1. 将抗生素的抗菌结果填入下表: 微生物学实验指导632．根据以上结果说明供试抗生素的抗菌谱。
3．记录不同大肠杆菌的抗药性测定结果。
六、问题和思考1．抗生素对微个物的作用机制有几种?举例说明之。
2．如供试菌为酵母菌、放线菌或霉菌，应如何测定抗生素的抗菌谱?参考书目1. 天宜磊简明微生物学及实验技术新疆：新疆科技卫生出版社，19942. 范秀容，李广武．沈萍微生物学实验第二版北京：高等教育出版社，19893. 徐积思，朱明珍抗生素北京：科学出版社，1982综合性实验指导实验21、食用菌的抑菌实验一、实验性质和项目来源实验性质：综合性实验项目来源：本系2002级学生年度论文转化二、实验目的与要求使学生学会提取技术，较熟练应用微生物学抑菌实验的基本原理和常规的基本实验技术，独立完成培养基配制、灭菌、接种、到平板、涂布、稀释、记数等实验项目。
学会设计综合性实验和综合性实验报告规范的书写格式。
三、实验内容1．实验材料中抑菌物质的提取；2．适宜浓度供试菌液的制备（比浊法）；3．抑菌试验（滤纸片法）四、实验安排时间安排：本实验共6学时；1学时准备实验；2学时抑菌物质的提取；2学时菌种培养、供试菌液的制备；1学时观察、描述、记载。
分组安排：每5人一组；每组分别选择一种食用菌作为研究对象(自由选择)。
程序安排：预习建议的参考书（学生实验报告样本由实验指导老师提供）→预习所选择的食用菌生理特点→分组写出实验流程设计书→指导教师确认实验设计的可行性→实验准备→预实验→修改实验方案→进行实验选择合适的培养基种类→计算培养基需要量→配置培养基→灭菌待用。
实验材料中抑菌物质的提取→适宜浓度供试菌液的制备（比浊法）→抑菌试验（滤纸片法）五、操作本实验需要的基本操作训练已经在前面的一些实验中学习过，在这里不再一一列出每一操作步骤。
为了帮助预习，将有关操作名称列出，这些操作在建议参考书中都可以找到。
1．培养基配置和灭菌2．无菌操作3．显微镜使用和细菌记数70 淮阴师范学院生物实验中心4．分光光度计使用和标准曲线绘制5．系列稀释方法6．抑菌试验（滤纸片法）六、试验报告记载内容1．姓名、班级、学号、小组编号、试验开始日期/时间2．材料和方法2．1材料仪器和药品、所选的食用菌种类、供试菌种、培养基组成等2．2方法培养基配置和灭菌、系列稀释、倾倒平板、抑菌物质的提取、适宜浓度供试菌液的制备（比浊法）、抑菌试验（滤纸片法）3．结果抑菌圈记录4．讨论七、组间交流(学时数不占实验学时数，将在理论课学时数中安排)每组自由选定1人向全班做报告。
第四部分微生物实验技能的测评微生物学实验是微生物教学的重要组成部分．对学生实验基本技能的培养,在教学中占有重要的位置。
为了检验学生在经过微生物实验课学习后，对微生物实验基本技术和知识的掌握程度并对学生学习效果进行评定·测评内容包括对微生物学实验基本知识和技能的掌握，应用所学识进行实验设计及系统地完成实验的实际工作能力。
下面是为此而设计的两种测方式，可选择其中的一种进行检测。
基本实验技能的检测一、实验目的和内容目的:掌握微生物学的基本实验技能并进行测试。
内容:1．复习全部基本实验操作。
2．教师对基本实验技能进行全面辅导，并接受学生的提问。
3．开放实验室(固定开放时间，学生可自由进入实验室) 。
二、实验材料和用具细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌种，细菌形态装片、培养基(液体、斜面、平板)、染色液。
载玻片、盖玻片、接种针、接种环、酒精灯、移液管、试管、培养皿、包装纸、线绳、高压蒸汽灭菌锅、显微镜。
三、基本步骤(一)复习的主要内容1. 实验的基本操作方法(1) 培养基的配制。
(2) 试管、培养皿、移液管等的包扎。
(3) 物品的高压蒸汽灭菌和干热灭菌。
(4) 细菌制片、单染色、革兰氏染色及染色原理。
(5) 铺平板、制斜面。
(6) 从试管斜面菌种划线接种至平板。
(7) 从试管科面菌种转接到试管科面。
88 淮阴师范学院生物实验中心(8) 从试管斜面菌种转接至液体培养基。
2．微生物的分离纯化(1)四大类群微生物的常用培养基及其pH范围。
(2)涂布法和混菌法的平板接种方法。
(3)穿刺接种。
(4)菌悬液的梯度稀释。
(5)划线分离纯化微生物。
微生物学实验指导89实验设计及实施能力的测评一、实验目的和内容目的：了解学生对实验的知识内容的灵活应用能力。