荧光显微镜介绍及使用
荧光介绍及荧光显微镜的使用
01.
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二、可见光显 微镜的使用
光源在显微镜下方，不需要开汞灯
02.
添加标题
可以观察载玻片上的任何物质
三、成象系统
一．照相机
二．图象采集软件
○ Leica100图象分析软件，把显微镜下看 到的图象拍摄下来，保存成图片文件，再 进行相关分析。
使用要点
标本制作 正确选择滤色镜 200W的超高压汞灯作光源 ，需预热15
• （五）镜油
• 使用特一制般的暗无视荧野光荧镜光油显，微也镜可和用用上油述镜甘观油察代标替本。时，必须使用镜油，最好
单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）
电泳
01
制胶片
单细胞悬 液制备
02
细胞裂解
染色与观察
03
DNA碱解旋
中和
对照组与实验组中肺泡巨噬细胞DNA迁移的实验图象
DAPI+FITC+Texas Red
（二）盖玻片
•
盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。
• （三）标本
• 部影，响而判组物断织镜。切直片接或观其察他到标的本上不部能不太充厚分，激如发太。厚另激外发，光细大胞部重分迭消或耗杂在质标掩本盖下，
• （四）封裱剂
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什么是荧光 ?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态 转变为高能状态，再回到低能状态时释 放出的光。
即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 一种光化荧光
荧光的种类
荧光显微镜技术在生物学研究中的应用
荧光显微镜技术在生物学研究中的应用荧光显微镜是一种常用的实验工具，用于生物学和药学等领域的研究。
它使用荧光染料，将样品的细胞、分子等部分标记为荧光颜色，使得这些部位在显微镜下更加明显，方便观察研究。
这种技术在现代生物学中的地位越来越重要，本文将详细介绍荧光显微镜技术的应用。
一、荧光显微镜的介绍荧光显微镜的原理是利用某些化学物质（荧光染料）具有荧光特性，即将长波长的光（通常是紫外线）转换为短波长的光，形成可见的荧光颜色。
荧光染料对特定的物质具有亲和力（比如只结合某种蛋白质），所以荧光显微镜可以被用来标记特定的分子或细胞等。
荧光显微镜的优点在于，它提供了非常高的分辨率和灵敏度，使得微小的细胞或分子可以被清晰地看到。
此外，荧光显微镜还有许多其他的应用，包括流式细胞术、免疫组织化学和细胞培养等。
二、荧光显微镜在细胞学中的应用荧光显微镜技术在细胞学中得到广泛应用，因为它可以帮助科学家研究细胞的结构和功能以及细胞内分子的交互作用。
例如，荧光显微镜可以用来观察细胞骨架、细胞器和膜系统的形态。
此外，荧光显微镜还可以用来研究细胞内的互动作用，比如某些蛋白质的相互结合、信号传导和运输等。
三、荧光显微镜在神经科学中的应用荧光显微镜在神经科学中也得到了广泛应用。
例如，荧光染料可以用来标记和观察单个神经元甚至单个神经元的突触。
荧光标记还可以用来观察神经元之间的联系和体内物质的转运。
荧光显微镜的成像技术也使得我们能够更好地理解人类认知和学习等重要的神经过程。
四、荧光显微镜在医学研究中的应用在医学研究方面，荧光显微镜技术可以用来研究疾病的发生和发展。
例如，它可以用来观察生物标志物、病原体等在细胞和组织中的行为和分布。
此外，荧光显微镜标记的蛋白质、抗体等可以被用来检测和诊断疾病。
五、荧光显微镜在环境科学中的应用荧光显微镜在环境科学中的应用主要是在观察水质、土壤和大气中的微生物和微粒。
科学家可以用荧光染料来标记水中或土壤中的某些细菌、真菌或病毒，然后通过荧光显微镜来观察它们在水或土中的分布情况和数量。
荧光显微镜的使用流程
荧光显微镜的使用流程一、介绍在生物科学领域中，荧光显微镜是一种常用的工具。
它利用荧光现象来观察和研究细胞、组织和生物分子。
本文将介绍荧光显微镜的使用流程，包括前期准备、显微镜的操作步骤、关键技巧和常见问题解答。
二、前期准备在使用荧光显微镜之前，需要进行一些前期准备工作，以确保顺利进行观察和实验。
2.1 样本准备首先，需要准备好要观察的样本。
样本可以是细胞、组织切片或荧光标记的蛋白质等。
对于细胞样本，可以在培养皿中直接观察或使用刀片将其固定在载玻片上。
对于组织切片，需要进行固定、切片和染色等处理。
2.2 荧光染色荧光显微镜通过荧光标记物来观察样本。
因此，在观察前需要对样本进行荧光染色。
常用的荧光染料有荧光素、荧光素二异硫氰酸酯（FITC）等。
根据需要选择适当的染料，并根据染料的使用说明进行染色操作。
2.3 防护措施在进行荧光显微镜观察时，应注意个人防护。
戴上实验手套和口罩，避免接触染料和其他有害物质。
同时，确保显微镜和工作台的清洁，以避免样本污染和数据误差。
三、荧光显微镜的操作步骤荧光显微镜的操作步骤通常包括调节显微镜参数、调节荧光镜片和观察样本等。
3.1 调节显微镜参数在使用荧光显微镜前，需要调节显微镜的参数。
首先，打开显微镜，并调节光源亮度合适。
然后，调节物镜，使样本图像清晰可见。
最后，根据需要选择合适的荧光滤光片，并将其插入显微镜中。
3.2 调节荧光镜片荧光镜片是荧光显微镜中一个重要的部件。
在观察时，需要根据染料的特性来选择合适的荧光镜片。
常用的荧光镜片有单色荧光镜片、双色荧光镜片和三色荧光镜片等。
调节荧光镜片可以增强荧光信号和减少背景噪音。
3.3 观察样本当显微镜参数和荧光镜片设置好后，可以开始观察样本。
将染色好的样本放置在载玻片上，并用夹片封闭。
然后，将载玻片放置在显微镜的样本台上，并通过调节焦距和聚焦仪调整样本的焦平面。
最后，通过目镜观察样本，并使用涂片或液晶板记录图像。
四、关键技巧使用荧光显微镜的过程中，有一些关键技巧可以帮助提高观察效果和数据质量。
荧光显微镜的原理与应用
荧光显微镜的原理与应用前言荧光显微镜是一种利用荧光现象进行观察和显示样品细胞或分子结构的显微镜。
它的原理和应用使得生物学、医学、材料科学等领域的研究变得更加准确和深入。
本文将介绍荧光显微镜的原理、构成和其在不同领域的应用。
一、荧光显微镜的原理荧光显微镜的成像原理基于光的荧光现象和酵素固有荧光物质本身的特性。
1.光的荧光现象当物质受到一定波长的光照射后，能量被吸收并再次散发出去。
荧光显微镜利用激发光的波长激发标记在样品中的荧光物质，使其发出荧光信号。
这种荧光信号可以被荧光显微镜所捕获和放大，进而产生图像。
2.酵素固有荧光某些分子具有自身固有的荧光性质。
这些分子可以从基态跃迁到激发态，并在激发态上持续存在一段时间后再跃迁回基态。
通过观察这些分子的荧光信号，可以获得关于样品的信息。
二、荧光显微镜的构成荧光显微镜通常由以下几个主要部件组成：1.光源：用来提供激发样品的激发光，常用的光源有氘灯、汞灯、激光器等。
2.激发光滤镜：用于选择性地过滤或选择激发光的特定波长。
3.物镜：用来放大样品并收集由荧光物质发出的荧光信号。
4.荧光筛选器：用来选择特定的荧光波长，并阻挡其他波长的光线。
5.观察系统：包括目镜、眼镜或摄像机等设备，用于观察和记录荧光信号。
三、荧光显微镜在不同领域的应用荧光显微镜在生物学、医学、材料科学等领域有广泛的应用。
1.生物学研究荧光显微镜可以帮助研究者观察和分析生物学样本中的细胞结构和功能。
通过将特定荧光染料标记到细胞中，可以实时监测细胞的代谢状态、基因表达和蛋白质定位。
2.医学诊断荧光显微镜在医学诊断中发挥着重要作用。
例如，通过使用荧光标记剂可以检测肿瘤细胞，帮助医生进行早期诊断和治疗。
3.材料科学荧光显微镜在材料科学中的应用主要集中在材料的结构和性能测试上。
通过标记某些特定的分子或颗粒物，并观察它们在材料中的分布和运动，可以更好地了解材料的组成和特性。
4.环境监测荧光显微镜也可以应用于环境监测领域。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域的高级显微镜。
它通过激发样品中的荧光染料，使其发出可见光，从而观察和分析样品的细胞结构、蛋白质分布和荧光标记等信息。
本文将介绍荧光显微镜的使用方法，希望能够帮助您更好地进行实验和研究。
1. 样品准备。
在使用荧光显微镜之前，首先需要准备样品。
样品的准备工作包括固定、染色和装片等步骤。
在固定样品时，需要选择合适的固定液和固定时间，以保持样品的形态和结构。
染色是为了使样品中的特定成分能够发出荧光，常用的染色剂包括DAPI、FITC和TRITC 等。
在装片时，需要将样品放置在载玻片上，并加入适量的缓冲液，然后覆盖一张封片玻片。
2. 仪器准备。
在进行荧光显微镜观察之前，需要对显微镜进行适当的准备工作。
首先需要打开显微镜的电源，并调节亮度和对比度，使样品能够清晰可见。
然后需要选择合适的物镜和滤光片，以获得所需的放大倍数和荧光波长。
在使用荧光显微镜时，需要注意避免光源直射样品，以免损坏荧光染料和样品。
3. 观察操作。
在进行荧光显微镜观察时，需要注意以下几点操作。
首先，需要将装有样品的载玻片放置在显微镜的载物台上，并通过调节焦距和聚焦，使样品清晰可见。
然后需要选择合适的荧光滤光片，以滤除非荧光信号，并选择合适的荧光波长，以激发样品中的荧光染料。
在观察过程中，需要避免长时间曝光样品，以免造成荧光淬灭和伤害样品。
4. 数据分析。
在观察完样品后，需要对所获得的荧光图像进行数据分析。
首先需要对荧光图像进行采集和保存，并根据实验需要进行图像处理和分析。
常用的图像处理软件包括ImageJ、Adobe Photoshop和MetaMorph等。
在进行数据分析时，需要注意选择合适的分析方法和工具，以获得准确的实验结果。
总结。
荧光显微镜作为一种高级显微镜，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
在使用荧光显微镜时，需要注意样品的准备、仪器的准备、观察操作和数据分析等步骤，以获得准确的实验结果。
倒置荧光显微镜使用方法(一)
倒置荧光显微镜使用方法(一)倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种常用于细胞、组织等生物样品观察的显微镜。
其特点是将物镜和光源的位置倒置，使得观察样品更加方便。
下面将介绍几种常见的倒置荧光显微镜使用方法。
方法一：样品准备1.在无菌条件下，将生物样品移植到培养皿或载玻片中。
2.样品可以是活细胞，也可以是固定的组织切片等。
3.如果需要染色，可以根据实验需求选择适当的荧光染料。
方法二：显微镜设置1.将倒置显微镜放在实验台上，并确保显微镜的稳定性。
2.打开显微镜电源，待显微镜系统启动后进行下一步操作。
3.调整光源，使得荧光光源均匀而明亮。
4.根据实验需求选择适当的滤光片，用于选择荧光发射波长。
方法三：样品装载1.将培养皿或载玻片放置在显微镜的样品台上。
2.使用目镜观察样品并调整焦距，确保样品清晰可见。
3.根据样品大小和形状进行显微镜调焦，以获得最佳的观察效果。
4.确保样品和显微镜的镜头之间没有空气或污染物，以避免影响观察结果。
方法四：荧光观察1.使用目镜观察样品后，可以使用显微镜的荧光通道进行观察。
2.打开荧光激发光源，调整光强度适当，避免过度曝光或低信号。
3.使用适当的荧光滤光片，选择要观察的荧光波长范围。
4.使用气体扩散器或其他方法降低样品温度，以减少荧光褪色和光损伤。
方法五：图像处理与分析1.使用相机或图像采集系统，记录荧光显微镜观察的图像。
2.可以使用图像处理软件进行曝光、对比度、亮度等调整，以优化图像质量。
3.利用图像分析软件进行细胞大小、数量、定量荧光信号等参数的测量和分析。
方法六：清洁与维护1.每次使用完成后，及时关闭荧光光源和显微镜电源。
2.用干净的纸巾或棉签轻轻擦拭显微镜的镜头和其他表面。
3.定期检查显微镜的各个部件，如镜头、滤光片、光源等，若有问题及时修理或更换。
以上是倒置荧光显微镜的使用方法，希望对您的实验有所帮助。
请根据实际需求进行调整和适配，并注意实验的安全性和准确性。
荧光显微镜使用说明书
荧光显微镜使用说明书1. 引言荧光显微镜是一种高级显微镜，它通过荧光染料和荧光体来观察生物样本。
本说明书将向用户介绍荧光显微镜的基本操作和注意事项。
2. 设备使用前的准备在开始使用荧光显微镜之前，请确保以下准备工作已经完成：2.1 样本准备- 准备待观察的生物样本，并进行适当的固定和染色处理。
- 使用适当的荧光染料标记待观察的目标结构，比如细胞核或细胞器。
- 确保样本处于干燥且无尘的环境中，以免影响显微镜观察效果。
2.2 显微镜设置- 将荧光显微镜放置在水平且稳定的台面上，避免震动。
- 连接电源线并确保电源稳定。
- 打开显微镜主机，并调节照明系统到适当的亮度。
- 确保镜头已正确安装并调节到焦点位置。
3. 操作步骤3.1 调节荧光滤光片- 根据所使用的荧光染料种类，选择相应的滤光片组合。
请参考荧光染料厂家提供的荧光光谱信息。
- 将滤光片安装到显微镜的滤光器单元上，确保滤光片与光源相匹配。
3.2 焦距调整- 放置已准备好的样本到显微镜的载物台上，并使用载物台调节样本水平位置。
- 通过调节镜头的焦距轮和对焦杆，使样本逐渐变得清晰可见。
3.3 荧光成像- 使用显微镜的放大倍率调节旋钮，逐渐增加放大倍率以观察细节。
- 通过调节显微镜的聚光镜或荧光照明系统，确保样本受到均匀且适当的荧光照明。
- 使用取景器或相机从目镜观察孔观察并记录样本图像。
4. 注意事项- 在操作显微镜时，请务必小心轻放，避免撞击或其他损坏。
- 建议在室温下使用荧光显微镜，避免极端温度或湿度对设备造成不利影响。
- 使用前请确保手部清洁，避免在样本处理过程中引入杂质。
- 镜头润滑剂可能对荧光染料造成负面影响，请避免使用含润滑剂的显微镜油。
- 使用完毕后，请关闭显微镜并拔出电源线。
5. 故障排除如果在使用荧光显微镜过程中遇到问题，请尝试以下解决方案：5.1 样本无法观察到荧光信号- 检查荧光滤光片是否正确安装。
- 检查荧光染料是否已正确标记在待观察的结构上。
荧光显微镜的使用流程
荧光显微镜的使用流程1. 简介荧光显微镜是一种能够通过荧光信号来观察和研究样本的显微镜。
其特点在于可以使样本特定的结构或分子产生荧光，并通过荧光显微镜观察和记录这些荧光信号。
荧光显微镜广泛应用于生物学、医学、材料科学等多个领域。
本文将介绍荧光显微镜的使用流程，以帮助用户正确操作和获取优质的显微图像。
2. 准备工作在使用荧光显微镜前，需要进行以下准备工作：•样本制备：根据实验需求，选择适当的样本进行准备。
样本制备包括固定、染色等步骤，应根据具体实验需求进行操作。
•荧光染料：根据实验需求和样本特性，选择适当的荧光染料。
一般情况下，荧光染料应与样本结构或分子相互作用并产生荧光。
•试剂和介质：根据实验需求，选择适当的试剂和介质。
例如，荧光染料需要使用适当的缓冲液进行稀释。
3. 荧光显微镜样机操作流程以下是荧光显微镜的基本操作流程：1.打开荧光显微镜电源，并等待仪器的初始化完成。
2.调整显微镜的亮度和对比度，使图像清晰可见。
3.安装荧光滤光器：根据使用的荧光染料的激发和发射波长，选择适当的滤光片。
将滤光片安装在滤光器轮上，并转到相应的位置。
4.放置样品：将制备好的样品放置在显微镜的载物台上。
确保样品与显微镜的物镜接触良好。
5.调焦：使用显微镜的调焦轮或拉杆调节物镜与样品的距离，使图像清晰。
6.切换到荧光模式：转动显微镜上的切换开关，将显微镜切换到荧光模式。
7.调整曝光时间：根据样品的荧光强度和亮度要求，调整荧光显微镜的曝光时间。
8.观察和记录：通过目镜或相机观察和记录荧光显微镜下观察到的图像。
9.清洗样品和仪器：使用适当的方法清洗样品和仪器，以防止交叉污染。
10.关闭荧光显微镜：关闭荧光显微镜的电源。
4. 注意事项在使用荧光显微镜时，需要注意以下事项：•样品保持湿润：如果样品容易干燥或氧化，应使用适当的封装或装置来保持样品湿润。
•避免光敏感化合物：某些荧光物质和样本可能对光敏感，应避免其暴露在强光下以防止损伤。
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荧光显微镜一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。
在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。
荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。
荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。
我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。
荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。
由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。
它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。
是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
二．工作原理光源多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。
超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。
它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。
超高压汞灯也散发大量热能。
因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。
新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一些时间后，则需要高压启动（约为15000V），启动后，维持工作电压一般为50～60V，工作电流约4A左右。
200W超高压汞灯的平均寿命，在每次使用2h的情况下约为200h，开动一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作20m i n，则寿命降低50%。
因此，使用时尽量减少启动次数。
灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。
灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。
点燃灯泡后不可立即关闭，以免水银蒸发不完全而损坏电极，一般需要等15m i n。
由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因此灯泡必须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。
超高压汞灯（100W或200W）光源的电路和包括变压、镇流、启动几个部分。
在灯室上有调节灯泡发光中心的系统，灯泡球部后面安装有镀铝的凹面反射镜，前面安装有集光透镜。
国产超高压汞灯G C Q-200型性能良好，可以代替H B O-200等型的进口灯泡，平均寿命在200h以上，价格也比较低。
我国研制的一种简易轻便型高色温溴钨荧光光源装置，体积小，重量轻，功率小，交、直流两用（自带直流电源），易于携带，使用方便，已推广应用。
滤色系统滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。
滤板型号，各厂家名称常不统一。
滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。
如德国产品（S c h o t t）B G12，就是种蓝色玻璃，B 是蓝色的第一个字母，G是玻璃的第一个字母；我国产品的名称已统一用拼音字母表示，如相当于B G12的蓝色滤板名为Q B24，Q是青色（蓝色）拼音的第一个字母，B是玻璃拼音的第一个字母。
不过有的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530，就是表示压制滤长530n m以下的光而透过530n m以上的光。
还有的厂家的滤板完全以数字命名，如美国C o r n i n g厂的N O：5-58，即相当于B G12。
1．激发滤板根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。
紫外光激发滤板：此滤板可使400n m以下的紫外光透过，阻挡400n m以上的可见光通过。
常用型号为U G-1或U G-5，外加一块B G-38，以除去红色尾波。
紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450n m范围内的光通过。
常用型号为Z B-2或Z B-3，外加B G-38。
紫蓝光激发滤板：它可使350～490n m的光通过。
常用型号为Q B24（B G12）。
最大吸收峰在500n m以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。
开始采用金属膜干涉滤板，由于针对性强，波长适当，因而激发效果比较玻璃滤更好。
如西德L e i t z厂的F I T C专用K P490滤板和罗达明的S546绿色滤板，均远比玻璃滤板效果好。
激发滤板分薄厚两种，一般暗视野选用薄滤板，亮视野荧光显微镜可选用厚一些。
基本要求是以获得最明亮的荧光和最好的背景为准。
2．压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。
与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板：紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫外光通过。
能与U G-1或U G-5组合。
常用G G-3K430或G G-6K460。
紫蓝光压制滤板：能通过510n m以上波长的光（绿到红），能与B G-12组合。
通常用O G-4K510或O G-1K530。
紫外紫光压制滤板：能通过460n m以上波长的光（蓝到红），可与B G-3组合，常用O G-11K470A K490，K510。
反光镜反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%；一般使用平面反光镜。
聚光镜专为荧光显微镜设计制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。
分明视野聚光器的暗视野聚光器两种。
还有相差荧光聚光器。
1．明视野聚光器在一般荧光显微镜上多用明视野聚光器，它具有聚光力强，使用方便，特别适于低、中倍放大的标本观察。
2．暗视野聚光器暗视野聚光器在荧光显微镜中的应用日益广泛。
因为激发光不直接进入物镜，因而除散射光外，激发光也不进入目镜，可以使用薄的激发滤板，增强激发光的强度，压制滤板也可以很薄，因紫外光激发时，可用无色滤板（不透过紫外）而仍然产生黑暗的背景。
从而增强了荧光图像的亮度和反衬度，提高了图像的质量，观察舒适，可能发现亮视野难以分辨的细微荧光颗粒。
3．相差荧光聚光器相差聚光器与相差物镜配合使用，可同时进行相差和荧光联合观察，既能看到荧光图像，又能看到相差图像，有助于荧光的定位准确。
一般荧光观察很少需要这种聚光器。
物镜各种物镜均可应用，但最好用消色差的物镜，因其自体荧光极微且透光性能（波长范围）适合于荧光。
由于图像在显微镜视野中的荧光亮度与物镜镜口率的平方成正比，而与其放大倍数成反比，所以为了提高荧光图像的亮度，应使用镜口率大的物镜。
尤其在高倍放大时其影响非常明显。
因此对荧光不够强的标本，应使用镜口率大的物镜，配合以尽可能低的目镜（4×,5×，6.3×等）。
目镜在荧光显微镜中多用低倍目镜，如5×和6.3×。
过去多用单筒目镜，因为其亮度比双筒目镜高一倍以上，但研究型荧光显微镜多用双筒目镜，观察很方便。
落射光装置新型的落射光装置是从光源来的光射到干涉分光滤镜后，波长短的部分（紫外和紫蓝）由于滤镜上镀膜的性质而反射，当滤镜对向光源呈45。
倾斜时，则垂直射向物镜，经物镜射向标本，使标本受到激发，这时物镜直接起聚光器的作用。
同时，滤长长的部分（绿、黄、红等），对滤镜是可透的，因此，不向物镜方向反射，滤镜起了激发滤板作用，由于标本的荧光处在可见光长波区，可透过滤镜而到达目镜观察，荧光图像的亮度随着放大倍数增大而提高，在高放大时比透射光源强。
它除具有透射式光源的功能外，更适用于不透明及半透明标本，如厚片、滤膜、菌落、组织培养标本等的直接观察。
研制的新型荧光显微镜多采用落射光装置，称之为落射荧光显微镜。
三．C C D简介荧光显微镜C C D荧光显微C C D是与荧光显微镜密切相关的数码摄像产品，一方面它可以将荧光显微镜拍摄的显微摄影产品通过u s b接口传输到电脑中，便于图像的采集研究，另一方面，通过荧光显微镜C C D我们可以拍摄到比单纯使用荧光显微镜更好的图片。
荧光显微镜C C D可以连接荧光显微镜组成显微成像系统。
使用范围一般情况下，单独使用荧光显微镜即可以达到我们想要的成像效果，但在某些情况下，比如说当荧光比较微弱的情况下，仅仅通过荧光显微镜并不能达到理想的拍摄效果，或者我们希望可以将拍摄的荧光图片上传的电脑生面预览，修改甚至发表学术论文，这时候没有荧光显微镜C C D是不能达到要求的。
产品特点荧光显微镜C C D一般具有良好的弱光捕捉能力，能够捕捉到极其微弱的荧光，因此成像能力好，此外，很多荧光冷C C D 生产上搜对此类C C D作了制冷处理，使得此类C C D的噪音大大降低，信噪比得以很大的提高。
由于其方便应用效果，此类C C D相机被广泛应用于荧光显微镜。
四．标本制作要求荧光显微镜的标本制作要求1、载玻片载玻片厚度应在0.8～1.2m m之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。
载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。
有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片盖玻片厚度在0.17m m左右，光洁。
为了加强激发光，也可用于涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。
3、标本组织切片或其他标本不能太厚，若太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。
另外，细胞重叠或杂质掩盖，影响判断。
4、封裱剂封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在p H8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。
所以，常5、镜油一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。
五．使用方法（1）使用显微镜时请保持周围环境的清洁。
（2）打开灯源，超高压汞灯要预热15m i n才能达到最亮点。
使用荧光进行观察时，不要频繁的开关荧光电源。
开关间断时间要保持在20～30分钟以上。