猪O型口蹄疫新型基因工程疫苗毒株的构建论
猪O型口蹄疫疫苗免疫效果试验报告
１１ 试 验 时 间与 试 验 动 物 ．
型 口蹄疫抗体间接正 向血凝试 验试剂 盒说明书进行
记录 。结果判定： 根据 农业部 下达 的标准 ， 检测猪 口 蹄疫免疫抗体滴度 ≥５为合格 ，５为不合格 ， ＜ 并经过 重复检验 ， 确定抗体滴度 。
１５ 试 验 猪 分 组 与 试 验 方 法 ．
３３０） ６ ００
文 章 编 ￣ ：０ ２ １５ （０ ２０ — １ ３ ０ －１０ — ９ ７２ １）３ ０ １ — ２
摘 要： 随机选 择规模猪 场 ４ ２日龄左右 的仔猪 ３ ０头和散养 户的 ８ ６日龄散养猪 ６头 ， 分别进行两 次 ０型 口蹄 疫灭活疫苗 免疫 ， 间接正 向血凝检 测 口蹄疫 免疫抗体 。结果 显示 ， 用 规模猪场 的仔猪 免疫抗体检 测 ， 首免 后 ２ 均滴度超 过 ５３ 均 为合格 ； ８ｄ平 －， 二免后 ２ 均滴度 超过 ８１ 均为合 ８ｄ平 ．， 格 。散养 猪只免疫抗体检测 ， 首免后 ２ ８ｄ平均滴度 ３ ２ 为不合格 ； ．， ５ 二免后 ２ ８ｄ平均 滴度 ９１ ， ． 为 ７ 合格 。试验表 明， ０型 口蹄疫灭 活疫苗 经过 两次免疫 可获得 满意效果 。 猪 关键词 ： ０型 １蹄疫疫苗 ； ： ３ 免疫 ； 抗体
１ ． 采血 次数 与 时 间 ６
１ ． 规 模猪 场 首 免 当天 （ ．１ ６ 指未注 射 疫苗 前 当 天）首免后第 ２ 天、８ ， 免后第 ２ ， １ ２ 天 二 ８天 ， 前 腔 经 静脉或耳静脉采血 １ ， 次 分离血清 ， 于抗体检测 。 用 下简称 中牧 ０型 口蹄疫灭活疫苗） ，批 号 ０ ００ ４ ９ ２０ ，
２１ ０ ２第 ３期
养猪 Ｓ Ｎ Ｒ Ｕ Ｔ Ｏ ＷＩ Ｅ Ｐ ＯＤ Ｃ Ｉ Ｎ
猪口蹄疫O型合成肽疫苗课件
疫苗的免疫机制
抗原识别
疫苗中的合成肽被免疫系统识别 为外来抗原。
免疫应答
免疫系统针对这些抗原产生特异性 抗体和记忆细胞，当再次接触相同 抗原时，迅速并有效地产生免疫应 答。
免疫记忆
记忆细胞能够在体内长期存活，当 再次接触相同病原体时，能更快地 启动免疫反应，提高免疫力。
02
CATALOGUE
疫苗的制造与生产
对生产过程中产生的废弃物进 行无害化处理，防止对环境和
人类造成危害。
03
CATALOGUE
疫苗的接种与使用
疫苗的接种对象
健康猪
为了预防口蹄疫，健康猪 是疫苗接种的主要对象。
易感猪
对于容易感染口蹄疫的猪 ，如幼猪和老年猪，应优 先接种疫苗。
受威胁猪
处于口蹄疫高发区的猪或 与患病猪接触过的猪也应 接种疫苗。
猪群健康。
提高生产效益
接种疫苗能够预防疾病，减少治 疗成本，提高养殖生产效益。
04
CATALOGUE
疫苗的安全性与有效性
疫苗的安全性评价
临床试验
在疫苗上市前，需进行大量临床试验，评估疫苗的安全性，确保 无严重不良反应。
免疫原性
评价疫苗的免疫原性，即疫苗引发机体产生免疫应答的能力，确保 疫苗能够刺激机体产生足够的免疫力。
预防和控制猪口蹄疫
猪口蹄疫是一种高度传染性疾病，对养猪业造成巨大损失。猪口蹄 疫O型合成肽疫苗可以有效预防和控制该病的发生和传播。
提高猪群健康水平
通过接种疫苗，可以提高猪群的免疫力，减少其他疾病的感染风险 ，从而整体提高猪群的健康水平。
降低治疗成本
预防疾病的发生可以减少猪只治疗费用，降低养殖成本，提高经济效 益。
疫苗的质量控制
O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及原核表达载体构建
１ ４ 引 物设 计 合 成 ．
参 照基 因库 已发 表 的 Ｏ 型 Ｆ Ｖ 基 因序列 ， ＭＤ 在
Ｖ １ 其中第 １ ０ Ｐ 上， ４ 位～第 １０ ６ 位氨基酸处的 Ｈ
环是 最主要 的保 护 性 抗 原 位 点【 ， 间构 象 比较 复 保守 区域设计 １对 目的片段包 含 Ｖ １ 因在 内的 ‘空 ］ Ｐ 基
１ 材 料 与 方 法
１ １ 细胞和病毒 －
Ｂ ＨＫ－１仓 鼠肾 细胞 ） 军 事 医学 科 学 院惠 赠 ； ２（ ，
制约经济发展 。口蹄疫发病特征为 口腔黏膜、 蹄部 和乳房皮肤发生水疱 ， 是动物中传染性最强的疾病 。
被世界动物卫生组织 （ Ｉ） Ｏ Ｅ 列为 Ａ类疾病 ， 国际生
（． １ 首都 师范大学生命科学学 院， 北京 １ ０ ３ Ｉ． ０ ０７ ２北京市农林科学 院畜 牧兽医研究所 ・ 北京 １０ ８ ） ０ ０ ９
中圈分类号 ： ８ ２ ６ ９ ６ ￥ ５． ５ ．
文■标识码 ： Ａ
文章一号 ：０ ７５ ３ （０ ６０—０ ００ １ ０—０ ８ ２ ０ ）８０ ７＿３
Ｆ Ｖ Ｏ Ｋ 型病毒株基 因， Ｏ型 口蹄疫流行毒 ＭＤ Ｉ 为
株细 胞培养 毒 基 因 ， 由上海 市农 业科 学 院惠赠 。
． 物武器公约会议也将它列为生物武器名 录， 是众所 １ ２ 质粒和 工程 茼 ｐ ＳＴ载体试剂 盒和 Ｔ ｐ ０ 受态细胞 为北 Ｂ－ ｏ１ 感 周知的“ 经济政治病 ¨ 。该病历来被世界各国和地
它也 是最重要 的 摘 要 ： Ｔ ｉ ｌ 取 Ｏ 型 口 蹄 疫 病 毒 免疫中发挥着重要 的作用 。同时， 用 ｒｏ 提 ｚ 副， 多年来 在 Ｆ Ｍ— Ｒ Ａ， Ｎ 根据 已经公布 的 Ｏ 型 口蹄 疫病 毒核苷 抗 原位 点及 抗原 变异 的关 键［ 因此 ， Ｖ分子流行病学调 查、 疫源 的追踪 、 毒株分型、 基 酸序列 ， 设计合成 １对 ＶＰ １基 因的引物 ， 通过 Ｄ
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点
Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ４５ ０ ００ ２ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ａ ｔ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ，ｆ ｏ ｏ ｔ — ａ ｎ ｄ — ｍ ｏ ｕ ｔ ｈ ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｉ Ｓ ｏ ｎ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｓ ｅ ｒ ｉ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ ｅ ｎ ｄ ａ ｎ —
２ ０ １ ４年 第 ｌ期
任巧玲 ： 猪 口蹄疫 ０ 型合成肽疫苗及其主要特 点
５ ｌ
猪 口蹄疫 Ｏ型 合成 肽疫 苗及 其主要特点
任 巧玲 ， 邢 宝松 ， 郭红 霞
（ 河 南省农业科学院畜牧兽医研究所 ， 河南 郑州 ４ ５ ０ ０ ０ ２ ）
摘
要： ２蹄 疫是 当前严重危 害我 国养猪 业的疾病之 一 ， １ 长期以来免 疫接 种是我 国预 防该病的 重要措施 。近年
ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ａ ｐ ｐｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｉ ｓ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．
猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗原多肽的串联表达及活性鉴定
Ｔ ｎ ｅ Ｅｘ ｒ ｓ ｉｎ ａ ｄ Ａｃｉｉ ａｙ ｉ ｏ ｔ ｅ ｅ ｔ ｅｏ ａ ｄ ｍ ｐ ｅ ｓ ｎ ｔ ｔ Ａｎ ｌ ｓ ｆＡ ｉ ｎ Ｐ ｐ ｉ ｆ ｏ ｖ ｙ ｓ ｎ ｇ ｄ
果显 示 ， 达蛋 白几 乎全部 以可溶 形 式存 在 。表 达 蛋 白经 Ｎｉ 表 —ＮＴ 树 脂 亲 和 纯化 ， Ｄ Ａ Ｓ Ｓ—Ｐ Ｅ ＡＧ
显 示纯化 的 目的蛋 白在 ２ Ｄ 处有 单 一 目的 条 带 ， 有 较 高的 纯度 。Ｅ Ｓ 检 测结 果 显 示 ， 化 ７ ｋ 具 Ｉ Ａ Ｉ 纯
ｐ ｐ ｉ ｅ ｖ ｃ ｉ ｅ ｔ — ｏ ｙ ｇ ｎ ｓ ｓ ｎ ｈ ｓｚ ｄ ｕ ｉ ｇ Ｅ． ｏ ｉ ｐ ｉ ｌ ｏ ｏ ｓａ ｃ ｒ ｉ ｐ ｅ ｅｗａ ｙ ｔ ｅ ｉ ｅ ｓ ｎ ｃ ｌ ｏ ｔｍａ ｄ ｎ ｃ ｏ ｄ ｎ ｏ ｔ ｅ ａ — ｃ ｎ ｃｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｆａ ｔｇ ｎ ｐ ｐ ｉ ｅ Ｔｈ ｅ ｏ ｂ ｎ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｖ ｃ ｏ ＥＴ３ ａ Ｐ２ ｗａ ｏ ｓ ｒ ｃ ｏ ａ ｉ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ｎ ｉ ｅ ｅ ｔｄ ． ｅ ｒ ｃ ｍ ｉ ａ ｔｅ ｐ ｅ ｓｏ ｅ ｔ ｒｐ ２ — ｓｃ ｎ ｔ ｕ — ｔ ｄ ｂ ｌ ｎ ｎ ｗｏ ｃ ｐ ｅ ｅ ｏ ｎ ｉ ｅ ｅ ｔ ｅｉ ｔ ｈ ｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｌ ｓ ｄ ｐ ｅ ｙ ｃｏ ｉ ｇ ｔ — ｏ ｙ ｇ ｎ ｆａ ｔｇ ｎ ｐ ｐ ｉ ｎ ｏ ｔ ｅ ｐ ｏ ａ ｙ ｔｃ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｐ ａ ｍｉ ＥＴ３ ａ ｄ ２．
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点任巧玲;邢宝松;郭红霞【摘要】At present, foot-and-mouth disease is one of the animal diseases which seriously endan-ger Chinese pig industry,,and vaccination is an important prevention methord for this disease. New-ly developed Synthetic peptide vaccine of O-type foot-and-mouth disease in swine has aroused great attention for its high immunogenicity, good biological safety, differentiate infection from vacci-nation, and so on. Foot-and-mouth disease virus, the antigenic epitope of type O foot-and-mouth disease virus, and the research status of synthetic peptide vaccine of type O foot-and-mouth dis-ease of swine and its main characteristic are discussed in this article In order to provide refer-ences for the promotion and the application of this vaccination.%口蹄疫是当前严重危害我国养猪业的疾病之一，长期以来免疫接种是我国预防该病的重要措施。
新型猪口蹄疫O型疫苗应用效果试验
个 镇 的３ 个 规模 猪场 进行 了分 组试 验 ，现将 试验 结果 报告 如 下 。
１ ． ２ 试 验 方 法
１ ． ２ ． １ 试 验猪 选择
１ 材 料和方法
１ ． １ 材 料
１ ． １ ． １ 试验 猪
分 别在 ３ 个 养 殖 场随 机选 择 ２ ５ ０ 头４ ５ 日龄健 康 仔猪 作 为对 比试
０１ ０１ ２０ ０ ４。 定 切 实有 效 的 生猪 口蹄疫 免疫 程 序 ，进 一 步提 升 生猪 口蹄疫 科 学 ２ 猪Ｏ 型 口蹄疫 抗 体液 相阻 断Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 诊 断试剂 盒 。生 产厂 家 ：中 防治 水 平 ，２ ０ １ １ 年９ 月 ～２ ０ １ ２ 年１ ０ 月 ，我 们 使 用 Ｏ 型灭 活 苗 （ Ｏ ， ＭＡ Ｙ ９ ８ ／ Ｂ Ｙ ／ ２ ０ １ ０ 株 ）和 ０ 型合 成 肽疫 苗 在 扬 中市 油 坊 、西 来 桥 二 国农业 科学 院兰 州兽 医研 究所 。批 号 ：２ ０ １ ２ ０ ９ １ ９ ０ １ 。
・１ １ ８・
农威 特 生物科 技 股份有 限公 司。批 号 ：Ｈ１ １ １ ２ ６ ８ Ｊ 。 ｒ ａ ｉ ｎ 离一 ０２ ０ ａ ｒ ｉ ｎ ，吸出血清 ，４ ￣ Ｃ 保存 。选择２ ０ １ ２ 年２ 月２ ７ 日试验猪 猪 口蹄疫０ 型合成肽疫苗。生产厂家 ：新疆 天康畜牧生物技 作为 疫苗 抗体 跟踪 组群 ，于 二免 后６ 周 、９ 周 、１ ２ 周 ，ｌ ￣ Ｐ ｌ ０ ５ 日龄 、 １ ３ ０ 日龄 、 １ ５ ０ 日龄 分别 在前腔 静脉 采血 ５ ｍ ｌ 。血样 以３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离 术股 份有 限公 司 。批号 ：２ ０ １ １ ０ ２ ８ 。 猪 口蹄 疫 ０ 型 合成 肽 疫 苗 。 生产 厂 家 ：中牧 实 业 股份 有 限公 卷
猪口蹄疫O型灭活疫苗质量标准
猪口蹄疫（O型）灭活疫苗质量标准本品系用口蹄疫O型病毒（猪源毒株）接种BHK－21细胞培养，收获培养物，经二乙烯亚胺（BEI）灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成。
用于预防猪O型口蹄疫。
【性状】外观为乳白色或淡粉红色的乳剂。
久置后，上层有少量油析出，振摇后呈均与乳剂。
剂型为水包油包水型。
用一清洁吸管，吸取少许疫苗滴于冷水表面，应呈云雾状扩散。
稳定性吸取疫苗10ml加入离心管中，以3000r/min离心15分钟，管底析出的水相应不多于0.5ml。
【安全检验】1．用小动物检验用体重350～450g的豚鼠2只，各皮下注射疫苗2ml；用体重18～22g的小白鼠5只，各皮下注射疫苗0.5ml。
连续观察7日，应不出现由疫苗引起的死亡或明显的局部和全身反应。
2．用猪检验用30～40日龄仔猪（细胞中和抗体效价不高于1:8、ELISA效价不高于1:8或乳鼠中和抗体效价不高于1:4）2头，各两侧耳根后肌肉分点注射2头份疫苗，逐日观察14日。
应不出现由疫苗引起的口蹄疫症状或明显的局部和全身不良反应。
【效力检验】用体重40kg左右的健康易感架子猪（细胞中和抗体效价不高于1:8、ELISA效价不高于1:8或乳鼠中和抗体效价不高于1:4）15头，分为3组，每组5头。
将疫苗分为1头份、1/3头份、1/9头份3个剂量组，每一剂量组分别于耳根后肌肉注射5头猪。
接种28日后，连同对照猪2头，每头猪耳根)。
连续观察10日。
对照猪后肌肉注射猪O型口蹄疫病毒强毒1.0ml(含103.0ID50均应至少1蹄出现水泡或溃疡。
免疫猪出现任何口蹄疫症状即判为不保护。
出现。
发病猪后要及时进行隔离。
按Reed－Muench法计算。
每头份疫苗应至少含6PD50【规格】（1）20ml/瓶（2）50ml/瓶（3）100ml/瓶。
【贮藏】在2～8℃保存，有效期为12个月。
【作用与用途】用于预防猪O型口蹄疫。
注苗后15日产生免疫力。
免疫期为6个月。
【用法与用量】根据厂家推荐的用法与用量使用。
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目录摘要 (III)关键词 (III)Abstract (III)Key words (IV)英文缩略词表 (IV)1前言 (1)1.1口蹄疫的基本特征 (1)1.1.1口蹄疫病毒基本概念 (1)1.1.2口蹄疫病毒生物学特征 (1)1.1.3口蹄疫病毒危害 (1)1.2泛素蛋白及其对抗原的影响 (2)1.3 siRNA干扰机制 (3)1.4 γ干扰素与口蹄疫免疫 (4)1.5 FMD疫苗研究进展 (5)1.6本实验研究的目的与意义 (6)2实验材料 (6)2.1菌种、毒株、载体与质粒 (6)2.2主要药品与试剂 (6)2.3主要培养基及配制 (7)2.4缓冲液及其配制 (7)2.5其他溶液 (7)2.5空斑筛选与纯化相关试剂 (8)2.6寡核苷酸引物 (8)3实验方法 (8)3.1转移载体PIECMVUbiP1P1SiFIFNγ的构建策略 (8)3.1.1限制性内切酶酶切反应 (9)3.1.2酶切产物的琼脂糖凝胶电泳检测 (9)3.1.3酶切产物的回收 (9)3.1.4回收产物的去磷酸化反应 (9)3.1.5目的基因与载体的酶连反应 (10)3.2 感受态细胞的制备、质粒的转化、质粒制备与纯化 (10)3.2.1大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） (10)3.2.2质粒的转化 (10)3.2.3质粒的小量制备（OMEGA试剂盒） (10)3.2.4质粒的大量制备（OMEGA试剂盒） (11)3.2.5阳性质粒的酶切鉴定 (12)3.3以PRV为载体表达FMDV抗原蛋白基因P1，泛素蛋白与抗原P1的融合基因Ubi- P1，RNA干扰基因shRNA，干扰素基因IFN-γ的重组病毒的构建 (12)3.3.1细胞的培养、冻存与复苏 (12)3.3.2 PRV TK-/gE-/LacZ+基因组DNA的提取 (12)3.3.3脂质体介导的共转染 (13)3.3.4重组病毒空斑纯化和PCR鉴定 (13)3.3.5鉴定用PCR模板处理 (14)3.3.6重组病毒PCR鉴定 (14)4结果与分析 (15)4.1转移质粒PIECMVUbiP1的构建 (15)4.2转移质粒PIECMVUbiP1P1的构建 (15)4.3转移质粒PIECMVUbiP1P1SiFIFNγ的构建 (16)4.4共转染产物接毒第三代PCR鉴定 (17)4.5重组病毒的空斑纯化及PCR鉴定 (18)4.5.1空斑的形成 (18)4.5.2在PK-15细胞上的第一轮空斑筛选 (19)4.5.3在Vero细胞上的第一轮空斑筛选 (20)4.5.4 重组病毒的空斑筛选结果 (20)5讨论 (20)5.1 载体的构建 (20)5.2 细胞的传代培养 (21)5.3 空斑筛选实验 (21)5.3.1 空斑筛选细胞的选择 (21)5.3.2 RNA干扰对空斑筛选结果的影响 (22)5.3.3干扰素γ对空斑筛选结果的影响 (22)参考文献： (22)致谢 (24)猪O型口蹄疫新型基因工程疫苗毒株的构建The construction of recombinat Virus for Generating a Novel Genetic Engineering Vaccine Agansit O Type FMDV ofPig摘要口蹄疫是一种急性、高度传染性的病毒性传染病，虽自20世纪初口蹄疫疫苗已经在世界部分地区应用，但目前全球口蹄疫疫情依然严重，也构成了世界动物及动物产品贸易的障碍。
由本实验室构建的猪伪狂犬病毒基因缺失株PRV TK-/gE-/LacZ+作为一种病毒载体，具有安全性好、容量大、重组效率高等优点，本研究用人工合成的O型口蹄疫P1基因作为抗原基因，用和泛素（Ub）融合的UbiP1作为另一个抗原基因同时达到增强细胞免疫效果，再将针对口蹄疫3B基因设计的shRNA和具有抗病毒及免疫调节效果的猪IFN-γ与以上两个功能基因串联，构建了具有四个功能基因的转移载体，将此转移载体和PRV缺失株TK-/gE-/LacZ+共转染细胞，发生基因重组后进行了空斑纯化，经鉴定，初步得到了含有P1基因、UbiP1、shRNA、IFN-γ四个功能基因的重组伪狂犬病毒，为进一步构建新型基因工程疫苗打下基础。
关键词：抗原基因；泛素蛋白基因；干扰素基因；重组病毒AbstractFoot and mouth disease (FMD) is an acute, highly contagious virul infection disease. Although vaccines, available since the early 1900s, have been used in parts of the world, the disease still is a serious globe outbtreak and become sanitary barrier to the commerce of animals and animal products. The vector virus PRV TK-/gE-/LacZ+ , constructed by our laboratory , has the advantages of safety, high capacity, high restructuring efficiency. This study we selecte synthetic O type FMDV P1 gene as antigen gene, P1 and ubiquitin (Ub) fusion gene UbiP1 as another antigen gene to enhance cellular immune effect. Then use shRNA designed for 3B gene of FMD, IFN-γ gene of porcine has anti-viral and immunomodulatory effects tandem with the above two function gene, constructed transfer vector with four functional gene. Making the transfer vector and the PRVTK-/gE-/LacZ+ cotransfected in cells. After the occurrence of recombinant, plaques were purified, identified, initially received recombinant pseudorabies virus with four functional genesof P1 gene, UbiP1, shRNA and IFN-γ, in order to further build a new foundation for the construction of genetic engineering vaccine.Key words：antigen gene; ubiquitin; interferon gene; recombinant virus英文缩略词表AbbreviationFMDV Ub UPS RNAi siRNA shRNA SIF IFNγPRV NCS Amp DMEM LB PBS PCR SDS EB OD EDTA PK Vero DMSO MEM Foot-and-Mouth disease virusUbiquitinUbiquitin-proteasome systemRNA interferenceRNA interference geneRNA interference geneInterference gene fragmentγ-interferon genePseudorabies virusNewborn calf serumAmplicillumDulbecco's Modified Eagle MediumLuria-Bertani mediumPhosphate buffer solutionPolymerase chain reactionSodium dodecylsulphateEthidium bromideOptical densityEDTA Disodium SaltPig kidney cellsAfrican green monkey kidney cellsDimethyl sulfoxideMinimal Essential Medium口蹄疫口蹄疫病毒泛素泛素蛋白酶系统小RNA干扰小RNA干扰基因小RNA干扰基因干扰基因区段γ干扰素基因伪狂犬病病毒新生牛血清氨苄青霉素改良Eagle培养基LB培养基磷酸盐缓冲液聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠溴化乙锭光密度乙二胺四乙酸猪肾细胞非洲绿猴肾细胞二甲基亚砜微小型培养基1前言1.1口蹄疫的基本特征1.1.1口蹄疫病毒基本概念口蹄疫(Foot-and-month disease, FMD)是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus, FMDV）感染引起的人畜共患的急性、烈性传染病，该病全世界分布广泛，主要感染偶蹄类，一旦爆发常造成巨大的经济损失。
由于存在制作灭活苗灭活不彻底和毒力返强造成的潜在危险，开发新型基因工程疫苗已引起人们的重视。
1.1.2口蹄疫病毒生物学特征口蹄疫病毒呈球形，正二十面体结构，直径20-25nm;无囊膜，对酸碱敏感，口蹄疫病毒粒子由衣壳和病毒核酸构成，衣壳由60个不对称的亚单位组成，每个亚单位含一分子的VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP4位于病毒颗粒内部。
FMDV属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，有7个血清型，即O，A，C，SAT 1, SAT 2, SAT 3和AsiaⅠ型(Rodriguez and Grubman, 2009)，各个血清型间无交叉反应（陆承平等，2005），病毒的这种特性，给其检疫、防疫带来极大的困难。
FMDV基因组为具有感染性的单股正链RNA，大小约8.5kb，只有一个开放的读码框(open reading frame, ORF)，两侧各有一个非编码区(non coding region, NCR)。
开放读码框首先翻译为一个多聚蛋白，经过蛋白酶切割为成熟的结构和非结构蛋白以及一些中间体。
FMDV基因组P1区编码结构蛋白，P12A前体物在3C蛋白酶作用下形成由VP4-VP2，VP3和VP1组成的原体。